一種青蒿素衍生物及其應(yīng)用的制作方法

專利名稱：：一種青蒿素衍生物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物化合物領(lǐng)域，涉及一種青蒿素衍生物及其應(yīng)用，具體涉及青蒿素衍生物作為腫瘤放射增敏藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：世界上惡性腫瘤，心血管疾病和艾滋病是嚴(yán)重威脅人類健康的三大疾病。隨著我國居民的生活方式和居家環(huán)境的改變，我國的癌癥新增病例數(shù)逐年在上升，一些惡性腫瘤的發(fā)生率和死亡率呈明顯上升趨勢。目前國際上大多數(shù)惡性腫瘤還沒有根治的方法，用于腫瘤治療的主要手段有手術(shù)、放療、化療、生物治療和其他(內(nèi)分泌治療、中醫(yī)中藥治療、熱療和射頻消融治療)治療等。腫瘤放射治療(簡稱放療)就是用放射線治療癌癥。放療已經(jīng)歷了一個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展。在倫琴發(fā)現(xiàn)X線、居里夫人發(fā)現(xiàn)鐳之后，很快就分別用于臨床治療惡性腫瘤，直到目前為止放療仍是惡性腫瘤重要的治療方法。大約70%的癌癥病人在治療癌癥的過程中需要用放療，約有40%的癌癥可以用放療根治。有的腫瘤經(jīng)過放療甚至可以治愈或代替手術(shù)治療，如鼻咽癌、食管癌、淋巴瘤等。更多的癌癥病人化療后都需要放療加以鞏固和提高療效，即輔助性放療。因此，放療在腫瘤治療中的作用和地位日益突出。放療已成為治療惡性腫瘤的主要手段之一。放療機(jī)制包括(1)直接損傷效應(yīng)，即主要由射線直接作用于有機(jī)分子而產(chǎn)生自由基引起DNA分子出現(xiàn)斷裂、交叉；和(2)間接損傷效應(yīng)，即主要由射線對(duì)人體組織內(nèi)水發(fā)生電離，產(chǎn)生自由基，這些自由基再和生物大分子發(fā)生作用，導(dǎo)致不可逆損傷。兩種效應(yīng)有同等的重要性。雖然放療在治療惡性腫瘤中的作用十分顯著已毫無疑問，但也要看到放射反應(yīng)和損傷的存在。高劑量射線在殺滅癌細(xì)胞同時(shí)也會(huì)嚴(yán)重?fù)p傷到腫瘤周圍的正常組織和器官，病人就會(huì)出現(xiàn)不同程度的不良反應(yīng)，如血細(xì)胞減少、嘔吐、不同組織或器官炎癥。因此，怎樣使放療既能最大限度地抑制和殺滅腫瘤細(xì)胞，又要盡可能減少或不產(chǎn)生對(duì)正常組織和細(xì)胞的損傷是制定腫瘤放療計(jì)劃的目也是放療研究界重要的課題之一。放射增敏藥物(一種使腫瘤細(xì)胞或組織對(duì)放療更加敏感的藥物)是近年來腫瘤放療研究領(lǐng)域的一個(gè)新的熱點(diǎn)。開發(fā)新的抗腫瘤藥物已成為國內(nèi)外備受關(guān)注的熱門的腫瘤研究領(lǐng)域，也符合我國當(dāng)前的研究方向，對(duì)提高我國基礎(chǔ)和應(yīng)用醫(yī)學(xué)研究水平具有一定的意義。目前基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用對(duì)放射增敏概念的使用上有些混亂，把凡是放療的同時(shí)使用另一種(或多種)藥物，療效增加了，就說是增敏了。這其實(shí)是混淆了放射增敏的學(xué)術(shù)概念。藥物與射線疊加在一起的生物效應(yīng)，大致有三種情況，即相加、加強(qiáng)或增敏。相加是兩種生物效應(yīng)的簡單相加，1+1=2。加強(qiáng)或增強(qiáng)，指的是射線的生物效應(yīng)為1，藥物的生物效應(yīng)小于1，兩者相加的最后生物效應(yīng)為2，1+<1=2。真正學(xué)術(shù)意義的增敏指的是射線的生物效應(yīng)為1，藥物的生物效應(yīng)為0(或很小)，兩者相加后的生物效應(yīng)為2，1+0=2。因此真正意義上的放射增敏藥，必須具備兩個(gè)特點(diǎn)(1)本身無(或幾乎無)對(duì)腫瘤的治療作用；(2)僅對(duì)腫瘤細(xì)胞有增敏作用。一個(gè)增敏藥物要通過專家和藥政部門的審評(píng)，必須要提供這兩個(gè)特征的研究數(shù)據(jù)。目前國際上放射增敏藥物領(lǐng)域的研究主要集中在(1)針對(duì)腫瘤乏氧細(xì)胞的放射增敏劑的研究，如硝基咪唑類放射增敏劑和甘氨雙唑鈉等。因?yàn)槟[瘤細(xì)胞常常是在乏氧環(huán)境下；(2)抑制輻射產(chǎn)生的DNA損傷修復(fù)的放射增敏劑的研究，如gemcitabine和甘氨雙唑鈉；(3)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的放射增敏劑的研究，如UCN-Ol和caffeine；(4)調(diào)節(jié)細(xì)胞基因的藥物和蛋白抗體應(yīng)用的研究，如Cos-2抑制劑；(5)針對(duì)放療有關(guān)腫瘤抑制基因調(diào)控等方面的研究，如將p53，pTEN等腫瘤抑制基因直接導(dǎo)入到腫瘤而產(chǎn)生放射增敏的研究；(6)現(xiàn)有腫瘤臨床化療藥物與放療聯(lián)合應(yīng)用所產(chǎn)生放射增敏的研究。如環(huán)磷酰胺、氟尿嘧啶、VP-16、博來霉素、絲裂霉素C、(羥基)喜樹堿、紫杉醇、阿霉素等；和(7)其它的研究，包括光敏劑Photofrin與多種其他卟啉放射增敏效應(yīng)的研究等等。針對(duì)乏氧細(xì)胞的放射增敏劑的硝基咪唑類放射增敏劑是目前國內(nèi)外研究較為成熟并具有發(fā)展前景的一類抗腫瘤放射增敏藥。細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的抗腫瘤放射增敏藥物UCN-Ol已進(jìn)入I或II期臨床實(shí)驗(yàn)。由我國第二軍醫(yī)大學(xué)研究人員研制出的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的國家一類抗癌新藥一甘氨雙唑鈉也發(fā)現(xiàn)有非常好的腫瘤放療增敏效果。雖然有些放射增敏劑已經(jīng)進(jìn)入I期或者II期臨床試驗(yàn)中，但在III期臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果表明，大多數(shù)試驗(yàn)是失敗的，主要原因是毒性(包括神經(jīng)毒性)限制了使用劑量，致使腫瘤中藥物濃度達(dá)不到增敏的足夠濃度。另外，大部分放射增敏藥物研究基本都未能提供增敏作用兩大基本特征的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，即單獨(dú)使用沒有殺傷細(xì)胞的作用和只對(duì)腫瘤細(xì)胞有增敏作用。因此，即便證明化療藥物與放射治療有相互增加殺傷細(xì)胞的作用，最多也只能是一種相加或加強(qiáng)的作用，是否是學(xué)術(shù)意義的增敏作用尚待提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。另外，現(xiàn)有的大多數(shù)放射增敏藥物的腫瘤選擇性、腫瘤特異性都不高或?qū)C(jī)體有一定的毒性作用，這些都限制了現(xiàn)有放射增敏藥物在臨床上的廣泛應(yīng)用。因此，尋找腫瘤選擇性高、特異性強(qiáng)和細(xì)胞毒性小或無細(xì)胞毒性的放射增敏藥物是國內(nèi)外腫瘤放射治療界的重要課題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種青蒿素衍生物。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種青蒿素衍生物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>上述技術(shù)方案中，所述青蒿素衍生物的分子式為C24H41O9N,該晶體易溶在丙酮、醋酸乙酯、氯仿、苯、冰醋酸、乙醇、甲醇、乙醚、石油醚及水；熔點(diǎn)為143-144°C。對(duì)上述技術(shù)方案中所述青蒿素衍生物的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)(1)藥理毒理，根據(jù)體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示所述青蒿素衍生物僅僅在高劑量(>250μΜ)顯示出對(duì)不同類型的腫瘤細(xì)胞(乳癌、結(jié)腸癌白血病、淋巴瘤、子宮內(nèi)膜癌、腦神經(jīng)瘤、胰腺癌、肝癌、胃癌和食道癌)生長產(chǎn)生抑制作用，即毒性劑量，這些劑量是所述青蒿素衍生物表現(xiàn)出腫瘤細(xì)胞放射增敏劑量的240-250倍；同時(shí)，對(duì)正常細(xì)胞而言，劑量的所述青蒿素衍生物的劑量大于560μM時(shí)才顯示出細(xì)胞生長抑制作用；(2)所述青蒿素衍生物具有廣譜放射增敏作用其SD5tl(增加50%放療敏感度所需增敏劑的濃度)在不同的腫瘤細(xì)胞系(46種不同類型的人類腫瘤細(xì)胞株，參見表1)大約為0.9-2.5μΜ之間，這些劑量也僅僅是所述青蒿素衍生物細(xì)胞毒性劑量的0.1-0.5%；同時(shí)，在大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中達(dá)到同樣的放射增敏效果，本發(fā)明所述青蒿素衍生物所用的劑量僅為青篙素和其它青篙素衍生物(包括青篙琥酯，篙甲醚、蒿乙醚、雙氫青篙素)劑量的1/5；(3)本發(fā)明所述青蒿素衍生物可增加X-線輻射誘發(fā)的細(xì)胞凋亡，并且顯現(xiàn)為劑量依賴型；(4)采用三種不同的腫瘤模型(自發(fā)性腫瘤模型，誘發(fā)性腫瘤模型和人類腫瘤細(xì)胞裸小鼠移植瘤模型)完成了本發(fā)明所述青蒿素衍生物的動(dòng)物體內(nèi)放療增敏試驗(yàn)，結(jié)果表明本發(fā)明所述青蒿素衍生物在這三種動(dòng)物模型均顯示出非常有效的放療增敏效果。因此，本發(fā)明同時(shí)要求保護(hù)上述青蒿素衍生物在制備腫瘤放射增敏藥物中的應(yīng)用；本發(fā)明同時(shí)要求保護(hù)一種腫瘤放射增敏藥物，所述腫瘤放射增敏藥物的活性成分為本發(fā)明所述青蒿素衍生物。優(yōu)選的技術(shù)方案中，腫瘤放射治療增敏劑中青蒿素衍生物濃度小于等于5μmol/L，進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方案中，腫瘤放射治療增敏劑中青蒿素衍生物濃度為2μmol/L5μmol/L。由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明所述青蒿素衍生物作為腫瘤放射增敏劑的活性成分時(shí)，在相同的劑量比青蒿素的放療增敏效果又高出5-8倍；使用低劑量的該青蒿素衍生物單獨(dú)處理對(duì)細(xì)胞生長不產(chǎn)生任何的影響，即無任何細(xì)胞毒性；并且，更可喜的是，和腫瘤細(xì)胞相比較，該青蒿素衍生物需要高出10-15倍以上的劑量才能在正常細(xì)胞看到其放射增敏效果，因此，該青蒿素衍生物完全符合放射增敏藥的兩大基本特征，即單獨(dú)使用(正常的作為腫瘤放療增敏劑的劑量)沒有殺傷細(xì)胞的作用和只對(duì)腫瘤細(xì)胞有增敏作用。2、本發(fā)明所述青蒿素衍生物具有廣譜的腫瘤放療增敏效果。3、本發(fā)明所述青蒿素衍生物的母物青蒿素已經(jīng)在臨床上應(yīng)用了幾十年，證實(shí)其副作用極少，是一非常安全的藥物。因此，與現(xiàn)有放射增敏藥物相比，本發(fā)明所述青蒿素衍生物有著它的非常強(qiáng)的臨床應(yīng)用優(yōu)勢。圖1為實(shí)施例四中人類乳癌MDA-MB-231細(xì)胞放射增敏誘發(fā)的細(xì)胞凋亡的DNA瓊脂糖凝膠電泳圖；圖2為實(shí)施例五中自發(fā)腫瘤的放療后大小差異圖；圖3為實(shí)施例五中化學(xué)致癌物DMBA誘發(fā)的乳癌放療后大小差異圖4為實(shí)施例五中小鼠乳頭狀瘤放療后大小差異圖；圖5為實(shí)施例一所得青蒿素衍生物的分子結(jié)構(gòu)圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述實(shí)施例一將0.284g(Immol)雙氫青蒿素溶于20mL無水二氯甲烷中，加入2.OOg(IOmmol)聚乙二醇500，然后在冰鹽浴冷卻下，加入0.Olg(0.07mmol)無水AlCl3(三氯化鋁)，片刻后撤去冰浴，室溫?cái)嚢?。用薄板色譜檢測反應(yīng)進(jìn)程(GF2硅膠板，香蘭醛，硫酸溶液顯色)。待反應(yīng)基本完成，反應(yīng)液依次用飽和碳酸氫鈉溶液(20mLX3)、水(20mLX2)、飽和氯化鈉溶液(20mLX3)洗滌至呈中性，用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸去溶劑，殘余油狀物經(jīng)硅膠柱層析分離(石油醚_乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫)，減壓濃縮后得0.5g無色油狀化合物，進(jìn)一步提純、結(jié)晶得無色晶體(參考張建新，王峻霞，張瑜，等.具有免疫抑制作用的含有聚乙二醇基的青蒿素衍生物的合成.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2006，41(1):65-7)。鑒定上述無色晶體，得其分子式為C24H41O9N,該晶體易溶在丙酮、醋酸乙酯、氯仿、苯、冰醋酸、乙醇、甲醇、乙醚、石油醚及水；熔點(diǎn)為143-144°C。該晶體的分子結(jié)構(gòu)式參見圖5。注以下實(shí)施例中青增素1號(hào)代表實(shí)施例一所得青篙素衍生物。實(shí)施例二，藥理毒理測試選用了46種不同類型的人類腫瘤細(xì)胞株和5種不同類型的人類正常細(xì)胞株，按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行指數(shù)培養(yǎng)。將不同濃度(0-600μM)的實(shí)施例一所得青蒿素衍生物加到指數(shù)生長的細(xì)胞的培養(yǎng)液中。24小時(shí)后使用四氮唑鹽[3-(4，5-dimethylthiaZ0l-2-yl)-2，5-diphenyl-tetrazoliumbromide,MTT]還原法測定細(xì)胞的生存。根據(jù)上述體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示實(shí)施例一所得青蒿素衍生物僅僅在高劑量(>250μΜ)時(shí)才顯示出對(duì)不同類型的腫瘤細(xì)胞生長產(chǎn)生抑制作用，即毒性劑量。但對(duì)正常細(xì)胞而言，當(dāng)實(shí)施例一所得青蒿素衍生物劑量大于560μM時(shí)才顯示出細(xì)胞生長抑制作用。實(shí)施例三選用了46種不同類型的人類腫瘤細(xì)胞株和5種不同類型的人類正常細(xì)胞株，按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行指數(shù)培養(yǎng)。在X-射線照射之前24或者48小時(shí)，采用不同濃度(0_150μΜ)的青篙素或其衍生物(包括青篙琥酯，篙甲醚、蒿乙醚、雙氫青篙素和實(shí)施例一所得青蒿素衍生物)或其它已報(bào)導(dǎo)的放射增敏藥物加到指數(shù)生長的細(xì)胞的培養(yǎng)液中。相對(duì)量的乙醇(用來溶解青篙素和其衍生物)或其它溶劑也直接地加到細(xì)胞培養(yǎng)液中作為陰性對(duì)照，這些溶劑并不對(duì)細(xì)胞的放射敏感性產(chǎn)生任何的影響。然后細(xì)胞接受不同劑量的X-射線照射(O-IOGy)。24小時(shí)后使用四氮唑鹽[3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyl-tetrazoliumbromide,MTT]還原法測定細(xì)胞的生存。采用LOGIT法計(jì)算增加50%放療敏感度的濃度SD5tl值，試驗(yàn)至少重復(fù)三次，實(shí)驗(yàn)的平均SD5tl作為評(píng)價(jià)體外放療敏感性的最終評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果如表1所示，在不同腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞，不同放射增敏藥物顯示出不同的放射增敏效果。在所有的檢測的腫瘤細(xì)胞，青篙素和這里檢測的所有青篙素衍生物都顯示出非常好的放射增敏效果，SD5tl明顯比這里檢查的其它放射增敏藥物的劑量要小。青篙素和這里檢測的所有青篙素衍生物的放射增敏劑量對(duì)細(xì)胞都不產(chǎn)生任何的毒性影響。在所有青篙素和青篙素衍生物中，實(shí)施例一所得青篙素衍生物的SD5tl劑量最小，換句話說，實(shí)施例一所得青篙素衍生物的放射增敏效果是最好。并且，實(shí)施例一所得青篙素衍生物表現(xiàn)出廣譜的放射增敏效果，其SD5tl在不同的腫瘤細(xì)胞系也比較一致，大約0.9-2.5μM之間。這些劑量也僅僅是實(shí)施例一所得青篙素衍生物細(xì)胞毒性劑量的0.1-0.5%。同時(shí)，在大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中達(dá)到同樣的放射增敏效果，實(shí)施例一所得青篙素衍生物所用的劑量僅為青篙素和其它青篙素衍生物劑量的1/5。表1.不同放療增敏藥物增敏效果的比較，以SD5tl(增加50%X-射線放療效果的劑量，平均值(μΜ)士平均差，所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次)為比較指標(biāo)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>NHEK62+4.645+4.545+6.258+4.547+1.382+3.245+3.180+1.450+4.3HUVEC59+7.237+3.646+4.549+6.049+0.773+1.952+4.251+2.639+2.9NHME53+4.523+2.344+5.249+4.363+0.658+2.779±3.967+1.948+3.8注CAF，caffeine；GEM,gemcitabine。HUVEC為正人臍帶靜脈內(nèi)皮的細(xì)胞；NHME為正常人支氣管上皮細(xì)胞；HMEC為正常人乳腺上皮細(xì)胞；NHEK為正常人表皮角化細(xì)胞。實(shí)施例四實(shí)施例一所得青篙素衍生物增加輻射所誘發(fā)的細(xì)胞凋亡為了測定實(shí)施例一所得青篙素衍生物放射增敏效果是否由于增加輻射所誘發(fā)的細(xì)胞凋亡。采用DNA瓊脂糖凝膠電泳分析方法，分析了在不同劑量的實(shí)施例一所得青篙素衍生物存在條件下，放射增敏誘發(fā)的細(xì)胞凋亡的結(jié)果。如圖1所示，在人類乳癌MDA-MB-231細(xì)胞接受5Gyχ-射線輻射前，實(shí)施例一所得青篙素衍生物24小時(shí)的預(yù)處理可以明顯增加隨后X-射線輻射誘發(fā)的細(xì)胞凋亡，即可見長度不等的DNA片段電泳條帶程度明顯增加。而且，實(shí)施例一所得青篙素衍生物增加χ-射線輻射誘發(fā)的細(xì)胞凋亡也顯現(xiàn)為劑量依賴型。實(shí)施例五青增素1號(hào)的體內(nèi)放療增敏試驗(yàn)體內(nèi)腫瘤放療增敏試驗(yàn)結(jié)果是評(píng)價(jià)侯選放療增敏藥物有效性的最重要指標(biāo)。動(dòng)物移植性腫瘤試驗(yàn)是篩選抗腫瘤新藥中最常用的模型。因此，我們分別采用了三種不同的腫瘤模型(自發(fā)性腫瘤模型，誘發(fā)性腫瘤模型和人類腫瘤細(xì)胞裸小鼠移植瘤模型)完成了實(shí)施例一所得青篙素衍生物的動(dòng)物體內(nèi)放療增敏試驗(yàn)以積累臨床前實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為臨床實(shí)驗(yàn)作好準(zhǔn)備。試驗(yàn)結(jié)果表明實(shí)施例一所得青篙素衍生物在這三種動(dòng)物模型均顯示出非常有效的放療增敏效果。詳情的結(jié)果描述如下。在所有實(shí)驗(yàn)中，同一批實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的性別都保持相同，且不同批次的實(shí)驗(yàn)都采用同一品系的小鼠。所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)兩次，但絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)了三次。(1)自發(fā)性腫瘤模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群中不經(jīng)有意識(shí)的人工實(shí)驗(yàn)處置而自然發(fā)生的一類腫瘤稱之為自發(fā)性腫瘤。選用自發(fā)性腫瘤型為對(duì)象進(jìn)行研究的優(yōu)點(diǎn)是自發(fā)性腫瘤通常比用實(shí)驗(yàn)方法誘發(fā)的腫瘤與人類所患的腫瘤更為相似，有利于將動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果推用到人，但不可能在短時(shí)間內(nèi)獲得大量腫瘤學(xué)材料，觀察時(shí)間可能較長和實(shí)驗(yàn)用到人，但不可能在短時(shí)間內(nèi)獲得大量腫瘤學(xué)材料，觀察時(shí)間可能較長和實(shí)驗(yàn)耗費(fèi)較大。我們采用了自發(fā)瘤模型應(yīng)用最多的C3H小鼠自發(fā)乳癌。C3H小鼠出生后有高的乳腺癌發(fā)生率(自發(fā)瘤可高達(dá)70%)。我們隨機(jī)地將小鼠分成四組無處理或照射的對(duì)照組，χ-線輻射照射組，青增素1號(hào)組和青增素1號(hào)加χ-線輻射組。每組10個(gè)小鼠。所有動(dòng)物耳朵將被標(biāo)記以便跟蹤鼠個(gè)體腫瘤的生長歷史。在我們喂養(yǎng)的C3H小鼠大約在九個(gè)月可見乳腺部位腫瘤發(fā)生。乳腺腫瘤的發(fā)展和生長在各個(gè)組別中未見明顯的有差異。當(dāng)腫瘤生長到大小約200mm2后，青增素1號(hào)組和青增素1號(hào)加x_線輻射組接受一周三次50mg/kg青增素1號(hào)靜脈注射共兩周，而無處理或照射的對(duì)照組和χ-線輻射照射組則靜脈注射生理鹽水。Χ-線輻射照射組和青增素1號(hào)加Χ_線輻射組然后接受一周兩次7Gy的)c-射線定位照射。在照射期間，青增素1號(hào)組和青增素1號(hào)加χ-線輻射組繼續(xù)接受一周三次的50mg/kg青增素1號(hào)靜脈注射直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束(照射后兩周)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，仔細(xì)測量每個(gè)小鼠的腫瘤大小并記錄。腫瘤大小的測量為每周2-3次，每次測量時(shí)稱鼠重。腫瘤體積的計(jì)算公式為V=π/eXaXbXc，其中a、b和c分別表示長、寬和高。并采用非參數(shù)曼惠特尼U-檢驗(yàn)辦法來檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組之間腫瘤大小的差異。P<0.05定為有明顯差異。每次測量時(shí)稱鼠重，計(jì)算相對(duì)體重(RWT)=測試時(shí)體重/試驗(yàn)開始時(shí)體重。如圖2所示，腫瘤在青增素1號(hào)組小鼠生長的腫瘤大小和無處理或照射的對(duì)照組小鼠生長的腫瘤大小無明顯差別(P>0.05)。和這些對(duì)照組相比，χ-線輻射照射組(ρ<0.01)和青增素1號(hào)加χ_線輻射組小鼠腫瘤(P<0.005)則明顯減小，但青增素1號(hào)加χ-線輻射組小鼠腫瘤比χ-線輻射照射組小鼠腫瘤更小。青增素1號(hào)加χ-線輻射組小鼠腫瘤和X-線輻射照射組小鼠體重并無明顯差別。這些數(shù)據(jù)表明青增素1號(hào)可以明顯增加自發(fā)腫瘤的放療敏感性。(2)誘發(fā)性腫瘤模型用化學(xué)致癌物、射線或病毒均可在各類動(dòng)物中誘發(fā)不同類型的腫瘤。從病因?qū)W角度分析，它與人體腫瘤較為近似，故此模型常用于特定的深入研究。現(xiàn)在已有非常成熟的誘發(fā)性腫瘤模型，如強(qiáng)化學(xué)致癌物二甲基苯蒽(DMBA)和甲基膽蒽可誘發(fā)乳癌。因此我們采用DMBA誘發(fā)雌性大鼠乳癌試驗(yàn)來檢測青增素1號(hào)放療增敏效果。2月鼠齡大小的Sprague-Dawley雄鼠，單次灌喂DMBA20微克/總共3次，一周內(nèi)完成。兩月后乳房部位可見腫瘤生長，成功率為75%左右。大約四月腫瘤長到170mm2大小后按以上自發(fā)性腫瘤模型中描述的實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行分組和處理。每組10個(gè)大鼠。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，仔細(xì)測量每個(gè)大鼠的腫瘤大小并記錄。并采用非參數(shù)曼惠特尼U-檢驗(yàn)辦法來檢驗(yàn)?zāi)[瘤大小的差異。正像圖3所示，青增素1號(hào)加χ-線輻射組大鼠腫瘤比未處理或青增素1號(hào)單獨(dú)處理的對(duì)照組的腫瘤要明顯小(P<0.005)，也比χ-線輻射照射組的腫瘤(ρ<0.01)來得小。這些數(shù)據(jù)表明青增素1號(hào)可以明顯增加化學(xué)致癌物DMBA誘發(fā)的乳癌放療敏感性。我們也采用DMBA誘發(fā)乳頭狀瘤模型。既用丙酮溶解DMBA150微克在雄性大鼠二側(cè)背部皮膚各涂一處，共涂21天，第3周后用巴豆油0.5mg在同一部位每周涂2次共34月。當(dāng)瘤>5mm2大小后開始按以上自發(fā)性腫瘤模型中描述的實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行癌塊大小動(dòng)物分組和處理。每組10個(gè)小鼠。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，仔細(xì)測量每個(gè)鼠的腫瘤大小并記錄。并采用非參數(shù)曼惠特尼U-檢驗(yàn)辦法來檢驗(yàn)?zāi)[瘤大小的差異。正像圖4所示的腫瘤生長的大小，青增素1號(hào)加χ-線輻射組小鼠的腫瘤是最小的，有些腫瘤都已測定不到了。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明注射了青增素1號(hào)的小鼠乳頭狀瘤對(duì)χ-線放療更加敏感，腫瘤生長明顯地受到了抑制。權(quán)利要求一種青蒿素衍生物，其特征在于，所述青蒿素衍生物化學(xué)結(jié)構(gòu)式為FSA00000125142300011.tif2.權(quán)利要求1所述青蒿素衍生物在制備腫瘤放射增敏藥物中的應(yīng)用。3.—種腫瘤放射增敏藥物，其特征在于有所述腫瘤放射增敏藥物的活性成分為青蒿素衍生物。全文摘要本發(fā)明屬于藥物化合物領(lǐng)域，涉及一種青蒿素衍生物及其制備方法和應(yīng)用，所述青蒿素衍生物的分子式為C24H41O9N，該青蒿素衍生物完全符合放射增敏藥的兩大基本特征，即單獨(dú)使用(正常的作為腫瘤放療增敏劑的劑量)沒有殺傷細(xì)胞的作用和只對(duì)腫瘤細(xì)胞有增敏作用，而且具有廣譜的腫瘤放療增敏效果。文檔編號(hào)A61P35/00GK101830945SQ201010179468公開日2010年9月15日申請(qǐng)日期2010年5月24日優(yōu)先權(quán)日2010年5月24日發(fā)明者樊賽軍申請(qǐng)人:蘇州基莫夫藥物開發(fā)有限公司