專利名稱：新型人用狂犬病疫苗及其制備方法
新型人用狂犬病疫苗及其制備方法 二.所屬領(lǐng)域 本發(fā)明涉及人用狂犬病疫苗及其的制備方法 [OOO3] 三.背景技術(shù)(早期文獻或參考文獻) 狂犬病(rabies)又名恐水癥(hydrophobia)，是由狂犬病毒感染引起的一種急性 傳染病。主要狂犬病病毒宿主為狼、狐、犬等動物?？袢∩袩o有效藥物可以治療，一旦發(fā) 病100%死亡。但可以通過接種狂犬病疫苗或者注射抗血清來預(yù)防吣 狂犬病在世界范圍內(nèi)均有發(fā)生和流行，據(jù)WHO資料(Bogel1986)統(tǒng)計156個國家 中有87個國家(不含我國)存在狂犬病，如印度、泰國、突尼斯、巴西、埃塞俄比亞、薩爾瓦 多等都是高發(fā)地區(qū)，印度每年死于狂犬病的病例約10000 20000例。20世紀(jì)80年代，我 國僅次于印度居世界第二位氣新中國成立以來，積極開展了對狂犬病的防治工作，目前已 基本控制了人間流行。 狂犬病疫苗是目前預(yù)防狂犬病發(fā)生唯一有效的藥品，現(xiàn)在各國所用疫苗多是細胞
疫苗，包括純化地鼠腎細胞狂犬病疫苗、純化Vero細胞狂犬病疫苗、人二倍體細胞狂犬病
疫苗、純化雞胚細胞狂犬病疫苗等。很長一段時間我國所用疫苗是以氫氧化鋁為佐劑的疫
苗，但是由于氫氧化鋁佐劑存在緩釋的作用，不能在短期內(nèi)(14天 21天)產(chǎn)生有效保護
抗體，現(xiàn)在的人用狂犬病疫苗均為無佐劑的疫苗，但是沒有氫氧化鋁吸附的無佐劑狂犬病
病毒很不穩(wěn)定，在保存過程中需要加入人血白蛋白作為保護劑，增加了疫苗成本。 另外無佐劑人用狂犬病疫苗需要達到有效抗體所需的抗原量高，穩(wěn)定性差，產(chǎn)生
的有效抗體強度不理想，目前對狂犬病疫苗的質(zhì)量控制方面日益加強，DNA殘留量及總蛋白
含量的嚴(yán)格控制，勢必要求將來所制備的人用狂犬病疫苗具有低抗原量，高效價，能快速產(chǎn)
生有效抗體，所以研制新型疫苗成為研究的重點。 四.發(fā)明內(nèi)容(項目內(nèi)容) 本發(fā)明的一個目的是提供一種新型的人用狂犬病疫苗，它含有常規(guī)方法制備的人 用狂犬病純化原液及破傷風(fēng)類毒素，破傷風(fēng)類毒素對滅活的狂犬病毒具有快速增強免疫的 作用，研制的新型人用狂犬病疫苗可以在7天內(nèi)快速產(chǎn)生有效高滴度的中和抗體，達到短 期內(nèi)獲得高中和抗體的作用，而且中和抗體維持時間較長，為狂犬重度咬傷及潛伏期短的 患者，提供一種更安全有效的人用狂犬病疫苗。 本發(fā)明的另一個目的是減少人用狂犬病純化原液抗原量，就是用很少的抗原量達 到好的免疫效果。人用狂犬病純化原液抗原的產(chǎn)量低，制備成本高，本發(fā)明提供一種新型人 用狂犬病疫苗的生產(chǎn)方法，包括以下步驟。 1、用常規(guī)方法分別制備人用狂犬病純化原液及破傷風(fēng)類毒素。
2、將這兩種成分按一定比例進行混合； 3、將混合后的疫苗按液體劑型疫苗和凍干劑型疫苗進行分裝或凍干；
4、將分裝后的產(chǎn)品經(jīng)成品檢定后進行包裝，即得到所需的新型人用狂犬病疫苗。
所說的兩種成分按抗原含量的混合比例為人用狂犬病純化原液常量的1/3 2/3 :破傷風(fēng)類毒素的用量為3Lf/劑 10Lf/劑。
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本發(fā)明的生產(chǎn)方法，前期利用現(xiàn)有的狂犬病純化原液生產(chǎn)工藝及破傷風(fēng)類毒素的 生產(chǎn)工藝，后期按所含抗原量一定比例進行混合配伍，得到新型人用狂犬病疫苗，從而達到 減少狂犬病純化原液抗原量，減少穩(wěn)定劑如人血白蛋白的使用，提高產(chǎn)品質(zhì)量，提高疫苗效 價，增強免疫的效果。 本發(fā)明的第三個目的就是提供一種新型人用狂犬病疫苗，不僅具有預(yù)防狂犬病毒
的作用，而且還能預(yù)防破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌感染的作用，在狂犬重度咬傷后通常需要另注
射大量的破傷風(fēng)抗毒素，具有較大的不良反應(yīng)；使用新型人用狂犬病疫苗可以直接預(yù)防狂
犬病毒及破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌，達到聯(lián)合疫苗的效果。 五.
(如果有附圖的話) 圖1使用不同伍配的本發(fā)明疫苗的中和抗體。
圖2表明本發(fā)明疫苗的效價與傳統(tǒng)疫苗的比較結(jié)果。 圖3表明使用本發(fā)明的疫苗的免疫效果 六.具體實施方案(或方法) 實施例1 : 各取人用狂犬病純化原液(地鼠腎細胞)(福爾生物制藥股份有限公司生產(chǎn))、破 傷風(fēng)類毒素原液(福爾生物制藥股份有限公司生產(chǎn))，根據(jù)抗原量稀釋為l劑量、1/2劑量 的疫苗，分別組合制成液體疫苗。實驗過程中，設(shè)單獨人用狂犬病疫苗為對照組，按照中國 藥典三部的方法分別測定四種組合疫苗的效價。實驗結(jié)果如圖2-l。由圖2-l中可見，添 加7Lf單位破傷風(fēng)類毒素的狂犬病疫苗的效價(6.32IU/mL)比對照組的效價(3. 74IU/mL) 增加2. 5IU/mL ;7Lf單位破傷風(fēng)類毒素與1/2劑量狂犬病純化原液抗原組成的疫苗的效價 (3. 77IU/mL)大于對照組效價(3. 74IU/mL) ，3. 5Lf單位破傷風(fēng)類毒素與1/2劑量狂犬病純 化原液抗原組成的疫苗的效價(3. 15IU/mL)略低于對照組效價(3. 74IU/mL)。因此本實驗 說明破傷風(fēng)類毒素能明顯增加狂犬病疫苗的效價作用，起到增強免疫的效果；在疫苗的制 備中可以大大減少人用狂犬病純化原液抗原量。
實施例2 : 各取人用狂犬病純化原液(VER0細胞)(福爾生物制藥股份有限公司生產(chǎn))、破 傷風(fēng)類毒素原液(福爾生物制藥股份有限公司生產(chǎn))，根據(jù)抗原量稀釋為1劑量、1/2劑量 的疫苗，分別組合制成液體疫苗。實驗過程中，設(shè)人用狂犬病疫苗為對照組，按照中國藥 典三部的方法分別測定四種組合疫苗的效價。實驗結(jié)果如圖2-2。由圖2-2中可見，添加 7Lf單位破傷風(fēng)類毒素的狂犬病疫苗的效價(6.48IU/mL)比對照組的效價(3. 85IU/mL)增 加2. 63IU/mL ;7Lf單位破傷風(fēng)類毒素與1/2劑量狂犬病純化原液抗原組成的疫苗的效價 (3.90IU/mL)大于對照組效價(3.85IU/mL)，3Lf單位破傷風(fēng)類毒素與1/2劑量狂犬病純化 原液抗原組成的疫苗的效價(3.80IU/mL)相當(dāng)于對照組效價(3.85IU/mL)。因此本實驗說 明破傷風(fēng)類毒素能明顯增加狂犬病疫苗的效價作用，起到增強免疫的效果；在疫苗的制備 中可以大大減少人用狂犬病純化原液抗原量。
實施例3 : 各取人用狂犬病純化原液(二倍體細胞)(福爾生物制藥股份有限公司生產(chǎn))、 破傷風(fēng)類毒素原液(福爾生物制藥股份有限公司生產(chǎn))，根據(jù)抗原量稀釋為1劑量、1/2劑 量的疫苗，分別組合制成液體疫苗。實驗過程中，設(shè)人用狂犬病疫苗為對照組，按照中國藥典三部的方法分別測定四種組合疫苗的效價。實驗結(jié)果如圖2-3。由圖2-3中可見，添加 7Lf單位破傷風(fēng)類毒素的狂犬病疫苗的效價(6.80IU/mL)比對照組的效價(4. 25IU/mL)增 加2. 55IU/mL ;7Lf單位破傷風(fēng)類毒素與1/2劑量狂犬病純化原液抗原組成的疫苗的效價 (4. 45IU/mL)大于對照組效價(4. 25IU/mL) ，3. 5Lf單位破傷風(fēng)類毒素與1/2劑量狂犬病純 化原液抗原組成的疫苗的效價(4.05IU/mL)相當(dāng)于對照組效價(4.25IU/mL)。因此本實驗 說明破傷風(fēng)類毒素能明顯增加狂犬病疫苗的效價作用，起到增強免疫的效果；在疫苗的制 備中可以大大減少人用狂犬病純化原液抗原量。
實施例4 : 各取人用狂犬病純化原液(地鼠腎細胞)(福爾生物制藥股份有限公司生產(chǎn))、破 傷風(fēng)類毒素原液(福爾生物制藥股份有限公司生產(chǎn))，根據(jù)抗原量稀釋為l劑量、1/2劑量 的疫苗，分別組合制成液體疫苗。實驗過程中，設(shè)人用狂犬病疫苗為對照組，其中只在對照 組中加入1%人血白蛋白為保護劑，在37°〇放置14天后，按照中國藥典三部的方法分別測 定四種組合疫苗的熱穩(wěn)。實驗證明添加7Lf單位破傷風(fēng)類毒素的狂犬病疫苗的熱穩(wěn)效價 (4. 80IU/mL)比對照組的熱穩(wěn)效價(2. 75IU/mL)增加2. 05IU/mL ;7Lf單位破傷風(fēng)類毒素 與1/2劑量狂犬病純化原液抗原組成的疫苗的熱穩(wěn)效價(2. 95IU/mL)大于對照組熱穩(wěn)效價 (2. 75IU/mL) ， 3. 5Lf單位破傷風(fēng)類毒素與1/2劑量狂犬病純化原液抗原組成的疫苗的熱穩(wěn) 效價(2.65IU/mL)相當(dāng)于對照組熱穩(wěn)效價(2. 75IU/ml)。因此本實驗說明破傷風(fēng)類毒素不 僅能明顯增加狂犬病疫苗的效價作用，起到增強免疫的作用；而且可以取代人血白蛋白起 到保護抗原的作用，減少成本。
實施例5: 各取人用狂犬病純化原液(地鼠腎細胞)(福爾生物制藥股份有限公司生產(chǎn))、破 傷風(fēng)類毒素原液(福爾生物制藥股份有限公司生產(chǎn))，根據(jù)抗原量稀釋為l劑量、1/2劑量 的疫苗，分別組合制成液體疫苗。實驗過程中，設(shè)人用狂犬病疫苗為對照組，其中只在對照 組中加入1%人血白蛋白為保護劑，按照中國藥典三部的方法分別進行四種組合疫苗的特 異性異常實驗。實驗結(jié)果均合格。說明加入破傷風(fēng)類毒素的新型狂犬病疫苗是安全的，有 效的。
實施例6 : 用上述案例組合的4種組合的疫苗分別免疫小鼠，每次免疫0. 5ml，0天、7天分別 免疫2次，分別在7、14、21、28天采血，檢測血清中和抗體和效價。實驗結(jié)果如圖1、圖3。由 圖1中可見，所有添加不同量的破傷風(fēng)類毒素的新型狂犬病疫苗均在7天時產(chǎn)生了高滴度 的中和抗體，添加7Lf單位破傷風(fēng)類毒素的狂犬病疫苗的中和抗體為30. 23IU/ml，遠遠大 于對照組(人用狂犬病疫苗)O. 83IU/ml，血清中和抗體提高36倍左右；在免疫后的14天， 所有添加不同量的破傷風(fēng)類毒素的新型狂犬病疫苗產(chǎn)生的血清中和抗體滴度維持在高水 平，尤其是3. 5Lf單位破傷風(fēng)類毒素與1/2劑量狂犬病純化原液抗原組成的疫苗的抗體滴 度快速增加為21. 4IU/ml，而對照組的中和抗體只有0. 96IU/ml ;在免疫后的21天，所有添 加不同量的破傷風(fēng)類毒素的新型狂犬病疫苗產(chǎn)生的血清中和抗體滴度依舊維持在高水平， 中和抗體效價為5 15IU/ml，而對照組的中和抗體下降為0. 13IU/ml左右，遠遠低于有效 保護抗體0. 5IU/ml ;血清中和抗體平均提高50 150倍左右；在免疫后的28天，所有添加 不同量的破傷風(fēng)類毒素的新型狂犬病疫苗產(chǎn)生的血清中和抗體雖然有所下降，但是血清中和抗體仍然遠遠大于有效中和抗體O. 5IU/ml的要求，中和抗體效價為4 10IU/ml，而對照 組的中和抗體效價下降為0. 09IU/ml。因此本實驗充分說明研制的新型人用狂犬病疫苗可 以在7天內(nèi)快速產(chǎn)生有效高滴度的中和抗體，達到短期內(nèi)獲得高中和抗體的作用，而且中 和抗體的持續(xù)時間較長，為狂犬重度咬傷及潛伏期短的患者，提供一種更安全有效的人用 狂犬病疫苗。研制的新型人用狂犬病疫苗的效果是顯著的，將在狂犬病的防治中起到重要 的作用。
權(quán)利要求
一種新型人用狂犬病疫苗，其特征是由人用狂犬病純化原液與破傷風(fēng)類毒素組成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人用狂犬病純化原液是指由地鼠腎細胞組織培養(yǎng)或二倍體 細胞培養(yǎng)或Vero細胞培養(yǎng)或雞胚細胞培養(yǎng)純化制備的人用狂犬病純化原液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的破傷風(fēng)類毒素是指由傳統(tǒng)方法或基因工程方法制備的破傷 風(fēng)類毒素。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的人用狂犬病純化原液的用量為常量的1/3 2/3。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1、3所述的破傷風(fēng)類毒素的用量為3Lf/劑 10Lf/劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1、4、5所述的人用狂犬病純化原液與破傷風(fēng)類毒素的最佳選擇人用狂犬病純化原液1/3量破傷風(fēng)類毒素3LF ;人用狂犬病純化原液1/2量破傷風(fēng)類毒素4LF。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人用狂犬病疫苗可以是不加人血白蛋白等保護劑的。
全文摘要
本發(fā)明涉及人用狂犬病疫苗及其制備方法，主要解決目前人用狂犬病疫苗需要達到有效抗體所需的抗原量高，穩(wěn)定性差，產(chǎn)生的有效抗體強度不理想的缺點。本發(fā)明的產(chǎn)品含有常規(guī)方法制備的人用狂犬病純化原液及破傷風(fēng)類毒素，其中破傷風(fēng)類毒素對滅活的狂犬病毒具有快速增強免疫的效果。實現(xiàn)用很少的抗原量達到好的免疫效果的目的。本發(fā)明疫苗的制備方法，前期利用現(xiàn)有的狂犬病純化原液生產(chǎn)工藝及破傷風(fēng)類毒素的生產(chǎn)工藝，后期按所含抗原量一定比例進行混合配伍，得到新型人用狂犬病疫苗。新型人用狂犬病疫苗可以直接預(yù)防狂犬病毒及破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌，達到聯(lián)合疫苗的效果。
文檔編號A61K39/205GK101708331SQ20091017742
公開日2010年5月19日 申請日期2009年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月29日
發(fā)明者孫雪南, 張靈敏, 王琪, 賈寶山 申請人:福爾生物制藥股份有限公司