專利名稱：一種含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥提取物領(lǐng)域，尤其涉及一種含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的
制備方法。
背景技術(shù)：
痔瘡是一種常見(jiàn)病、多發(fā)病，中國(guó)自古就有"十人九痔"之說(shuō)。發(fā)明專利 CN101181283公開(kāi)了一種抗痔瘡藥物組合物，含有蘆丁、柚皮苷，二者重量百分比為0. 8 4 : l，對(duì)于痔瘡等疾病具有顯著的治療作用。此外，還具體公開(kāi)了兩種制備該抗痔瘡藥物 組合物的方法，一是直接混合蘆丁、柚皮苷，二是直接水提法。直接混合法所用的蘆丁、柚皮 苷均是純品，這兩種化合物純品可通過(guò)中藥提取方法得到，但其制備工藝復(fù)雜，純化路線煩 瑣，成本代價(jià)很高；蘆丁、柚皮苷純品也可通過(guò)西藥合成方法得到，但其代價(jià)成本也很大，使 得制備抗痔瘡藥物組合物的成本也會(huì)比較高。 基于此，我們對(duì)其制備方法進(jìn)行了深入研究，發(fā)明專利CN101396460公開(kāi)了一種
含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的大孔樹(shù)脂制備工藝，其中蘆丁、柚皮苷二者重量百分比 為0.8 4 : 1，符合發(fā)明專利CN101181283公開(kāi)的質(zhì)量控制指標(biāo)。但是大孔樹(shù)脂制備工藝
步驟相對(duì)復(fù)雜，成本相對(duì)較高。 我們知道，直接水提法制備的組合物中所含其他水溶性成分較多，如蛋白質(zhì)、糖、 氨基酸等，樣品為粘膏狀，濃縮、干燥轉(zhuǎn)移操作極其麻煩，轉(zhuǎn)移過(guò)程中有效成分損失較大，重 復(fù)性不好，形成的樣品也不便于保存，極易吸潮，生菌霉變。 本發(fā)明正是基于以上制備工藝及分析方法存在的問(wèn)題，對(duì)該抗痔瘡組合物的制備 工藝進(jìn)行了深入系統(tǒng)的研究，發(fā)明了新的適合工業(yè)化生產(chǎn)的制備工藝，并建立了快速的高 效液相分析方法。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的制備方法，所述提取物是 以枳殼及槐花(或槐米)為原料提取，包括以下步驟取一定量的原料藥材，用一定量的水 提取，濃縮水提取液；向所述水提取液中加一定量的乙醇溶液，靜置；取上清液，濃縮干燥， 得到抗痔瘡提取物。 本發(fā)明所用的原料藥材是枳殼和槐花(或槐米)。枳殼為蕓香科植物酸橙(Citrus aurantium L.)及其栽培變種的干燥未成熟果實(shí)?；被ㄊ嵌箍浦参锘?Sophora J即onica L.)的干燥花，其干燥花蕾為槐米。在制備提取物之前，優(yōu)選將原料藥材進(jìn)行預(yù)處理，即將藥 材洗凈、曬干、粉碎、過(guò)篩。 其中，水提取步驟中，水溶液的體積與原料藥材的重量之比(ml/g)是10 15 : 1，優(yōu)選12 : 1。水提取之后，濃縮液體積與原料藥材的重量之比(ml/g)是2 4 : 1， 優(yōu)選3 : 1。水提取過(guò)程中，加熱回流提取2 3次，每次2 3小時(shí)，優(yōu)選加熱回流提取3 次，每次2小時(shí)。
其中，醇沉步驟中，加入乙醇后使乙醇的終濃度達(dá)到65% 75% ，優(yōu)選70% 。靜置時(shí)間為10 20小時(shí)，優(yōu)選12 18小時(shí)。 其中，濃縮干燥步驟采用減壓真空干燥，真空度是0.09 0. 10MPa，溫度是55t: 60°C，時(shí)間是10 14小時(shí)。濃縮后提取物的比重是1. 00 1. 25g/cm3。
本發(fā)明提供的一種含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的制備方法提取效率高，能有效地富集主要活性成分總黃酮。應(yīng)用本發(fā)明提供的制備方法得到的含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物，以蘆丁為對(duì)照品時(shí)，測(cè)定的提取物中總黃酮含量為26% 28%。以蘆丁、柚皮苷為對(duì)照品時(shí)，蘆丁、柚皮苷的重量百分比為2.0 2.5 : 1。 應(yīng)用本發(fā)明提供的制備方法得到的含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物為固體黃色粉末，體積小，提高了中藥的內(nèi)在質(zhì)量。同時(shí)因在制備過(guò)程中去除了大量的無(wú)機(jī)鹽、粘液質(zhì)等，增強(qiáng)了產(chǎn)品的穩(wěn)定性，不易吸濕，不易吸潮，非常便于保管保存。并且，該提取物易于制備成外觀美觀的各種劑型，便于直接臨床及制劑使用。該制備方法重復(fù)性好，工藝參數(shù)可控，溶劑安全無(wú)污染。 應(yīng)用本發(fā)明提供的制備方法得到的含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物在質(zhì)量控制方法上可以采用紫外分光光度法和高效液相分析法進(jìn)行含量測(cè)定，以及采用高效液相指紋圖譜進(jìn)行分析。由于提取物在制備過(guò)程中去除了大量雜質(zhì)，使得分析方法前處理簡(jiǎn)單、方便，從而使建立的高效液相分析方法更加靈敏、準(zhǔn)確、快速，簡(jiǎn)單易控。 應(yīng)用本發(fā)明提供的制備方法得到的含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物具有明顯的抗痔瘡作用，發(fā)明專利CN101181283公開(kāi)了含蘆丁、柚皮苷的重量百分比在0.8 4 : l范圍內(nèi)的提取物的具體試驗(yàn)實(shí)施例及數(shù)據(jù)。 本發(fā)明提供的含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的制備方法步驟簡(jiǎn)捷、工藝簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，污染小，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)，具有很高的應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式以下所述是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例一 取中藥材枳殼、槐花(或槐米)各10公斤，加入240公斤水溶液，加熱回流提取，每次2小時(shí)，提取液過(guò)濾，濾液待處理；繼續(xù)向藥渣中加入240公斤水溶液，加熱回流提取，每次2小時(shí)，提取液過(guò)濾，濾液待處理；繼續(xù)向藥渣中加入240公斤水溶液，加熱回流提取，每次2小時(shí)，取濾液；三次過(guò)濾液合并，減壓濃縮，濃縮到約40升，加乙醇，使乙醇濃度調(diào)整為70%，安靜放置12小時(shí)，取上清液，減壓濃縮(55°C 60°C，0. 09 0. lOMPa)，藥液比重約1. 25g/cm 真空干燥，真空度為0. 09 0. lOMPa，溫度為60。C，時(shí)間是12小時(shí)，即得。
實(shí)施例二 取中藥材枳殼、槐花(或槐米)各10公斤，加入200公斤水溶液，加熱回流提取，每次2小時(shí)，提取液過(guò)濾，濾液待處理；繼續(xù)向藥渣中加入200公斤水溶液，加熱回流提取，每次2小時(shí)，提取液過(guò)濾，濾液待處理；繼續(xù)向藥渣中加200公斤水溶液，加熱回流提取，每次2小時(shí)，提取液過(guò)濾，取濾液；三次過(guò)濾液合并，減壓濃縮，濃縮到約60升，加乙醇，使乙醇濃度調(diào)整為70%，安靜放置16小時(shí)，取上清液，減壓濃縮(55°C 60°C，0.09 0. 10MPa)， 藥液比重約1. 25g/cm3，真空干燥，真空度是0. 09 0. 10MPa，溫度是60°C ，時(shí)間為12小時(shí)，即得。 實(shí)施例三 取中藥材枳殼、槐花(或槐米)各10公斤，加入300公斤水溶液，加熱回流提取， 每次3小時(shí)，提取液過(guò)濾，濾液待處理；繼續(xù)向藥渣中加300公斤水溶液，加熱回流提取， 每次3小時(shí)，提取液過(guò)濾，濾液待處理，兩次過(guò)濾液合并，減壓濃縮，濃縮到約80升，加乙 醇，使乙醇濃度調(diào)整為70 % ，安靜放置18小時(shí)，取上清液，減壓濃縮(55°C 60°C ， 0. 09 0. lOMPa)，藥液比重約1. 25g/cm 真空干燥，真空度是0. 09 0. lOMPa，溫度是60°C，時(shí)間 為12小時(shí)，即得。
含量測(cè)定實(shí)驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液和實(shí)施例一、二、三中制備的三批樣品，采用紫外分光光度法作 為總黃酮的含量測(cè)定方法，高效液相色譜法作為蘆丁及柚皮苷的含量測(cè)定方法。
—、紫外分光光度法測(cè)定總黃酮含量
儀器日本島津UV-2401紫外分光光度計(jì) 對(duì)照品溶液的制備取蘆丁對(duì)照品約13mg，精密稱定，置于100ml量瓶中，加甲醇 使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液1. Oml 、 2. Oml 、 3. Oml 、 4. Oml 、 5. Oml 、置
25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。以甲醇為空白溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法(中 國(guó)藥典2005版一部附錄VA)在257nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪 制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 供試品溶液制備及測(cè)定法取實(shí)施例中制備的樣品約30mg，精密稱定，置于25ml 量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液lml置 25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，照紫外_可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VA) 在257nm處測(cè)定吸光度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出供試品溶液總黃酮的濃度(P g/ml)，計(jì)算供試 品總黃酮含量。 二、高效液相色譜法測(cè)定蘆丁及柚皮苷的含量
1、高效液相色譜條件 (1)儀器設(shè)備及條件AgilentllOO自動(dòng)進(jìn)樣系列，進(jìn)樣量10iU ;
色譜柱依利特公司Kromasil C18色譜柱5 ii m(4. 6mmX250mm);
DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)257nm、283nm ;
柱溫30。C ;洗脫流速1. Oml/min ;
(2)流動(dòng)相的確定 采用乙腈0. 05M醋酸銨(醋酸調(diào)pH為3. 8) = 17 : 83為流動(dòng)相。
2、提取物供試品溶液及對(duì)照品溶液的配制 取實(shí)施例中制備的樣品30mg，精密稱定，置于25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲使溶 解，冷卻后，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。 精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋制成每lml中約含O. lmg的溶液，作 為蘆丁對(duì)照品溶液；另精密稱取柚皮苷對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋制成每lml中約含0. 04mg的溶液，作為柚皮苷對(duì)照品溶液；取供試品溶液和對(duì)照品溶液各lOiU注入液相色譜儀，記錄色譜圖，用外標(biāo)法計(jì)算含量。
3、測(cè)定方法 分別稱取蘆丁、柚皮苷對(duì)照品溶液，將供試品溶液和上述對(duì)照品溶液按上述色譜
條件進(jìn)行分析。 三、含量測(cè)定結(jié)果 實(shí)施例一、實(shí)施例二、實(shí)施例三中制備的三批樣品含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。 表1
樣品批次蘆丁含量(％)柚皮苷含量(％ )總黃酮含量(％ )
實(shí)施例一8. 274. 1227. 12
實(shí)施例二8. 153. 4328. 06
實(shí)施例三8. 123. 2427. 79 測(cè)定結(jié)果表明，三批樣品中總黃酮含量分別為27. 12%、28. 06%、27. 79%，三批樣品中蘆丁與柚皮苷含量之比為2.0 2.5 : 1。
權(quán)利要求
一種含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的制備方法，所述提取物是以枳殼及槐花(或槐米)為原料提取，其特征在于，包括以下步驟取一定量的原料藥材，用一定量的水提取，濃縮水提取液；向所述水提取液中加一定量的乙醇溶液，靜置；取上清液，濃縮干燥，得到抗痔瘡提取物。
2. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述水提步驟中，水溶液的體積與原料藥材的重量之比(ml/g)是10 15 : 1。
3. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述水提取后，濃縮液體積與原料藥材的重量之比(ml/g)是2 4 : 1。
4. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述水提取過(guò)程中，加熱回流提取2 3次，每次2 3小時(shí)。
5. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述醇沉步驟中，乙醇的終濃度達(dá)到65% 75%。
6. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述靜置時(shí)間是10 20小時(shí)。
7. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述濃縮干燥步驟是減壓真空干燥，其中真空度是O. 09 0. 10MPa、溫度是55°C 6(TC，時(shí)間是10 14小時(shí)。
8. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述濃縮后提取物的比重是1. 00 1. 25g/cm3。
9. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，以蘆丁為對(duì)照品，所述提取物中總黃酮含量為26% 28%。
10. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，以蘆丁、柚皮苷為對(duì)照品，所述提取物含蘆丁、柚皮苷的含量之比為2.0 2.5 : 1。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的制備方法。該提取物是以枳殼及槐花(或槐米)為原料提取，包括以下步驟取一定量的原料藥材，用一定量的水提取，濃縮水提取液；向所述水提取液中加一定量的乙醇溶液，靜置；取上清液，濃縮干燥，得到抗痔瘡提取物。本發(fā)明提供的含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的制備方法步驟簡(jiǎn)捷，工藝簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，污染小，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)，具有很高的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)A61K36/752GK101708243SQ20091018880
公開(kāi)日2010年5月19日 申請(qǐng)日期2009年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月10日
發(fā)明者嚴(yán)啟新, 李勇, 李姿, 陳萍, 高媛 申請(qǐng)人:深圳海王藥業(yè)有限公司