黃連提取物及其治療呼吸道疾病的新用途的制作方法

專利名稱：黃連提取物及其治療呼吸道疾病的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種用于祛痰、止咳和/或具有抗組胺活性的黃連(Coptidis rhizoma)提取物或黃連和常春藤(ivy)的組合提取物。具體地，本發(fā)明提供一種含有黃連 提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物作為活性成分的止咳和/或祛痰組合物并且/或者 用于預(yù)防和治療呼吸道疾病的組合物，及其制備方法。
背景技術(shù)：
已知咳嗽和痰是由物理或化學(xué)因素——例如冷空氣，外來物質(zhì)包括致病微生物、 空氣污染物、變應(yīng)原等——引起的，并且可根據(jù)原因分類如下第一，如果喉(arynx)、氣管、支氣管、咽、鼻旁竇和膈等中的咳嗽受體被物理化學(xué) 因素刺激，所述刺激將被傳至腦髓質(zhì)的咳嗽中心，由此產(chǎn)生咳嗽反射。第二，如果副交感神經(jīng)系統(tǒng)被物理或化學(xué)因素激活，支氣管的平滑肌收縮，由此可 能出現(xiàn)諸如支氣管痙攣和支氣管收縮的癥狀。第三，由物理或化學(xué)因素將炎性介質(zhì)等從肥大細(xì)胞中釋放。因此，去除上述因素可抑制咳嗽和痰。但是，至今為止開發(fā)的大部分藥物主要是合 成的化學(xué)物質(zhì)，因此可引起各種副作用。開發(fā)的用于補(bǔ)償這些缺陷的天然藥物不能表現(xiàn)出 對(duì)咳嗽和痰很好的抑制作用。同時(shí)，哮喘——一種代表性呼吸道疾病——反復(fù)而間歇性地表現(xiàn)為諸如呼吸困 難、咳嗽和喘鳴性呼吸(stridulous breathing)等的癥狀。哮喘可分作心源性哮喘和支氣 管哮喘。盡管哮喘的發(fā)生率根據(jù)國家、人種和年齡等而變化，報(bào)道稱2007年在英國7. 9%的 成人、13. 7%的兒童和9. 4%的老人患有哮喘。在韓國，由于生活方式的改變、環(huán)境污染和壓 力增大等原因，哮喘的發(fā)生率已經(jīng)升高。近來，由于環(huán)境污染變得嚴(yán)重，哮喘的嚴(yán)重程度已 最大化，發(fā)生哮喘的年齡變小并且癥狀持續(xù)時(shí)間變長。呼吸道阻塞是哮喘的特征，其通過三步發(fā)生。具體地，支氣管的平滑肌收縮，肺部 粘膜變厚，支氣管和細(xì)支氣管中的粘液聚積，從而成阻塞呼吸道。在這幾步中，只有支氣管 平滑肌的收縮可容易地恢復(fù)。在外因性(過敏性)哮喘的發(fā)生機(jī)制中，IgE非常重要，IgG部分地與之相關(guān)。IgE 釋放激活肥大細(xì)胞而引起超敏反應(yīng)的介質(zhì)，例如組胺、SRS-A、ECF-A、NCF、PAF、激肽(Kinin) 和Pk等。內(nèi)因性(非過敏性)哮喘——盡管其機(jī)制還不清楚——看起來是由自主神經(jīng) 介導(dǎo)的。對(duì)內(nèi)因性哮喘患者的膽堿刺激引起一種介質(zhì)(如組胺)直接通過終末器官(end organs)從肥大細(xì)胞中分離，杯狀細(xì)胞分泌增加，肺部血管擴(kuò)張，氣管、支氣管和細(xì)支氣管收 縮，從而增加支氣管痙攣和粘液分泌。尚未開發(fā)出根本性治療哮喘的方法，但研制了預(yù)防痙攣和并發(fā)癥的各種方法和藥 物；然而，它們僅僅是改善癥狀而不能從根本上治療疾病，而且它們可能引起嚴(yán)重的副作用。為了克服已有藥物的局限性，需要開發(fā)能夠從根本上治療病因并有效地改善疾病癥狀的新藥。但是，呼吸道疾病涉及從中分離的各種白細(xì)胞、細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)，因此僅 憑單一組分化合物很難實(shí)現(xiàn)有效治療。因此，具有各種成分和作用機(jī)制的天然提取物可成 為有效的藥物，因此，需要開發(fā)一種基于天然提取物的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題對(duì)止咳藥和祛痰藥的研究結(jié)果使本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了黃連提取物或黃連和常春藤葉 的組合提取物有極好的止咳、祛痰和抗組胺活性，從而完成本發(fā)明。一個(gè)實(shí)施方案提供了黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物用于祛痰、止咳 并且/或者治療和/或預(yù)防呼吸道疾病的新用途。另一個(gè)實(shí)施方案提供了含有黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物作為活 性成分的止咳或祛痰組合物并且/或者用于預(yù)防和/或治療呼吸道疾病的組合物，和制備 所述組合物的方法。另一個(gè)實(shí)施方案還提供了用來止咳、祛痰并且/或者治療和/或預(yù)防呼吸道疾病 的方法，包括將含有黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物作為活性成分的組合物給 予需要止咳、祛痰并且/或者治療和/或預(yù)防呼吸道疾病的患者的步驟。技術(shù)方案一個(gè)實(shí)施方案涉及黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物用于祛痰、止咳并 且/或者治療和/或預(yù)防呼吸道疾病的新用途。另一個(gè)實(shí)施方案涉及含有黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物作為活性 成分的止咳或祛痰組合物并且/或者用于預(yù)防和/或治療呼吸道疾病的組合物。黃連是一種屬于毛茛科(Rarumculaceae family)的多年生草本植物，主要用其 根莖部分。已知黃連包含生物堿黃連素(berberine)、非洲防己堿(palmatine)、黃連堿 (coptisine)、5-羥(基)小檗堿(berberastine)和蘭花堿(magnoflorine)等作為主要藥 物成分。但是，尚未研究黃連提取物和含有黃連提取物的組合物的止咳、祛痰和抗組胺活 性。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)黃連的提取物有止咳、祛痰和抗組胺活性，并且對(duì)治療和/或預(yù)防 呼吸道疾病有效，從而完成本發(fā)明。常春藤屬于五加科(Araliaceae family)，其含義是屬于常春藤屬(Hedera spp.) 的植物。例如，它可包括但不局限于阿爾及利亞常春藤(Hedera algeriensis)、亞速爾群島 胃(Hedera azorica)、 β禾(Hedera canariensis)(Hedera colchica)、洋常春藤(Hedera helix)、大西洋常春藤(Hedera hibernica)、馬德拉島常春 藤(Hedera maderensis)、尼泊爾常春藤(Hederanepalensis)、Hedera pastuchowii 禾口菱 葉常春藤(Hedera rhombea)等。干燥常春藤葉的提取物的止咳和祛痰作用已被公布；但是 仍無報(bào)道稱當(dāng)常春藤葉與其他草藥提取物一起施用時(shí)可獲得顯著的協(xié)同用作，而同時(shí)無副 作用。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)與每種提取物單獨(dú)使用相比，黃連提取物和常春藤提取物的組合顯 著地增強(qiáng)止咳效果、祛痰效果、抗組胺效果、抑制支氣管收縮的效果、抑制氣道超敏的效果、
5抑制肺組織支氣管阻塞的效果和抑制炎癥細(xì)胞浸潤的效果。此外，在本發(fā)明中，提供了藥理 活性表現(xiàn)出最佳協(xié)同效果的黃連提取物和常春藤葉提取物的最佳混合比例。為了通過混合黃連提取物和常春藤葉提取物來使止咳、祛痰、抗組胺、抑制支氣 管收縮、抑制氣道超敏、抑制肺組織的支氣管阻塞和抑制炎癥細(xì)胞浸潤的活性協(xié)同效果最 大化，常春藤葉提取物和黃連提取物的混合比例基于固體內(nèi)容物(solid content)重量計(jì) (常春藤葉提取物重量黃連提取物重量)為0.1 1至10 1，優(yōu)選0.2 1至5 1， 更優(yōu)選1 1至4 1，更優(yōu)選1.5 1至3. 5 1，最優(yōu)選2. 5 1至3. 5 1。術(shù)語“固 體內(nèi)容物”是指用來制備提取物的溶劑被移除后的那些物質(zhì)。本文中的術(shù)語“提取物”是指黃連和/或常春藤葉的粗提取物并且/或者所述粗 提取物的特定溶劑-可溶提取物(solvent-soluble extract)或級(jí)分，其可以是以溶液、濃 縮物和粉末的形式。術(shù)語“黃連和常春藤葉的組合提取物”既指分別通過提取常春藤葉和 提取黃連得到的常春藤葉提取物和黃連提取物的混合物，又指通過提取常春藤葉和黃連的 混合物而得到的提取物。所述黃連提取物可以是通過用一種或多種選自水、具有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支 鏈醇的溶劑提取黃連、特別是黃連的根莖部分而得到的粗提取物，或者是通過所述向粗提 取物加入一種或多種溶劑而得到的一種溶劑可溶的提取物，其中所述溶劑選自具有1-6個(gè) 碳原子的直連或支鏈醇的水溶液，優(yōu)選丙醇水溶液、異丙醇水溶液和水飽和丁醇。所述常春藤葉提取物可以是通過用一種或多種選自水、具有1-4個(gè)碳原子的直鏈 或支鏈醇的溶劑提取干燥常春藤葉而得到的一種粗提取物，或者是通過向所述粗提取物加 入一種或多種溶劑而得到的一種溶劑可溶的提取物，其中所述溶劑選自具有1-6個(gè)碳原子 的直連或支鏈醇的水溶液，優(yōu)選丙醇水溶液、異丙醇水溶液和水飽和丁醇。用于制備常春藤 葉提取物的常春藤可以是常春藤屬，例如，其可以是一種或多種選自以下的常春藤阿爾及 利亞常春藤、亞速爾群島常春藤、坎那利島常春藤、波斯常春藤、洋常春藤、大西洋常春藤、 馬德拉島常春藤、尼泊爾常春藤、Hedera pastuchowii和菱葉常春藤等，但不限于此。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，用于制備黃連或常春藤葉粗提取物的溶劑可以是一種或 多種選自以下物質(zhì)的溶劑水；10至70% (ν/ν)、優(yōu)選20至60% (ν/ν)、更優(yōu)選25至55% (ν/ν)的具有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇，優(yōu)選甲醇水溶液和乙醇水溶液，還有水飽和丁用于制備黃連或常春藤葉的溶劑可溶的提取物的溶劑可以是一種或多種選自以 下物質(zhì)的溶劑10至70% (ν/ν)、優(yōu)選20至60% (ν/ν)、更優(yōu)選25至55% (ν/ν)的具有 1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇，優(yōu)選丙醇水溶液和異丙醇水溶液，還有水飽和丁醇。黃連和常春藤葉的組合提取物可以是黃連提取物和常春藤葉提取物的混合物，或 者是黃連和常春藤葉混合物的提取物。例如，所述組合提取物可以是通過將黃連和常春藤 葉混合，然后用一種或多種選自水和具有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇的溶劑提取混合物 而得到的一種粗提取物；或者是通過向所述粗提取物加入一種或多種選自具有1-6個(gè)碳原 子的低級(jí)醇的水溶液的溶劑(優(yōu)選丙醇水溶液和異丙醇水溶液還有水飽和丁醇)而得到的 一種溶劑可溶的提取物。優(yōu)選地，用于制備黃連和常春藤葉的粗提取物的溶劑可以是水；10至70% (ν/ν)、 優(yōu)選20至60% (ν/ν)、更優(yōu)選約25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水飽和丁
6醇。用于制備所述溶劑可溶的提取物的溶劑可以是一種或多種選自以下物質(zhì)的溶劑10至 70% (ν/ν)、優(yōu)選20至60% (ν/ν)、更優(yōu)選約25至55% (ν/ν)的具有1_6個(gè)碳原子的低級(jí) 醇的水溶液，優(yōu)選丙醇水溶液和異丙醇水溶液，還有水飽和丁醇。“級(jí)分”可以是通過用二氯甲烷和甲醇(30 1至7 1 (ν/ν))的混合溶劑對(duì)所述 溶劑可溶的提取物進(jìn)行硅膠柱層析而得到。所述黃連提取物、溶劑可溶提取物或級(jí)分包含黃連素、非洲防己堿、黃連堿、非洲 防己胺(columbamine)和藥根堿(jatrorrhizine)，優(yōu)選黃連素(0. 5至47. 0重量份)非 洲防己堿(0. 2至21. 4重量份)黃連堿(0. 1至18. 0重量份)非洲防己胺(0. 1至3. 2重 量份)藥根堿(0. 1至2. 6重量份)。在另一方面，本發(fā)明涉及一種制備有止咳、祛痰、抗組胺、抑制支氣管收縮、抑制氣 道超敏、抑制肺組織的支氣管阻塞和抑制炎癥細(xì)胞浸潤活性的黃連和常春藤葉的組合提取 物的方法。所述方法包括用一種或多種溶劑提取黃連、優(yōu)選黃連的根莖部分的步驟，所述溶 劑選自水和有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇，例如水，10至70% (ν/ν)、優(yōu)選20至60% (ν/ ν)、更優(yōu)選約25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水飽和丁醇。所述制備黃連和常春藤葉的組合提取物的方法可包括以下步驟用一種或多種溶劑提取干燥的常春藤葉來獲取常春藤葉提取物，其中所述溶劑選 自水和有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇，例如水，10至70% (ν/ν)、優(yōu)選20至60% (ν/ν)、 更優(yōu)選25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水飽和丁醇；用一種或多種溶劑提取黃連、優(yōu)選黃連的根莖部分來獲取黃連提取物，其中所述 溶劑選自水和有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇，例如水，10至70% (ν/ν)、優(yōu)選20至60% (ν/ν)、更優(yōu)選25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水飽和丁醇；和將所得常春藤葉提取物和黃連提取物以基于固體內(nèi)容物計(jì)以0.1 1至 10 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)、優(yōu)選0.2 1至5 1、更優(yōu)選1 1 至4 1、更優(yōu)選1.5 1至3. 5 1、最優(yōu)選2. 5 1至3. 5 1的比例混合。制備常春藤葉提取物的步驟和制備黃連提取物的步驟還可以包括向所得提取物 加入一種或多種選自有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇的溶劑(優(yōu)選水飽和丁醇、丙醇和異 丙醇)來獲取溶劑可溶的提取物的步驟。將詳細(xì)解釋制備常春藤葉提取物的步驟切下常春藤葉并用水清洗來除去雜質(zhì)， 將葉片干燥，然后用一種或多種選自水和有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇(例如水、10至 70% (ν/ν)、優(yōu)選20至60% (ν/ν)、更優(yōu)選25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液， 或水飽和丁醇)的溶劑以約5至20倍、優(yōu)選7至15倍于所述干燥常春藤葉體積的量對(duì)葉 片進(jìn)行回流提取。提取溫度是40至110°C，優(yōu)選55至90°C。提取后，將所得提取物過濾，收集濾液，然后用一種或多種選自水和有1-4個(gè)碳原 子的直鏈或支鏈醇(例如水，10至70% (ν/ν)、優(yōu)選20至60% (ν/ν)、更優(yōu)選25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水飽和丁醇)的溶劑以約5至15倍，優(yōu)選8至12倍 的體積量回流提取所得殘?jiān)?。提取溫度是——但并不具體地限定于——40至110°C，優(yōu)選 55至90°C。提取后，將所得提取物過濾，將濾液與先前獲得的濾液合并，在真空下將其濃縮 來制備常春藤葉提取物。兩次提取和每次提取后合并獲取的濾液可提高提取效率，但是提取次數(shù)不局限于此。將詳細(xì)解釋制備黃連提取物的步驟將黃連的根莖部分切成小塊，然后以約3至 20倍、優(yōu)選5至15倍于原材料體積的量向其加入一種或多種選自水和有1-4個(gè)碳原子的 直鏈或支鏈醇的溶劑(例如水，10至70% (ν/ν)、優(yōu)選20至60% (ν/ν)、更優(yōu)選25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水飽和丁醇)來提取0. 5至20小時(shí)，優(yōu)選1至10小 時(shí)，更優(yōu)選2至5小時(shí)。提取溫度是——但不局限于——40至110°C，優(yōu)選55至90°C。優(yōu) 選地，將所得提取物過濾，收集濾液，以約5至15倍、優(yōu)選8至12倍體積的量向殘?jiān)尤胍?種或多種選自水和有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇(例如水，10至70% (ν/ν)、優(yōu)選20至 60% (ν/ν)、更優(yōu)選25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水飽和丁醇)的溶劑， 然后提高溫度再提取1至10小時(shí)、優(yōu)選2至5小時(shí)，然后將所得提取物過濾并在真空下濃 縮以獲取黃連提取物。將所得提取物和先前得到的濾液合并可提高提取效率。兩次提取和將每次提取后獲得的濾液合并可提高提取效率，但提取次數(shù)不局限于 此。如果用來制備黃連提取物和/或常春藤提取物的溶劑的量太少，會(huì)很難攪拌并且 提取物的溶解性降低導(dǎo)致提取效率下降。如果用來制備黃連提取物和/或常春藤提取物的 溶劑的量太多，用于接下來純化步驟的低級(jí)醇的量會(huì)增加而引起經(jīng)濟(jì)問題和處理問題。因 此，優(yōu)選在上述范圍內(nèi)調(diào)整溶劑的量。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，再提取可在初次提取后進(jìn)行，這可以防止由僅 進(jìn)行初次提取而帶來的提取效率下降，因?yàn)樵诖罅恐迫〔菟幪崛∥锏那闆r下，即使進(jìn)行有 效地過濾，由于草藥提取物的量很大從而產(chǎn)生損失，因此當(dāng)僅進(jìn)行初次提取時(shí)提取效率會(huì) 降低。因此，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，初次提取后可進(jìn)行再提取。此外，在每個(gè)步 驟中檢測(cè)提取效率發(fā)現(xiàn)總提取量的約80%至90%是通過二次提取得到的，從而表明兩步 提取與多于三次提取的多次提取相比可有顯著的經(jīng)濟(jì)效益。溶劑可溶的提取物可通過將所獲粗提取物懸浮于2至10倍、優(yōu)選3至7倍體積的 水中，并且向其中以0. 5至3倍、優(yōu)選2倍當(dāng)量于懸浮液的量分1次到5次，優(yōu)選2到3次 加入一種或多種選自有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇的水溶液的溶劑(優(yōu)選丙醇水溶液或 異丙醇水溶液，還有水飽和丁醇)來提取溶劑可溶層，然后在真空下濃縮。使用低級(jí)醇的溶劑可溶的提取步驟是為了去除不必要的雜質(zhì)例如蛋白質(zhì)、多糖和 脂肪酸等。因此如果使用的低級(jí)醇的量比濾液少，不必要的成分例如脂肪酸就形成微粒，從 而使分層不光滑并且減少活性成分的提取量。因此，優(yōu)選在上述范圍內(nèi)調(diào)整低級(jí)醇的量。將分層后獲得的低級(jí)醇級(jí)分于50至60°C在真空下濃縮以除去樣本中殘留的溶 劑。為了控制所得濃縮物中殘留的低級(jí)醇的含量以便于使其適用作藥物原材料，可所 得濃縮物與基于所得濃縮物的總量計(jì)10至30倍、優(yōu)選15至25倍、更優(yōu)選約20倍重量的 水共沸濃縮1到5次，優(yōu)選2到3次，并且向其加入等量水對(duì)其進(jìn)行均勻懸浮，然后將所得 懸浮液凍干來制備粉末形式的黃連提取物和/或常春藤葉提取物。優(yōu)選地，為了均勻地合并組合提取物中的每種提取物，向所得組合提取物加入2 至3倍重量的水，然后于50至60°C在真空下濃縮，向所得濃縮物中加入等量水來對(duì)其進(jìn)行 均勻懸浮，然后將所得懸浮液凍干來制備粉末形式的組合物。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，制備黃連和常春藤葉的組合提取物的方法可包括以下步 驟將干燥的常春藤葉和黃連(優(yōu)選黃連的根莖部分)以1 4至7 1(常春藤葉 的重量黃連的重量)、優(yōu)選1 1至6 1、更優(yōu)選2 1至5 1的重量比混合來制備常 春藤葉和黃連的混合物；和用一種或多種選自水和有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇的溶劑(例如水，10至 70% (ν/ν)、優(yōu)選20至60% (ν/ν)、更優(yōu)選約25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液， 或水飽和丁醇)提取所得混合物。上述方法還可包括在制取常春藤葉和黃連的混合物的提取物步驟后加入一種或 多種溶劑來獲取溶劑可溶的提取物的步驟，其中所述溶劑選自有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支 鏈低級(jí)醇，優(yōu)選丙醇和異丙醇和水飽和丁醇。制備粗提取物和溶劑可溶的提取物步驟的細(xì)節(jié)和在制備每種草藥提取物中描述
的一樣。作為本發(fā)明中使用的提取方法，可使用任何常規(guī)使用的方法。例如，可通過在室溫 下提取、熱水提取、超聲波提取、回流提取或冷卻提取來進(jìn)行所述提取，但不限于此。在另一方面，本發(fā)明提供一種包含黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物作 為一種活性成分的止咳組合物。另一方面，本發(fā)明還提供一種包含黃連提取物或黃連和常 春藤葉的組合提取物作為一種活性成分的祛痰組合物。在另一方面，本發(fā)明還提供一種包 含黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物作為一種活性成分的用于預(yù)防和/或治療 呼吸道疾病的組合物。在另一方面，本發(fā)明提供一種止咳的方法，包含向患者施用治療有效量的黃連提 取物或黃連和常春藤葉的組合提取物這一步驟。在另一方面，本發(fā)明還提供一種祛痰的方 法，包括向患者施用治療有效量的黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物這一步驟。 在另一方面，本發(fā)明還提供一種預(yù)防和/或治療呼吸道疾病的方法，包括向患者施用治療 有效量的黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物這一步驟。所述患者可以是需要止 咳、祛痰或治療和/或預(yù)防呼吸道疾病的哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人類。所述治療有效量是為得到所需療效確定的劑量。其可根據(jù)年齡、體重、性別、劑型、 健康狀況和疾病嚴(yán)重程度而不同，其還可根據(jù)醫(yī)師或藥劑師的判斷而不同。例如，每日劑量 基于活性成分含量計(jì)可以是0. 5至500mg/kg，優(yōu)選1至300mg/kg，但不局限于此。所述劑 量可一日一次或一日多次地施用。所述劑量說明一般情況，其可以依個(gè)別情況而更高或更 低。如果含有本發(fā)明組合提取物的組合物的每日劑量比上述范圍低，不能獲得顯著的效果； 而如果其超出了上述范圍，經(jīng)濟(jì)功效下降，并且劑量超出了常規(guī)劑量因而引起不良副作用。 因此，每日劑量優(yōu)選在上述范圍內(nèi)。所述黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合提取物表現(xiàn)出止咳、祛痰、抗組胺、抑制 支氣管收縮、抑制氣道超敏、抑制肺組織支氣管阻塞和抑制炎癥細(xì)胞浸潤活性，因此它們可 用于治療、預(yù)防或減輕相關(guān)的呼吸道疾病。并且，優(yōu)選所述黃連和常春藤葉的組合提取物， 因?yàn)榕c每種單獨(dú)提取物相比可獲得協(xié)同作用。所述呼吸道疾病可以是有關(guān)咳嗽和痰的全部疾病，例如選自普通咳嗽或痰；帶 有咳嗽和痰的肺氣腫(pulmonary emphysema)；支氣管炎例如慢性支氣管炎、急性支氣管炎、卡他性支氣管炎(catarrhalbronchitis)、阻塞性支氣管疾病或炎性支氣管疾病 (obstructive orinflammatory bronchial disease)等；哮喘例如支氣管哮喘、變應(yīng)性 氣喘(atopic asthma)、IgE 介導(dǎo)的支氣管變應(yīng)性哮喘(atopic bronchialIgE-mediated asthma)、非變應(yīng)性哮喘(non-atopic asthma)、過敏性哮喘(allergic asthma)和非過敏性 哮喘(non-allergic asthma)等；慢性或急性支氣管收縮；喘鳴性嬰兒綜合征(stridulus infant syndrome)；個(gè)曼性阻塞性月市病(chronic obstructive pulmonary disease)；支 氣管腺瘤(bronchial adenoma)；孤立性月市結(jié)節(jié)(solitary pulmonarynodule)；肺結(jié)核 (pulmonary tuberculosis)；月農(nóng)胸(pyothorax)；月市月農(nóng)月中(pulmonary abscess)；普通感冒； 流行性感冒和肺組織細(xì)胞增多病(pulmonary histiocytosis)?？梢砸远喾N途徑將本發(fā)明的組合物施用于哺乳動(dòng)物，包括人。本發(fā)明的組合物可 以通過通常使用的方法施用，例如，其可通過口服、直腸內(nèi)給藥或通過靜脈、肌肉、皮下、子 宮內(nèi)或腦室內(nèi)注射給藥。本發(fā)明的組合物可被配制為口服劑型例如粉劑、顆粒劑、片劑、膠 囊劑、懸浮劑、乳劑、糖漿、氣霧劑等，或腸胃外劑型例如經(jīng)皮給藥劑(transdermal agent)、 栓劑和滅菌的注射溶液等。本發(fā)明的組合物還可以包括制藥學(xué)適用且生理可耐受的佐劑例如載體、賦形劑和 稀釋劑。本發(fā)明的組合物可單獨(dú)施用；但是，一般考慮到給藥路線和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐 (standard pharmaceutical practice)，所述組合物可與選擇的藥用載體一同施用。例如， 可以以口服、直腸內(nèi)或舌下方式將所述組合物以含有乳糖或淀粉的片劑形式、單獨(dú)地以膠 囊劑的形式或含有賦形劑的膠囊劑的形式、含有調(diào)味劑或著色劑的酏劑的形式或懸浮劑的 形式給藥。液體劑型可與藥用添加劑例如懸浮劑(例如甲基纖維素；半合成的甘油酯例如 witepsol ；或甘油酯混合物例如杏仁油和PEG-6酯的混合物，或PEG-8和辛酸甘油酯/癸酸 甘油酯的混合物)一起配制。在另一方面，本發(fā)明提供了一種含有黃連提取物或黃連和常春藤葉的組合物提取 物的用于止咳、祛痰或預(yù)防或改善呼吸道疾病例如哮喘的健康功能性食物。所述健康功能 性食物可以是食物、飲料或食品添加劑等。在健康功能性食物中作為活性成分的提取物的含量可以根據(jù)食物形式和所需用 途等適當(dāng)改變，沒有特定的限制。例如，其可以以總食物的0.01至15重量％的量加入，對(duì) 于健康飲料組合物，其可以基于IOOml組合物計(jì)以0. 02至10g、優(yōu)選0. 3至Ig的量加入。在將本發(fā)明的草藥組合物施用于人體的情況下，考慮到天然提取物的一般性質(zhì)， 認(rèn)為與其他合成藥物相比不必?fù)?dān)心副作用，并且實(shí)際毒性試驗(yàn)結(jié)果證明其對(duì)活體沒有影 響。


圖1在小鼠模型中通過酚紅排泌法(phenol red secretion method)示出了黃連 提取物及其活性級(jí)分和代表成分的祛痰活性。圖2示出了在實(shí)施例2中制備的提取物的祛痰活性，示出了通過用小鼠進(jìn)行酚紅 排泌法所測(cè)量的結(jié)果。圖3示出了在實(shí)施例2中制備的提取物的止咳活性，示出了用豚鼠進(jìn)行止咳試驗(yàn)
10的結(jié)果。圖4示出了在實(shí)施例2中制備的提取物的抑制支氣管收縮活性，示出了使用豚鼠 的離體支氣管時(shí)對(duì)收縮誘導(dǎo)物(constriction inducer)的松弛程度(％ )。圖5示出了在實(shí)施例2-7的提取物對(duì)肺組織中支氣管阻塞的作用，以及對(duì)卵白蛋 白致敏(OVA-sensitized)的試驗(yàn)小鼠的肺組織中炎癥細(xì)胞浸潤的抑制活性((a)正常組， (b)誘發(fā)組，(c)陽性對(duì)照，(d)實(shí)施例2-7)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例將參照以下實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)詳細(xì)地解釋本發(fā)明。但是，以下實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)只是示例性地說明本發(fā)明，本發(fā)明的范圍并不限于此。實(shí)施例1.制備黃連提取物1-1.用水制備黃連提取物1-1-1.制備黃連耜提取物(CR-GA)用水清洗從京東市場(chǎng)(Kyungdong market)購買的黃連以除去雜質(zhì)，用1. 5L水 在80°C下對(duì)250g干燥黃連進(jìn)行兩次熱水提取，每次持續(xù)3小時(shí)，然后對(duì)所得提取物進(jìn)行 過濾并在真空下濃縮得到62. 5g粗提取物(相對(duì)于原料草藥的產(chǎn)率為25% )，將其命名為 “CR-GA”，并用于下面的實(shí)施例1-2。1-1-2.制備黃連的溶劑可溶提取物(CR-GA-I)向?qū)嵤├?-1-1獲取的62. 5g CR-GA加入0. 5L水以使其懸浮，并向其中加入IL水 飽和丁醇以進(jìn)行兩次分層，然后只收集水飽和丁醇級(jí)分并將其在真空下濃縮直至干燥。當(dāng) 大部分丁醇和水蒸發(fā)后，加入0.4L水對(duì)其進(jìn)行共沸濃縮，重復(fù)兩次。最后，加入0. IL蒸餾 水來懸浮所得濃縮物，然后凍干所得懸浮液得到19. 8g粉末形式的黃連提取物(相對(duì)于原 料草藥的產(chǎn)率為7. 92% )，將其命名為“CR-GA-1”在以下實(shí)驗(yàn)中用作樣本。1-2.用50% (ν/ν)乙醇制備黃連提取物1-2-1.制備粗黃連提取物(CR-GB)用水清洗從京東市場(chǎng)購買的黃連以除去雜質(zhì)，用2.0L 50% (ν/ν)的乙醇水溶 液在80°C下對(duì)250g干燥黃連進(jìn)行兩次回流提取，每次持續(xù)3小時(shí)，然后將所得提取物過 濾并在真空下濃縮得到57. 5g粗提取物(相對(duì)于原料草藥的產(chǎn)率為23% )，將其命名為 “CR-GB”，并用于以下實(shí)施例2-2。1-2-2.制備黃連的溶劑可溶提取物(CR-GB-I)向?qū)嵤├?-2-1獲取的57. 5g CR-GB中加入0. 3L水以使其懸浮，向其中加入0. 6L 水飽和丁醇以進(jìn)行兩次分層，然后只收集丁醇級(jí)分并將其在真空下濃縮直至干燥。當(dāng)大部 分丁醇和水蒸發(fā)后，向其中加入0. 2L水來對(duì)其進(jìn)行共沸濃縮，重復(fù)兩次。最后加入0. 2L蒸 餾水來懸浮所得濃縮物，然后將所得懸浮液凍干得到31. Sg粉末形式的黃連提取物(相對(duì) 于原料草藥的產(chǎn)率為12.7%)，將其并命為“0 -68-1”，并在以下實(shí)驗(yàn)中用作樣本。1-3.用水飽和丁醇制備黃連提取物1-3-1.制備黃連提取物(CR-GC)用水清洗從京東市場(chǎng)購買的黃連以除去雜質(zhì)，用2. 5L水飽和正丁醇在85°C下對(duì)250g干燥黃連進(jìn)行兩次回流提取，每次持續(xù)3小時(shí)，然后將所得提取物過濾并在真空下濃 縮。當(dāng)大部分丁醇蒸發(fā)后，向其中加入0.2L水對(duì)其進(jìn)行共沸濃縮，重復(fù)兩次。最后向其中 加入0. 2L蒸餾水以使其懸浮，然后將所得懸浮液凍干得到32. 8g粉末形式的提取物(相對(duì) 于原料草藥的產(chǎn)率為13. )，將其命名為“CR-GC”，并用于以下實(shí)驗(yàn)。1-4.分離黃連提取物用二氯甲烷和甲醇(30 1-7 1 (ν/ν))的混合溶劑通過硅膠柱色譜將實(shí)施例 1-2-2中獲取的20g CR-GB-I分為5個(gè)級(jí)分。Fr. 1為0. 8g(在下文中稱作“Fr. 1”)，F(xiàn)r. 2 為2. 6g (在下文中稱作“Fr. 2”)，F(xiàn)r. 3為5. 5g (在下文中稱作“Fr. 3”)，F(xiàn)r. 4為2. 8g (在 下文中稱作“Fr. 4”)，F(xiàn)r. 5為6. 5g(在下文中稱作“Fr. 5”)，其在以下實(shí)驗(yàn)中均用為樣本。實(shí)施例2制備黃連和常春藤葉的組合提取物制備常春藤葉提取物用水清洗常春藤(洋常春藤(Hedera helix))葉以除去雜質(zhì)，并將其完全干燥。將 3L 30% (ν/ν)乙醇水溶液加入到250g所制備的常春藤葉中，并回流提取6小時(shí)，然后將所 得提取物過濾，收集濾液。將2.5L 30% (ν/ν)乙醇水溶液加入到殘?jiān)校?0°C下回流提 取3小時(shí)，然后將所得濾液與先前所得濾液合并，在真空下濃縮。當(dāng)大部分溶劑蒸發(fā)后，加 入0.2L水對(duì)其進(jìn)行共沸濃縮，重復(fù)兩次。然后加入等量水將其均勻懸浮，然后將所得懸浮 液凍干得到42. 4g粉末形式的常春藤葉提取物。所得常春藤葉提取物被用來制備下面的實(shí) 施例2-1至2-11的組合提取物。制備黃連提取物用水清黃連以除去雜質(zhì)，并將其完全干燥。將2. OL 50% (ν/ν)乙醇水溶液加入到 250g所制備的黃連中，并在80°C下回流提取3小時(shí)。然后將所得提取物過濾并在真空下濃 縮得到57. 5g粗提取物。向其中加入0. 3L水將其懸浮，然后加入0. 6L水飽和丁醇以進(jìn)行 兩次分層。然后，只收集丁醇級(jí)分并在真空下將其濃縮直至干燥。當(dāng)大部分丁醇和水蒸發(fā) 后，加入0.2L水對(duì)其進(jìn)行共沸濃縮，重復(fù)兩次。最后，向其中加入等量水將其懸浮，將所得 懸浮液凍干得到31. 8g黃連，所得黃連在下面的實(shí)施例2-1至2-11中被用來制備組合提取 物。2-1.制備組合提取物(0. 2 1)將以上制備的常春藤葉提取物和黃連提取物以重量比例0.2 1(常春藤葉提取 物的重量黃連提取物的重量)混合。為了均勻混合，向合并的提取物中加入約2至3倍重 量的水，然后將其于50-60°C在真空下濃縮。然后，向所得濃縮物中再次加入等量水對(duì)其進(jìn) 行均勻懸浮，將所得懸浮液凍干來制備粉末形式的組合提取物。2-2.制備組合提取物(0. 4 1)用與上述制備實(shí)施例1相同的方法制備組合提取物，除了將所制備的常春藤葉提 取物和黃連提取物的比例改變?yōu)?.4 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。2-3.制備組合提取物(1:1)用與上述制備實(shí)施例1相同的方法制備組合提取物，除了將所制備的常春藤葉提 取物和黃連提取物的比例改變?yōu)? 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。2-4.制備組合提取物(1. 5 1)用與上述制備實(shí)施例1相同的方法制備組合提取物，除了將所制備的常春藤葉提取物和黃連提取物的比例改變?yōu)?.5 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。2-5.制備組合提取物U 1)用與上述制備實(shí)施例1相同的方法制備組合提取物，除了將所制備的常春藤葉提 取物和黃連提取物的比例改變?yōu)? 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。2-6.制備組合提取物(2. 5 1)用與上述制備實(shí)施例1相同的方法制備組合提取物，除了將所制備的常春藤葉提 取物和黃連提取物的比例改變?yōu)?. 5 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。2-7.制備組合提取物(3 1)用與上述制備實(shí)施例1相同的方法制備組合提取物，除了將所制備的常春藤葉提 取物和黃連提取物的比例改變?yōu)? 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。2-8.制備組合提取物(3. 5 1)用與上述制備實(shí)施例1相同的方法制備組合提取物，除了將所制備的常春藤葉提 取物和黃連提取物的比例改變?yōu)?. 5 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。2-9.制備組合提取物Q 1)用與上述制備實(shí)施例1相同的方法制備組合提取物，除了將所制備的常春藤葉提 取物和黃連提取物的比例改變?yōu)? 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。2-10.制備組合提取物(4. 5 1)用與上述制備實(shí)施例1相同的方法制備組合提取物，除了將所制備的常春藤葉提 取物和黃連提取物的比例改變?yōu)?. 5 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。2-11.制備組合提取物(5 1)用與上述制備實(shí)施例1相同的方法制備組合提取物，除了將所制備的常春藤葉提 取物和黃連提取物的比例改變?yōu)? 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。實(shí)施例3.黃連提取物活性實(shí)驗(yàn)3-1.黃連提取物祛痰活性測(cè)定[實(shí)驗(yàn)方法]為了測(cè)定實(shí)施例1-1至1-3的黃連提取物的祛痰活性，在以下步驟中使用Engler 等人的方法(Engler H, Szelenyi I, J. Pharmacol. Moth. 11,151-157,1984,, ；Bao-quin Lin et. , Pulmonary Pharmacology&Therapeutics 21，259-263，2008.)來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)雄性小鼠(8周齡，Sam tako BioKorea)經(jīng)口服給予陽性對(duì)照藥(氨溴素 (ambroxol), Sigma)和測(cè)試藥(實(shí)施例1_1到1_3的黃連提取物)，30分鐘后，經(jīng)腹膜內(nèi)注 射500mg/kg酚紅(酚紅溶解在鹽水中)。30分鐘后，用二乙醚麻醉鼠，切斷腹部大動(dòng)脈取 血，然后切下整個(gè)氣管。將離體的氣管置于Iml鹽水中清洗30分鐘，在室溫下以10，OOOrpm 離心5分鐘，向上清液加入IN氫氧化鈉(NaOH)(每Iml上清液加入0. Iml的IN NaOH)，然 后測(cè)量在M6nm下的吸光度來測(cè)定酚紅濃度作為祛痰活性。[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]所獲結(jié)果在下表1中示出。[表1]
13.劑量(mg/kg)分泌痰液能力(％)實(shí)施例1-1CR-GA50029CR-GA-I50036實(shí)施例1-2CR-GB50032CR-GB-I50041實(shí)施例1-3CR-GC50038陽性對(duì)照(氨溴素)25032如上表1所示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為所述提取物整體上具有極好的活性，特別是實(shí)施例2的 CR-GB-I顯示出最佳痰液分泌活性。并且，測(cè)定了實(shí)施例2的CR-GC-I各種劑量(50、100、150、200、500mg/kg)的活性， 其結(jié)果在下表2中示出。[表 2]
劑量(mg/kg )分泌痰液能力 (%)實(shí)施例1-2CR-GB-I50410022150322003350041陽性對(duì)照(氨溴素)25030如上表2所示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為實(shí)施例1-2的CR-GB-I在劑量為500mg/kg時(shí)顯示最佳 痰液分泌活性。3-2.黃連提取物的止咳活性測(cè)定[實(shí)驗(yàn)方法]為測(cè)定實(shí)施例1-1至1-3的黃連提取物的止咳活性，在以下步驟中用Tanaka等人 的方法(Motomu Tanaka and Kei Maruyama. ,J. Pharmacol. Sci. 93,465-470,2003. ,Daoui, Cognon, Naline et.，Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 158，42-48，1998)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)雄性豚鼠(6周齡，Sam tako BioKorea)經(jīng)口服給予測(cè)試藥物，一小時(shí)后，將所 述豚鼠置于體積描記器室(plethysmograph chamber,Buxco,U. S. A.)中，然后，將咳嗽誘導(dǎo)物檸檬酸(Sigma)噴霧以引起咳嗽。使用用作止咳藥的可可堿(Sigma)作為陽性對(duì)照。并 且，將所述豚鼠暴露于0. 2M檸檬酸10分鐘，記錄15分鐘內(nèi)的咳嗽次數(shù)。[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]結(jié)果在下表3中示出。[表3]
權(quán)利要求
1.包含黃連提取物作為活性成分的止咳或祛痰組合物。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物還包含常春藤葉提取物，并且所述提取物是 黃連和常春藤葉的組合提取物的形式。
3.權(quán)利要求2的組合物，其中常春藤葉提取物和黃連提取物的重量比例是0.1 1至 10 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。
4.權(quán)利要求3的組合物，其中常春藤葉提取物和黃連提取物的重量比例是0.2 1至 5 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。
5.包含黃連提取物作為活性成分的預(yù)防或治療呼吸道疾病的組合物。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述組合物還包含常春藤葉提取物，并且所述組合物是 黃連和常春藤葉的組合提取物的形式。
7.權(quán)利要求6的組合物，其中常春藤葉提取物和黃連提取物的重量比例是0.1 1至 10 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中常春藤葉提取物和黃連提取物的重量比例是0.2 1至 5 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。
9.權(quán)利要求5至8中任一項(xiàng)的組合物，其中所述呼吸道疾病選自肺氣腫、支氣管炎、哮 喘、慢性或急性支氣管收縮、喘鳴性嬰兒綜合征、慢性阻塞性肺病、支氣管腺瘤、孤立性肺結(jié) 節(jié)、肺結(jié)核、膿胸、肺膿腫、普通感冒、流行性感冒和肺組織細(xì)胞增多病。
10.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的組合物，其中所述提取物是使用一種或多種選自水和具 有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈醇的溶劑作為提取溶劑而獲取的粗提取物，或者是通過向所 述粗提取物加入一種具有1-6個(gè)碳原子的直連或支鏈醇的水溶液而得到的一種溶劑可溶 的提取物。
11.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物被配制為粉劑、顆粒劑、片劑、 膠囊劑、懸浮劑、乳劑、糖漿、氣霧劑、經(jīng)皮給藥劑、栓劑或滅菌的注射溶液。
12.包含權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的組合物的用于預(yù)防或改善呼吸道疾病的健康功能 性食物。
13.—種止咳或祛痰的方法，包括向需要止咳或祛痰的患者給予含有黃連提取物作為 活性成分的組合物這一步驟。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述組合物還包含常春藤葉提取物，并且所述組合物是 以黃連和常春藤葉的組合提取物的形式給藥。
15.權(quán)利要求14的組合物，其中常春藤葉提取物和黃連提取物的重量比例是0.1 1 至10 1 (常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。
16.權(quán)利要求15的組合物，其中常春藤葉提取物和黃連提取物的重量比例是0.2 1 至5 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。
17.權(quán)利要求13或14的方法，其中所述組合物的每日劑量基于活性成分的量計(jì)為0.5 至 500mg/kgo
18.一種預(yù)防或治療呼吸道疾病的方法，包括向需要治療或預(yù)防呼吸道疾病的患者給 予含有黃連提取物作為活性成分的組合物這一步驟。
19.權(quán)利要求18的方法，其中所述組合物還包含常春藤葉的提取物，并且所述提取物 是以黃連和常春藤葉的組合提取物的形式給藥。
20.權(quán)利要求19的組合物，其中常春藤葉提取物和黃連提取物的重量比例是0.1 1 至10 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。
21.權(quán)利要求20的組合物，其中常春藤葉提取物和黃連提取物的重量比例是0.2 1 至5 1(常春藤葉提取物的重量黃連提取物的重量)。
22.權(quán)利要求18的方法，其中所述呼吸道疾病選自肺氣腫、支氣管炎、哮喘、慢性或急 性支氣管收縮、喘鳴性嬰兒綜合征、慢性阻塞性肺病、支氣管腺瘤、孤立性肺結(jié)節(jié)、肺結(jié)核、 膿胸、肺膿腫、普通感冒、流行性感冒和肺組織細(xì)胞增多病。
23.權(quán)利要求18或19的方法，其中所述組合物的每日劑量基于活性成分的量計(jì)為0.5 至 500mg/kgo
全文摘要
本發(fā)明提供了一種包含黃連提取物或者黃連和常春藤葉的組合提取物作為活性成分的用于止咳、祛痰、預(yù)防和/或治療呼吸道疾病的組合物，和一種使用所述組合物來止咳、祛痰，和/或預(yù)防和/或治療呼吸道疾病的方法。
文檔編號(hào)A61K36/25GK102065876SQ200980122243
公開日2011年5月18日 申請(qǐng)日期2009年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月13日
發(fā)明者延成欽, 張守任, 愼珉奇, 漁津, 辛榮埈, 金昌煥, 韓昌均 申請(qǐng)人:韓國安國藥品株式會(huì)社