微型鐵調(diào)素肽及其使用方法

專利名稱：微型鐵調(diào)素肽及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有鐵調(diào)素活性的肽。
背景技術(shù)：
鐵調(diào)素，一種由肝臟產(chǎn)生的肽類激素，是一種人類和其它哺乳動(dòng)物的鐵穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)劑。鐵調(diào)素通過與其受體鐵輸出通道鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合，并引起其內(nèi)化和降解，從而發(fā)揮作用。人鐵調(diào)素是一種25-氨基酸的肽0fep25)。參見Krause等0000)FEBS Lett 480 147-150，和 Park 等 Q001)J Biol Chem276 :7806_7810。如 Jordan 等 Q009)J Biol Chem 284 J4155-67所描述，該具有生物活性的25-氨基酸形式的鐵調(diào)素的結(jié)構(gòu)為由8個(gè)半胱氨酸形成4個(gè)二硫鍵的單一的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。鐵調(diào)素活性異常與包括遺傳性血色病和鐵負(fù)荷性貧血的鐵超負(fù)荷疾病相關(guān)。遺傳性血色病(HH)是一種遺傳性鐵超負(fù)荷疾病，主要是由鐵調(diào)素不足引起，或極少數(shù)由鐵調(diào)素耐受性引起。這些使得飲食中鐵離子的過量吸收和鐵超負(fù)荷的形成。HH的臨床表現(xiàn)可以包括肝病(肝硬化，肝癌)，糖尿病和心臟衰竭。目前，HH的唯一治療方法是定期放血，這種方法非常有效，但使病人非?？鄲?。鐵負(fù)荷貧血是一種無(wú)效紅細(xì)胞生成的遺傳性貧血癥，如β -地中海貧血，并伴有嚴(yán)重的鐵超負(fù)荷。鐵超負(fù)荷的并發(fā)癥是這些患者發(fā)病和死亡的主要原因。鐵調(diào)素缺乏是未輸血患者鐵超負(fù)荷的主要原因，并且促使輸血患者的鐵超負(fù)荷。對(duì)于這些患者，目前治療鐵超負(fù)荷的方法是鐵螯合，這種方法非常繁重，有時(shí)無(wú)效，并且伴有頻繁的副作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種具有鐵調(diào)素活性的肽及其使用方法。本發(fā)明提供了一種肽，該肽可以是分離的和/或純化的，含有下述結(jié)構(gòu)式、主要由以下結(jié)構(gòu)式構(gòu)成或者由以下結(jié)構(gòu)式構(gòu)成 Α1-Α2-Α3-Α4-Α5-Α6-Α7-Α8-Α9-Α10其中Al是Asp、Glu、焦谷氨酸(pyroglutamate)、Gln、ASn、或者常用作它們的替代物的
非天然氨基酸；A2是Thr、kr、Val、Ala、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；
A3是His、AsruArg、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；A4是Wre、Leu、lie、Trp, Tyr、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸，所述非天然氨基酸包括環(huán)己基丙氨酸；A5是ftx)、kr、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；A6是lie、Leu、Val、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；A7是Cys、kr、Ala、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸，所述非天然氨基酸包括S-叔丁基-半胱氨酸；A8是lie、Leu、Thr、Val、Arg、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；A9是Wre、Leu、lie、Tyr、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸，所述非天然氨基酸包括環(huán)己基丙氨酸；并且AlO是Cys、kr、Ala、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；其中，羧基末端氨基酸是酰胺或羧基形式；至少一個(gè)巰基氨基酸作為氨基酸之一存在于序列中；并且Al、A2、A3、Al至A2、Al至A3、AlO、A9至AlO、A8至AlO、或者它們的組合可選擇
性地缺失。條件是所述肽不含有H印25的氨基酸殘基1至6。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的所述肽不是H印4-7、H印3-7、Hep 1-7, H印9C7_tBut、 H印9-C7A、H印9-7CS、(D) Pen、Cyc_2、Cyc_3、Cyc_4、或者 Pr26。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的所述肽只含有一個(gè)氨基酸殘基，所述氨基酸殘基含有能夠形成二硫鍵的巰基。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的所述肽只含有兩個(gè)氨基酸殘基，所述氨基酸殘基各自含有能夠形成二硫鍵的巰基。在一些實(shí)施方式中，Al 是 0-六8 、0-6111、0-焦谷氨酸、0-6111、04811、131^8 、1(^、或者^]^六8口 ；A2 是 D-Thr、D4er、D-Val、Tie、Inp、Chg、bhThr、或者 N-MeThr ；A3 是 D-His、D_Asn、DArg、Dpa、_pa、或者 2_ 氨基茚；A4 是 D-Phe、D-Leu、D_11e、D-Trp、Phg、bhPhe、Dpa、Bip、INal、bhDpa、Amc、PheF5、 hPhe, Igl、或者環(huán)己基丙氨酸；A5 是 D-Pro、D-Ser> Oic、bUro、反式-4-PhftO、順式-4-PhftO、順式-5-PhPro、 Idc ；A6 是 D-Ile、D-Leu、Phg、Chg、Amc、bhlle、Ach JPMeIle ；A7 是 D-Cys、D-Ser、D-Ala、Cys(S_tBut)、homoC、Pen、(D) Pen、Dap (AcBr)、禾口 Inp ；A8 是 D-Ile、D-Leu, D-Thr, D-Val, D-Arg, Chg, Dpa、bhlle、Ach、或者 MeIle ；A9 是 D-Phe、D-Leu、D_11 e、PheF5、N-MePhe、芐酰胺、bhPhe、Dpa、Bip、INal、bhDpa、 環(huán)己基丙氨酸；或者AlO 是 D-Cys> D-Ser > D-Ala ；或者它們的組合。在一些實(shí)施方式中，Al 是 Ala、D-Ala、Cys、D-Cys、Phe、D_Phe、Asp 或者連接于 Cys 或者 DCys 的 D_Asp、Phe或者連接于聚乙二醇分子的D-Phe、或者Dpa或者連接于棕櫚酰的(D)Dpa，所述聚乙二醇分子連接于鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸、或者棕櫚酰；A2 是 Ala、D-Ala, Cys, D-Cys, Pro、D-Pro, Gly、或者 D-Gly ；A3 是 Ala、D_Ala、Cys、D-Cys, Dpa、Asp 或者連接于 Dpa 或者(D) Dpa 的 D-Asp ；A4 是 Ala、D_Ala、Pro、或者 D-Pro ；A5 是 Ala、D_Ala、Pro、D_Pro、Arg、D-Arg ；A6 是 Ala、D_Ala、Phe、D_Phe、Arg、D-Arg> Cys、D-Cys ；A7 是 Hi s、或者 D-Hi s ；A8 是 Cys、或者 D_Cys ；或者A9 是連接于 RA 的 Phe 或者 D_Phe、Asp、D_Asp、連接于 RB 的 Asp 或者 D_Asp、 連接于RC的bhPhe、或者巰基乙胺，其中，所述RA是-CONH2-CH2-CH2-S、連接于Pro-Lys 或者Pro-Arg的_D_Pro、連接于與Pro-Lys或者Pro-Arg連接的Pro的-bhPro、連接于 bhPro-Lys 或者 bhPro-Arg 的-D-Pro，RB 是-PEGl 1-GYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFL、- (PEG 11)-(GPHyp) 10,并且，RC 是連接于 Pro-Lys 或者 Pro-Arg 的-D_Pro、連接于 bhPro-Lys 或者 bhPro-Arg 的-DPro ；或者它們的組合物。在一些實(shí)施方式中，Al是 Asp，A2 是 Thr，A3 是 His，A4 是 Wie，A5 是 ftx)，A6 是 He, A7是Ala，A8是lie，A9是Phe，并且AlO是酰胺形式的Cys，其中Al或者Al至A2可選擇性地缺失。在一些實(shí)施方式中，Al是 Asp，A2 是 Thr，A3 是 His，A4 是 Wie，A5 是 ftx)，A6 是 He, A7是Cys或者非天然巰基氨基酸，A8是Ile ；A9是酰胺形式的Wie，并且AlO缺失。在一些實(shí)施方式中，Al和A2缺失，A3是His，A4是Wie，A5是ftx)，A6是lie，A7 是Cys或者非天然巰基氨基酸，A8是酰胺形式的lie，并且A9和AlO缺失。在一些實(shí)施方式中，Al和A2缺失，A3是His，A4是Wie，A5是ftx)，A6是lie，A7 是Cys或者酰胺形式的非天然巰基氨基酸，并且A8至AlO缺失。在一些實(shí)施方式中，所述肽是環(huán)肽。在一些實(shí)施方式中，所述肽是倒序的(retroinverted)，使得Al是酰胺的C-末端并且AlO是N-末端，所有的氨基酸是D-型氨基酸而不是天然L-型氨基酸。在一些實(shí)施方式中，所述肽在N-末端、C-末端、或者兩端含有一個(gè)加成。在一些實(shí)施方式中，所述肽選自由Hep3_8、H印3-9、Hep 1-8, Hep 1-9, H印1-10C7A、 H印9F4A、H印9C7-SStBut、(D) C、homoC、Pen、(D) Pen, Cyc-I、Pr 10、Pr 11、Pr 12、riH印7 Δ DT、 Pr23、Pr24、Pr25、Pr27、Pr28、F4bhPhe、F4Dpa、F4Bip、F41Nal、F4bhDpa、F9bhPhe、F9Dpa、 F9B ip、F9 INal、F9bhDpa、Pr 39、Pr40、Pr41、Pr42、Pr43、Pr44、Pr45、Pr46、Pr 13、Pr 14、Pr 15、 Prl6、Prl7、Prl8、Prl9、Pr20、Pr21、Pr22、Pr_l、Pr_2、Pr_3、和 Pr_4 組成的組。 在一些實(shí)施方式中，所述肽具有鐵調(diào)素活性。在一些實(shí)施方式中，所述肽與鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合，優(yōu)選為人鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了含有至少一種本發(fā)明所述的肽的組合物和藥物制劑。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了含有至少一種本發(fā)明所述的肽的藥物制劑的制備方法，該藥物制劑用于治療鐵代謝疾病，如鐵超負(fù)荷疾病。還提供了治療患者鐵代謝疾病的方法，如哺乳動(dòng)物患者，優(yōu)選為人類患者，該方法包括給予患者至少一種本發(fā)明所述的肽或者組合物。在一些實(shí)施方式中，所述肽以治療有效量進(jìn)行給藥。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了結(jié)合鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白或誘導(dǎo)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白內(nèi)化和降解的方法，該方法包括將鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與本發(fā)明所述的至少一種肽或組合物接觸。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種試劑盒，該試劑盒包括與試劑、裝置、指導(dǎo)材料、或者它們的組合一起包裝的本發(fā)明所述的至少一種肽或組合物。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種復(fù)合物，該復(fù)合物含有本發(fā)明所述的至少一種肽與鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合，優(yōu)選為人鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，或者與抗體相結(jié)合，例如該抗體可特異性地結(jié)合于本發(fā)明所述肽，Hep25，或者與它們的組合。無(wú)論是以上的概述還是以下的詳細(xì)說明都僅是典型和解釋，旨在為權(quán)利要求所述的發(fā)明做進(jìn)一步的解釋。附圖旨在對(duì)本發(fā)明提供進(jìn)一步的理解，全部包含在本說明書中并構(gòu)成本說明書的一部分，對(duì)本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式進(jìn)行說明，并與說明書一起來(lái)解釋說明本發(fā)明的原理。


本發(fā)明可通過參考附圖進(jìn)一步理解。圖1為表示Hep25中丙氨酸替代物的相對(duì)鐵調(diào)素活性的圖；圖2A為表示H印25中F4替代物的相對(duì)鐵調(diào)素活性的圖；圖2B為表示H印25中F9替代物的相對(duì)鐵調(diào)素活性的圖；圖3A為表示H印1-9和H印1-10C7A相對(duì)于H印25 (A)的鐵調(diào)素活性的圖；圖;3B為表示H印1-7和H印1_8相對(duì)于H印1_9或者H印25的鐵調(diào)素活性的圖；圖3C為表示H印4-7、H印3-7、H印3-8和H印3-9相對(duì)于H印1-9的鐵調(diào)素活性的圖；圖4為表示C7修飾肽相對(duì)于!fep25的鐵調(diào)素活性的圖；圖5為表示與H印25，或者對(duì)照組(PBS)相比，微型鐵調(diào)素H印l_9、Pr6和1^12的體內(nèi)作用(通過小鼠血清鐵濃度測(cè)定)，每只小鼠腹腔注射50 μ g肽；圖6為表示腹腔注射微型鐵調(diào)素1^27 (20和200nmOleS)的體內(nèi)作用(通過小鼠血清鐵濃度測(cè)定)，Hep25的注射劑量為20nmOles ；圖7為表示腹腔注射微型鐵調(diào)素riH印7 ADT(20和200nmOleS)的體內(nèi)作用(通過小鼠血清鐵濃度測(cè)定)，Hep25的注射劑量為20nmoles ；圖8為表示腹腔注射微型鐵調(diào)素1^27和(20nmoles)的體內(nèi)作用(通過小鼠血清鐵濃度測(cè)定)，腹腔注射前預(yù)先與脂質(zhì)體混合，H印25的注射劑量為20nmOles ；圖9為表示口服強(qiáng)制給予微型鐵調(diào)素ft^TQOOnmoles)后的體內(nèi)作用(通過小鼠血清鐵濃度測(cè)定)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種肽，該肽可應(yīng)用于鐵代謝疾病的研究和治療。本發(fā)明所用的“鐵代謝疾病”，包括鐵代謝異常直接引起的疾病，或者血液中鐵水平失調(diào)引起的疾病，或者是由另一種疾病引起的鐵失調(diào)的疾病，或者可以通過調(diào)節(jié)鐵水平治療的疾病，等等。更具體地說，根據(jù)該權(quán)利要求所述，鐵代謝疾病包括鐵超負(fù)荷疾病，鐵缺乏癥，鐵生物分布紊亂癥，其它鐵代謝紊亂癥及其它與鐵代謝潛在相關(guān)的紊亂癥，等等。鐵代謝疾病包括血色病、HFE突變的血色病、鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白突變的血色病、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2突變的血色病、血幼素(hemojuvelin)突變血色病、鐵調(diào)素突變的血色病、青少年血色病、新生兒血色病、鐵調(diào)素缺乏癥、輸血性鐵超負(fù)荷、地中海貧血、中度地中海貧血、α地中海貧血、 鐵粒幼細(xì)胞性貧血、嚇啉癥、遲發(fā)性皮膚卟啉癥、非洲鐵超負(fù)荷、高鐵蛋白血癥、銅藍(lán)蛋白缺乏癥、無(wú)轉(zhuǎn)鐵蛋白血癥、先天性紅細(xì)胞生長(zhǎng)不良性貧血、慢性貧血疾病、炎癥性貧血、感染性貧血、低色性小球性貧血、缺鐵性貧血、難治性缺鐵性貧血、慢性腎病性貧血、促紅細(xì)胞生成素障礙、缺鐵性肥胖、其它貧血、過量產(chǎn)生鐵調(diào)素或誘導(dǎo)其過量產(chǎn)生的良性或惡性的腫瘤、 鐵調(diào)素過剩癥、弗里德(Friedreich)共濟(jì)失調(diào)、纖細(xì)綜合征、蒼白球色素性退變綜合征、威爾森氏癥、肺含鐵血黃素沉著病、肝癌、癌癥、肝炎、肝硬化、異食癖、慢性腎功能衰竭、胰島素抵抗、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、神經(jīng)退行性疾病、多發(fā)性硬化癥、帕金森氏病、亨廷頓氏病和阿爾茨海默氏病。在某些情況下，“鐵代謝性疾病”的定義所包括的疾病和紊亂通常未被明確確定為與鐵相關(guān)。例如，鐵調(diào)素在小鼠胰腺的過高表達(dá)表明糖尿病(I型或II型)、胰島素抵抗、葡萄糖不耐受和其它紊亂可能通過治療根本上的鐵代謝疾病來(lái)改善。參見Ilyin，G.等(2003 年)FEBS Lett. 54222-26，其在此處作為參考。因此，這些疾病都包含在廣義的定義中。根據(jù)本發(fā)明使用的本領(lǐng)域公知的方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易就能確定給定的疾病是否是一種“鐵代謝疾病”，包括本發(fā)明所參考的W0200409M05所述的方法，以及本領(lǐng)域公知的監(jiān)測(cè)鐵調(diào)素、血幼素或鐵水平和表達(dá)的方法，例如本發(fā)明引用的美國(guó)專利No. 7，534，764所述。在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方式中，鐵代謝疾病是指鐵超負(fù)荷疾病，其中包括遺傳性血色病、鐵負(fù)荷性貧血、酒精性肝疾病和慢性丙型肝炎。本發(fā)明所使用的術(shù)語(yǔ)“蛋白”，“多肽”和“肽”可以互換使用，指兩個(gè)或兩個(gè)以上相連的氨基酸。除了如表2所示的罕見或非天然氨基酸的縮寫之外，在本發(fā)明中使用本領(lǐng)域常用的三個(gè)字母和一個(gè)字母的縮寫來(lái)表示氨基酸殘基。除前面標(biāo)明“D-”外，所述氨基酸是 L-氨基酸。氨基酸縮寫群組或字符串用來(lái)表示肽。除非特別注明外，所述肽以N-末端在左側(cè)表示，并且其序列是從N-末端寫到C-末端。本發(fā)明所述肽可以用本領(lǐng)域公知的方法制備，包括化學(xué)合成、生物合成或用 DNA重組方法體外合成，以及固相合成。例如，參見Kelly和Winkler (1990)Genetic Engineering Principles and Methods, vol. 12, J. K. Setlow ed. , Plenum Press, NY, pp. 1-19 ；Merrifield(1964) J Amer Chem Soc 85 :2149 ；Houghten (1985)PNAS USA 82: 5131-5135 ； 禾口 Stewart&Young(1984) Solid Phase Peptide Synthesis,2ed. Pierce, Rockford, IL，本發(fā)明將它們引入作為參考。本發(fā)明所述肽可以用本領(lǐng)域公知的蛋白純化技術(shù)純化，諸如反相高效液相色譜法(HPLC)、離子交換或免疫親和層析、濾過或尺寸排阻色譜法、或電泳法。參見 01snes，S.和 A. Pihl (1973) Biochem. 12 (16) :3121-3126 ；^P Scopes (1982) Protein Purification, Springer-Verlag，NY，本發(fā)明將它們引入作為參考。 另外，本發(fā)明所述肽可用本領(lǐng)域公知的重組DNA技術(shù)制備。因此，在此處引入編碼本發(fā)明所述多肽的多聚核苷酸。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，多聚核苷酸是分離的。本發(fā)明使用的“分離的多聚核苷酸”是指存在于不同于多聚核苷酸自然產(chǎn)生的環(huán)境中的核苷酸。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明所述肽進(jìn)行了大致純化。此處使用的“大致純化”的化合物是指一種從該化合物的天然環(huán)境提取的化合物，并且有最少約60%，優(yōu)選約75%，最優(yōu)選約90 %的該化合物從與該化合物相關(guān)的其它大分子化合物相游離。本發(fā)明所使用的“分離的”化合物是指將其從自然環(huán)境中分離。例如，相對(duì)于全鏈多肽，分離肽是在其N-末端、C-末端、或兩端的側(cè)鏈上不含天然氨基酸的多肽。例如，分離的H印1-9是指H印25的氨基酸殘基1-9組成的分離肽，該分離肽可以再在其N-末端、C-末端、或兩端含有非天然氨基酸，但在C-末端的第九個(gè)氨基酸殘基之后無(wú)半胱氨酸的氨基酸殘基。如本發(fā)明所規(guī)定，本發(fā)明涉及的氨基酸位置與H印25的氨基酸殘基一致。例如，所述氨基酸位置9，對(duì)應(yīng)于!fep25的第九個(gè)氨基酸殘基。本發(fā)明所述肽可結(jié)合于鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，優(yōu)選為人鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。本發(fā)明優(yōu)選的肽可特異性結(jié)合于人鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。此處所使用的“特異性結(jié)合”是指與樣品中其它試劑相比、特異性結(jié)合劑可與樣品中給定配體優(yōu)先作用。例如，能特異性結(jié)合給定配體的特異性結(jié)合劑，在合適條件下，其結(jié)合于給定的配體，在量或程度上，明顯超過與樣品中其它組分的非特異性結(jié)合。所述合適條件是指能夠允許給定特異性結(jié)合劑和給定配體相互作用的條件。所述條件包括PH值、溫度、濃度、溶劑、孵化時(shí)間等等，這些條件可能在不同的給定的特異性結(jié)合劑和配體對(duì)間有差異，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地測(cè)得。本發(fā)明的所述肽，以下簡(jiǎn)稱“微型鐵調(diào)素”，模擬H印25即生物活性的人類25-氨基酸形式的鐵調(diào)素活性。本發(fā)明中所使用的具有“鐵調(diào)素活性”的化合物是指該化合物在給予(如腸外注射或口服)患者后，能夠呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性降低患者(如小鼠或人) 的血漿鐵水平。例如參見Rivera等(2005)，blood 106 :2196-9。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的所述肽具有體外活性，根據(jù)文獻(xiàn)Nemeth等Q006) Blood 107 :3觀-33，其可以通過測(cè)定鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)細(xì)胞株內(nèi)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的內(nèi)化和降解來(lái)測(cè)定。體外活性可以通過將鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白標(biāo)記為綠色熒光蛋白，測(cè)定細(xì)胞中劑量依賴性熒光損失來(lái)測(cè)定。參見Nemeth等(2006)Bloodl07 :328_33。按參比制劑H印25或微型鐵調(diào)素濃度梯度，將等份細(xì)胞培養(yǎng)M小時(shí)。如此處所述，EC5tl值是指能夠引起參比H印25制劑產(chǎn)生最大熒光損失的50%所需的給定化合物濃度(如肽)。在測(cè)定中!fep25的EC5tl值在5至 15nM范圍內(nèi)，在體外活性測(cè)定中優(yōu)選微型鐵調(diào)素的EC5tl值約為IOOOnM或更低。根據(jù)本發(fā)明，本領(lǐng)域其它已知方法也可以用于計(jì)算鐵調(diào)素活性和肽體外活性。例如，可以通過測(cè)定其導(dǎo)致鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白細(xì)胞內(nèi)化的能力來(lái)測(cè)定化合物體外活性，它是采用能識(shí)別細(xì)胞外鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗原決定簇的抗體，應(yīng)用免疫組織化學(xué)或流式細(xì)胞儀測(cè)定。另外，如 Nemeth等O006)Blood 107 :328-33所述，可預(yù)先用鐵的放射性同位素或穩(wěn)定同位素使鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)細(xì)胞超負(fù)荷，測(cè)定化合物抑制鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)細(xì)胞鐵外流的劑量依賴性抑制能力，來(lái)測(cè)定化合物體外活性。微型鐵調(diào)素設(shè)計(jì)以往研究表明，Hep25的N-末端區(qū)段對(duì)其鐵調(diào)素活性非常重要，并有可能形成與鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的接觸界面。然而，每個(gè)N-末端氨基酸對(duì)鐵調(diào)素活性的重要性仍不明確。因此，對(duì)Hep25的殘基1-6進(jìn)行丙氨酸掃描誘變，以測(cè)定每個(gè)N-末端氨基酸對(duì)鐵調(diào)素活性的影響。如圖1所示，T2A替代物對(duì)鐵調(diào)素活性無(wú)實(shí)質(zhì)性影響。苯丙氨酸替代物(F4A或F9A) 引起鐵調(diào)素活性下降幅度最大，高達(dá)70%以上。其余丙氨酸替代物也可測(cè)得其使鐵調(diào)素活性下降，但不如F4A或F9A替代物影響顯著。為確定高度保留的并且結(jié)構(gòu)上極為重要的F4位苯丙氨酸對(duì)鐵調(diào)素活性是否有重要作用，本發(fā)明用其它氨基酸系統(tǒng)地替代H印25的F4位氨基酸。如圖2A所示，側(cè)鏈極性增加(F4Y)可以導(dǎo)致鐵調(diào)素活性明顯降低，即用D-型苯丙氨酸(f)或帶電氨基酸(D、K和Y) 替代。然而，用非芳香族環(huán)己基丙氨酸替代F4位殘基時(shí)，鐵調(diào)素活性未變化，從而表明，大量疏水性殘基有助于提高鐵調(diào)素活性。為確定高度保留的并且結(jié)構(gòu)上極為重要的F9位苯丙氨酸對(duì)鐵調(diào)素活性是否有重要作用，本發(fā)明用其它氨基酸替代H印25的F9位氨基酸。如圖2B所示，當(dāng)F9位不論是用丙氨酸替代還是用非芳香族環(huán)己基丙氨酸替代時(shí)，鐵調(diào)素活性均降低，從而表明，芳香族殘基對(duì)鐵調(diào)素活性有重要影響?；蛲蛔冄芯勘砻?，C326，即人鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3 位半胱氨酸殘基，是參與鐵調(diào)素結(jié)合的關(guān)鍵氨基酸殘基。因此，本發(fā)明化學(xué)合成、重組了多種包含巰基的Hep25N-末端片段， 如 H印4-7、H印3-7、H印3-8、H印3-9、Hep 1-7, Hep 1-8, Hep 1-9 和 H印 1-10C7A，它們相對(duì)于 Hep25的相對(duì)活性采用流式細(xì)胞儀定量測(cè)定鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-GFP的降解、基于細(xì)胞鐵蛋白測(cè)定方法的鐵外排評(píng)價(jià)、以及放射性同位素鐵外流研究進(jìn)行測(cè)定。這些序列和這些N-末端片段的EC50值如表1所示。顯著的并且出乎意料的是，如圖3所示，在流式細(xì)胞儀測(cè)定鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-GFP中， H印1-9和H印1-10 C7A顯示相當(dāng)強(qiáng)的活性。與!1印邪相比，在質(zhì)量水平上，H印1-9和H印1-10 C7A只有大約4倍以下活性，在摩爾水平上，大約10倍以下活性。因此，H印1-9和!fepl-10 C7A被用作構(gòu)建其它具有鐵調(diào)素活性的肽的基底。為確定半胱氨酸巰基對(duì)H印1-9的鐵調(diào)素活性的重要作用，將H印1-9的C7位用具有相似形狀但不能形成二硫鍵的氨基酸替代，得到Hep9-C7S(絲氨酸替代物)和 Hep9C7-tBut (叔丁基阻斷半胱氨酸)，或用叔丁基耦合二硫鍵修飾的半胱氨酸(可以作為保留基團(tuán)參與HS-叔丁基的二硫鍵交換)替代，得到H印9C7-SMBut。如圖4所示，能夠切斷二硫鍵形成或交換的氨基酸替代物可以導(dǎo)致鐵調(diào)素活性完全喪失，從而表明，二硫鍵形成是鐵調(diào)素活性的必需條件。其它C7氨基酸替代物及其鐵調(diào)素活性見表1。基于H印1-9和H印1-10 C7A的其它肽構(gòu)建成二硫鍵環(huán)化肽，所述肽含有非天然氨基酸替代物，是經(jīng)后逆轉(zhuǎn)錄的，包含修飾F4和F9位殘基，或帶有一個(gè)正電荷。其C-末端氨基酸是酰胺形式。修飾后和相應(yīng)的鐵調(diào)素活性如表1所示。如表1所示，除和之外，EC50約為IOOOnM或以下的微型鐵調(diào)素包含至少6個(gè)相鄰的氨基酸殘基，相對(duì)于Ifep25的殘基3-8 (參見H印3-8)。因此，在一些實(shí)施方式中，優(yōu)選微型鐵調(diào)素至少含有6個(gè)相鄰的氨基酸殘基，相對(duì)于Hepl-9的6個(gè)相鄰氨基酸殘基，優(yōu)選殘基3-8。氨基酸殘基可以是非天然或稀有氨基酸、L-型或D-型氨基酸殘基、修飾殘基、或它們的組合。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明所述微型鐵調(diào)素至少有一個(gè)氨基酸替代物、修飾、或加成。氨基酸替代物實(shí)例包括將用D-型氨基酸殘基替代其相應(yīng)的L-型氨基酸殘基，用homoC、 Pen、D-型Pen、hp、或類似氨基酸替代半胱氨酸，用WiWie、Dpa, bhDpa, Bip、INal、以及其類似氨基酸替代Wie。替代殘基的名稱和結(jié)構(gòu)在表2中列出。其它合適的替代物在表1中列出。修飾的實(shí)例包括修飾一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的肽使肽形成一個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)、后倒序(retroinversion)、以及修飾一個(gè)殘基使形成二硫鍵。如表1所示，加成的實(shí)例包括在N-末端、C-末端、或兩端增加至少一個(gè)氨基酸殘基或至少一個(gè)化合物。如表1所示，大多數(shù)微型鐵調(diào)素的EC5tl約IOOnM或以下，至少包含一個(gè)Dpa或WiDPA 氨基酸替代物。因此，在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明所述微型鐵調(diào)素至少有一個(gè)Dpa或W1DPA
氨基酸替代物。由圖1丙氨酸取代數(shù)據(jù)來(lái)看，在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明所述微型鐵調(diào)素可以在7 位氨基酸位置含有Ala，而不是在4位和9為氨基酸位置，因?yàn)樵?位氨基酸位置含有可以形成二硫鍵的巰基。見表1中H印9F4A和H印9C-SStBut。由圖2和表1中4位氨基酸取代數(shù)據(jù)來(lái)看，本發(fā)明的所述微型鐵調(diào)素在4位可以有氨基酸替代物，與H印25、H印1-9或H印1-10 C7A相比，該替代物不會(huì)導(dǎo)致其荷電性質(zhì)或極性的實(shí)質(zhì)性變化。H印1-9或H印1-10 C7A的4位的優(yōu)選氨基酸替代物包括Wie、D-Phe, bhPhe、Dpa、bhDpa、Bip、INal、或類似氨基酸。根據(jù)本發(fā)明的微型鐵調(diào)素，具有以下結(jié)構(gòu)式A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10其中Al是Asp、Glu、焦谷氨酸、Gin、Asn、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；A2是Thr、kr、Val、Ala、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；A3是His、AsruArg、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；A4是W!e、LeU、Ile、Trp、Tyr、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸，其中，所述非天然氨基酸包括環(huán)己基丙氨酸；A5是ft~0、kr、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；A6是lie、Leu、Val、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；A7是Cys、kr、Ala、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸，其中，所述非天然氨基酸包括S-叔丁基-半胱氨酸；A8是lie、Leu、Thr、Val、Arg、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；A9是W!e、LeU、Ile、Tyr、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸，其中，所述非天然氨基酸包括環(huán)己基丙氨酸；并且AlO是Cys、kr、Ala、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸；其中，羧基末端氨基酸是酰胺或羧基形式；Cys或不同的巰基氨基酸作為氨基酸之一存在于序列中；并且Al、A2、A3、Al至A2、Al至A3、A10、A9至A10、A8至A10、或者它們的組合可選擇性地缺失。在一些實(shí)施方式中，Al是 Asp，A2 是 Hir，A3 是 His，A4 是 Phe，；A5 是 Pro，A6 是 He, A7是Ala，A8是lie，A9是Phe，并且AlO是酰胺形式的Cys，其中，Al或Al至A2可選擇性地缺失。在一些實(shí)施方式中，Al是 Asp，A2 是 Thr，A3 是 His，A4 是 Wie，A5 是 ftx)，A6 是 He, A7是Cys或非天然巰基氨基酸，A8是lie，A9是酰胺形式的Wie，并且AlO缺失。在一些實(shí)施方式中，Al和A2缺失，A3是His，A4是Wie，A5是ftx)，A6是lie，A7 是Cys或非天然巰基氨基酸，A8是酰胺形式的lie，并且A9和AlO缺失。
在一些實(shí)施方式中，Al和A2缺失，A3是His，A4是Wie，A5是ftx)，A6是lie，A7 是Cys或非天然巰基氨基酸，并且A8至AlO缺失。在一些實(shí)施方式中，非天然氨基酸A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、或者它們的組合是指相應(yīng)的D-型氨基酸。例如，對(duì)Al來(lái)說，其非天然氨基酸可以是D-Asp、D-Glu, D-Gln, D-Asn、或其它等等。在一些實(shí)施方式中，所述非天然氨基酸為Al 是 D-Asp、D-Glu、D-焦谷氨酸、D-Gln、D-Asn、bhAsp、Ida、或者 N-MeAsp ；A2 是 D-Thr、D4er、D-Val、Tie、Inp、Chg、bhThr、或者 N-MeThr ；A3 是 D-His、D_Asn、DArg、Dpa、_pa、或者 2_ 氨基茚；A4 是 D-Phe、D-Leu、D_11e、D-Trp、Phg、bhPhe、Dpa、Bip、INal、bhDpa、Amc、PheF5、 hPhe, Igl、或者環(huán)己基丙氨酸；A5 是 D-Pro、D-Ser> Oic、bUro、反式-4-PhftO、順式-4-PhftO、順式-5-PhPro、 Idc ；A6 是 D-Ile、D-Leu、Phg、Chg、Amc、bhlle、Ach JPMeIle ；A7 是 D-Cys、D-Ser、D-Ala、Cys(S_tBut)、homoC、Pen、(D) Pen、Dap (AcBr)、禾口 Inp ；A8 是 D-Ile、D-Leu> D-Thr> D_Val、D_Arg、Chg> Dpa、bhlle、Ach、或 MeIle ；A9 是 D-Phe、D-Leu、D_11 e、PheF5、N-MePhe、芐酰胺、bhPhe、Dpa、Bip、INal、bhDpa、 環(huán)己基丙氨酸；并且AlO 是 D-Cys、D_Ser、D-Ala0在一些實(shí)施方式中，所述氨基酸替代物(以及加成物，如有說明)為Al 是 Ala、D-Ala、Cys、D-Cys、Phe、D_Phe、Asp 或者連接于 Cys 或者 DCys 的 D_Asp、 Phe或者連接于聚乙二醇分子的D-Phe、或者Dpa或者連接于棕櫚酰的(D)Dpa，所述聚乙二醇分子連接于鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸、或者棕櫚酰；A2 是 Ala、D-Ala、Cys、D_Cys、Pro、D-Pro、Gly、或者 D-Gly ；A3 是 Ala、D-Ala、Cys、D_Cys、Dpa、Asp 或者連接于 Dpa 或者(D) Dpa 的 D-Asp ；A4 ^ Ala> D~Ala>D-Pro ；A5 是 Ala、D-Ala、Pro、D-Pro、Arg、D-Arg ；A6 是 Ala、D-Ala、Phe、D-Phe、Arg、D-Arg、Cys、D-Cys ；A7 是 Hi s、或者 D-Hi s ；A8 是 Cys、或者 D_Cys ；并且A9 是連接于 RA 的 Phe 或者 D_Phe、Asp、D_Asp、連接于 RB 的 Asp 或者 D_Asp、 連接于RC的bhPhe、或者巰基乙胺，其中，所述RA是-CONH2-CH2-CH2-S、連接于Pro-Lys 或者Pro-Arg的_D_Pro、連接于與Pro-Lys或者Pro-Arg連接的Pro的-bhPro、連接于 bhPro-Lys 或者 bhPro-Arg 的-D-Pro，RB 是-PEGl 1-GYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFL、- (P EGll)-(GPHyp) 10,并且，RC 是連接于 Pro-Lys 或者 Pro-Arg 的-D_Pro、連接于 bhPro-Lys 或者 bhPro-Arg 的-DPro。在一些實(shí)施方式中，所述微型鐵調(diào)素是10部分序列，其中A7是Ala，并且AlO是 Cys0在一些實(shí)施方式中，所述微型鐵調(diào)素通過二硫鍵形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
在一些實(shí)施方式中，所述肽是倒序的(retroinverted)，使Al為C-末端并且AlO 為N-末端，并且氨基酸殘基是D-型氨基酸。在一些實(shí)施方式中，所述倒序(retroinverted) 肽在N-末端、C-末端、或兩端至少包含一個(gè)加成。在一些實(shí)施方式中，所述倒序 (retroinverted)肽至少包含一個(gè)L-型氨基酸。在一些實(shí)施方式中，所述微型鐵調(diào)素在4位、9位、或兩個(gè)位置含有氨基酸替代物。在一些實(shí)施方式中，所述氨基酸替代物是Wig、Phe、D-Phe、bhPhe、Dpa、BipUNal、Dpa、 bhDpa、Amc、或巰乙胺。在一些實(shí)施方式中，所述微型鐵調(diào)素在7位含有氨基酸替代物。在一些實(shí)施方式中，所述氨基酸替代物是 Cys(S-tBut)、Ala、D_Ala、Ser, D-Ser, homoC、Pen、(D) Pen、His、 D-His> gJc Inp0根據(jù)本發(fā)明，一些優(yōu)選的微型鐵調(diào)素在表1中列出。
權(quán)利要求
1.一種分離的肽，該肽具有以下結(jié)構(gòu)式 A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10 其中，Al是Asp、Glu、焦谷氨酸、Gin、Asn、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸； 八2是11^、^^、￥31、411或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸； A3是His、AsruArg、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸； A4是Wre、Leu、lie、Trp, Tyr、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸，所述非天然氨基酸包括環(huán)己基丙氨酸；A5是ftx)、kr、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸； A6是lie、Leu、Val、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸； A7是Cys、Ser, Ala、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸，所述非天然氨基酸包括S-叔丁基-半胱氨酸；A8是lie、Leu、Thr, Val、Arg、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸； A9是Wre、Leu、lie、Tyr、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸，所述非天然氨基酸包括環(huán)己基丙氨酸；并且AlO是Cys、kr、Ala、或者常用作它們的替代物的非天然氨基酸； 其中，羧基末端氨基酸是酰胺或羧基形式； 至少一個(gè)巰基氨基酸作為氨基酸之一存在于序列中；并且Al、A2、A3、Al至A2、Al至A3、AlO、A9至AlO、A8至AlO、或者它們的組合可選擇性地缺失。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，Al是D-Asp、D-Glu,D-焦谷氨酸、D-Gln、D-Asn, bhAsp、Ida、或者 N-MeAsp ；A2 是 D-Thr、D-kr、D-Val、Tle、Inp、Chg、bhThr、或者 N-MeThr ； A3 是 D-His、D-Asn、DArg、Dpa、(D)Dpa、或者 2-氨基茚；A4 是 D-Phe、D-Leu、D-11e、D-Trp、Phg^bhPhe、Dpa、Bip、INal、bhDpa、Amc、PheF5、hPhe、 Igl、或者環(huán)己基丙氨酸；A5 是 D-Pro、D4er、0ic、bhPro、反式-4-PhPro、順式-4-PhPro、順式-5-PhPro、Idc ； A6 是 D-Ile、D-Leu、Phg、Chg、Amc、bhIle、Ach、和 MeIle ；A7 是 D-Cys>D-Ser、D_Ala、Cys (S-tBut)、homoC、Pen、(D) Pen、Dap (AcBr)、禾口 Inp ； A8 是 D-Ile、D-Leu, D-Thr, D-Val, D-Arg, Chg、Dpa、bhlle、Ach、或者 MeIle ； A9 是 D-Phe、D-Leu, D_Ile、PheF5、N-MePhe、節(jié)酰胺、bhPhe、Dpa、Bip、INal、bhDpa、環(huán)己基丙氨酸；或者AlO 是 D-Cys、D-Ser,D-Ala ； 或者它們的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，Al 是 Ala、D-Ala、Cys、D-Cys、Phe、D_Phe、Asp 或者連接于 Cys 或者 DCys 的 D-Asp、Phe 或者連接于聚乙二醇分子的D-Phe、或者Dpa或者連接于棕櫚酰的(D) Dpa，所述聚乙二醇分子連接于鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸、或者棕櫚酰；A2 是 Ala、D-Ala, Cys、D_Cys、Pro、D-Pro, Gly、或者 D-Gly ；A3 是 Ala、D-Ala, Cys、D-Cys, Dpa、Asp 或者連接于 Dpa 或者(D) Dpa 的 D-Asp ；A4 是 Ala、D-Ala, Pro、或者 D-Pro ；A5 是 Ala、D-Ala、Pro、D-Pro> Arg> D-Arg ；A6 是 Ala、D-Ala、Phe、D-Phe、Arg、D-Arg> Cys、D-Cys ；A7 是 His、或者 D-His ；A8是Cys、或者D-Cys ；或者A9是連接于RA的Phe或者D-Phe、Asp、D-Asp、連接于RB的Asp或者D-Asp、連接于RC 的bhPhe、或者巰基乙胺，其中，所述RA是-CONH2-CH2-CH2-S、連接于Pro-Lys或者ftx)-Arg 的-D-Pro、連接于與Pro-Lys或者Pro-Arg連接的Pro的-bhftx)、連接于bhPro-Lys或者 bhPro-Arg 的-D-Pro，RB 是-PEGl I-GYIPEAPRDGQAYVRKDGEffVLLSTFL, - (PEG11) - (GPHy ρ) 10,并且，RC是連接于Pro-Lys 或者Pro-Arg 的-D-Pro、連接于bhPro-Lys 或者bhPro-Arg 的-DPro ；或者它們的組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，Al是Asp，A2是Thr，A3是His，A4是Wie，A5是 Pro, A6是lie，A7是Ala，A8是lie，A9是Wie，并且AlO是酰胺形式的Cys，其中Al或者 Al至A2可選擇性地缺失。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，Al是Asp，A2是Thr，A3是His，A4是Wie，A5是 Pro,A6是Ile，A7是Cys或者非天然巰基氨基酸，A8是Ile ；A9是酰胺形式的Wie，并且AlO 缺失。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，Al和A2缺失，A3是His,A4是Phe, A5是Pro, A6 是lie，A7是Cys或者非天然巰基氨基酸，A8是酰胺形式的lie，并且A9和AlO缺失。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，Al和A2缺失，A3是His,A4是Phe, A5是Pro, A6 是lie，A7是Cys或者酰胺形式的非天然巰基氨基酸，并且A8至AlO缺失。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，所述肽是環(huán)肽。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的肽，其中，所述序列是倒序的，使得Al是C-末端，并且AlO是N-末端。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的肽，其中，所述肽在N末端、C末端、或者兩端含有一個(gè)加成。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，所述肽選自由H印3-8、H印3-9、Hep1-8, Hep 1-9, H印 1-10C7A、H印9F4A、H印9C7_SStBut、(D) C、homoC、Pen、(D) Pen、Cyc-I、Pr 10、Pr 11、Pr 12、 riHep7ADT> Pr23、Pr24、Pr25、Pr27、Pr28、F4bhPhe> F4Dpa> F4Bip> F41Nal> F4bhDpa> F9bhPhe、F9Dpa、F9Bip、F91Nal、F9bhDpa、Pr39、Pr40、Pr41、Pr42、Pr43、Pr44、Pr45、Pr46、 Prl3、Prl4、Prl5、Prl6、Prl7、Prl8、Prl9、Pr20、Pr21、Pr22、Pr_l、Pr_2、Pr_3、和 Pr-4 組成的組。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的肽，其中，所述肽具有鐵調(diào)素活性。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的肽，其中，所述肽與鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合。
14.一種組合物，該組合物含有權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的至少一種肽。
15.一種結(jié)合鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白或誘導(dǎo)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白內(nèi)化和降解的方法，該方法包括將鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的至少一種肽或權(quán)利要求14所述的組合物接觸。
16.一種治療患者鐵代謝疾病的方法，該方法包括將權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的至少一種肽或者權(quán)利要求14所述的組合物給予治療對(duì)象。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述鐵代謝疾病是鐵超負(fù)荷疾病。
18.—種試劑盒，該試劑盒包括與試劑、裝置、指導(dǎo)材料、或者它們的組合一起包裝的權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的至少一種肽或者權(quán)利要求14所述的組合物。
19.一種復(fù)合物，該復(fù)合物包括與鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白或者抗體結(jié)合的權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的至少一種肽。
20.本發(fā)明如所述。
全文摘要
本發(fā)明提供了具有鐵調(diào)素活性的肽及其制備和使用方法。
文檔編號(hào)A61P3/00GK102245626SQ200980148967
公開日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2009年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月5日
發(fā)明者E·內(nèi)梅特, G·普雷薩, P·魯沙拉, T·甘茲 申請(qǐng)人:加利福尼亞大學(xué)董事會(huì)