專利名稱：一種靶向于miR-122的小分子化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及藥物設(shè)計方面。
背景技術(shù)：
MicroRNA (微小核糖核酸)是一種長度為18 25核苷酸單鏈的內(nèi)源性非編碼性小RNA。它主要通過與靶標基因3'非翻譯區(qū)的完全或不完全配對，抑制其翻譯，從而參與調(diào)控個體發(fā)育、細胞凋亡、增殖及分化等生命活動。在病理條件下，microRNA可通過調(diào)控其靶標基因及其參與的信號通路，影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，發(fā)揮著類似于癌基因或抑癌基因的功能。實驗表明在很多腫瘤中，一些類型的microRNA是高表達的，這些高表達的 microRNA與腫瘤的侵入性、轉(zhuǎn)移性等有一定的相關(guān)性。這些microRNA為腫瘤診斷和治療提供了新的策略。目前抑制microRNA功能的普遍方法是采用反義抑制的原理。實驗證明，與成熟體microRNA完全互補或與前體microRNA—些區(qū)域互補的經(jīng)過修飾的RNA可以有效的抑制 microRNA功能。一些體內(nèi)實驗證明，這種抑制RNA通過體內(nèi)注射也有效果。因此具有一定的臨床應(yīng)用價值。然而，反義抑制方法存在體內(nèi)給藥困難的問題。目前的各種向體內(nèi)運送RNA方法， 包括化學轉(zhuǎn)染試劑以及病毒載體等，都存在效率和安全性問題，因此一直無法達到臨床應(yīng)用的要求。而傳統(tǒng)的小分子化合物藥物則在給藥方面存在明顯的優(yōu)勢，或注射或口服，簡單有效。因此我們認為小分子化合物抑制劑將比傳統(tǒng)的反義抑制RNA更有潛力成為靶向 microRNA的藥物。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有抑制腫瘤細胞生長或誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡活性的化合物。本發(fā)明的第一方面,提供了一種 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethano 1 chloride的用途，用于制備治療腫瘤、抑制腫瘤細胞生長、和/或誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的化合物。在另一優(yōu)選例中，所述的致凋亡化療藥物包括腫瘤壞死因子，更佳地為人TNFa。在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤或腫瘤細胞是表達名為mir-122的microRNA的腫瘤或腫瘤細胞。較佳地，所述的腫瘤選自下組乳腺癌、肺癌、胃癌、細腸癌、前列腺癌、肝癌； 更佳的腫瘤選自下組肺癌。在另一優(yōu)選例中，提供了 一種 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride的用途，用于制備人mir-122的特異抑制劑。
圖 1 是/]、分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanolchloride的屬性圖。圖 2 是小分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanolchloride 的結(jié)構(gòu)式圖。圖 3 是小分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanolchloride 的3D結(jié)構(gòu)圖。
具體實施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)部分腫瘤細胞內(nèi)mir-122的表達往往升高，抑制mir-122的表達和功能可以抑制腫瘤細胞的增殖和體內(nèi)外的致瘤活性。本發(fā)明人運用軟件從數(shù)萬個侯選化合物中篩出了若干個可能會和mir-122結(jié)合的小分子化合物，首次得到了一個可以強烈增強TNF-a肺癌細胞系MCF-7增殖抑制作用的化合物1-dibenzofu ran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。具體而言，本發(fā)明人的研究表明，mir-122在肺癌腫瘤組織中的選擇性高表達，而在正常肺組織中未見表達，提示mir-122可能與腫瘤發(fā)生及生長密切相關(guān)。因此本發(fā)明的研究表明，抗凋亡作用的分子mir-122在細胞生長調(diào)控、細胞凋亡、 腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮重要作用。因此，mir-122很可能在臨床腫瘤的診斷和治療中作為潛在的候選靶標。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人篩選了大量的化合物，從而獲得了一種可能有效抑制腫瘤的小分子化合物，所述的小分子化合物特異性地在蛋白水平靶向抗凋亡分子-mir-122。活性成分l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride /]、分子化合物及其藥學上可以接受的鹽和活性衍生物。l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 是一禾中指向 mir-122 的先導(dǎo)化合物。一類特別優(yōu)選的鹽是鈉鹽或鉀鹽。實施例1/]、分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 的蹄選。采用計算機輔助的虛擬方法進行。首先用生物信息學的方法下載mir-122序列并利用計算機軟件建立三維結(jié)構(gòu)模型，然后對NCI Diversity Set數(shù)據(jù)庫內(nèi)140，000個化合物進行篩選，取得具有成藥潛能的2000個。然后通過ADT軟件處理成AutoDoCk4識別的格式，接著利用AutoGricM和 AutoDock4軟件生成柵格及執(zhí)行分子對接。同時，以mir-122略作改變作為對照，剔除對接結(jié)果中非特異性結(jié)合的化合物。最后選定一個化合物，即l-dibenz0furan-3-yl-2-piperi din-2-ylethanol chloride。實施例2小分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 對月中瘤細胞的生長抑制本實施例采用了常規(guī)的MTT法，方法如下
先將MCF-7細胞30000個細胞/孔的密度鋪96孔板過夜，然后把小分子化合物l_d ibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 以不同濃度單獨與人 TNF_a 聯(lián)合加入。40小時后每孔加入MTT (5mg/ml) IOul，37度孵育4小時后用150ul 二甲亞楓溶液紫色結(jié)晶后放置于酶標儀以570吸光度檢測。結(jié)果 Il 示，l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 可以在 5-lOul終濃度顯著增強TNF-a對細胞增殖的抑制，而其本身未對細胞造成顯著的毒性作用，為本發(fā)明專利所申請保護的一種靶向于mir-122的抗腫瘤小分子化合物。
權(quán)利要求
1.一禾中 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 白勺用途，其特征在于，用于制備治療腫瘤、抑制腫瘤細胞生長、和/或誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的化合物。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的腫瘤或腫瘤細胞是表達mir-122的腫瘤或腫瘤細胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于生物信息學和計算機技術(shù)相結(jié)合的抑制劑虛擬篩選平臺而篩選出的能夠特異地結(jié)合上mir-122，并抑制其調(diào)控作用的一種小分子化合物。該小分子化合物具有有效性高，特異結(jié)合能力強，易于篩選等優(yōu)點。該化合物將比傳統(tǒng)的microRNA反義抑制更有潛力成為靶向于microRNA的抗腫瘤新藥。
文檔編號A61P35/00GK102266335SQ20101019018
公開日2011年12月7日 申請日期2010年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月1日
發(fā)明者曾華宗 申請人:上海聚類生物科技有限公司