專(zhuān)利名稱(chēng)：新腦苷脂用于制備治療炎癥性腸炎藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種Fusaruside用于制備治療炎癥性腸炎 藥物的用途。
背景技術(shù)：
新腦苷脂F(xiàn)usaruside最初是從菌種Fusarium sp. IFB-121中提取得到(Shu, R.G., et al. 2004. Antibacterial and xanthine oxidase inhibitory cerebrosides fromFusarium sp IFB-121, an endophytie fungus in Quercus variabilis. Lipids. 39(7) :p. 667-673.)，它的化學(xué)結(jié)構(gòu)自被報(bào)道以來(lái)，對(duì)該化合物的研究甚少，關(guān)于其 藥理活性方面，尤其是抑制炎癥反應(yīng)、保護(hù)消化道器官的作用等，迄今未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明主 要發(fā)現(xiàn)了偽仰皿&如對(duì)2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)的炎癥性腸炎具有顯著的改善 作用。該腸炎模型被公認(rèn)為克羅恩氏病及潰瘍性結(jié)腸炎的動(dòng)物模型之一。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供fusaruside的一種新用途。本發(fā)明所說(shuō)的fusaruside的新用途是=Fusaruside用于制備治療炎癥性腸炎藥 物的用途。所說(shuō)的炎癥性腸炎包括各種潰瘍性腸炎、克羅恩氏病及其它腸組織相關(guān)疾病。本發(fā)明所說(shuō)的fusaruside可通過(guò)下述方法獲得從植物內(nèi)生菌栓皮櫟鐮刀屬 真菌Fusarium sp. IFB-121固體發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到fusaruside。即提取Fusariumsp. IFB-121菌液，膠柱層析，ODS反相柱層析，20%甲醇/水系統(tǒng)——純甲醇洗脫，最后用HPLC 制備得 fusaruside。本發(fā)明的藥理實(shí)驗(yàn)表明對(duì)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的小鼠，2. 5、5、10mg/kg的 fusaruside均能提高其生存率。5和10mg/kg的fusaruside可顯著減輕TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸 炎小鼠體重的降低。對(duì)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的小鼠，5和10mg/kg的fusaruside可顯著改善 腸部紅斑，出血，水腫，血便，腹瀉，束緊形成，出現(xiàn)粘液等病變。對(duì)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的小 鼠，5和10mg/kg的fusaruside可顯著改善上皮腺體層增厚，潰瘍，隱窩缺失，潰瘍處大量中 性粒細(xì)胞等病變。以上顯示，fusaruside能顯著改善TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，顯示出良好的抑制炎癥的 作用。已知TNBS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎是炎癥性腸炎及克羅恩氏病的典型動(dòng)物模型，故其作為 克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎及其它腸組織炎癥相關(guān)疾病的治療藥物中得到應(yīng)用。
四
圖IFusaruside對(duì)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠體重的影響。C57BL/6 小鼠隨機(jī)分成 6 組，分別為正常組，TNBS 組，fusaruside 2. 5、5、10mg/kg 和dexamethasone，造模后連續(xù)經(jīng)腹腔給藥三天，每天稱(chēng)量體重。體重結(jié)果以平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn) 誤表示。* :P < 0. 05vs模型組小鼠；# =P < 0. Olvs模型組小鼠(Dunnett，s test)。
3
圖2FuSaruSide對(duì)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸宏觀指標(biāo)分析。第三天，取TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸，進(jìn)行宏觀指標(biāo)評(píng)分。結(jié)果以平均數(shù)士 標(biāo)準(zhǔn)誤表示。* :P<0. 05vs TNBS組小鼠；** :P<0. Olvs TNBS組小鼠(Dunnett，s test)。圖3FuSaruSide對(duì)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸病理切片微觀指標(biāo)分析。第三天，取TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸，并切取相同位置的結(jié)腸組織，石蠟包 埋，用H&E染色，并進(jìn)行微觀學(xué)評(píng)分，結(jié)果以平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)誤表示。* :P < 0. 05vs TNBS組 小鼠；** :P < 0. Olvs TNBS 組小鼠(Dunnett' s test)。
五具體實(shí)施例方式本文所涉及的栓皮櫟鐮刀屬真菌Fusarium sp. IFB-121是從栓皮櫟的樹(shù)皮中提取 (Shu, R. G. , et al. 2004. Antibacterial and xanthine oxidase inhibitorycerebrosides from Fusarium sp IFB-121, an endophytic fungus in Quercus variabilis. Lipids. 39 (7) :p. 667-673.)，由南京大學(xué)譚仁祥教授提供。實(shí)施例一 Fusaruside的提取分離及結(jié)構(gòu)本發(fā)明所研究的fusaruside系從植物內(nèi)生菌栓皮櫟鐮刀屬真菌Fusarium sp. IFB-121 固體發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到。即在 50L YPD (10% Yeast extract ；20% Peptone ；20% Dextrose)培養(yǎng)基中，于28°C，180rpm，培養(yǎng)Fusarium sp. IFB-121，7天。用紗布過(guò)濾并抽 濾制菌餅，干燥，然后再用丙酮浸泡菌餅12h，每30min攪拌一次，濃縮提取液，得粗膏52g。 對(duì)提取液進(jìn)行硅膠柱層析，洗脫劑為1 :40%丙酮的氯仿溶液及2 :20%甲醇的丙酮溶液。接 著用ODS反相柱層析，20%甲醇/水系統(tǒng)——純甲醇洗脫。98%的甲醇/水洗脫時(shí)得到腦 苷脂組分。最后用HPLC制備，洗脫條件為97%色譜甲醇(水)，得fusaruside，其結(jié)構(gòu)式如 下。 實(shí)施例二 Fusaruside的藥理實(shí)驗(yàn)及結(jié)果分析1)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎取C57BL/6小鼠(8_10周)，隨機(jī)分成6組，除正常組外先用150 μ 11% TNBS溶液 涂在成年雄性C57BL/6小鼠的刮毛后的腹部。七天后，用的戊巴比妥麻醉小鼠后輕輕直 腸注射TNBS溶液(2. 5mg TNBS在50%乙醇溶液中)。其中4組在直腸注射后分別經(jīng)腹腔 給2. 5、5、10mg/kg的fusaruside和lmg/kg的地塞米松(dexamethasone)，模型組和正常組 給予等量的PBS，連續(xù)3天，動(dòng)物每天測(cè)量體重，觀察小鼠存活率和腹瀉情況。第三天，取小 鼠結(jié)腸，先進(jìn)行宏觀指標(biāo)評(píng)分，再切取相同位置的結(jié)腸組織，石蠟包埋，用H&E染色，進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分。2) Fusaruside對(duì)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠生存率的影響在第三天時(shí)，在模型組中還有30%的小鼠存活，2. 5、5、10mg/kg的fusaruside和 lmg/kg的地塞米松處理組中則分別為40%、40%、50%和40%，該結(jié)果說(shuō)明2. 5,5UOmg/ kg的fusaruside均能增加結(jié)腸炎小鼠的存活率。3) Fusaruside對(duì)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠體重的影響如圖1所示，在模型組小鼠體重有明顯的下降。在第三天時(shí)，與模型組小鼠相比， 5和10mg/kg的fusaruside，以及l(fā)mg/kg dexamethasone對(duì)結(jié)腸炎小鼠的體重下降均有顯
著改善作用。4) Fusaruside對(duì)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎其它宏觀指標(biāo)的影響宏觀學(xué)評(píng)分規(guī)則為，出現(xiàn)出血、水腫、束緊形成、潰瘍、血便、出現(xiàn)粘液、腹瀉各計(jì) 1分，紅斑和粘連根據(jù)程度可給0-2分。如圖2所示，腸組織切片分析顯示與正常組相 比，模型組有典型的紅斑，出血，水腫，血便，腹瀉，束緊形成，并出現(xiàn)粘液。評(píng)分結(jié)果顯示， fusaruside 5、10mg/kg均能顯著改善這些病變，作用呈劑量依賴(lài)性。Dexamethasone lmg/ kg也能改善這些病變。5) Fusaruside對(duì)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎微觀指標(biāo)的影響微觀學(xué)評(píng)分規(guī)則為，無(wú)炎癥計(jì)為0分，少量粒細(xì)胞的浸潤(rùn)計(jì)為1分，中度粒細(xì)胞的 浸潤(rùn)計(jì)為2分，高度粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，中度纖維化，高血管密度，腸壁變厚，隱窩畸變及Goblet 細(xì)胞丟失計(jì)為3分，透壁浸潤(rùn)，大片Goblet細(xì)胞丟失，多處纖維化及隱窩大面積丟失計(jì)為4 分。如圖3所示，腸組織切片分析顯示與正常組相比，模型組有典型的結(jié)腸炎特點(diǎn)如隱窩畸 變，Goblet細(xì)胞丟失，單核細(xì)胞侵潤(rùn)和嚴(yán)重的粘膜損傷。相關(guān)評(píng)分結(jié)果顯示，fusaruside 5、 10mg/kg均能顯著改善這些病變，作用呈劑量依賴(lài)性。Dexamethasone lmg/kg也能改善這 些病變。本發(fā)明所述，fusaruside可用于制備多種克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎及其它腸組 織炎癥相關(guān)疾病的治療藥物。
權(quán)利要求
Fusaruside在制備治療炎癥性腸炎藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所說(shuō)的應(yīng)用，其特征在于所說(shuō)的炎癥性腸炎是克羅恩氏病、潰瘍性腸 炎或其它腸組織炎癥相關(guān)疾病。
全文摘要
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述，從植物內(nèi)生菌栓皮櫟鐮刀屬真菌Fusarium sp.IFB-121固體發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到fusaruside。Fusaruside能顯著改善TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。由此可見(jiàn)，fusaruside能明顯改善免疫性腸部炎癥。綜上所述，fusaruside作為一種新型炎癥腸病治療藥物，具有良好的抑制炎癥和保護(hù)腸組織等活性，可用于各種潰瘍性腸炎、克羅恩氏病及其他腸組織相關(guān)疾病的治療并制備相應(yīng)的治療藥物。
文檔編號(hào)A61P1/00GK101912406SQ20101018840
公開(kāi)日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月1日
發(fā)明者吳興新, 徐建梁, 徐強(qiáng), 胥蘇海, 譚仁祥 申請(qǐng)人:南京大學(xué)