專利名稱：刺楸葉總有效部位的制備方法及其藥物應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及刺楸葉總有效部位的制備方法、以其為原料制得的新 藥，及其在預(yù)防和治療風(fēng)濕骨痛疾病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
刺楸系五加科刺楸屬植物Kalopanax septemlobus (Thunb. ) Koidz.，具有祛風(fēng)、除 濕、通絡(luò)、止痛、殺蟲(chóng)之功效，臨床用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰膝疼痛，外用跌打損傷。有報(bào) 道刺楸的主要活性成分為皂苷類化合物，其生物活性主要表現(xiàn)在抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗類 風(fēng)濕以及抗真菌和糖尿病等方面。目前從刺楸中共分離得到45種五環(huán)三萜類皂苷化合物， 主要包括單糖鏈皂苷和雙糖鏈皂苷兩類，其主要的皂苷元是常春藤皂苷元、齊墩果酸型皂 苷元、葳嚴(yán)仙皂苷元和pictogenin型皂苷元。此外還含有少量黃酮類化合物、苯丙烷類酚 酸衍生物、揮發(fā)油等。雖然國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)刺楸屬植物的化學(xué)成分及其藥理活性研究較為深 入，但對(duì)其有效部位的提取純化及藥物應(yīng)用卻涉及甚少。所謂中藥現(xiàn)代化就是在繼承和發(fā)揚(yáng)我國(guó)中醫(yī)藥優(yōu)勢(shì)和特色的基礎(chǔ)上，充分利用現(xiàn) 代科學(xué)技術(shù)的理論、方法和手段，借鑒國(guó)際認(rèn)可的醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，研究、開(kāi)發(fā)、管理和生產(chǎn) 出以現(xiàn)代化和高技術(shù)為特征的安全、高效、穩(wěn)定、可控的現(xiàn)代中藥產(chǎn)品，使中藥產(chǎn)業(yè)實(shí)現(xiàn)大 品種、大企業(yè)和大市場(chǎng)，成為具有強(qiáng)大國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力的現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)和國(guó)民經(jīng)濟(jì)新的增長(zhǎng)點(diǎn)，擴(kuò)大 我國(guó)中藥在國(guó)際市場(chǎng)上的份額。而要實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，只能從三個(gè)層次入手。中藥復(fù)方由于 成分過(guò)于復(fù)雜，藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究薄弱，提取純化難度較大；而單一成分又不具備中醫(yī)藥的 特色，產(chǎn)品副作用大，開(kāi)發(fā)形勢(shì)艱難，因此從傳統(tǒng)中藥中提取有效部位的研究就顯得尤為重 要，成為中藥現(xiàn)代化研究中進(jìn)展較快的發(fā)展方向之一。與原藥材相比，它富集了有效物質(zhì)， 提高了技術(shù)含量和療效，減少了服用劑量，增加了質(zhì)量控制水平，既體現(xiàn)了中藥多成分、多 靶點(diǎn)、多層次產(chǎn)生作用的特點(diǎn)，又保留了原方治療上的優(yōu)點(diǎn)，還可以改變中成藥“粗、大、黑” 的現(xiàn)狀。目前該類研究工作已受到廣大醫(yī)藥工作者的重視，并取得了可喜的成果，有許多產(chǎn) 品已投入臨床使用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種刺楸葉總有效部位的制備方法及其藥物應(yīng)用，還提供用刺楸葉總 有效部位或與其他藥物組方，用藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑制備的新藥；還提供其在預(yù) 防和治療抗炎、鎮(zhèn)痛、抗類風(fēng)濕等風(fēng)濕骨痛方面疾病的應(yīng)用。本發(fā)明刺楸葉總有效部位是從刺楸葉中提取獲得的，該總有效部位中總皂苷的含 量彡50%。本發(fā)明提供的刺楸葉總有效部位的制備方法包括下列步驟(1)提取用濃度為O 95%的乙醇作溶劑，將原料刺楸葉加入重量4 10倍的 該溶劑中進(jìn)行回流提取，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收溶劑后濃縮；(2)純化將該濃縮液加水稀釋，離心，取上清液裝于已預(yù)先處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱中，先用5 10倍樹(shù)脂柱體積的水洗，再用5 10倍樹(shù)脂柱體積、濃度為50 95%的 乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇后濃縮，精制，干燥，即得刺楸葉總有效部位。當(dāng)本發(fā)明用于預(yù)防和治療風(fēng)濕骨痛疾病的藥物時(shí)，均是安全的。本發(fā)明還提供用 刺楸葉總有效部位以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑制備的各種新藥。這些新藥包括口服 給藥制劑、舌下片、栓劑、泡騰片、注射劑等。口服給藥制劑包括口服固體制劑、口服液體制 劑?？诜腆w制劑可以是片劑、膠囊、顆粒劑、丸劑、錠劑等。這些制劑中，除包括本發(fā)明總有 效部位外，還可以任選含有藥學(xué)上可接受的填充劑、助流劑、潤(rùn)滑劑、著色劑、矯味劑等。這 些制劑還可以根據(jù)需要制備成緩釋或控釋制劑。口服液體制劑可以是溶液、混懸液、乳化液 等。這些制劑中，除包括本發(fā)明總有效部位外，還可以任選含有藥學(xué)上可接受的溶劑、助溶 劑、增溶劑、助懸劑、乳化劑、表面活性劑、矯味劑等。本發(fā)明提供的以刺楸葉總有效部位為原料制得的新藥不僅包括單方制劑，還包括 在復(fù)方制劑中添加刺楸葉總有效部位作為活性成分的藥物。本發(fā)明提供的刺楸葉總有效部位用于制備治療風(fēng)濕骨痛、跌打損傷疾病的藥物。本發(fā)明的有益效果是(1)本發(fā)明提供的刺楸葉總有效部位用于制備治療風(fēng)濕骨痛、跌打損傷疾病的藥 物，填補(bǔ)了刺楸總有效部位制備領(lǐng)域的空白，運(yùn)用適合工業(yè)化生產(chǎn)的提純技術(shù)從刺楸葉中 分離得到高純度有效部位，并將其應(yīng)用到制藥領(lǐng)域，實(shí)現(xiàn)了該類制劑從藥材組方到有效部 位組方的質(zhì)的飛躍，有效提高了該類制劑的國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。(2)整個(gè)工藝過(guò)程只以水和乙醇為溶劑，污染小；所用的樹(shù)脂再生后可數(shù)次重復(fù) 利用，成本低，易操作；終產(chǎn)物刺楸葉總有效部位純度高，產(chǎn)品穩(wěn)定性和均一性良好，易于產(chǎn) 業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下列具體的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更加詳細(xì)的描述，但不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任 何限制。實(shí)施例1 取刺楸葉3kg，酌予碎斷，以30kg 70%乙醇回流提取2次，每次1.5小時(shí)，濾過(guò)，合 并濾液，回收乙醇后濃縮至體積為1L，加水至3L，離心，取上清液過(guò)DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱， 柱床體積1L，先用8L水洗，棄去水液，再用7. 5L 70%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇后濃 縮，精制，干燥，即得刺楸葉總有效部位。所制得的刺楸葉總有效部位中總皂苷含量為62%。實(shí)施例2取刺楸葉3kg，酌予碎斷，以12kg 95%乙醇回流提取2次，每次1.5小時(shí)，濾過(guò)，合 并濾液，回收乙醇后濃縮至體積為1L，加水至3L，離心，取上清液過(guò)AB8大孔吸附樹(shù)脂柱，柱 床體積1L，先用5L水洗，棄去水液，再用IOL 95%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇后濃縮， 精制，干燥，即得刺楸葉總有效部位。所制得的刺楸葉總有效部位中總皂苷含量為71%。實(shí)施例3取刺楸葉3kg，酌予碎斷，以24kg水提取2次，每次1. 5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃 縮至體積為1L，過(guò)NKA-9大孔吸附樹(shù)脂柱，柱床體積1L，先用IOL水洗，棄去水液，再用5L 50%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇后濃縮，精制，干燥，即得刺楸葉總有效部位。所制得
4的刺楸葉總有效部位中總皂苷含量為53%。實(shí)施例4刺楸葉總有效部位的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備精密稱取刺楸皂苷B對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含0. 5mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對(duì)照品溶液50、100、200、300、400μ 1分別置具塞試管 中，揮去溶劑，加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液0. 2ml，高氯酸0. 8ml，于70°C水浴上加 熱15分鐘，流水冷卻，加冰醋酸5ml，搖勻，以相應(yīng)的試劑為空白，在550nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光 度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定取刺楸葉總有效部位粉末，過(guò)80目篩，為通過(guò)實(shí)施例2中制備，取0. 25g，精密 稱定，置50ml錐形瓶中，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，洗滌濾渣，合并濾液，蒸干，殘 渣加水15ml微熱使溶解，移置分液漏斗中，加水飽和正丁醇振搖提取4次，每次15ml，分取 正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解并定量轉(zhuǎn)移置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作 為樣品溶液。取樣品溶液200μ 1于具塞試管中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制項(xiàng)下方法，測(cè)定吸光 度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含刺楸皂苷B的濃度，計(jì)算，即得。依此方法測(cè)定實(shí)施 例2所制得的刺楸葉總有效部位中總皂苷含量為71%。實(shí)驗(yàn)例5刺楸葉總有效部位的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中所用刺楸葉總有效部位為實(shí)施 例2制得。1.刺楸葉總有效部位對(duì)冰醋酸所致小鼠扭體次數(shù)的影響小鼠按體重隨機(jī)分四組。第一組正常對(duì)照組，灌胃10ml/kg蒸餾水；第二組為陽(yáng)性 藥組，灌胃200mg/kg芬必得，第三組刺楸葉總有效部位低劑量組，灌胃100mg/kg ；第四組刺 楸葉總有效部位高劑量組，灌胃200mg/kg。每日一次，連續(xù)七日，末次給藥后1小時(shí)，0.6% 冰醋酸腹腔注射，記錄出現(xiàn)扭體潛伏期及15分鐘內(nèi)扭體次數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。表1.刺楸葉總有效部位對(duì)冰醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響 結(jié)果表明刺楸葉總有效部位能明顯抑制冰醋酸所致小鼠扭體次數(shù)。2.刺楸葉總有效部位對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎的影響(1)實(shí)驗(yàn)材料藥物雷公藤多甙片為浙江得恩德制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)0807105?？ń槊鐑龈?粉、羊毛脂、液體石蠟為市售。動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，180 200g，動(dòng)物等級(jí)貳級(jí)。合格證SCXK-2007_0001。
由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。
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分組和給藥第一組為正常對(duì)照組，灌胃蒸餾水；第二組為模型組，灌胃蒸餾水；第 三組為陽(yáng)性藥組，灌胃雷公藤片300mg/kg ；第四組為觀察藥高劑量組，灌胃600mg/kg ；第五 組為觀察藥低劑量組，灌胃300mg/kg。(2)實(shí)驗(yàn)方法①弗氏完全佐劑的制備羊毛脂、液體石蠟按1 2研磨均勻，高壓滅菌，4°C保存。 使用時(shí)加入卡介苗至10mg/ml，邊加邊研磨，制成弗氏完全佐劑。②方法取雄性大鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只。每只鼠測(cè)量左右足踝關(guān)節(jié) 以下體積，重復(fù)2次，取均數(shù)，作為正常值。除正常對(duì)照組外，其余每只大鼠右后足墊皮內(nèi)注 射0.1ml弗氏完全佐劑。給予弗氏完全佐劑后，開(kāi)始灌胃給藥(lml/100g)，每天1次，連續(xù) 5周，在給藥后2、7、14、21、28、35日，測(cè)量左右后肢踝關(guān)節(jié)以下體積，足腫脹程度=給藥后 足體積-給藥前足體積。結(jié)果見(jiàn)表2。(3)檢測(cè)指標(biāo)取血清，測(cè)定TNF- α，NO含量。取右側(cè)足關(guān)節(jié)做病理檢查。結(jié)果見(jiàn) 表3和病理檢查結(jié)果。(4)結(jié)果檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果表2結(jié)果表明，觀察藥對(duì)大鼠原發(fā)性和繼發(fā)性病變都有明顯抑制 作用；表3結(jié)果表明，觀察藥對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血清中TNF-α和NO有明顯的抑制作用。病理學(xué)檢查結(jié)果光鏡觀察正常組，踝關(guān)節(jié)組織學(xué)結(jié)構(gòu)正常。模型組軟骨面毛糙凹凸不平、缺損，軟骨細(xì)胞固縮，滑膜組織不同程度增生，滑膜 下明顯有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。雷公藤組，部分病變可見(jiàn)不同程度的減輕，少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。刺楸葉總有效部位高劑量組滑膜細(xì)胞僅輕度增生，且排列整齊、細(xì)胞形態(tài)規(guī)則， 未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，軟骨表面光滑。刺楸葉總有效部位低劑量組部分滑膜細(xì)胞輕度增生，有極少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。軟骨 表面尚光滑。病理學(xué)結(jié)果表明，刺楸葉總有效部位對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎原發(fā)性和繼發(fā)性病變都有 一定的治療作用。
表3刺楸葉總有效部位對(duì)大鼠TNF- α和NO含量的影響 *p < 0. 05，**p < 0. 01，***p < 0. 00權(quán)利要求
一種刺楸葉總有效部位的制備方法，其特征在于包括下列步驟(1)提取用濃度為0～95％的乙醇作溶劑，將原料刺楸葉加入重量4～10倍的該溶劑中進(jìn)行回流提取，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收溶劑后濃縮；(2)純化將該濃縮液加水稀釋，離心，取上清液裝于已預(yù)先處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱中，先用5～10倍樹(shù)脂柱體積的水洗，再用5～10倍樹(shù)脂柱體積、濃度為50～95％的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇后濃縮，精制，干燥，即得刺楸葉總有效部位；該總有效部位中總皂苷含量≥50％。
2.如權(quán)利要求1所述的刺楸葉總有效部位在制備用于預(yù)防和治療風(fēng)濕骨痛疾病的藥 物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種刺楸葉總有效部位的制備方法及其藥物應(yīng)用。屬于中藥領(lǐng)域。以刺楸葉或根皮為原料，用0％～95％乙醇水溶液回流提取，提取液濃縮后經(jīng)過(guò)適當(dāng)處理，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，依次以水、50％～95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮，精制，干燥，即得刺楸葉總有效部位，總皂苷含量≥50％。本發(fā)明方法只需乙醇、水作溶劑進(jìn)行提取，采用大孔樹(shù)脂吸附技術(shù)分離純化，終產(chǎn)物刺楸葉總有效部位純度高，產(chǎn)品穩(wěn)定性和均一性良好。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)合理，低成本、易操作，穩(wěn)定性好，質(zhì)控更嚴(yán)格，易于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P29/00GK101926837SQ201010186348
公開(kāi)日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2010年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月26日
發(fā)明者劉永宏, 王隸書, 程?hào)|巖, 邸琳 申請(qǐng)人:王隸書