專利名稱：：手性釕配合物及其作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及釕配合物，具體的說，涉及手性釕配合物及其作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是危害人類健康的主要疾病之一，在各種疾病導(dǎo)致的死亡中，癌癥的死亡率僅次于心血管疾病的死亡率，在某些發(fā)達國家占死亡原因的首位，90年代我國每年新發(fā)病例超過200萬人。臨床上普遍采用化療、手術(shù)治療以及放射治療等手段對腫瘤進行治療。1969年Rosenberg發(fā)現(xiàn)順鉑(cisplatin)具有抗腫瘤活性，并很快發(fā)展成為臨床上廣泛使用的抗腫瘤藥物。順鉑臨床上用于治療膀胱癌、前列腺癌、肺癌、頭頸部癌、乳腺癌、惡性淋巴癌和白血病等。但該藥物水溶性差，且僅能注射給藥，緩解期短，并伴有嚴重的腎、胃腸道毒性、耳毒性及神經(jīng)毒性，長期使用會產(chǎn)生耐藥性。因此研制新的具有抗腫瘤活性的金屬配合物引起人們的重視。近年來已經(jīng)證實鉑、銠、鍺、錫等，特別是釕的化合物具有抗腫瘤活性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種手性釕配合物，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足。本發(fā)明的另一個目的是提供上述手性釕配合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明設(shè)計合成了一系列的手性釕配合物，具有以下結(jié)構(gòu)特點1)以釕作為中心金屬離子；具有剛性八面體空間結(jié)構(gòu)的絡(luò)離子；2)分子中有兩個聯(lián)吡啶基團作為輔助配體；3)以2-取代苯基咪唑[4，5-f][I，IO]菲咯啉作為主配體；4)具有上述結(jié)構(gòu)特點的金屬配合物的手性異構(gòu)體，具有旋光性。上述手性釕配合物的通式為A-[Ru(bpy)2L](PF6)2，其中，A為A或A;L為tFPIP、IPBP、IPBH或PYNI。上述手性釕配合物的優(yōu)選化合物為A-[Ru(bpy)2(tFPIP)](PF6)2、A-[Ru(bpy)2(tFPIP)](PF6)2、A-[Ru(bpy)2(IPBP)](PF6)2、A-[Ru(bpy)2(IPBP)](PF6)2、A-[Ru(bpy)2(IPBH)](PF6)2、A-[Ru(bpy)2(IPBH)](PF6)2、A-[Ru(bpy)2(PYNI)](PF6)2、A-[Ru(bpy)2(PYNI)](PF6)2。上述手性釕配合物具有很好的抗腫瘤活性，能用于制備抗腫瘤藥物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果本發(fā)明設(shè)計合成了一系列的手性釕配合物，體外細胞實驗結(jié)構(gòu)表明，這些釕配合物對肝癌細胞株BEL-7402等具有明顯的抑制活性，能用于制備抗腫瘤藥物。具體實施例方式實施例1A-[Ru(bpy)2(tFPIP)](PF6)2(A-1)的合成A-[Ru(bpy)2(FPIP)](PF6)2(A-1)的合成路線見式(I):CI)1.1菲羅啉5，6-二酮的合成1，10-鄰菲羅啉(4g，21.88mmol)與KBr(4g，33.9mmo1)置于冰浴上，攪拌下緩慢滴加H2S04和HN03的混酸溶液，滴加完畢后移去冰浴，加熱回流40分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，使溴逸去，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至燒杯中，加入6mo1*L—、aOH溶液，小心調(diào)節(jié)溶液pH值約為7(溶液中有大量金黃色沉淀生成)，用3X100mL氯仿萃取，合并有機相后，用50ml水洗滌1_2次，無水硫酸鈉干燥過夜。減壓蒸去氯仿，得橙黃色粗產(chǎn)品。用乙醇溶解粗產(chǎn)品，過60-100目硅膠柱，收集黃色色帶，乙醇中重結(jié)晶，得黃色針狀晶體，產(chǎn)率74.8%。1.22-(2-三氟甲苯基)咪唑[4，5-f][I，IO]菲咯啉(tFPIP)的合成菲羅啉5，6-二酮(2.6g，12mmol)禾P2-三氟基苯甲醛(2.5g，18mmol)，乙酸銨(19g，25mmo1)和冰乙酸(100ml)，攪拌回流4h，冷卻至室溫，加入蒸餾水，用濃氨水調(diào)pH值至中性，有大量橙黃色沉淀生成時，用3X20mL氯仿萃取。旋干，真空干燥，得粗產(chǎn)品。粗產(chǎn)品以甲醇溶解，過硅膠柱，甲醇淋洗，收集黃色洗脫液，濃縮干燥，得灰黃色固體，產(chǎn)率86.7%。1.3cis-[Ru(bpy)2Cl2]2H20的合成氯化釕(RuCl3nH20)(1.56g，6,1)，聯(lián)吡啶(1.87g，12,1)和氯化鋰(2.42g，57.6mmo1)，溶于15mlDMF中，氬氣保護下加熱回流8小時。冷卻至室溫，加入50ml丙酮，搖勻，置冰箱冷凍過夜。過濾，得紫黑色微晶，以冰水洗至近無色，干燥，產(chǎn)率71.0%(以聯(lián)吡啶計算)。1.4ciS-[Ru(bpy)2(py)2]Cl2的合成2.Ogcis-[Ru(bpy)2Cl2]*2H20，23ml妣啶禾口46ml水，加熱攪拌回流4小時。減壓蒸去全部溶劑后，用46ml甲醇溶解得到紅色固體，然后加入300ml乙醚，室溫放置1小時，洗出大量的紅色晶體。抽濾，用乙醚洗滌數(shù)次，得到紅色晶體，產(chǎn)率84.5%。1.5A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20的合成1.95gcis-[Ru(bpy)2(py)2C12]溶于30ml水中，室溫攪拌下加入0.5M的0，0，-二苯甲?；?D-酒石酸鈉溶液19.0ml，攪拌10分鐘，將所得溶液敞口置于通風(fēng)櫥中，約一個星期后析出大量紅色晶體，產(chǎn)率79.3%。1.6A_[Ru(bpy)2(FPIP)](PF6)2(A-1)的合成A-[Ru(bpy)2(py)2][O，O，-dibenzoyl-d—tartrate]12H20，tFPIP以及乙二醇和水的混合溶液加熱回流6小時，冷至室溫后加水稀釋，過濾得到深紅色濾液，向濾液中加入飽和NH4PF6溶液，得到大量橙黃色沉淀，抽濾，沉淀分別用水、乙醚洗滌數(shù)次，真空干燥，得到橙紅色粗品。將干燥后得粗品用5ml乙腈溶解，過中性氧化鋁柱，乙腈-甲苯溶液淋洗下主要的紅色組分，減壓旋干，乙腈-甲苯中重結(jié)晶，得到橘紅色固體，產(chǎn)率79%。ESI-MS(m/e):777.2;389.2。CD(inTris—HCl，pH=7.2，A隨)-291.Onm。實施例2A-[Ru(bpy)2(tFPIP)](PF6)2(A-1)的合成A-[RU(bpy)2(FPIP)](PF6)2(A-1)的合成路線見式(II):(II)菲羅啉5，6_二酮，2-(2_三氟甲苯基)咪唑[4，5_f][1，10]菲咯啉(tFPIP)，cis-[Ru(bpy)2Cl2]，Cis-[Ru(bpy)2(py)2]Cl2的合成同實施例1。2.lA-[Ru(bpy)2(py)2]12H20的合成1.95gcis-[Ru(bpy)2(py)2C12]溶于30ml水中，室溫攪拌下加入0.5M的0，0，-二苯甲?；?L-酒石酸鈉溶液19.0ml。攪拌10分鐘，將所得溶液敞口置于通風(fēng)櫥中，約一星期后析出大量紅色晶體，產(chǎn)率73%。2.2A-[Ru(bpy)2(tFPIP)](PF6)2(A-1)的合成A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20(0.13g，0.lmmol)，5tFPIP(O.105g，0.28mmol)以及乙二醇和水的混合溶劑加熱回流6小時，冷至室溫后加水40ml稀釋，過濾得到深紅色濾液，向濾液中加入飽和NH4PF6溶液，得到大量橙黃色沉淀，抽濾，沉淀分別用水、乙醚洗滌數(shù)次，真空干燥，得到橙紅色粗品。將干燥后得粗品用5ml乙腈溶解，過中性氧化鋁柱，乙腈-甲苯溶液淋洗下主要的紅色組分，減壓旋干，乙腈-甲苯中重結(jié)晶，得到橘紅色固體，產(chǎn)率76%。ESI-MS(m/e):777.3;389.3。CD(inTris_HCl，pH=7.2，X隨)+291.0nm。實施例3A-[Ru(bpy)2(IPBP)](PF6)2(A-2)的合成A-[Ru(bpy)2(謂)](PF6)2(A-2)的合成路線見式(III):O(III)菲羅啉5，6_二酮，cis_[Ru(bpy)2Cl2]，cis_[Ru(bpy)2(py)2]Cl2，A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20的合成同實施例1。3.12-(4-甲基-l-苯并吡喃-2-酮)咪唑[4，5_f][I，IO]菲咯啉)(IPBP)的合成菲羅啉-5，6-二酮0.315g(1.5mmol)，3-醛基色酮0.261g(1.5mmo1)，乙酸銨2.31g(30mmo1)和冰乙酸20mL的混合物于油浴中加熱回流2小時。冷卻至室溫后，用80mL水稀釋，然后滴加濃氨水中和至近中性，即析出大量黃色沉淀。抽濾，先后用水，乙醇洗滌數(shù)次，烘干即得粗產(chǎn)物，無水乙醇中重結(jié)晶，產(chǎn)率73%。3.2A-[Ru(bpy)2(IPBP)](PF6)2(A-2)的合成A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20(0.26g，0.2,1)，IPBP(O.210g，0.56mmol)以及乙二醇和水的混合溶劑加熱回流6小時，冷至室溫后加水40ml稀釋，過濾得到深紅色濾液，向濾液中加入飽和NH4PF6溶液，得到大量橙黃色沉淀，抽濾，沉淀分別用水、乙醚洗滌數(shù)次，真空干燥，得到橙紅色粗品。將干燥后得粗品用5ml乙腈溶解，過中性氧化鋁柱，乙腈-甲苯溶液淋洗下主要的紅色組分，減壓旋干，乙腈-甲苯中重結(jié)晶，得到紅色固體，產(chǎn)率70%。ESI-MS(m/e):791.3.CD(inTris-HCl，pH=7.2，Amax):-291.0nm。實施例4A-[Ru(bpy)2(IPBP)](PF6)2(A-2)的合成A-[Ru(bpy)2(IPBP)](PF6)2(A-2)的合成路線見式(IV):菲羅啉5，6-二酮，cis-[Ru(bpy)2Cl2]，ciS-[Ru(bpy)2(py)2]Cl2的合成同實施例1;A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20的合成同實施例2;IPBP的合成同實施例3。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20(0.26g，0.2,1)，IPBP(O.210g，0.56mmol)以及乙二醇和水的混合溶劑加熱回流6小時，冷至室溫后加水40ml稀釋，過濾得到深紅色濾液，向濾液中加入飽和NH4PF6溶液，得到大量橙黃色沉淀，抽濾，沉淀分別用水、乙醚洗滌數(shù)次，真空干燥，得到橙紅色粗品。將干燥后得粗品用5ml乙腈溶解，過中性氧化鋁柱，乙腈_甲苯溶液淋洗下主要的紅色組分，減壓旋干，乙腈_甲苯中重結(jié)晶，得到紅色固體，產(chǎn)率72%。ESI-MS(m/e):937.0;791.3;396.27。CD(inTris-HCl，pH=7.2，、ax):+291.0nm。實施例5A-[Ru(bpy)2(IPBH)](PF6)2(A-3)的合成A-[Ru(bpy)2(扁)](PF6)2(A-3)的合成路線見式(V):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>菲羅啉5，6_二酮，cis_[Ru(bpy)2Cl2]，cis_[Ru(bpy)2(py)2]ClA-[Ru(bpy)2(py)2]12H20的合成同實施例1。5.12_(4H-1-二氧六環(huán)并苯基)咪唑[4，5_f][1，10]菲咯啉(IPBH)的合成鄰菲咯啉-5，6-二酮0.315g(l.5,1)，3-醛基苯并二惡烷0.246g(l.5,1)，乙酸銨2.31g(30mmo1)和冰乙酸20mL的混合物于油浴中加熱回流2小時。冷卻至室溫后，用80mL水稀釋，然后滴加濃氨水中和至近中性，即析出大量棕黃色沉淀。抽濾，先后用水，乙醇洗滌數(shù)次，烘干即得粗產(chǎn)物，無水乙醇中重結(jié)晶，產(chǎn)率67.1%。5.2A-[Ru(bpy)2(IPBH)](PF6)2(A-3)的合成A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20(0.13g，0.lmmol)，IPBH(O.107g，0.3mmo1)以及乙二醇和水的混合溶劑加熱回流6小時，冷至室溫后加水40ml稀釋，過濾得到深紅色濾液，向濾液中加入飽和NH4PF6溶液，得到大量橙黃色沉淀，抽濾，沉淀分別用水、乙醚洗滌數(shù)次，真空干燥，得到橙紅色粗品。將干燥后得粗品用5ml乙腈溶解，過中性氧化鋁柱，乙腈_甲苯溶液淋洗下主要的紅色組分，減壓旋干，乙腈_甲苯中重結(jié)晶，得到橘黃色固體，產(chǎn)率74%。ESI-MS(m/e):913.0;767.2;384.3。CD(inTris-HCl，pH=7.2，X隨)-292.0nm。實施例6A-[Ru(bpy)2(IPBH)](PF6)2(A-3)的合成A-[Ru(bpy)2(IPBH)](PF6)2(A-3)的合成路線見式(VI):(VI)菲羅啉5，6-二酮，cis-[Ru(bpy)2Cl2]，cis-[Ru(bpy)2(py)2]Cl2的合成同實施例1;A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20的合成同實施例2;IPBP的合成同實施例5。A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20(0.13g，0.lmmol)，IPBH(O.107g，0.3mmo1)以及乙二醇和水的混合溶劑加熱回流6小時，冷至室溫后加水40ml稀釋，過濾得到深紅色濾液，向濾液中加入飽和NH4PF6溶液，得到大量橙黃色沉淀，抽濾，沉淀分別用水、乙醚洗滌數(shù)次，真空干燥，得到橙紅色粗品。將干燥后得粗品用5ml乙腈溶解，過中性氧化鋁柱，乙腈_甲苯溶液淋洗下主要的紅色組分，減壓旋干，乙腈_甲苯中重結(jié)晶，8得到橘黃色固體，產(chǎn)率76%。ESI-MS(m/e):912.87;767.3;384.3。CD(inTris_HCl，pH=7.2，A隨)292.Onm.實施例7A-[Ru(bpy)2(PYNI)](PF6)2(A-4)的合成A-[Ru(bpy)2(PYNI)](PF6)2(A-4)的合成路線見式(VII)。(vn)cis-[Ru(bpy)2Cl2]，cis-[Ru(bpy)2(py)2]Cl2，A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20的合成同實施例1。7.12-(2'-卩比啶)萘并咪唑(PYNI)的合成2-氰基-吡啶0.312g(3,1)，2，3_二氨基萘0.47g(3,1)，多聚磷酸6ml，加熱到175°C6小時，停止反應(yīng)，冷至8(TC，迅速將反應(yīng)混合物倒入50ml水中，用25%氨水中和，得到棕綠色沉淀，用乙醇重結(jié)晶，真空干燥得棕綠色粉末。產(chǎn)率76.2%。7.2A-[Ru(bpy)2(PYNI)](PF6)2(A-4)的合成A_[Ru(bpy)2(py)2]12H20(0.13g，0.1,1)，IPBH(O.0735g，0.3,1)以及乙二醇和水的混合溶劑(9:1，v/v，20ml)于120°C回流6小時，冷至室溫后加水40ml稀釋，過濾得到深紅色濾液，向濾液中加入飽和NH4PF6溶液，得到大量橙黃色沉淀，抽濾，沉淀分別用水、乙醚洗滌數(shù)次，真空干燥，得到橙紅色粗品。將干燥后得粗品用5ml乙腈溶解，過中性氧化鋁柱，乙腈甲苯(10:1，v/v)溶液淋洗下主要的紅色組分，減壓旋干，乙腈_甲苯中重結(jié)晶，得到棕色固體，產(chǎn)率80%。ESI-MS(m/e):658.2;583.9;329.7。CD(inTris—HCl，pH=7.2，A隨)-294nm。實施例8A-[Ru(bpy)2(PYNI)](PF6)2(A-4)的合成A-[Ru(bpy)2(PYNI)](PF6)2(A-4)的合成路線見式(VIII):cis-[Ru(bpy)2Cl2]，cis-[Ru(bpy)2(py)2]Cl2的合成同實施例l;A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20的合成同實施例2;PYNI的合成同實施例7。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>A-[Ru(bpy)2(py)2]12H20(0.13g，0.lmmol)，IPBH(O.0735g，0.3,1)以及乙二醇和水的混合溶劑(9:1，v/v，20ml)于120°C回流6小時，冷至室溫后加水40ml稀釋，過濾得到深紅色濾液，向濾液中加入飽和NH4PF6溶液，得到大量橙黃色沉淀，抽濾，沉淀分別用水、乙醚洗滌數(shù)次，真空干燥，得到橙紅色粗品。將干燥后得粗品用5ml乙腈溶解，過中性氧化鋁柱，乙腈甲苯(10:1，v/v)溶液淋洗下主要的紅色組分，減壓旋干，乙腈_甲苯中重結(jié)晶，得到棕色固體，產(chǎn)率79%。ESI-MS(m/e):658.2;583.8;329.8。CD(inTris—HCl，pH=7.2，A隨)+294nm。實施例9釕配合物對腫瘤細胞生長的抑制以5-氟尿嘧啶為陽性對照。研究釕配合物對人肝癌細胞株(BEL-7402)，結(jié)腸癌細胞株(HCT-8)和人肺腺癌細胞株(A-549)(細胞實驗均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所篩選中心進行)?！銓嶒灧椒ㄟx用對數(shù)生長周期的貼壁腫瘤細胞，胰酶消化后，用10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成5000個/ml的細胞懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中(每孔接種100iil)，37°C，5%C02條件下培養(yǎng)24h。待細胞長滿單層后，實驗組加樣品10iU，然后加入RPMI-1640培養(yǎng)液(FlowLaboratories,美國)至每孔終體積為200ii1。37°C，5%C02條件下繼續(xù)培養(yǎng)72h后，將細胞培養(yǎng)板中的營養(yǎng)液棄掉，每孔加入100新鮮配制的0.5mg/mlMTT無血清培養(yǎng)液，37°C，5%C02條件下繼續(xù)培養(yǎng)4h。小心棄上清，加入200y1匿S0溶解MTTformazon沉淀，微型超聲振蕩器混勻，酶標儀上測定波長544nm處的光密度值(OD值)，按下式計算配合物對腫瘤細胞生長的抑制率腫瘤細胞生長抑制率(％)=(0D對照-0D魏)/(0D對照-0D空白)X100%不同濃度目標化合物對人肝癌細胞株(BEL-7402)，結(jié)腸癌細胞株(HCT_8)和人肺腺癌細胞株(A-549)腫癌細胞生長的抑制率(％)見表1。表1釕配合物對BEL-7402，HCT-8和A-549腫瘤細胞株的抑制活性<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>從表1數(shù)據(jù)可以看到，高濃度(50iig/ml)條件下；釕配合物(約50yM)對實驗?zāi)[瘤細胞均表現(xiàn)出明顯的生長抑制作用；特別是A_l(88.3%;86.2%);A_1(88.8%;88.9%);A-2(86.8%;83.4%);A-2(64.9%;53.7%)對人肝癌細胞株BEL-7402禾口結(jié)腸癌細胞株HCT-8生長抑制率均超過50%。在低濃度5iig/ml條件下，釕配合物A/A-[RU(bpy)2(FPIP)]2+(約5iiM)，對人肝癌細胞株BEL-7402肝癌細胞、HCT-8結(jié)腸癌和A-549肺腺癌細胞生長的抑制均超過了陽性對照藥5-FU(約38M)。實驗條件下，釕配合物對人肝癌細胞株BEL-7402肝癌細胞的抑制率要比HCT-8結(jié)腸癌和A-549肺腺癌的強一些，而對肝癌細胞的活性比結(jié)腸癌更大，尤其是左旋配合物，對肝癌細胞的選擇性更為明顯。權(quán)利要求一種手性釕配合物，其通式為A-[Ru(bpy)2L](PF6)2，其中，A為Δ或Λ；L為IPBP；F2009102533438C00011.tif2.權(quán)利要求1所述手性釕配合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種手性釕配合物及其作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用。手性釕配合物的通式為A-[Ru(bpy)2L](PF6)2，其中，A為Δ或Λ；L為tFPIP、IPBP、IPBH或PYNI。該手性釕配合物以釕作為中心金屬離子，具有剛性八面體空間結(jié)構(gòu)的絡(luò)離子；分子中有兩個聯(lián)吡啶基團作為輔助配體；以2-取代苯基咪唑[4，5-f][1，10]菲咯啉作為主配體；具有上述結(jié)構(gòu)特點的金屬配合物的手性異構(gòu)體，具有旋光性。這些釕配合物對肝癌細胞株BEL-7402等具有明顯的抑制活性，能用于制備抗腫瘤藥物。文檔編號A61P35/00GK101717413SQ20091025334公開日2010年6月2日申請日期2007年9月27日優(yōu)先權(quán)日2007年9月27日發(fā)明者劉云軍,梁寶霞,梅文杰,王娜,韋新煜,馬玉卓申請人:廣東藥學(xué)院