專利名稱：中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及中藥的檢測(cè)方法，尤其是一種中藥制劑小兒金丹 的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
小兒金丹由朱砂、橘紅、平貝母、膽南星、前胡、玄參、半夏(清)、大青葉、木通、桔 梗、荊芥穗、羌活、西河柳、地黃、枳殼(麩炒)、赤芍、鉤藤、葛根、牛蒡子(炒)、天麻、甘草、 防風(fēng)、冰片、水牛角濃縮粉、羚羊角、薄荷組成，制備方法以上二十六味，羚羊角銼研成細(xì) 粉，水牛角濃縮粉、冰片研成細(xì)粉，朱砂水飛成極細(xì)粉；其余平貝母等二十二味，粉碎成細(xì) 粉，過(guò)篩；將羚羊角粉、水牛角濃縮粉、冰片、朱砂細(xì)粉與川貝母等粉末配研，過(guò)篩，混勻，每 IOOg粉末加煉蜜120 140g制成大蜜丸，即得，主要功能祛風(fēng)化痰、清熱鎮(zhèn)驚，用于小兒 感冒發(fā)燒、鼻塞流涕、咳嗽氣喘、咽喉腫痛、高熱驚風(fēng)。目前國(guó)際上雖然尚無(wú)植物類中藥的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，但是美國(guó)、歐盟、我國(guó)及傳統(tǒng)出口中 藥的東南亞地區(qū)均有提高中藥標(biāo)準(zhǔn)的趨勢(shì)，在此情況下，需要提出適合我國(guó)產(chǎn)品質(zhì)量的標(biāo) 準(zhǔn)以適應(yīng)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，我國(guó)有數(shù)千年的中藥使用歷史，世界各國(guó)在制訂相應(yīng)的植物藥產(chǎn)品質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)中多參考我國(guó)的中藥標(biāo)準(zhǔn)，所以完善、提高中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更已經(jīng)迫在眉睫。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種能夠定性、定量檢測(cè)藥物 成分的中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，本方法具有檢測(cè)手段簡(jiǎn)單、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)ο本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，步驟是(1)顯微鑒別；(2)以前胡為對(duì)照藥材，薄層色譜法鑒別小兒金丹處方中是否含有前胡成分；(3)以枳殼為對(duì)照藥材，以柚皮苷為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別小兒金丹處方中是否 含有枳殼成分；(4)以葛根為對(duì)照藥材，以葛根素為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別小兒金丹處方中是否 含有葛根成分；(5)以防風(fēng)為對(duì)照藥材，5-0-甲基維斯阿米醇苷為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別小兒 金丹處方中是否含有防風(fēng)成分；(6)以柚皮苷為對(duì)照品，液相色譜法檢測(cè)小兒金丹處方中柚皮苷的含量；(7)采用電位滴定法，測(cè)定小兒金丹處方朱砂中硫化汞的含量。而且，所述顯微鑒別為將小兒金丹置顯微鏡下觀察不規(guī)則細(xì)小顆粒暗棕紅色，有 光澤，邊緣暗黑色；石細(xì)胞黃棕色或無(wú)色，類長(zhǎng)方形、類圓形或形狀不規(guī)則，直徑約94μπι; 草酸鈣針晶成束，長(zhǎng)100 144 μ m,存在于黏液細(xì)胞中或散在；聯(lián)結(jié)乳管直徑14 25 μ m,5含淡黃色顆粒狀物；油管含棕黃色分泌物，直徑約100 μ m;草酸鈣砂晶存在于薄壁細(xì)胞中， 有時(shí)含晶細(xì)胞連接成行；纖維成束，周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維，含晶細(xì)胞的壁木 化增厚；纖維束周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維；油管含金黃色分泌物，直徑約 30 μ m ；不規(guī)則碎片灰白色或灰黃色，稍具光澤，表面有灰棕色色素顆粒，并有不規(guī)則縱長(zhǎng)裂縫。而且，所述薄層色譜法鑒別處方中的前胡成分的方法為(1)供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加硅藻土 3g，研細(xì)，加三氯甲 烷40ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液；(2)對(duì)照藥材溶液的制備取前胡對(duì)照藥材lg，加三氯甲烷15ml，同上述供試品溶 液制備方法制成對(duì)照藥材溶液；(3)薄層條件及結(jié)果薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10 μ 1，對(duì)照藥材溶液 4μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚乙酸乙酯=3 1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出， 晾干，置紫外光燈365nm下檢視，檢視供試品色譜中在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上是否 顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)，進(jìn)而確定供試樣品中是否含有前胡成分。而且，所述薄層色譜法鑒別處方中的枳殼成分的方法為(1)供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加甲醇30ml，超聲處理30分 鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次15ml，合并乙酸 乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；
(2)對(duì)照藥材溶液的制備取枳殼對(duì)照藥材lg，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾 過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；(3)對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為 對(duì)照品溶液；(4)薄層條件及結(jié)果薄層色譜試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對(duì)照藥材溶液 10μ1、對(duì)照品溶液4μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯丁酮乙醇= 12 5 1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，加熱，置紫外光燈 254nm下及紫外光燈365nm檢視，檢視供試品色譜中在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位 置上是否顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)，進(jìn)而確定樣品中是否含有枳殼與橘紅成分。而且，所述薄層色譜法鑒別處方中的葛根成分的方法為(1)供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加甲醇30ml，超聲處理30分 鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次15ml，合并乙酸 乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；(2)對(duì)照藥材溶液的制備取葛根對(duì)照藥材lg，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾 過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；(3)對(duì)照品溶液的的制備取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每ml含Img的溶液，作為 對(duì)照品溶液；(4)薄層條件及結(jié)果薄層色譜試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液 各10μ1，對(duì)照品溶液4μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇水= 7 2.5 0.25為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，檢視供試品色譜中 在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上是否顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。6
而且，所述薄層色譜法鑒別處方中的防風(fēng)成分的步驟為(1)供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加硅藻土 3g，研細(xì)，加丙酮 40ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為供試品溶液；(2)對(duì)照藥材溶液的制備取防風(fēng)對(duì)照藥材lg，加丙酮10ml，超聲處理30分鐘，濾 過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；(3)對(duì)照品溶液的制備取5-0-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含 Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；(4)薄層條件及結(jié)果薄層色譜試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一 硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷甲醇=4 1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈 254nm下檢視，檢視供試品色譜中在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上是否顯相同顏 色的斑點(diǎn)，進(jìn)而確定供試樣品中是否含有防風(fēng)成分。而且，所述以柚皮苷為對(duì)照品，液相色譜法檢測(cè)處方中柚皮苷的含量的方法為(1)色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇水磷酸= 35 65 0. 05 ；柱溫35°C;流速lml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)283nm，理論板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算不 低于3000 ；(2)對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含柚 皮苷對(duì)照品0. Img的溶液，搖勻，即得，精密吸取10 μ 1，注入液相色譜儀檢測(cè)；(3)供試品溶液的制備取小兒金丹樣品適量，剪碎，取2. 5g，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減 失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得，精密吸取10 μ 1，注入液相色譜儀檢測(cè)；(4)含量限度的制定小兒金丹樣品中，枳殼占處方總量的4. 17%，已經(jīng)炮制，本品為生粉入藥，另處方 中橘紅亦含有少量柚皮苷，綜合考慮，枳殼中柚皮苷轉(zhuǎn)移率按100%計(jì)算，每Ig含柚皮苷不 得少于0. 72mg，若按照每丸計(jì)算，含柚皮苷不得少于1. Img0而且，所述采用電位滴定法，測(cè)定小兒金丹處方朱砂中硫化汞的含量的方法為(1)朱砂中硫化汞含量測(cè)定取朱砂粉末約0. lg，共6份，精密稱定，置IOOml錐形瓶中，加硫酸IOml與硝酸鉀 1. 5g，加熱使溶解，放冷，加水50ml，加高錳酸鉀溶液至顯粉紅色，再滴加2%硫酸亞鐵 溶液至紅色消失后，用硫氰酸銨滴定液0. 1047mol/L滴定，每Iml硫氰酸銨滴定液0. Imol/ L相當(dāng)于11. 63mg的硫化汞HgS，含量的平均值為97. 48%, RSD為0. 92% ；(2)供試品處理方法的確定取小兒金丹樣品適量，剪碎，取2g，精密稱定，置 IOOml錐形瓶中，加硫酸20ml，硝酸鉀2g，加熱使成乳白色，放冷，加水40ml，滴加高錳 酸鉀溶液至顯粉紅色以2分鐘內(nèi)不消失為度，再滴加2%硫酸亞鐵溶液至紅色消失，用硫 氰酸銨滴定液0. lmol/L滴定，每Iml硫氰酸銨滴定液0. lmol/L相當(dāng)于11. 63mg的硫化汞 (HgS)；(3)含量限度的確定處方中，朱砂占處方總量的4. 83%，依據(jù)藥典對(duì)朱砂含硫化汞不得少于96. 0%的 規(guī)定，小兒金丹樣品含硫化汞理論量應(yīng)為46. 38mg/g，鑒于本品為大蜜丸，按照士 15%上下 浮動(dòng)，小兒金丹樣品每1丸含朱砂以硫化汞HgS計(jì)，應(yīng)為60 80mg。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是本發(fā)明的檢測(cè)方法在原標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，增加了處方中朱砂、玄參、半夏、桔梗、羌活、 鉤藤、葛根、甘草、防風(fēng)及水牛角濃縮粉的顯微鑒別方法；增加了處方中前胡、枳殼、葛根及 防風(fēng)的薄層鑒別方法；以柚皮苷為定量指標(biāo)，制定了橘紅和枳殼的含量測(cè)定方法，修訂后的 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高了小兒金丹質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性，進(jìn)一步確保產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量和療效，對(duì)促進(jìn)產(chǎn) 品銷售、增加產(chǎn)品的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力、保證患者用藥安全意義重大。
圖1為本發(fā)明供試樣品中前胡的薄層色譜圖在紫外光燈(365nm)檢視圖，從左至 右依次為樣品1 (批號(hào)E518001)，樣品2 (批號(hào)E5180(^)，樣品3 (批號(hào)20060 ，前胡對(duì) 照藥材(中檢所)，陰性樣品；圖2，圖3分別為本發(fā)明供試樣品中枳殼與橘紅檢測(cè)中的薄層色譜圖在紫外燈 254nm，365nm的檢視圖，從左至右依次為樣品1(批號(hào)E518001)，樣品2 (批號(hào)E518002)， 樣品3(批號(hào)200603)，柚皮苷對(duì)照品(中檢所)，陰性樣品，枳殼對(duì)照藥材(中檢所)，橘紅 藥材；圖4為本發(fā)明供試樣品中葛根檢測(cè)在紫外光燈(365nm)下檢視圖，從左至右依次 為樣品1 (批號(hào)E518001)，樣品2 (批號(hào)疋51800幻，樣品3 (批號(hào)20060 ，葛根對(duì)照藥材 (中檢所)，葛根素對(duì)照品(中檢所)，陰性樣品；圖5為本發(fā)明供試樣品中防風(fēng)檢測(cè)在紫外光燈OMnm)下檢視圖，從左至右依次 為樣品1 (批號(hào)E518001)，樣品2 (批號(hào)疋51800幻，樣品3 (批號(hào)20060 ，防風(fēng)對(duì)照藥材 (中檢所)，5-0-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品(中檢所)，陰性樣品；圖6、圖7為本發(fā)明供試樣品中玄參檢測(cè)的不同展開(kāi)劑的薄層色譜圖，從左至右依 次為樣品1 (批號(hào)E518001)，樣品2 (批號(hào)疋51800幻，樣品3 (批號(hào)20060 ，玄參對(duì)照藥 材(中檢所)，陰性樣品；圖8為本發(fā)明柚皮苷對(duì)照品色譜圖；圖9為本發(fā)明柚皮苷檢測(cè)中供試品色譜圖；圖10為本發(fā)明柚皮苷檢測(cè)中陰性樣品色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明，下述實(shí)施例是說(shuō)明性的，不是限定性的， 不能以下述實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，其方法的步驟是(1)顯微鑒別取本品，置顯微鏡下觀察不規(guī)則細(xì)小顆粒暗棕紅色，有光澤，邊緣暗黑色；石 細(xì)胞黃棕色或無(wú)色，類長(zhǎng)方形、類圓形或形狀不規(guī)則，直徑約94μπι;草酸鈣針晶成束，長(zhǎng) 100 144 μ m,存在于黏液細(xì)胞中或散在；聯(lián)結(jié)乳管直徑14 25 μ m,含淡黃色顆粒狀物； 油管含棕黃色分泌物，直徑約100 μ m。草酸鈣砂晶存在于薄壁細(xì)胞中，有時(shí)含晶細(xì)胞連接成 行；纖維成束，周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維，含晶細(xì)胞的壁木化增厚；纖維束周圍 薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維；油管含金黃色分泌物，直徑約30 μ m ；不規(guī)則碎片灰8白色或灰黃色，稍具光澤，表面有灰棕色色素顆粒，并有不規(guī)則縱長(zhǎng)裂縫。(2)采用薄層色譜法，以前胡為對(duì)照藥材，鑒別處方中的前胡。①供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加硅藻土 3g，研細(xì)，加三氯甲烷 40ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。②對(duì)照藥材溶液的制備取前胡對(duì)照藥材lg，加三氯甲烷15ml，同上述供試品溶 液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。③陰性樣品溶液的制備按處方配比，取除前胡外的其他藥材，按原藥制備工藝制 成丸劑，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。④薄層條件及結(jié)果照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)， 吸取供試品溶液10μ 1，對(duì)照藥材溶液4μ 1，陰性樣品溶液10μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層 板上，以石油醚(60 90°C)乙酸乙酯=3 1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈 (365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)， 陰性樣品無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。(3)采用薄層色譜法，以枳殼為對(duì)照藥材，以柚皮苷為對(duì)照品，鑒別處方中的枳殼 與橘紅。鑒于枳殼與橘紅均屬蕓香科植物，含有部分相同的成分。目前中國(guó)藥品生物制品 檢定所尚未提供橘紅對(duì)照藥材，故參照《中國(guó)藥典》2005年版一部有關(guān)內(nèi)容，采用薄層色譜 法，以枳殼為對(duì)照藥材，以柚皮苷為對(duì)照品，鑒別處方中的枳殼與橘紅。①供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘， 濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯 液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。②對(duì)照藥材溶液的制備取枳殼對(duì)照藥材lg，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾 過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。③對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì) 照品溶液。④陰性樣品溶液的制備按處方配比，取除枳殼和橘紅外的其他藥材，按原藥制備 工藝制成丸劑，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。⑤薄層條件及結(jié)果照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)， 吸取上述供試品溶液及對(duì)照藥材溶液10 μ 1、對(duì)照品溶液4 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄 層板上，以乙酸乙酯丁酮乙醇=12 5 1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%三氯 化鋁乙醇溶液，加熱，置紫外光燈OMnm)下及紫外光燈(365nm)檢視。供試品色譜中，在 與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)，陰性樣品無(wú)干擾。 結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3。(4)采用薄層色譜法，以葛根為對(duì)照藥材，以葛根素為對(duì)照品，鑒別處方中的葛根。①供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘， 濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯 液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。②對(duì)照藥材溶液的制備取葛根對(duì)照藥材lg，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾 過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。
③對(duì)照品溶液的的制備取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每ml含Img的溶液，作為對(duì) 照品溶液。④陰性樣品溶液的制備按處方配比，取除葛根外的其他藥材，按原藥制備工藝制 成丸劑，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。⑤薄層條件及結(jié)果照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)， 吸取上述供試品溶液、陰性樣品溶液及對(duì)照藥材溶液各10μ 1，對(duì)照品溶液4μ 1，分別點(diǎn)于 同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇水=7 2.5 0.25為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾 干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性樣品無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖4。(5)采用薄層色譜法，以防風(fēng)為對(duì)照藥材，5-0-甲基維斯阿米醇苷為對(duì)照品，鑒別 處方中的防風(fēng)。①供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加硅藻土 3g，研細(xì)，加丙酮 40ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為供試品溶液。②對(duì)照藥材溶液的制備取防風(fēng)對(duì)照藥材lg，加丙酮10ml，超聲處理30分鐘，濾 過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。③對(duì)照品溶液的制備取5-0-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含 Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。④陰性樣品溶液的制備按處方配比，取除防風(fēng)外的其他藥材，按原藥制備工藝制 成丸劑，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。⑤薄層條件及結(jié)果照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)， 吸取上述四種溶液各10μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇G 1) 為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì) 照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖4。(6)采用薄層色譜法，以玄參為對(duì)照藥材，鑒別處方中的玄參。①供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加水40ml，加熱使溶解，放冷， 濾過(guò)，濾液用乙醚振搖提取2次，每次20ml，棄去乙醚液，水液用水飽和的正丁醇40ml振搖 提取，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。②對(duì)照藥材溶液的制備取玄參對(duì)照藥材2. 5g，加乙醇50ml，加熱回流1小時(shí)，濾 過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，同法制成對(duì)照藥材溶液。③陰性樣品溶液的制備按處方配比，取除玄參外的其他藥材，按原藥制備工藝制 成丸劑，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。④薄層條件及結(jié)果a、照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液 各6μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇=5 1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出， 晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相 應(yīng)的位置上，不顯相同的斑點(diǎn)，陰性樣品無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖6。b、照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液 各6μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，三氯甲烷甲醇水=I3 7 2在10°C以下放 置分層的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，不顯相同的斑點(diǎn)，陰性樣品無(wú)干擾， 結(jié)果見(jiàn)圖7。(7)以柚皮苷為對(duì)照品，液相色譜法檢測(cè)處方中柚皮苷的含量①色譜條件參照《中國(guó)藥典》2005年版一部有關(guān)含量測(cè)定方法制定。用十八烷 基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇水磷酸=35 65 0. 05 ；柱溫35°C ；流速 lml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)283nm，理論板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算不低于3000。②對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含柚皮 苷對(duì)照品0. Img的溶液，搖勻，即得，精密吸取10 μ 1，注入液相色譜儀，結(jié)果見(jiàn)圖8。③供試品溶液的制備取小兒金丹樣品適量，剪碎，取2. 5g，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率50W，頻率50kHz) 30分鐘，放冷，再 稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得，精密吸取10 μ 1，注入液相 色譜儀，結(jié)果見(jiàn)圖9。④陰性樣品溶液的制備按處方取除橘紅和枳殼的各味藥材，按原藥制備工藝制 得樣品，再按本步驟中“③”供試品溶液制備方法，制得陰性樣品溶液。精密吸取10μ 1，注 入液相色譜儀。與柚皮苷對(duì)照品色譜峰相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處，無(wú)色譜峰出現(xiàn)，陰性樣品無(wú)干 擾。結(jié)果見(jiàn)圖10。⑤含量限度的制定處方中，枳殼占處方總量的4. 17%，已經(jīng)炮制，鑒于本品為生粉入藥，另處方中橘 紅亦含有少量柚皮苷，綜合考慮，枳殼中柚皮苷轉(zhuǎn)移率按100%計(jì)算(《中國(guó)藥典》2005年 版一部枳殼項(xiàng)下含量限度計(jì)算)，每Ig含柚皮苷不得少于0. 72mg，若按照每丸計(jì)算，含柚皮 苷不得少于1. lmg。(8)采用電位滴定法，測(cè)定小兒金丹處方朱砂中硫化汞的含量。①電位滴定原理本方法是利用電位的突躍來(lái)確定滴定終點(diǎn)，結(jié)果判定準(zhǔn)確。②朱砂中硫化汞含量測(cè)定取朱砂粉末約0. lg，共6份，精密稱定，置IOOml錐形瓶中，加硫酸IOml與硝酸 鉀1. 5g，加熱使溶解，放冷，加水50ml，加高錳酸鉀溶液至顯粉紅色，再滴加2%硫酸亞 鐵溶液至紅色消失后，用硫氰酸銨滴定液(0. 1047mol/L)滴定。每Iml硫氰酸銨滴定液 (0. Imo 1/L)相當(dāng)于11.63mg的硫化汞(HgS)，含量的平均值為97. 48%, RSD為0.92%，結(jié) 果見(jiàn)表1。③供試品處理方法的確定取小兒金丹樣品適量，剪碎，取2g，精密稱定，置IOOml 錐形瓶中，加硫酸20ml，硝酸鉀2g，加熱使成乳白色，放冷，加水40ml，滴加高錳酸鉀溶 液至顯粉紅色以2分鐘內(nèi)不消失為度，再滴加2%硫酸亞鐵溶液至紅色消失，用硫氰酸銨 滴定液(0. lmol/L)滴定。每Iml硫氰酸銨滴定液(0. lmol/L)相當(dāng)于11. 63mg的硫化汞 (HgS)。④空白試驗(yàn)按“②”方法，不加樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果兩份消耗硫氰酸銨滴定液按照 0. lmol/L硫氰酸銨計(jì)，均為0. 02ml。⑤陰性樣品試驗(yàn)按處方的配比，取除朱砂的各藥味，按原藥制備工藝制得樣品， 再按本步驟中“③”供試品的處理方法測(cè)定，結(jié)果消耗0. lmol/L硫氰酸銨滴定液為0. 02ml,表明陰性樣品對(duì)朱砂的定量測(cè)定無(wú)明顯影響。⑥含量限度的確定處方中，朱砂占處方總量(蜜比100/130計(jì))的4. 83%，依據(jù)藥典對(duì)朱砂含硫化汞 不得少于96. 0%的規(guī)定，小兒金丹樣品含硫化汞理論量應(yīng)為46. 38mg/g，鑒于本品為大蜜 丸，按照士 15%上下浮動(dòng)，小兒金丹樣品每1丸含朱砂以硫化汞(HgS)計(jì)，應(yīng)為60 80mg。表1朱砂中硫化汞含量測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于其方法的步驟是(1)顯微鑒別；(2)以前胡為對(duì)照藥材，薄層色譜法鑒別小兒金丹處方中是否含有前胡成分；(3)以枳殼為對(duì)照藥材，以柚皮苷為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別小兒金丹處方中是否含有 枳殼成分；(4)以葛根為對(duì)照藥材，以葛根素為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別小兒金丹處方中是否含有 葛根成分；(5)以防風(fēng)為對(duì)照藥材，5-0-甲基維斯阿米醇苷為對(duì)照品，薄層色譜法鑒別小兒金丹 處方中是否含有防風(fēng)成分；(6)以柚皮苷為對(duì)照品，液相色譜法檢測(cè)小兒金丹處方中柚皮苷的含量；(7)采用電位滴定法，測(cè)定小兒金丹處方朱砂中硫化汞的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述顯 微鑒別為將小兒金丹置顯微鏡下觀察不規(guī)則細(xì)小顆粒暗棕紅色，有光澤，邊緣暗黑色；石 細(xì)胞黃棕色或無(wú)色，類長(zhǎng)方形、類圓形或形狀不規(guī)則，直徑約94μπι;草酸鈣針晶成束，長(zhǎng) 100 144 μ m，存在于黏液細(xì)胞中或散在；聯(lián)結(jié)乳管直徑14 25 μ m，含淡黃色顆粒狀物； 油管含棕黃色分泌物，直徑約100 μ m;草酸鈣砂晶存在于薄壁細(xì)胞中，有時(shí)含晶細(xì)胞連接 成行；纖維成束，周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維，含晶細(xì)胞的壁木化增厚；纖維束周 圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維；油管含金黃色分泌物，直徑約30 μ m;不規(guī)則碎片 灰白色或灰黃色，稍具光澤，表面有灰棕色色素顆粒，并有不規(guī)則縱長(zhǎng)裂縫。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述薄層 色譜法鑒別處方中的前胡成分的方法為(1)供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加硅藻土3g，研細(xì)，加三氯甲烷 40ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液；(2)對(duì)照藥材溶液的制備取前胡對(duì)照藥材lg，加三氯甲烷15ml，同上述供試品溶液制 備方法制成對(duì)照藥材溶液；(3)薄層條件及結(jié)果薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μ1，對(duì)照藥材溶液4μ 1，分 別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚乙酸乙酯=3 1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置 紫外光燈365nm下檢視，檢視供試品色譜中在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上是否顯示相同 顏色的熒光斑點(diǎn)，進(jìn)而確定供試樣品中是否含有前胡成分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述薄層 色譜法鑒別處方中的枳殼成分的方法為(1)供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾 過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯 液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；(2)對(duì)照藥材溶液的制備取枳殼對(duì)照藥材lg，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)， 濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；(3)對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照 品溶液；(4)薄層條件及結(jié)果薄層色譜試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對(duì)照藥材溶液10μ1、對(duì)照品溶液4μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯丁酮乙醇=12 :5:1 為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，加熱，置紫外光燈254nm下及紫外 光燈365nm檢視，檢視供試品色譜中在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上是否顯相同 顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)，進(jìn)而確定樣品中是否含有枳殼與橘紅成分。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述薄層 色譜法鑒別處方中的葛根成分的方法為(1)供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾 過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯 液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；(2)對(duì)照藥材溶液的制備取葛根對(duì)照藥材lg，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)， 濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；(3)對(duì)照品溶液的的制備取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每ml含Img的溶液，作為對(duì)照 品溶液；(4)薄層條件及結(jié)果薄層色譜試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各 ομ1，對(duì) 照品溶液4μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇水=7 2.5 0.25 為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，檢視供試品色譜中在與對(duì)照藥材及 對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上是否顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述薄層 色譜法鑒別處方中的防風(fēng)成分的步驟為(1)供試品溶液的制備取小兒金丹樣品10g，剪碎，加硅藻土3g，研細(xì)，加丙酮40ml，超 聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為供試品溶液；(2)對(duì)照藥材溶液的制備取防風(fēng)對(duì)照藥材lg，加丙酮10ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)， 濾液蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；(3)對(duì)照品溶液的制備取5-0-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的 溶液，作為對(duì)照品溶液；(4)薄層條件及結(jié)果薄層色譜試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠 GF254薄層板上，以三氯甲烷甲醇=4 1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈254nm 下檢視，檢視供試品色譜中在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上是否顯相同顏色的斑 點(diǎn)，進(jìn)而確定供試樣品中是否含有防風(fēng)成分。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述以柚 皮苷為對(duì)照品，液相色譜法檢測(cè)處方中柚皮苷的含量的方法為(1)色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇水磷酸= 35 65 0. 05 ；柱溫35°C;流速lml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)283nm，理論板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算不 低于3000 ；(2)對(duì)照品溶液的制備取柚皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含柚皮苷 對(duì)照品0. Img的溶液，搖勻，即得，精密吸取10 μ 1，注入液相色譜儀檢測(cè)；(3)供試品溶液的制備取小兒金丹樣品適量，剪碎，取2.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶 中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的 重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得，精密吸取10 μ 1，注入液相色譜儀檢測(cè)；(4)含量限度的制定小兒金丹樣品中，枳殼占處方總量的4. 17%，已經(jīng)炮制，本品為生粉入藥，另處方中橘 紅亦含有少量柚皮苷，綜合考慮，枳殼中柚皮苷轉(zhuǎn)移率按100%計(jì)算，每Ig含柚皮苷不得少 于0. 72mg，若按照每丸計(jì)算，含柚皮苷不得少于1. Img0
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述采用 電位滴定法，測(cè)定小兒金丹處方朱砂中硫化汞的含量的方法為(1)朱砂中硫化汞含量測(cè)定取朱砂粉末約0. Ig,共6份，精密稱定，置IOOml錐形瓶中，加硫酸IOml與硝酸鉀1. 5g， 加熱使溶解，放冷，加水50ml，加1 %高錳酸鉀溶液至顯粉紅色，再滴加2 %硫酸亞鐵溶液至 紅色消失后，用硫氰酸銨滴定液0. 1047mol/L滴定，每Iml硫氰酸銨滴定液0. lmol/L相當(dāng) 于11. 63mg的硫化汞HgS，含量的平均值為97. 48%, RSD為0. 92% ；(2)供試品處理方法的確定取小兒金丹樣品適量，剪碎，取2g，精密稱定，置IOOml錐 形瓶中，加硫酸20ml，硝酸鉀2g，加熱使成乳白色，放冷，加水40ml，滴加1 %高錳酸鉀溶液 至顯粉紅色以2分鐘內(nèi)不消失為度，再滴加2%硫酸亞鐵溶液至紅色消失，用硫氰酸銨滴定 液0. lmol/L滴定，每Iml硫氰酸銨滴定液0. lmol/L相當(dāng)于11. 63mg的硫化汞(HgS)；(3)含量限度的確定處方中，朱砂占處方總量的4. 83%，依據(jù)藥典對(duì)朱砂含硫化汞不得少于96.0%的規(guī) 定，小兒金丹樣品含硫化汞理論量應(yīng)為46. 38mg/g，鑒于本品為大蜜丸，按照士 15%上下浮 動(dòng)，小兒金丹樣品每1丸含朱砂以硫化汞HgS計(jì)，應(yīng)為60 80mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥制劑小兒金丹的質(zhì)量控制方法，步驟是首先進(jìn)行顯微鑒別；其次采用薄層色譜法，鑒別小兒金丹處方中是否含有前胡、枳殼與橘紅、葛根、防風(fēng)成分以柚皮苷為對(duì)照品，液相色譜法檢測(cè)小兒金丹處方中柚皮苷的含量；采用電位滴定法，測(cè)定小兒金丹處方朱砂中硫化汞的含量。本發(fā)明的檢測(cè)方法在原標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，增加了處方中朱砂、玄參、半夏、桔梗、羌活、鉤藤、葛根、甘草、防風(fēng)及水牛角濃縮粉的顯微鑒別方法；增加了處方中前胡、枳殼、葛根及防風(fēng)的薄層鑒別方法；以柚皮苷為定量指標(biāo)，制定了橘紅和枳殼的含量測(cè)定方法，修訂后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高了小兒金丹質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性，進(jìn)一步確保產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量和療效，對(duì)促進(jìn)產(chǎn)品銷售、增加產(chǎn)品的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力、保證患者用藥安全意義重大。
文檔編號(hào)A61K31/045GK102048941SQ200910071120
公開(kāi)日2011年5月11日 申請(qǐng)日期2009年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月3日
發(fā)明者劉東霞, 劉志青, 劉淑, 商丹丹, 李燕鈺, 黃麗華 申請(qǐng)人:天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠