一種具有抗腫瘤作用的組合物及其應(yīng)用的制作方法

專利名稱：一種具有抗腫瘤作用的組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有抗腫瘤作用的組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人參是具有千年歷史的滋補(bǔ)強(qiáng)壯中藥，據(jù)現(xiàn)代研究表明，人參中最主要的活性 成分為人參皂苷(gensenosides)，人參皂苷具有提高機(jī)體免疫功能的作用。因此，人參 皂苷及其復(fù)方產(chǎn)品的研究均已經(jīng)廣泛開展，例如名為"具有抗腫瘤活性的藥物"的發(fā)明 專利(CN99101777. 3)禾P "擔(dān)子菌亞門和五加科提取物的生理活性組合物"的發(fā)明專利 (CN01807160.0)。前者公開了一種含有比例為IO : 5 : 3的靈芝真菌、云芝真菌和人參根 水煎液的抗腫瘤劑；后者公開了一種通過(guò)熱水提取得到的包含屬于擔(dān)子菌亞門多孔菌科的 熱水提取物和屬于五加科植物根的熱水提取物的組合物，該組合物具有降血糖和抗腫瘤活 性。 專利組合物均為真菌和人參根的水提取物，其活性成分除了真菌多糖和人參皂苷 外，還有大量的人參多糖、蛋白質(zhì)、色素和無(wú)機(jī)鹽等，組成成分復(fù)雜，活性物質(zhì)基礎(chǔ)不明確， 有效成分含量低，尤其是其產(chǎn)品中的人參皂苷是固有的人參總皂苷而非經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化后次生形 成的高活性人參次生皂苷。 人參次生皂苷又稱人參次苷，為人參皂苷在一定條件下失去糖配體而新生成的 皂苷，由于次生皂苷失去了極性大的糖配體，其極性降低了，所以又稱為低極性人參皂苷。 人參次苷通常由人參(Panax ginseng)、西洋參(Panax qui卿efolius)、三七參(Radix Notoginseng)、竹節(jié)參(Panax japonicus)、絞股藍(lán)(Gynostemma pentaphyllum)或其 他人參屬(Panax)植物和絞股藍(lán)屬(Gynostemma)植物的根、莖、葉、花和果實(shí)的皂苷提 取物、總皂苷、二醇組皂苷、三醇組皂苷和人參皂苷Ral、 Ra2、 Ra3、 Rbl、 Rb2、 Rb3、 Rc、 Rd、 Re、 Rf、 Fl、 F2、 Rgl、三七皂苷Rl等單體皂苷進(jìn)行高溫高壓水解(韓國(guó)專利號(hào)192678)、 酸水解(CN02144780. 2、 CN01133408. 8)、堿水解(CN00123074. 3、 CN03134090. 3)、酶水解 (CN200610047112. 8)或微生物發(fā)酵方法(CN02132403. 4、 CN03101549. 2)斷裂糖苷鍵失去 糖配體而制備得到的次生產(chǎn)物，包括人參次苷提取物、人參總次苷、人參二醇組次生皂苷、 人參三醇組次生皂苷以及人參皂苷F4、Rg2、Rg3、Rg4、Rg5、Rg6、Rhl、Rh2、Rh3、Rh4、RKl、RK2、 RK3、C-K等次生皂苷及次生苷元Ppd、Ppt等。人參次苷在參屬和絞股藍(lán)屬植物中的含量極 低，甚至不存在，其中Rg3在白參中的含量?jī)H為0. 0003% ，在紅參中的含量約為0. 03% ;Rh2 和C-K在天然人參中并不存在，僅在紅參中含有約0. 001 % Rh2，而C-K只是人參皂苷的腸 道菌代謝產(chǎn)物。與人參皂苷相比，人參次苷具有更低的極性、更高的生物利用度和更強(qiáng)的生 理活性，如人參皂苷Rg3、 Rhl、 Rh2、 C-K及其苷元Ppd等均具有殺死癌細(xì)胞的顯著作用，且 毒性很低，無(wú)副作用。其中人參皂苷Rg3已經(jīng)成功申報(bào)了腫瘤治療藥物并已有拿到藥品批 準(zhǔn)文號(hào)，人參皂苷Rh2、 C-K及其苷元Ppd也在進(jìn)行腫瘤治療的臨床研究過(guò)程中。
真菌多糖是一種生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑，其免疫調(diào)節(jié)作用和對(duì)腫瘤的治療作用已受到人 類的廣泛地重視，一批真菌多糖產(chǎn)品在許多國(guó)家已被用到了臨床上，并取得了顯著療效，如
3香菇多糖、灰樹花多糖、姬松茸多糖、云芝多糖、靈芝多糖、樟芝多糖、裂褶菌多糖、繡球菌多 糖、冬蟲夏草多糖、北蟲草多糖、桑黃多糖、酵母多糖等，這些多糖均具有良好的免疫調(diào)節(jié)作 用以及直接抑制腫瘤的功效，其主要活性成分為P-葡聚糖或者以P-葡聚糖為主的雜聚 糖。眾多實(shí)驗(yàn)研究表明，P-葡聚糖，尤其是P-l，3-葡聚糖、P-l，6-葡聚糖在提高免疫 功能和抑制腫瘤生長(zhǎng)方面具有良好的作用，如香菇多糖(CN 93102815. 9)、豬苓多糖(CN 95115855. 4)、云芝多糖(CN 200710032475.9)等。 雖然目前已經(jīng)出現(xiàn)了上述的真菌多糖、人參次苷產(chǎn)品以及真菌提取物與人參提取 物組成的組合物專利，但是未見真菌多糖與人參次苷的組合物專利或研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明通過(guò)對(duì)臨床研究中明確具有提高人體免疫功能和抑制癌細(xì)胞活性的真菌 多糖和人參次苷進(jìn)行合理配伍，提供了一種能提高免疫功能、抑制和殺死腫瘤細(xì)胞的組合 物。該組合物主要通過(guò)真菌多糖激活人體免疫功能，通過(guò)低極性人參次苷抑制腫瘤細(xì)胞增 殖和毛細(xì)血管生成，兩者相互協(xié)同增效殺死腫瘤細(xì)胞，最終達(dá)到預(yù)防和治療癌癥的目的，且 效果明顯優(yōu)于單用真菌多糖或人參次苷。 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)解決方案 這種具有提高免疫功能、抑制毛細(xì)血管生成和殺死腫瘤細(xì)胞功能的抗癌組合物由
真菌多糖和人參次苷組成，其重量配比為人參次苷真菌多糖=1 : 0.01 500，其中優(yōu)選 重量配比為人參次苷真菌多糖=i : o. i 50。 人參次苷包括人參次苷提取物、人參總次苷、人參二醇組次生皂苷、人參三醇組次
生皂苷以及單體人參皂苷F4、 Rg2、 Rg3、 Rg4、 Rg5、 Rg6、 Rhl、 Rh2、 Rh3、 Rh4、 RK1、 RK2、 RK3、
C-K等次生皂苷及其次生苷元Ppd、 Ppt中的一種或幾種。 人參次苷是由人參、西洋參、三七參、竹節(jié)參、絞股藍(lán)或其他人參屬、絞股藍(lán)屬植 物的根、莖、葉、花或果實(shí)的皂苷提取物、總皂苷、二醇組皂苷、三醇組皂苷和人參皂苷Ral、 Ra2、 Ra3、 Rbl、 Rb2、 Rb3、 Rc、 Rd、 Re、 Rf 、 Fl、 F2、 Rgl、三七皂苷Rl等單體皂苷經(jīng)高溫高壓水 解、酸水解、堿水解、酶水解或微生物發(fā)酵方法中的一種或幾種方法制備得到的皂苷含量為 1% 99%的人參次苷，較佳的，人參次苷中皂苷含量為50% _95%，優(yōu)選皂苷重量百分比為 50 95 %人參次生皂苷有效部位或次生人參皂苷單體。 上述人參次苷的獲取方法均為現(xiàn)有技術(shù)，也可通過(guò)市購(gòu)?fù)緩将@得。
真菌多糖包括香燕(Lenti皿la Edodes)多糖、灰樹花(Grifola frondosa)多 糖、姬松葺(Agaricus blazei)多糖、云芝(Coriolus versicolor)多糖、靈芝(Ganoderma lucidum)多糖、紫芝(Ganoderma sinensis)多糖、樹舌靈芝(Ganoderma 即planatum) 多糖、松杉靈芝(Ganoderma tsugae)多糖、蘑燕(Agancus bru皿escens)多糖、木 耳(Auricularia auricula)多糖、毛木耳(Auricularia polytricha)多糖、芻皮木耳 (Auricularia delicata)多糖、銀耳(Tremellafuciformis)多糖、茶色銀耳(Tremella foliacea)多糖、金耳(Tremella aurantia)多糖、裂褶菌(Schizophyllum commne)多 糖、繡球菌(Sparassis latifolia)多糖、猴頭菇(Hericium erinaceus)多糖、雞腿菇 (Copyinds comatus)多糖、糙皮側(cè)耳(Pleurotus ostreatus)多糖、阿魏側(cè)耳(Pleurotus ferulae)多糖、金針燕(Flammulina velutipes)多糖、冬蟲夏草(Cordyc印s sinensis)多
4糖、蝙蝠蛾擬青霉(Paceilomyces h印ialid)多糖、蝙蝠蛾多毛孢(Hirsutella h印ialid) 多糖、北蟲草(Cordyc印s militaris)多糖、桑黃(Phelli皿s igniarius)多糖、啤酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)多糖、酉良酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)多糖、產(chǎn)阮假 絲酵母(Candida utilis)多糖、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)多糖、卡氏酵母 (Saccharomyces carlsbergensis)多糖中的一種或幾種。是以真菌為原料，采用熱水提取、 乙醇沉淀、超濾、葡聚糖凝膠過(guò)濾、DEAE纖維素柱層析中的一種或幾種方法制備得到的糖含 量為10% 99%的真菌多糖，包括來(lái)源于真菌的水提取物、多糖有效部位和多糖有效成分， 優(yōu)選糖重量百分比為50 95%的真菌多糖有效部位或真菌多糖純品。真菌多糖的主要活性 成分為P-葡聚糖或者以P-葡聚糖為主的雜聚糖，其中。根據(jù)糖苷鍵的不同P-葡聚糖 可分為P-l，2-葡聚糖、P-l，3-葡聚糖、P-l，4-葡聚糖、P-l，6-葡聚糖，或者他們的聚 合物或混合物。 上述真菌多糖的獲取方法均為現(xiàn)有技術(shù)，也可通過(guò)市購(gòu)?fù)緩将@得。 優(yōu)選的，本發(fā)明的組合物為灰樹花多糖和人參總次苷的組合。優(yōu)選重量配比為人
參總次苷灰樹花多糖=i : o. i 50。在具體實(shí)施例中，列舉了人參總次苷灰樹花多 糖=i : 4。 同樣優(yōu)選的，本發(fā)明的組合物為香菇多糖與人參皂苷Rg3的組合。優(yōu)選重量配比
為人參皂苷Rg3 :香菇多糖=i : o. i 50。在具體實(shí)施例中，列舉了人參皂苷Rg3 :香 菇多糖=i : i。 本發(fā)明的組合物只需將所選的真菌多糖與人參次苷按比例混合即可獲得。 本發(fā)明的組合物可用于制備具有預(yù)防腫瘤、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、輔助治療腫瘤、增
強(qiáng)免疫力作用或抑制毛細(xì)血管增生作用的制劑。 所述腫瘤可為肺癌，肝癌，鼻咽癌，膀胱癌，乳腺癌，腦腫瘤，胃癌，子宮癌，直腸癌，
結(jié)腸癌，肌肉瘤，卵巢癌，淋巴瘤，甲狀腺癌，胰腺癌諸類型的腫瘤。 在使用上述組合物時(shí)，是將安全有效量的組合物施用于哺乳動(dòng)物，其中該安全有 效量通常是約lmg/kg體重 約200mg/kg體重。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健 康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。 本發(fā)明還進(jìn)一步公開了一種具有防治腫瘤作用的制劑，它含有安全有效量的前述 組合物以及藥學(xué)上可接受的載體。 所述制劑類型包括但不限于膠囊劑、片劑、顆粒劑、干預(yù)混劑、粉劑、口服液和針 劑等。 所述藥學(xué)上可接受的載體可為天然或合成的一種或多種有機(jī)或無(wú)機(jī)成分，本發(fā)明 的組合物與其相混合有助于抗體發(fā)揮作用?？勺鳛獒t(yī)藥學(xué)上可接受的載體及其組分的物質(zhì) 包括糖類；纖維素及其衍生物；麥芽；明膠；滑石；固體潤(rùn)滑劑；多元醇；海藻酸；乳化劑；潤(rùn)
濕劑；著色劑；調(diào)味劑；壓片劑；抗氧化劑；防腐劑；無(wú)熱原水；等滲鹽溶液；磷酸鹽緩沖液等。 將人參次苷和真菌多糖按配比混合均勻后作為活性成分，加入適量輔料按常規(guī)工 藝制成最終產(chǎn)品。本發(fā)明的組合物具有顯著的提高機(jī)體免疫功能，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和 毛細(xì)血管增生的功能，適用于癌癥的預(yù)防和治療，可以用于提高機(jī)體的免疫機(jī)能和腫瘤的 治療，且療效明顯優(yōu)于單獨(dú)使用人參次苷或真菌多糖。
5
本組合物安全無(wú)毒，當(dāng)人參次生皂苷與真菌多糖的質(zhì)量比在2 : 8時(shí)，小鼠的最大 耐受量為10g，比氯化鈉的安全性(LD5。 = 4g/kg)還好。
具體實(shí)施例方式
為了更好地理解本發(fā)明，以下將舉實(shí)例說(shuō)明，但這并不意味是對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1 取人參次苷提取物(皂苷重量比為1 % )10kg和香菇多糖(糖重量比為 95% )0. lkg，粉碎成細(xì)粉，加入硬脂酸鎂0. 05kg，混合均勻，灌裝膠囊。
實(shí)施例2 取人參皂苷Rh2(皂苷重量比為90% )0. lkg和姬松茸多糖(糖重量比為 10% )50kg，粉碎成細(xì)粉，加入微晶纖維素10kg、羧甲基淀粉鈉2kg，混合均勻，濕法制粒，干 燥，加滑石粉2kg、硬脂酸鎂0. 3kg，按常規(guī)片劑制備工藝制成片劑。
實(shí)施例3 取繡球菌多糖(糖重量比為30% )10kg和人參皂苷元Ppd(苷元重量比為 80% ) lkg，粉碎成細(xì)粉，加入微晶纖維素2kg、羧甲基淀粉鈉0. 2kg，混合均勻，濕法制粒，干 燥，加硬脂酸鎂O. lkg，按常規(guī)顆粒劑制備工藝制成顆粒劑。
實(shí)施例4 取人參二醇組次苷(皂苷重量比為90% )0.2kg和樟芝多糖(糖重量比為 50% ) 10kg用純水溶解，過(guò)濾，按常規(guī)工藝灌裝成口服液。
實(shí)施例5 取灰樹花多糖(糖重量比為40X)40kg和人參總次苷(皂苷重量比為80X)10kg， 粉碎成細(xì)粉，加入硬脂酸鎂0. 3kg，混合均勻，分裝成散劑。
實(shí)施例6 取注射用香菇多糖(糖重量比為99% ) lkg和注射用人參皂苷Rg3 (皂苷重量比為 99% )lkg，用IOL注射用水溶解，過(guò)濾，按常規(guī)凍干工藝灌裝成粉針劑。
實(shí)施例7人參次苷與真菌多糖組合物延長(zhǎng)S180小鼠生存期實(shí)驗(yàn)
1.材料與方法
1.1材料 藥物真菌多糖為灰樹花多糖(糖重量比為40% )，批號(hào)060308，購(gòu)自浙江方格藥 業(yè)有限公司；人參總次苷(皂苷重量比為80%)，批號(hào)為060206，采用酸水解工藝自制；取 上述灰樹花多糖與人生總次苷，按實(shí)施例5方法配制而成，即為灰樹花多糖與人參總次苷 組合物，批號(hào)為060501 ;環(huán)磷酰胺(CTX)，200mg/瓶，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào) 06012321。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞系昆明種小鼠，雌性，體重18士2g，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中心提供。Sarcoma 180腹水型瘤株(S180)，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所。
1. 2方法 瘤種保存與傳代自腹腔荷瘤小鼠無(wú)菌取瘤細(xì)胞，經(jīng)滅菌生理鹽水(NS)稀釋后無(wú) 菌操作接種于正常成年小鼠腹腔，每7天傳1代。 荷瘤模型制作方法處死腹腔傳代7天的S180荷瘤小鼠，無(wú)菌操作取腹水。滅菌
6NS稀釋腹水調(diào)整瘤細(xì)胞濃度至8X106個(gè)/ml，瘤細(xì)胞死亡率〈5%。按無(wú)菌操作要求將瘤 細(xì)胞懸液接種于小鼠腹腔，O. 2ml/只。 腹腔荷瘤生存期實(shí)驗(yàn)80只小鼠，除10只用于正常對(duì)照組外，其余均腹腔荷瘤， 次日隨機(jī)分為7組，每組10只。分組包括腹腔荷瘤模型組；CTX治療組；聯(lián)用治療組CTX+ 灰樹花多糖人參總次苷組合物低、中、高劑量組；CTX+灰樹花多糖組；CTX+人參總次苷組。 各組都在腹腔荷瘤次日起灌胃(i.g.)給藥，每天一次，每次給藥O. lml/10g。 CTX為腹腔 注射(i. P.)給藥，50mg/kg，連用7天；灰樹花多糖人參總次苷組合物低、中、高劑量分別為 250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg ;人參總次苷組為200mg/kg、灰樹花多糖組800mg/kg，用至 死亡前1天。觀察生存期和一般情況。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示。采用單因素方差分析，組間
兩兩比較采用q檢驗(yàn)。 2.結(jié)果 與CTX聯(lián)用，灰樹花多糖人參總次苷組合物中、高劑量組能顯著延長(zhǎng)S180小鼠生 存期，灰樹花多糖人參總次苷組合物低劑量組、灰樹花多糖組、人參總次苷組都具有延長(zhǎng) S180小鼠生存期的趨勢(shì)，但是無(wú)顯著性差異。且灰樹花多糖人參總次苷組合物有劑量依賴 趨勢(shì)，劑量高效果顯著，結(jié)果見表1。 表1灰樹花多糖人參總次苷組合物對(duì)S180腹腔荷瘤小鼠生存期的影響(n =
10， x±s)
分組劑量(mg/kg )生存天數(shù)(天)生存期延長(zhǎng)率(％)
荷瘤對(duì)照組12.3±1.4
CTX組5012.6±1.62.9
CTX+灰樹花多糖人參 總次苷組合物低劑量組50+25014.1±1.914.7
CTX+灰樹花多糖人參 總次苷組合物中劑量組50+50016.8 ±2. 2厶36.7
CTX+灰樹花多糖人參 總次苷組合物高劑量組50+100018.4±2.1AA49.9
CTX+灰樹花多糖組50+80013.8±1.312.7
CTX+人參總次苷組50+20014.6±1.918.8 A與CTX組比較 實(shí)施例8人參次苷與真菌多糖組合物對(duì)S180皮下荷瘤小鼠的抑瘤實(shí)驗(yàn) 1.材料與方法 1. 1禾才茅斗 藥物真菌多糖為灰樹花多糖(糖重量比為40% )，批號(hào)060308，購(gòu)自浙江方格藥業(yè)有限公司；人參總次苷(皂苷重量比為80%)，批號(hào)為060206，采用酸水解工藝自制；取 上述灰樹花多糖與人生總次苷，按實(shí)施例5方法配制而成，即為灰樹花多糖與人參總次苷 組合物，批號(hào)為060501 ;環(huán)磷酰胺(CTX)，200mg/瓶，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào) 06012321。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞系昆明種小鼠，雌性，體重18±2g，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中心提供。Sarcoma 180腹水型瘤株(S180)，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所。
1. 2方法 瘤種保存與傳代自腹腔荷瘤小鼠無(wú)菌取瘤細(xì)胞，經(jīng)滅菌生理鹽水(NS)稀釋后無(wú) 菌操作接種于正常成年小鼠腹腔，每7天傳1代。 荷瘤模型制作方法處死腹腔傳代7天的S180荷瘤小鼠，無(wú)菌操作取腹水。滅菌 NS稀釋腹水調(diào)整瘤細(xì)胞濃度至8X106個(gè)/ml，瘤細(xì)胞死亡率〈5%。按無(wú)菌操作要求將瘤 細(xì)胞懸液接種于右前肢腋下皮下，O. 2ml/只。 對(duì)皮下荷瘤鼠的實(shí)驗(yàn)觀察80只小鼠，除IO只用于正常對(duì)照組外，其余均皮下荷 瘤，次日隨機(jī)分為7組，每組10只。分組包括皮下荷瘤模型組；CTX治療組；聯(lián)用治療組
CTX+灰樹花多糖人參總次苷組合物低、中、高劑量組；CTX+灰樹花多糖組；CTX+人參總次苷 組。各組都在腹腔荷瘤次日起灌胃(i.g.)給藥，每天一次，給藥劑量O. lml/10g。 CTX為 腹腔注射(i. P.)給藥，給藥劑量30mg/kg，連用7天；灰樹花多糖人參總次苷組合物低、中、 高劑量分別為250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg ;人參總次苷組為200mg/kg ;灰樹花多糖組 800mg/kg，用至處理前l(fā)天，于皮下荷瘤后第12天處理。用藥過(guò)程觀測(cè)一般情況。各批次 動(dòng)物處理時(shí)，先稱體重，處死后取瘤、胸腺、脾臟并稱重，進(jìn)而換算出抑瘤率、胸腺指數(shù)、脾臟 指數(shù)；另取右后肢股骨做骨髓有核細(xì)胞(BMNC)計(jì)數(shù)。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示。采用單因素方差分析，組間
兩兩比較采用q檢驗(yàn)。 2.結(jié)果 CTX組、與CTX聯(lián)用的灰樹花多糖人參總次苷組合物小、中、高劑量組、灰樹花多糖 組和人參總次苷組均能抑制S180的生長(zhǎng)。其中CTX組抑瘤作用顯著；與CTX聯(lián)用時(shí)，灰樹 花多糖人參總次苷組合物小劑量組、灰樹花多糖組和人參總次苷組的抑瘤作用顯著，灰樹 花多糖人參總次苷組合物中、高劑量組的抑瘤作用極顯著。聯(lián)用CTX時(shí)，灰樹花多糖人參總 次苷組合物比灰樹花多糖組或人參總次苷組更能促進(jìn)胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的回升。灰樹花 多糖人參總次苷組合物對(duì)荷瘤與CTX協(xié)同所致的骨髓有核細(xì)胞的減少都有明顯的促進(jìn)回 升作用，且劑量越大回升作用越強(qiáng)。結(jié)果見表2、3。由此可見，人參次苷與真菌多糖組合物 的活性明顯高于單用人參次苷或真菌多糖。 表2灰樹花多糖人參總次苷組合物對(duì)皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用(n = 10， x±s)
分組劑量(mg/kg )腫瘤重量(mg )抑瘤率(％ )
荷瘤對(duì)照組2186±584一
CTX組30780±63—64.3
CTX+灰樹花多糖人參 總次苷組合物低劑量組30+250492±61A77.5
CTX+灰樹花多糖人參 總次苷組合物中劑量組30+500346±86A84.2
CTX+灰樹花多糖人參 總次苷組合物髙劑量組30+1000219士105厶a恥.O
CTX+灰樹花多糖組30+800652 ±23670.2
CTX+人參總次苷組30+200564±109A74.2 *與對(duì)照組比較，a與CTX組比較。 表3灰樹花多糖人參次苷組合物對(duì)皮下荷瘤小鼠免疫器官和骨髓有核細(xì)胞數(shù)的
影響(n = 10， x±s)
分組
劑量 胸腺 脾臟
(mg/kg )( mgAOg ) (mg/10g)
數(shù)
(X10"
正常組
荷癯對(duì)照組
CTX組
crx+灰樹花多糖人參 總次苷組合物低劑量組
CTX+灰樹花多糖人參
總次苷組合物中劑量組
CTX+灰樹花多糖人參
總次苷組合物高劑量組
CTX+灰樹花多糖組 CTX+人參總次苷組
30
30+250 30+500 30+1000
38.7士4.6 33.4土5.1 22.4土4.3**
30.8土4.7A
43.8± 9.7 56.4±11.5 118.3± 13.6"
2明1±站2— 1746±246 1198 ±269*
138.2±42.6A 1783±208
,a厶
33.8土5.
134.5±32.9A1987 ±214
aaa
35.1土3.8
厶a
132.4±17.6A 2236±237
66.1± 5.8 67. 3 土 10. 4
1468±289*" 1368 ±394"
30+800 28.6±3.4A
30+200 30.2±6.8A *與對(duì)照組比較，a與CTX組比較。
實(shí)施例9真菌多糖與人參次苷組合物對(duì)小鼠B16-BL6細(xì)胞自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的抑瘤實(shí)驗(yàn) 1.材料與方法
1. 1材料 藥物真菌多糖為香菇多糖(糖重量比為99% )，批號(hào)060304，購(gòu)自福洲梅峰制藥 廠；人參次苷RG3 (皂苷重量比為99% )，批號(hào)為060201，購(gòu)自同田生物技術(shù)有限公司；取上 述香菇多糖與人參次苷RG3，按實(shí)施例6方法配制而成，即為香菇多糖人參次苷RG3組合物 060601 ;環(huán)磷酰胺(CTX)，200mg/瓶，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào)06012321。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞系C57BL/6小鼠，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 B16-BL6小鼠黑色素瘤細(xì)胞高轉(zhuǎn)移株，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所。
1. 2方法 荷瘤模型制作方法將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的B16-BL6細(xì)胞用0. 25%胰蛋白酶消化，離 心收集細(xì)胞，無(wú)菌PBS洗滌，用無(wú)菌生理鹽水配制成1Xl(f個(gè)/ml細(xì)胞懸液。
實(shí)驗(yàn)觀察120只小鼠，分成正常組；荷瘤對(duì)照組；紫杉醇治療組；香菇多糖人參次 苷RG3組合物低、中、高劑量組；香燕多糖組；人參次苷RG3組，共8組，每組15只。正常組 外，其余每只小鼠后肢爪墊皮下接種50 iU (含5 X 105個(gè)瘤細(xì)胞)。各組都在荷瘤次日起腹 腔注射給藥，每周5次，連續(xù)5周，每次給藥0. lml/10g。紫杉醇的劑量為10mg/kg ;香菇多 糖人參次苷RG3組合物低、中、高劑量分別為50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg ;人參次苷RG3 組和香菇多糖組的劑量各為100mg/kg。接種瘤液后3周，當(dāng)瘤體^ 10mm3時(shí)，將小鼠用乙醚 麻醉，無(wú)菌條件下切除患肢。2周后處死動(dòng)物，解剖取肺，稱重，計(jì)算肺系數(shù)。將肺Bouins液 固定，于解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。采用Mann Whithey U-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
2實(shí)驗(yàn)結(jié)果 紫杉醇和香菇多糖人參次苷RG3組合物高、中劑量組對(duì)小鼠B16-BL6細(xì)胞自發(fā)性
肺轉(zhuǎn)移具有顯著抑制作用，香菇多糖人參次苷RG3組合物低劑量組、香菇多糖組和人參次
苷RG3組對(duì)小鼠細(xì)胞自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移具有抑制趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異，結(jié)果見表4。 表4香菇多糖人參次苷RG3組合物對(duì)小鼠B16-BL6細(xì)胞自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的抑制作
用
10分組劑量給藥次數(shù)轉(zhuǎn)移鼠/荷 瘤鼠肺系數(shù)肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié) 數(shù)抑制率
(呢/kg )(次)(只/只)(xts)
對(duì)照組13/1319. 2± 8. 6245. 6±39. 7
紫杉醇組10258/812.8± 1.858. 6±4. 51*81.14
香菇多糖人參 次苷RG3組合物 低劑量組502514/1414. 6 ± 4. 7817.8±21.3460.96
香菇多糖人參 次苷RG3組合物 中劑量組1002514/1511. 8± 3. 04*14. 7± 12.46*67. 76
香菇多糖人參 次苷RG3組合物 髙劑量組2002513/149.4± 2. 56*10.8 ± 11.83*76.32
香菇多糖組1002512A214.1± 3. 5926.4±27. 4142.11
人參次苷RG3組1002511/1113. 6± 2. 6521.9 ±24. 5851.97
1權(quán)利要求
一種具有抗腫瘤作用的組合物，由人參次苷和真菌多糖組成。
2. 如權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述人參次苷與真菌多糖的重量比為i : (0.01-500)。
3. 如權(quán)利要求2所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述人參次苷與真菌多糖的重量比為i : (o. 1-50)。
4. 如權(quán)利要求1-3所述任一具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述人參次苷選 自人參次苷提取物、人參總次苷、人參二醇組次生皂苷、人參三醇組次生皂苷以及次生人參 皂苷單體F4、 Rg2、 Rg3、 Rg4、 Rg5、 Rg6、 Rhl、 Rh2、 Rh3、 Rh4、 RK1、 RK2、 RK3、 C-K及次生苷元 Ppd或Ppt中的一種或幾種。
5. 如權(quán)利要求4所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述人參次苷是由 人參Panax ginseng、西洋參Panax quinquefolius、三七參Radix Notoginseng、竹節(jié)參 Panaxjaponicus、絞股藍(lán)Gynostemma pentaphyllum或其他人參屬植物和絞股藍(lán)屬植物的 皂苷提取物、總皂苷、二醇組皂苷、三醇組皂苷以及單體人參皂苷Ral、 Ra2、 Ra3、 Rbl、 Rb2、 Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Fl、F2、Rgl和三七皂苷Rl中的一種或多種經(jīng)高溫高壓水解、酸水解、堿 水解、酶水解或微生物發(fā)酵方法中的一種或幾種方法制備得到的皂苷含量為1% _99%的 人參次苷。
6. 如權(quán)利要求5所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述人參次苷中皂苷 含量為50% -95%。
7. 如權(quán)利要求l-3所述任一具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述真菌多糖包 括香菇多糖、灰樹花多糖、姬松茸多糖、云芝多糖、靈芝多糖、紫芝多糖、樹舌靈芝多糖、松杉 靈芝多糖、蘑菇多糖、木耳多糖、毛木耳多糖、皺木耳多糖、銀耳多糖、茶色銀耳多糖、金耳多 糖、裂褶菌多糖、繡球菌多糖、猴頭燕多糖、雞腿燕多糖、糙皮側(cè)耳多糖、阿魏側(cè)耳多糖、金針 菇多糖、冬蟲夏草多糖、蝙蝠蛾擬青霉多糖、蝙蝠蛾多毛孢多糖、北蟲草多糖、桑黃多糖、啤 酒酵母多糖、釀酒酵母多糖、產(chǎn)朊假絲酵母多糖、乳酸克魯維酵母多糖或卡氏酵母多糖中的 一種或幾種。
8. 如權(quán)利要求7所述具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述真菌多糖是以真菌 為原料，采用熱水提取、乙醇沉淀、超濾、葡聚糖凝膠過(guò)濾及DEAE纖維素柱層析中的一種或 幾種方法制備得到的糖含量為10% _99%的真菌多糖。
9. 如權(quán)利要求8所述具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述真菌多糖中的糖含 量為50-95%。
10. 如權(quán)利要求1-9所述任一具有抗腫瘤作用的組合物的用途，其特征在于，所述組合 物用于制備具有預(yù)防腫瘤、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、輔助治療腫瘤、增強(qiáng)免疫力作用或抑制毛細(xì) 血管增生作用的制劑。
11. 一種具有抗腫瘤作用的制劑，它含有安全有效量的權(quán)利要求l-9所述任一具有抗 腫瘤作用的組合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
12. 如權(quán)利要求11所述具有防治腫瘤作用的制劑，其特征在于，所述制劑類型為膠囊 劑、片劑、顆粒劑、干預(yù)混劑、粉劑、口服液或針劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有抗腫瘤作用的組合物及其應(yīng)用。本發(fā)明公開的組合物是由人參次苷和真菌多糖組成，其重量配比人參次苷真菌多糖為1∶0.01～500，優(yōu)選重量配比為人參次苷真菌多糖為1∶0.1～50。本發(fā)明還公開了該組合物的制備方法。本發(fā)明組合物具有提高免疫功能和抗腫瘤作用，且療效明顯優(yōu)于單獨(dú)使用人參次苷或真菌多糖，適用于腫瘤的治療。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101695513SQ20091019780
公開日2010年4月21日 申請(qǐng)日期2009年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月28日
發(fā)明者白韻琴 申請(qǐng)人:上海永神生物科技有限公司;