專利名稱：：一種柴胡提取物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于一種中藥提取物，具體涉及一種柴胡提取物及其制備方法和含有該柴胡提取物的藥物組合物以及在制備治療肝、膽疾病藥物上的應用。
背景技術：
：瘀膽型肝炎屬中醫(yī)黃疸范疇，可由多種原因?qū)е?，其主要特點是肝內(nèi)膽汁淤滯。本病發(fā)病率高，預后較差，嚴重影響人們的勞動能力和生活質(zhì)量。瘀膽型肝炎按其臨床表現(xiàn)分為急性和慢性兩種類型。急性瘀膽型肝炎一般可自愈，而慢性瘀膽型肝炎如不及時治療，部分病人將發(fā)展為肝硬變，肝衰竭及肝癌。西醫(yī)認為瘀膽型肝炎的病機是由于膽鹽形成和運轉不良，使膽汁乳化及排入微細膽管內(nèi)的水分減少，造成膽汁不易排出，膽汁在微細膽管內(nèi)形成膽栓而發(fā)生膽汁滯留，常用藥物有糖皮質(zhì)激素、苯巴比妥、熊去氧膽酸、胰泌素、強力寧等，但是長期應用會產(chǎn)生較強的副作用。超生理量的糖皮質(zhì)激素具有抗感染、抗過敏和抑制免疫反應等多種藥理作用，常被運用于治療各類炎癥狀態(tài)。但是不適當?shù)氖褂没蜷L期大劑量使用可導致多種不良反應和并發(fā)癥，如庫欣綜合征，誘發(fā)潰瘍，骨質(zhì)疏松，類固醇糖尿病等,甚至危及生命；苯巴比妥單獨使用有頭暈，嗜睡等后遺癥，長期服用可產(chǎn)生耐藥性，依賴性和蓄積性中毒，停藥后可出現(xiàn)撤藥綜合征；熊去氧膽酸的不良反應有便秘、腹瀉、過敏、頭痛等癥狀；強力寧(Potenline)為甘草酸(甘草甜素)制劑，其主要成分為甘草酸單胺、L-半胱氨酸和甘氨酸，具有退黃、抗炎、抗過敏、保護肝細胞、促進膽紅素代謝等多種藥理作用，臨床用于病毒性肝炎、流行性出血熱等疾病的治療。強力寧長期使用會導致嚴重過敏反應、低血鉀麻痹、消化道麻痹、牙齦出血、泌乳、精神癥狀等癥狀。中藥治療瘀膽型肝炎的機制是通過增加肝膽汁流量，促進膽汁分泌和松弛奧狄氏括約肌來實現(xiàn)的。中藥能通過多途徑多環(huán)節(jié)多系統(tǒng)多耙點作用，使機體內(nèi)外環(huán)境協(xié)調(diào)，發(fā)揮利膽退黃、保肝、免疫調(diào)節(jié)、抗炎及抗病毒的作用，基本上4無不良反應，醫(yī)療成本相對較低。中藥制劑以其療效確切、能調(diào)節(jié)整體機能、毒副作用小等優(yōu)點，被患者廣泛接受和應用。但到目前為止，尚未有比較理想的治療瘀膽型肝炎的中藥及天然藥物的制劑上市。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種柴胡提取物，該提取物對于肝病有很好的治療效果。本發(fā)明第二目的提供上述柴胡提取物的制備方法。本發(fā)明第三目的是提供含有上述柴胡提取物的藥物組合物。本發(fā)明第四目的是提供上述柴胡提取物在治療肝病上的應用。實現(xiàn)本發(fā)明的技術方案如下一種柴胡提取物，按照如下方法制備(1)將柴胡，拉丁文名禾爾為萬w;/ewn/附s附"/h'z'^Pavw^^ww57za"ef7!丄"的莖和/或葉干燥粉碎，得柴胡粗粉；加810倍重量的7595。％醇溶液在7585X:中回流提取l3次，每次提取24小時，合并提取液，過濾，回收乙醇并濃縮，濃縮至相對密度為l.O—l.l;(2)向濃縮液中加入810倍體積的水，放置12小時，過濾，得到濾液；(3)將步驟(2)獲得的濾液通過DIOI型大孔樹脂柱，流速為2-5ml/min，水洗脫，以Molishi反應為陰性判定水洗脫終點；70%乙醇洗脫，收集洗脫液，TLC檢測蘆丁不再出現(xiàn)來判定終點，回收乙醇，7(TC真空干燥，得到柴胡提取物粉末。所述醇溶液為乙醇溶液。上述柴胡提取物的制備方法，按照如下步驟進行-.(1)3每柴古月，拉丁文名禾爾為5wp/ewn/msm"/z"fTo斷ar.i^vi^/oZ/wm5Tza"dK丄/，的莖和/或葉干燥粉碎，得柴胡粗粉；加810倍重量的7595%醇溶液在7585。C中回流提取l3次，每次提取24小時，合并提取液，過濾，回收乙醇并濃縮，濃縮至相對密度為l.O—l.l;(2)向濃縮液中加入810倍體積的水，放置12小時，過濾，得到濾液；(3)將步驟(2)獲得的濾液通過D101型大孔樹脂柱，流速為2-5ml/min，水洗脫，以Molishi反應為陰性判定水洗脫終點；70%乙醇洗脫，收集洗脫液，TLC檢測蘆丁不再出現(xiàn)來判定終點，回收乙醇，70。C真空干燥，得到柴胡提取物粉末。含有上述柴胡提取物的藥物組合物，所述的藥物組合物為有效劑量的柴胡提取物與藥劑學上常用輔料混合，制成藥劑學上可接受的劑型。本發(fā)明的柴胡提取物可以加入制備不同劑型時所需的各種常規(guī)輔料，如崩解劑、潤滑劑、粘合劑等以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用口服劑型，如丸劑、散劑、片劑、膠囊劑、口服液等。所述的藥物組合物含有下列重量百分比的組份上述柴胡提取物50-75%;PEG-40015—60%;甘油0.5—25%;吐溫801—15%;劑型優(yōu)選軟膠囊。上述柴胡提取物在制備治療肝病藥物上的應用。上述柴胡提取物在制備治療瘀膽性肝炎、膽囊炎或黃疸型肝炎藥物上的應用。上述柴胡提取物藥物組合物在制備治療肝病藥物上的應用。上述柴胡提取物藥物組合物在制備治療瘀膽性肝炎、膽囊炎或黃疸型肝炎藥物上的應用。上述提取物經(jīng)下述方法分析可知該提取物中含有的主要黃酮類化合物。(1)提取取柴胡莖和葉部分9.9千克粉碎成粗粉(20目)，10倍量85%乙醇回流兩次，各1小時，合并提取液，濃縮至成稀浸膏。稀浸膏依次用石油醚(6090。C)和乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得浸膏。(2)分離浸膏以聚酰胺柱色譜分離，以水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇梯度洗脫，每500ml—瓶收集，聚酰胺薄膜檢識，合并成份相近的流份,得到七個溶劑洗脫部分，分別為Fr.I、Fr.II、Fr.IH、Fr.IV、Fr.V、Fr.VI、Fr.W。將Fr.II濃縮，有黃色固體析出，過濾得黃色固體，將過濾后的溶液濃縮得浸膏2.71g，黃色固體以乙醇重結晶，得化合物II(236mg)。浸膏以硅膠柱色譜進一步純化分離，以氯仿一甲醇一水梯度洗脫，得化合物I(10mg)、化合物II(40mg)，F(xiàn)r.V以S印hadexLH-20柱色譜分離，用l:l的甲醇一水洗脫，得化合物IV(32mg)和化合物V(22mg)，F(xiàn)r.VI濃縮，有黃色固體析出，過濾得黃色固體，黃色固體經(jīng)S印hadexLH-20柱色譜分離，用甲醇洗脫，得化合物III(39mg)和化合物V(10mg)。Fr.VE經(jīng)S印hadexLH-20柱色譜分離，用甲醇洗脫，得化合物VI(32mg)。本實驗從柴胡莖葉中分離得到了六個化合物，鑒定了這六個化合物的結構，它們分別是5,7，4'-三羥基-3'-甲氧基黃酮醇-3-(9-蕓香糖苷(I);5,7,3'，4'-四羥基黃酮醇-3-0-蕓香糖苷(II);異鼠李素(III);5,7,3'，4'-四羥基黃酮醇-3-O-0t-L-阿拉伯呋喃糖苷(IV);槲皮素(V);蟲漆酸(VI)。以上六個化合物皆為首次從該植物中分離得到，其中化合物VI為首次從柴胡屬屬植物中分離得到，也是從柴胡屬植物中第一次分離得到蒽醌類成份。本發(fā)明中所述的柴胡，拉丁文名稱為S甲/ewi/m5m"/z"Wo/^;ar.尸fl葡/oZ/腦eJZ/，本品系傘形科柴胡屬植物，經(jīng)青海省藥品檢定所鑒定藥材為小葉黑柴胡，外觀與北柴胡相似，其根黑褐色，有較稀疏的橫紋而與之區(qū)別，主要分布于河北、山西、陜西、河南、甘肅、青海、內(nèi)蒙等省區(qū)。小葉黑柴胡為長橢圓形，多彎曲，有的具分枝。長510cm，直徑0.20.8cm。表面黑褐色，粗糙，具突起的支根痕。皮孔不明顯。根頭多具25分枝，頂端有殘留的莖基及葉基；下側具兩行呈疣狀突起的不定芽。質(zhì)脆，易折斷，斷面顯片狀纖維性或略平坦，皮部淺棕色，木部淡黃色，呈放射狀，氣微香，味微苦辛。鑒別方法(1)本品橫切面木栓層為1040余列細胞，木栓細胞扁平，長徑約為短徑的4倍。木栓層內(nèi)側為35層切向延長的薄壁細胞，有油管510個，斷續(xù)排列呈一環(huán)。韌皮部較窄，其中分泌組織較多，內(nèi)含黃色油狀物。形成層由35層扁小的薄壁細胞組成連續(xù)的環(huán)或不明顯。木質(zhì)部導管呈放射狀排列。木質(zhì)束較寬，束間組織較窄；木纖維群多分布于木質(zhì)部的外側，散在或斷續(xù)排列成環(huán)。本品根莖有髓，近木質(zhì)部處有油管。本發(fā)明具有的優(yōu)點和有益效果(1)本發(fā)明對于瘀膽性肝炎、膽囊炎、黃疸型肝炎等有較好的治療作用；(2)本發(fā)明來源于天然植物中藥材，對人對環(huán)境無害；(3)本發(fā)明制備方法簡單，成本低。具體實施例方式實施例1-3為柴胡提取物的制備方法，實施例4-6為本發(fā)明藥物組合物的軟膠囊劑的制備，實施例7為本發(fā)明柴胡提取物的藥效學實驗。實施例1(1)將柴胡(5t/p/ewwwjw〖f/H7『0/,^.Pavm/o/^w577朋"7!丄U的莖和葉3000克干燥粉碎成20目左右，加9倍重量的85%乙醇在85。C中回流提取3次，每次提取3小時，合并提取液，過濾，冋收乙醇并濃縮，濃縮至相對密度為l.O一l.l;(2)向濃縮液中加入9倍體積的水，放置12小時，過濾，得到濾液；(3)將步驟2獲得的濾液通過D101型大孔樹脂柱，流速為5ml/min，水洗脫，以Molishi反應為陰性判定水洗脫終點；70%乙醇洗脫，收集洗脫液，TLC檢測盧丁不再出現(xiàn)來判定終點，回收乙醇，70'C真空干燥，得到柴胡提取物粉末600g。實施例2(1)將柴胡的莖和葉3000g干燥粉碎成20目左右，加8倍重量的95%乙醇在8(TC中回流提取2次，每次提取4小時，合并提取液，過濾，回收乙醇并濃縮，濃縮至相對密度為l.O—l.l;(2)向濃縮液中加入10倍體積的水，放置12小時，過濾，得到濾液；(3)將步驟2獲得的濾液通過D101型大孔樹脂柱，流速為2ml/min，水洗脫，以Molishi反應為陰性判定水洗脫終點；70%乙醇洗脫，收集洗脫液，TLC檢測盧丁不再出現(xiàn)來判定終點，回收乙醇，7(TC真空干燥，得到柴胡提取物粉末459g。實施例3(1)將柴胡的莖和葉3000g干燥粉碎成20目，加10倍重量的75%乙醇在75°C中回流提取2次，每次提取3小時，合并提取液，過濾，回收乙醇并濃縮，濃縮至相對密度為l.O—l.l;(2)向濃縮液中加入8倍體積的水，放置12小時，過濾，得到濾液；(3)將步驟2獲得的濾液通過D101型大孔樹脂柱，流速為4ml/min，水洗脫，以Molishi反應為陰性判定水洗脫終點；70%乙醇洗脫，收集洗脫液，TLC檢測戸丁不再出現(xiàn)來判定終點，回收乙醇，7(TC真空干燥，得到柴胡提取物粉末735g。實施例4本發(fā)明藥物組合物軟膠囊劑的制備取實施例l制得的柴胡提取物447g，PEG-400625.8g、吐溫8023g、甘油57.7g混合均勻，制得膠囊內(nèi)容物；膠皮液由42%明膠、20%甘油、37%水及1%色素亮黑混合制得，在膠體磨中壓制成軟膠囊。每粒膠囊內(nèi)容物重0.50g，內(nèi)容物為棕褐色的粘稠液體，氣香，味苦。實施例5本發(fā)明藥物組合物軟膠囊劑的制備取實施例l制的柴胡提取物224g，PEG-400358.4g，吐溫80179.2g，甘油4.5g混合均勻，膠皮液制備方法同實施例4，最后在膠體磨中壓制成軟膠囊。每粒膠囊內(nèi)容物重O.50g,內(nèi)容物為棕褐色的粘稠液體，氣香，味苦。實施例6本發(fā)明藥物組合物軟膠囊劑的制備取實施例3制的柴胡提取物650g，PEG-400270g，吐溫8030g，甘油50g混合均勻，膠皮液制備方法同實施例4，最后在膠體磨中壓制成軟膠囊。每粒膠囊內(nèi)容物重0.50g，內(nèi)容物為棕褐色的粘稠液體，氣香，味苦。實施例7本發(fā)明柴胡提取物對異硫氰酸-a-萘酯(ANIT)模型大鼠的利膽作用ANIT是一種間接肝毒劑，主要損害肝內(nèi)膽管上皮細胞，引起毛細管增生及小葉間膽管周圍產(chǎn)生炎癥，從而造成膽管阻塞，形成明顯的膽汁淤積性黃疸，出現(xiàn)高膽紅素血癥和膽汁分泌減少。1)、受試藥物實施例2制備的柴胡提取物；陽性藥為華沙利膽丸，德國華沙制藥廠，產(chǎn)品編號10500。2)、動物Wister大鼠，270-330g，雄性，II級，購于中國生物制品檢定所動物中心。3)、實驗方法取Wister大鼠，隨機分為空白組，模型組，陽性藥組(0.54粒/只/日)，柴胡提取物粉末用量分為兩個劑量組，高劑量組0.0324g/只/日，低劑量組0.0162g/只/日，每組8只，受試藥物均用水溶解，各組大鼠每日灌胃給藥2次，每次lml，連續(xù)一周?？瞻捉M和模型組給相同體積的生理鹽水。灌胃3日后，除空白組外，其余各組動物均腹腔注射4y。ANIT植物油溶液按0.1875ml/100g進行造模，造模后繼續(xù)按劑量灌胃給藥。實驗結束前，動物禁食不禁水12小時。末次給藥lh后，大鼠以復合麻醉劑(氯胺酮地西泮=1:1)0.25ml/100g麻醉，開腹分離總膽管，于近肝臟端封閉，遠肝臟端結扎，在封閉段朝肝臟方向剪一V字型缺口，插入口徑約為0.6mm的塑料管，結扎固定，并引出腹壁，膽汁流出后，開始計時，計每小時膽汁流量，結果見表l。按照總膽紅素測定試劑盒(購自北京首醫(yī)臨床醫(yī)學科技中心)操作測定總膽紅素(TBIL)值，結果見表2。緒IT誘發(fā)的大鼠肝損傷類似人的肝內(nèi)膽汁淤積病變。由表1和2可以看出，動物肝內(nèi)膽汁淤積病變已經(jīng)發(fā)生，造模成功。測得數(shù)據(jù)的T檢驗結果表明，各組與空白組相比較，有顯著性差異(P<0.01)。與模型組相比較，本發(fā)明的柴胡提取物有明顯的利膽退黃作用，提高大鼠膽汁分泌量，并且能降低膽汁中TBIL的含量。高低劑量相比，高劑量能顯著提高大鼠膽汁分泌量。表]本發(fā)明柴胡提取物對大鼠膽汁分泌量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>PO.Ol，各組與空白對照組比較，有顯著性差異。表2本發(fā)明柴胡提取物對大鼠膽汁中TBIL的影響單位g<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>P<0.01，各組與空白組對照，有顯著性差異。權利要求1、一種柴胡提取物，其特征在于，按照如下方法制備(1)將柴胡的莖和/或葉干燥粉碎，得柴胡粗粉；加8～10倍重量的75～95％醇溶液在75～85℃中回流提取1～3次，每次提取2～4小時，合并提取液，過濾，回收乙醇并濃縮，濃縮至相對密度為1.0-1.1；(2)向濃縮液中加入8～10倍體積的水，放置12小時，過濾，得到濾液；(3)將步驟(2)獲得的濾液通過D101型大孔樹脂柱，流速為2-5ml/min，水洗脫，以Molishi反應為陰性判定水洗脫終點；70％乙醇洗脫，收集洗脫液，TLC檢測蘆丁不再出現(xiàn)來判定終點，回收乙醇，70℃真空干燥，得到柴胡提取物粉末。2、根據(jù)權利要求1所述的柴胡提取物，其特征在于，所述醇溶液為乙醇溶液。3、權利要求1所述柴胡提取物的制備方法，其特征在于，包括如下操作步驟(1)將柴胡的莖和/或葉干燥粉碎，得柴胡粗粉；加810倍重量的7595%醇溶液在7585i:中回流提取13次，每次提取24小時，合并提取液，過濾，回收乙醇并濃縮，濃縮至相對密度為l.O—l.l;(2)向濃縮液中加入810倍體積的水，放置12小時，過濾，得到濾液；(3)將步驟2獲得的濾液通過D101型大孔樹脂柱，流速為2-5ml/min，水洗脫，以Molishi反應為陰性判定水洗脫終點；70%乙醇洗脫，收集洗脫液，TLC檢測蘆丁不再出現(xiàn)來判定終點，回收乙醇，70。C真空干燥，得到柴胡提取物粉末。4、含有權利要求l所述柴胡提取物的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為有效劑量的柴胡提取物與藥劑學上常用輔料混合，制成藥劑學上可接受的劑型。5、根據(jù)權利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物含有下列重量百分比的組份權利要求l所述的柴胡提取物50-75%;PEG-400或明膠15—60%;甘油0.5—25%;吐溫801—15%。6、按照權利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物的劑型是軟膠囊劑。7、權利要求1所述的柴胡提取物在制備治療肝、膽疾病藥物上的應用。8、權利要求1所述的柴胡提取物在制備治療瘀膽性肝炎、膽囊炎或黃疸型肝炎藥物上的應用。9、權利要求4所述的柴胡提取物藥物組合物在制備治療肝病藥物上的應用。10、權利要求4所述的柴胡提取物藥物組合物在制備治療瘀膽性肝炎、膽囊炎或黃疸型肝炎藥物上的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種柴胡提取物及其制備方法，屬于中藥領域。本發(fā)明按照如下方法制備將柴胡的莖和/或葉干燥粉碎，得柴胡粗粉；加8～10倍重量的75～95％醇溶液在75～85℃中回流提取1～3次，每次提取2～4小時，合并提取液，過濾，回收乙醇并濃縮，濃縮至相對密度為1.0-1.1；向濃縮液中加入8～10倍體積的水，放置12小時，過濾，通過D101型大孔樹脂柱，洗脫，收集洗脫液，70℃真空干燥，得到柴胡提取物粉末。本發(fā)明還公開了含有上述柴胡提取物的藥物組合物，以及它們在制備治療肝、膽疾病藥物方面的應用。文檔編號A61P1/16GK101579375SQ200910087169公開日2009年11月18日申請日期2009年6月10日優(yōu)先權日2009年6月10日發(fā)明者張卓勇,蔡光明申請人:中國人民解放軍第三○二醫(yī)院;首都師范大學