專利名稱：營(yíng)養(yǎng)組合物在制備恢復(fù)錯(cuò)配修復(fù)基因損傷藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種營(yíng)養(yǎng)組合物的用途，尤其是一種營(yíng)養(yǎng)組合物在制備恢復(fù)錯(cuò)配修復(fù)
基因損傷藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)(匪R)是人體細(xì)胞的一種能修復(fù)DNA堿基錯(cuò)配的安全保障體系，由一系列特異性修復(fù)DNA堿基錯(cuò)配的酶分子(錯(cuò)配修復(fù)基因產(chǎn)物)組成。正常情況下該系統(tǒng)能消除DNA復(fù)制錯(cuò)誤，保持遺傳物質(zhì)的完整性和穩(wěn)定性，避免遺傳物質(zhì)發(fā)生突變，保證DNA復(fù)制的忠實(shí)性。但是，如果錯(cuò)配修復(fù)基因損傷，則會(huì)影響DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)正常工作；具有錯(cuò)配修復(fù)缺陷的細(xì)胞突變率比正常細(xì)胞高出100 1000倍。 目前，在遺傳學(xué)方面已有如下權(quán)威結(jié)論"不論是器質(zhì)性疾病還是功能性疾病，都有必要在基因水平上去探究其病因"，"人類正常的衰老和死亡也受到基因的調(diào)控"，"不論是防治疾病還是延緩衰老，都可以從基因這個(gè)層次上來研究解決問題"為此，基因治療已經(jīng)成為現(xiàn)代科學(xué)研究的熱點(diǎn)。 基因治療是糾正與疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)，現(xiàn)有方法大多是以正常基因替換異常的致病基因。如將載有治療基因的病毒載體感染靶細(xì)胞；脂質(zhì)體攜帶治療基因穿過靶細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞；通過化學(xué)方法將治療基因與特異細(xì)胞受體結(jié)合，開展靶向治療。此外，也有少數(shù)用RNA干擾的方法。雖然1990年開始進(jìn)行第一例基因治療已獲得成功，但仍面臨如下問題有待解決①外源基因在受體表達(dá)不穩(wěn)定、時(shí)間短，限制了基因治療的療效；②外源基因移植引起免疫系統(tǒng)對(duì)已識(shí)別過的外來物產(chǎn)生免疫增強(qiáng)，使病人的治療難以重復(fù)；③病毒載體對(duì)病人可能有各種潛在的危險(xiǎn)；④許多疾病是由多基因缺陷引起的，無法用單基因糾正解決問題。 專利申請(qǐng)?zhí)枮?00710012788. 8的專利申請(qǐng)公開了一種"促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖與血紅蛋白合成的營(yíng)養(yǎng)組合物"。該營(yíng)養(yǎng)組合物的原料及重量比如下核苷酸90 110、精氨酸20 30、賴氨酸20 30、半胱氨酸10 20、甘氨酸25 35、組氨酸20 30、卵磷脂110 130、腦磷脂50 70、維生素E 0. 4 0. 6、維生素C 5 7、葉酸0. 02 0. 04、維生素B20. 05 0. 07、維生素B60. 07 0. 08、維生素B120. 0001 0. 0002、鐵0. 5 1. 5、鋅0. 5 0. 7、錳0. 4 0. 6、枸杞多糖14 16、葡萄籽提取物14 16?？擅黠@提高血中血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)及血小板(Pit)數(shù)量；可剌激骨髓造血干細(xì)胞的增殖，使造血干細(xì)胞明顯增多；明顯提高細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)目；對(duì)肝、脾的損傷具有明顯的恢復(fù)作用。該營(yíng)養(yǎng)組合物適用于營(yíng)養(yǎng)不良性貧血(缺鐵性貧血及葉酸與維生素B^營(yíng)養(yǎng)不良性貧血)、紅細(xì)胞生成減少所致貧血以及紅細(xì)胞破壞過多或丟失所致貧血。但是，該專利申請(qǐng)文件并沒有記載該營(yíng)養(yǎng)組合物具有恢復(fù)錯(cuò)配修復(fù)基因損傷的作用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是發(fā)現(xiàn)了上述營(yíng)養(yǎng)組合物具有恢復(fù) 配修復(fù)基因損傷的作用，提供一種營(yíng)養(yǎng)組合物在制備恢復(fù)錯(cuò)配修復(fù)基因損傷藥物中的應(yīng)用。 本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種營(yíng)養(yǎng)組合物在制備恢復(fù)錯(cuò)配修復(fù)基因損傷藥物中的應(yīng)用。 本發(fā)明作為藥物可為錯(cuò)配修復(fù)基因損傷的恢復(fù)提供基本營(yíng)養(yǎng)條件，即增強(qiáng)錯(cuò)配修復(fù)蛋白的活性，從而達(dá)到恢復(fù)錯(cuò)配修復(fù)基因損傷的目的。本發(fā)明解決了向機(jī)體植入外源基因所存在的種種問題，具有有效、安全、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、不產(chǎn)生免疫排斥等優(yōu)點(diǎn)。
圖1是本發(fā)明實(shí)施例四個(gè)錯(cuò)配修復(fù)基因編碼蛋白MSH2、 MSH3、 MLH1、 PMS2免疫印跡圖。 圖2是本發(fā)明實(shí)施例四個(gè)錯(cuò)配修復(fù)基因MSH2、 MSH3、 MLH1、 PMS2蛋白表達(dá)的組方示意圖。
具體實(shí)施例方式1.建立模型、實(shí)驗(yàn)分組和實(shí)驗(yàn)流程 再生障礙性貧血小鼠模型的建立本實(shí)驗(yàn)采用BALB/c小鼠。實(shí)驗(yàn)步驟第1天皮下注射乙酰苯肼100mg/kg，次日X射線2. OGy照射后，于第5天環(huán)磷酰胺80mg/kg腹腔注射，第15天重復(fù)以上步驟但不給予射線處理。以單純等量生理鹽水相應(yīng)部位注射為正常對(duì)照組。 實(shí)驗(yàn)分組根據(jù)動(dòng)物藥理學(xué)的藥品劑量和綜合實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)分析，分為①正常對(duì)照組；②再障模型組；③高劑量組，以1445. 55mg/kg. d營(yíng)養(yǎng)組合物對(duì)再障小鼠灌胃； 中劑量組，以963. 7mg/kg. d營(yíng)養(yǎng)組合物對(duì)再障小鼠灌胃；⑤低劑量組，以674. 59mg/kg. d營(yíng)養(yǎng)組合物對(duì)再障小鼠灌胃。 實(shí)驗(yàn)流程首先，按前述再障小鼠模型的建立方法，注射乙酰苯肼、環(huán)磷酰胺及X射線照射。從第7天開始，營(yíng)養(yǎng)組合物高、中、低劑量組分別以相應(yīng)劑量對(duì)再障小鼠進(jìn)行灌胃，每天一次，直至第49天，拉頸處死小鼠，采樣進(jìn)行檢測(cè)。
2.實(shí)驗(yàn)方法 2. 1.免疫印跡分析(Western blot analysis) 用2x的電泳緩沖液(125,1/L Tris-HCl，p朋.8，2% sodium dodecylsulfate，5% glycerol, and 1% P-mercaptoethanol)裂解細(xì)胞，離心取上清，蛋白濃度由BCA法檢測(cè)。煮沸變性的蛋白以每孔40ii g的含量點(diǎn)樣，經(jīng)濃縮膠為6%、分離膠為10%的SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳分離。通過電轉(zhuǎn)儀將凝膠上的蛋白樣品移至PVDF膜上，5X脫脂奶粉(TTBS配制)在37t:封閉2小時(shí)。分別與1 : 200免抗小鼠MSH2、 MSH3、 PMS2、MLH1、GAPDH多克隆抗體(錯(cuò)配修復(fù)基因蛋白及內(nèi)參蛋白)4。C孵育過夜。以TTBS洗膜3次，每次10分鐘。然后加HRP標(biāo)記的羊抗免IgG(l : 2000稀釋)37t:孵育1小時(shí)，隨后以TTBS洗膜3次，每次10分鐘。ECL發(fā)光試劑盒檢測(cè)結(jié)果。
2. 2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)均用SPSS 12. 0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。每一項(xiàng)分析至少有三次結(jié)果。數(shù)值用均數(shù)±SD表示，采用t檢驗(yàn)。P < 0. 05認(rèn)為有顯著性差異，并在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果本實(shí)驗(yàn)我們選用最常用的四個(gè)錯(cuò)配修復(fù)基因MSH2、MSH3、MLH1、PMS2。 如圖1、圖2所示與正常對(duì)照組相比，再障模型組小鼠骨髓造血細(xì)胞四個(gè)錯(cuò)配修
復(fù)基因的蛋白表達(dá)量均下調(diào)；營(yíng)養(yǎng)組合物處理再障小鼠后，小鼠骨髓造血細(xì)胞錯(cuò)配修復(fù)基
因的表達(dá)量隨營(yíng)養(yǎng)組合物劑量增加而增加，表明營(yíng)養(yǎng)組合物是通過增強(qiáng)錯(cuò)配修復(fù)蛋白的活
性而達(dá)到對(duì)再障小鼠錯(cuò)配修復(fù)基因損傷的恢復(fù)作用。 具體數(shù)值見表l。 表1營(yíng)養(yǎng)組合物對(duì)四個(gè)錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)的作用
相對(duì)表達(dá)對(duì)照組再障組高劑量組中劑量組翻量組
PMS20.660.34#0.73*o.r0.72*
匪0.820.27*0.7S*0.71*0.24*
鵬D.890.42#0.88*0.89*0.63*
MSH2O.柳03f0.58*0.50'0.51* #P < 0. 05再障組與對(duì)照組
*P < 0. 05營(yíng)養(yǎng)組合物組與再障組
結(jié)論 營(yíng)養(yǎng)組合物可促進(jìn)再障小鼠四個(gè)錯(cuò)配修復(fù)基因MSH2、 MSH3、 MLH1、 PMS2的蛋白表達(dá)量，對(duì)四個(gè)錯(cuò)配修復(fù)基因MSH2、 MSH3、 MLH1、 PMS2的損傷具有恢復(fù)作用。
權(quán)利要求
一種營(yíng)養(yǎng)組合物在制備恢復(fù)錯(cuò)配修復(fù)基因損傷藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開一種營(yíng)養(yǎng)組合物在制備恢復(fù)錯(cuò)配修復(fù)基因損傷藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明作為藥物可為錯(cuò)配修復(fù)基因損傷的恢復(fù)提供基本營(yíng)養(yǎng)條件，即增強(qiáng)錯(cuò)配修復(fù)蛋白的活性，從而達(dá)到恢復(fù)錯(cuò)配修復(fù)基因損傷的目的。本發(fā)明解決了向機(jī)體植入外源基因所存在的種種問題，具有有效、安全、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、不產(chǎn)生免疫排斥等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K31/519GK101780184SQ20101012903
公開日2010年7月21日 申請(qǐng)日期2010年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月22日
發(fā)明者吳文國(guó), 李恕, 董鋒 申請(qǐng)人:珍奧集團(tuán)股份有限公司