專利名稱：一種抑制乙酰膽堿酯酶的中華真地鱉提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的中華真地鱉提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
阿爾茨海默病(Alzheimer，s disease，AD)，是最常見的以進(jìn)行性癡呆為特征的
大腦退行性變性疾病。它嚴(yán)重影響患病者的認(rèn)知功能、記憶功能、社會(huì)生活能力、個(gè)人 生活能力等。目前，世界上較為接受的AD病理為“膽堿能缺失學(xué)說”。學(xué)說認(rèn)為大腦 內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)_乙酰膽堿的缺失是導(dǎo)致AD疾病的關(guān)鍵原因?，F(xiàn)今對(duì)AD的治療主要是采用乙酰膽堿酯酶抑制劑(如他克林、加蘭他敏、石杉 堿甲等)來抑制乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase，AchE)，提高患者體內(nèi)的乙酰膽堿水 平，延緩乙酰膽堿的水解速度，從而發(fā)揮其對(duì)AD的治療作用。目前，國(guó)內(nèi)研究的乙酰 膽堿酯酶抑制劑大都來源于植物和微生物，如劉嘉林、徐擇鄰等分別從蛇足石杉和華南 馬尾杉中分離得到石杉?jí)A甲；董悅生等從2141株放線菌中篩選到一株具有抑制AchE活 性的陽(yáng)性菌株N-98-1021A。但對(duì)于昆蟲的研究甚少，更無從中華真地鱉中提取乙酰膽堿 酯酶抑制劑的相關(guān)報(bào)道。而中華真地鱉是傳統(tǒng)的活血化瘀藥，據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明其具有抗 凝血、抗缺氧、降血脂、抗突變、治療冠心病、高血壓病等作用。本發(fā)明以中華真地鱉為原料，采用有機(jī)溶劑提取和萃取的手段，制備對(duì)AchE 抑制率達(dá)20% 70%的中華真地鱉提取物，與陽(yáng)性對(duì)照他克林相比，具有顯著的抑制效果。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有抑制AchE活性的中華真地鱉提取物及其制備方 法，為預(yù)防老年癡呆病生物藥品的開發(fā)提供理論依據(jù)。本發(fā)明的特征在于以中華真地鱉為原料，采用有機(jī)溶劑提取和萃取的手段，制 備對(duì)AchE抑制率達(dá)20 70%的中華真地鱉提取物。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是稱取一定量的中華真地鱉，在料液比1 10 1 25、浸提溫度40 70°C、浸提時(shí)間2 7h的條件下進(jìn)行乙醇提取。將中華真地鱉 乙醇提取液在40°C下真空濃縮至干后，以“酸溶堿沉”法除去其不溶性雜質(zhì)，再分別用 氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三種有機(jī)相進(jìn)行萃取，其萃取液分別經(jīng)濃縮至干。經(jīng)濃縮至干的中華真地鱉乙醇提取物和三種有機(jī)相萃取物，分別用DMSO配成 一定濃度的樣品液，測(cè)其對(duì)AchE的抑制率。以他克林作為陽(yáng)性對(duì)照，中華真地鱉其乙醇 提取物與三種有機(jī)相萃取物對(duì)AchE的抑制率達(dá)20 70%。
具體實(shí)施例方式1、中華真地鱉乙醇提取最佳工藝條件的確定具有抑制AchE活性的中華真地鱉乙醇提取最佳條件為中華真地鱉與乙醇(95% )的料液比10 1 25 1、溫度40 70°C下，提取2 7h。2、乙醇提取樣品液的制備及其對(duì)AchE的抑制率按具體實(shí)施方式
1所得的中華真地鱉乙醇提取液，在40°C下真空濃縮至干，用 DMSO配成一定濃度的乙醇提取樣品液，并測(cè)得其對(duì)AchE的抑制率在20%以上。3、酸溶堿沉按具體實(shí)施方式
1所得的中華真地鱉乙醇提取液，在40°C下真空濃縮至干，先 以pH為3的HCl溶液進(jìn)行溶解，再用濃氨水溶液將其pH調(diào)至10后，過濾除去其不溶性 雜質(zhì)，得到透明的棕紅色液體。4、有機(jī)相萃取按具體實(shí)施方式
3所得到的棕紅色透明液體，分別加入氯仿、乙酸乙酯、乙醚 三種有機(jī)溶劑，進(jìn)行萃取。5、有機(jī)相萃取液的提取率將氯仿、乙酸乙酯、乙醚三種有機(jī)相萃取液，于40°C下真空濃縮至干，并測(cè)得 其提取率達(dá)10 50%。6、有機(jī)相萃取樣品液的制備及其對(duì)AchE的抑制率按具體實(shí)施方式
4所得到的三種有機(jī)相萃取液，分別在40°C下真空濃縮至干， 用DMSO配成一定濃度的有機(jī)相萃取樣品液，并分別測(cè)得其對(duì)AchE的抑制率在20 70%。7、選取萃取有機(jī)相考慮提取率和對(duì)AchE的抑制率兩個(gè)因素，在氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三種萃取 有機(jī)相中，本發(fā)明選取乙酸乙酯作為萃取特定有機(jī)相。8、對(duì)AchE抑制率的測(cè)定方法本發(fā)明采用DTNB法測(cè)定中華真地鱉提取樣品液對(duì)AchE的抑制率。
權(quán)利要求
1.一種抑制乙酰膽堿酯酶的中華真地鱉提取物及其制備方法，其特征在于稱取一定量的中華真地鱉，在料液比1 10 1 25、浸提溫度40 70°C、浸提時(shí)間2 7h的條件下進(jìn)行乙醇提取。將中華真地鱉乙醇提取液在40°C下真空濃縮至干 后，以“酸溶堿沉”法除去其不溶性雜質(zhì)，再分別用氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三種有機(jī) 相進(jìn)行萃取，其萃取液分別經(jīng)濃縮至干。經(jīng)濃縮至于的中華真地鱉乙醇提取物和三種有 機(jī)相萃取物，分別用DMSO配成一定濃度的樣品液，測(cè)其對(duì)AchE的抑制率。以他克林 作為陽(yáng)性對(duì)照，中華真地鱉其乙醇提取物與三種有機(jī)相萃取物對(duì)AchE的抑制率達(dá)20 70%。由于考慮提取率和對(duì)AchE的抑制率兩個(gè)因素，在氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三種有 機(jī)相中，本發(fā)明選取乙酸乙酯作為萃取特定有機(jī)相。本發(fā)明采用DTNB法測(cè)定對(duì)中華真 地鱉提取樣品液對(duì)AchE的抑制率。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抑制乙酰膽堿酯酶(AchE)活性的中華真地鱉提取物及 其制備方法，其特征在于具有抑制AchE活性的中華真地鱉乙醇提取最佳條件為中華真地鱉與乙醇(95% ) 的料液比10 1 25 1、溫度40 70°C下，提取2 7h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抑制乙酰膽堿酯酶(AchE)活性的中華真地鱉提取物及 其制備方法，其特征在于將中華真地鱉乙醇提取液，在40°C下真空濃縮至干后，進(jìn)行“酸溶堿沉”。先以pH 為3的HCl溶液進(jìn)行溶解，再用濃氨水溶液將其pH調(diào)至10后，過濾除去其不溶性雜質(zhì)， 得到透明的棕紅色液體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抑制乙酰膽堿酯酶(AchE)活性的中華真地鱉提取物及 其制備方法，其特征在于將中華真地鱉乙醇提取液經(jīng)濃縮，“酸溶堿沉”后得到的棕紅色透明液體，分別以 氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三種有機(jī)溶劑，進(jìn)行萃取。將三種有機(jī)相萃取液在40°C下分別 真空濃縮至干，并測(cè)得其提取率達(dá)10 50%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抑制乙酰膽堿酯酶(AchE)活性的中華真地鱉提取物及 其制備方法，其特征在于將中華真地鱉乙醇提取液和三種有機(jī)相萃取液分別經(jīng)濃縮至干后，用DMSO配成一 定濃度的樣品液，分別測(cè)其對(duì)AchE的抑制率。以他克林作為陽(yáng)性對(duì)照，中華真地鱉其乙 醇提取物與三種有機(jī)相萃取物對(duì)AchE的抑制率達(dá)20 70%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抑制乙酰膽堿酯酶(AchE)活性的中華真地鱉提取物及 其制備方法，其特征在于考慮提取率和對(duì)AchE的抑制率兩個(gè)因素，在氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三種萃取有機(jī) 相中，本發(fā)明選取乙酸乙酯作為萃取特定有機(jī)相。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抑制乙酰膽堿酯酶(AchE)活性的中華真地鱉提取物及 其制備方法，其特征在于本發(fā)明采用DTNB法測(cè)定中華真地鱉提取樣品液對(duì)AchE的抑 制率。
全文摘要
一種抑制乙酰膽堿酯酶的中華真地鱉提取物及其制備方法，其特征是以中華真地鱉為原料，采用有機(jī)溶劑提取和萃取的手段，制備對(duì)乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase，AchE)抑制率達(dá)20～70％的中華真地鱉提取物。即稱取一定量的中華真地鱉，在料液比1∶10～1∶25、浸提溫度40～70℃、浸提時(shí)間2～7h的條件下進(jìn)行乙醇提取。將中華真地鱉乙醇提取液在40℃下真空濃縮至干后，以“酸溶堿沉”法過濾除去其不溶性雜質(zhì)，再分別用氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三種有機(jī)相進(jìn)行萃取，其萃取液分別經(jīng)濃縮至干。經(jīng)濃縮至干的中華真地鱉乙醇提取物和三種有機(jī)相萃取物，分別用DMSO配成一定濃度的樣品液，測(cè)其對(duì)AchE的抑制率。以他克林作為陽(yáng)性對(duì)照，中華真地鱉其乙醇提取物與三種有機(jī)相萃取物對(duì)AchE的抑制率達(dá)20～70％。
文檔編號(hào)A61K35/60GK102008508SQ20091017380
公開日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2009年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月5日
發(fā)明者寧杰, 樸美子, 王鳳舞 申請(qǐng)人:樸美子