專利名稱：朝鮮槐提取物及其提取方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及朝鮮槐提取物及其提取方法和用途, 具體涉及朝鮮槐提取物及其提取方法和在制備雌激素類藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
_一
Rupr. et Maxim.)又名山槐、高麗槐、懷
槐，為豆科馬鞍樹屬植物。朝鮮槐全株含多種黃酮類成分化合物芒柄花 黃素(formoononetin )、染料木素(genistein )、 阿夫羅摩辛(afromosin )、 大豆黃素(afromosin)、鴦尾種苷元、葛花亭等及其苷類，是少數(shù)幾種含 4種異黃酮(植物雌激素)的植物之一。
異黃酮具有弱雌激素活性，可與雌激素受體結(jié)合，依個(gè)體激素狀態(tài)， 可發(fā)揮雌激素樣或抗雌激素活性，表現(xiàn)出對(duì)人體雌激素水平的雙向調(diào)節(jié) 作用?，F(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)的雌激素受體主要有兩種a-雌激素受體和(3-雌激素 受體。其中oc-雌激素受體主要分布于乳腺、子宮和卵巢中，p-雌激素受 體則常見于前列腺、骨和血管組織。植物雌激素盡管比內(nèi)源性或合成性 激素作用小，但可與p-雌激素受體結(jié)合，而產(chǎn)生有益作用，同時(shí)對(duì)乳腺 和卵巢無(wú)不良影響。
異黃酮類植物雌激素主要包括染料木素異黃酮和大豆黃素，大豆黃 素在大腸內(nèi)由細(xì)菌代謝形成有雌激素作用的雌馬酚(equol)或無(wú)雌激素 作用的去甲安哥拉紫檀素，染料木素則代謝為無(wú)雌激素活性的對(duì)乙基酚。 植物中的異黃酮大多數(shù)與糖結(jié)合形成異黃酮苷，苷元只占很小一部分， 但是主要起生理活性的是異黃酮苷元。生理?xiàng)l件下，異黃酮苷在腸道菌 群的作用下，脫掉糖苷而成為具有生物活性的非結(jié)合形式的異黃酮苷元， 經(jīng)過(guò)不同的活化代謝途徑，產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物，來(lái)發(fā)揮雌激素或抗雌 激素樣作用。
現(xiàn)代研究證實(shí)，朝鮮槐中提取得到的異黃酮類化合物具有弱雌激素 樣作用，對(duì)于預(yù)防乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、改善骨質(zhì)疏松和改善婦 女更年期癥狀等均有一定的作用。但是朝鮮槐中異黃酮苷元含量較低， 不到1%(重量)，主要以異黃酮苷的形式存在，因此把朝鮮槐異黃酮苷 轉(zhuǎn)化成苷元形式，是提高其生物利用度的前提。
目前還未見有巿售的朝鮮槐提取物，因此開發(fā)一種簡(jiǎn)單可行的方法 獲得朝鮮槐提取物，用于制備雌激素性藥物可以填補(bǔ)本領(lǐng)域關(guān)于朝鮮槐 提取及應(yīng)用方面的空白。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種朝鮮槐提取物及其提取方法和用途。 本發(fā)明所述的朝鮮槐總異黃酮提取物，含有對(duì)藥理活性起作用的主
要化合物，具體是芒柄花黃素、染料木素、阿夫羅摩辛、大豆黃素等，
它可以通過(guò)如下方法制得，該方法包括下列步驟
(1) 用甲醇或乙醇提取朝鮮槐的心材、根皮、莖皮、技皮、葉、
3葉梗、花、果實(shí)和/或種子；
(2) 過(guò)濾該提取液并濃縮干燥成浸膏或干粉；
(3) 用無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸或酶催化水解浸膏或干粉；
(4) 用脂肪族的酯類或二氯甲烷或三氯甲烷萃取酸水解物或酶 水解物；
(5) 有機(jī)相濃縮至干，獲得朝鮮槐提取物。
優(yōu)選實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的方法是用甲醇或乙醇進(jìn)行第一次提取(步驟(1)), 所用甲醇或乙醇濃度在5%到95%范圍內(nèi)，優(yōu)選濃度為50%~70%,藥材 與溶劑的質(zhì)量體積比在l: 2到1: 25的范圍內(nèi)，優(yōu)選為1: 10到1: 20 的范圍內(nèi)，溫度在室溫到溶劑的回流范圍內(nèi)，優(yōu)選在50 100。C,提取方 式為超聲振蕩提取、回流提取、浸漬提取，優(yōu)選回流提取。
用于步驟(l)的藥材為朝鮮槐的心材、根皮、莖皮、枝皮、葉、葉 梗、花、果實(shí)和/或種子，優(yōu)選為莖皮。
用于步驟(3)的無(wú)機(jī)酸為鹽酸、硫酸，優(yōu)選為鹽酸。 用于步驟(3)的有機(jī)酸為甲酸、乙酸，優(yōu)選為乙酸。 用于步驟(3)的酶為a-葡萄糖苷酶、(3-葡萄糖苷酶，優(yōu)選P-葡萄糖 苷酶。
用于步驟(4)的脂肪族的酯類為乙酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸丁酯， 優(yōu)選乙酸乙酯。
所述酯類或二氯甲烷或三氯甲烷溶劑用體積比1: l到l: IO范圍， 優(yōu)選為l: 5。最好用新的等份溶劑重復(fù)進(jìn)行提取， 一般至少3次。
影響本提取工藝的因素有原料的質(zhì)量及加工過(guò)程中的實(shí)際操作情 況，原料的質(zhì)量差異取決于收集該植物材料的時(shí)間及處理干燥的方式。
按上述方法所得的朝鮮槐提取物中含總異黃酮苷元的含量在 15~85%(重量)，與總提取物相比，該提取物在藥理活性初步實(shí)驗(yàn)中顯 示出高活性，并且不需要進(jìn)一步的特殊處理，且隨時(shí)間的推移活性保持 穩(wěn)定。
圖1.實(shí)施例4中朝鮮槐總異黃酮對(duì)3周齡雌性幼鼠子宮和卵巢的作 用。(平均值+SD， n=10， * <0.05 vs.雌激素)
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1:
取朝鮮槐干燥莖皮lKg,粉碎，過(guò)20目篩。加60%乙醇15L于90。C 回流提取3次，每次1.5小時(shí)。提取液濾過(guò)，濾液減壓濃縮成粘稠浸膏狀 (130g)。用300ml4M鹽酸混懸浸膏，于90。C水解4小時(shí)。向水解產(chǎn)物 中加入300ml乙酸乙酯進(jìn)行萃取，分取乙酸乙酯層，重復(fù)上述操作3次， 合并乙酸乙酯層。將乙酸乙酯層減壓濃縮至干，得到朝鮮槐總異黃酮提 取物，其中總異黃酮苷元的含量為31.2%。
實(shí)施例2:
4取朝鮮槐干燥莖皮lKg,粉碎，過(guò)20目篩。加80。/。乙醇20L室溫浸 泡提取3次，每次3天。提取液濾過(guò)，濾液減壓濃縮成粘稠浸膏狀(100g )。 用300ml 4M乙酸混懸浸膏，于80°C水解6小時(shí)。向水解產(chǎn)物中加入300ml 二氯甲烷進(jìn)行萃取，分取二氯甲烷層，重復(fù)上述操作3次，合并二氯甲 烷層。將二氯甲烷層減壓濃縮至干，得到朝鮮槐總異黃酮提取物，其中 總異黃酮苷元的含量為26.4%。
實(shí)施例3:
取朝鮮槐干燥莖皮lKg,粉碎，過(guò)20目篩。加60%乙醇15L于90。C 回流提取3次，每次1.5小時(shí)。提取液濾過(guò)，濾液減壓濃縮成粘稠浸膏狀 (130g)。用400ml pH6的磷酸鉀緩沖液混懸浸膏，加入800U/g的卩-葡 萄糖苷酶，于36。C攪拌、水解3小時(shí)。向水解產(chǎn)物中加入400ml乙酸乙 酯進(jìn)行萃取，分取乙酸乙酯層，重復(fù)上述操作3次，合并乙酸乙酯層。 將乙酸乙酯層減壓濃縮至干，得到朝鮮槐總異黃酮提取物，其中總異黃 酮苷元的含量為35.7%。
實(shí)施例4:
本發(fā)明通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證了朝鮮槐總異黃酮作為雌激素類藥物 的藥理活性。
具體實(shí)施方式
如下
取出生21天左右的雌性幼鼠，分為空白對(duì)照組，陽(yáng)性藥物(雌激素) 對(duì)照組，朝鮮槐總異黃酮75mg/kg劑量組、30mg/kg劑量組、10mg/kg齊'j 量組和5mg/kg劑量組，飼養(yǎng)5曰后，早晚給藥(陽(yáng)性藥物劑量)，連續(xù) 四天。末次給藥后，于第二天早上脫頸處死，取其子宮、卵巢稱重并按 下列公式計(jì)算卵巢系數(shù)和子宮系數(shù)。卵巢系數(shù)=卵巢濕重/體重x 100%, 子宮系數(shù)=子宮濕重/體重x 100%。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1
i續(xù)^予朝鮮槐e總異黃酮四天后，與陽(yáng)性對(duì)照組相比，高劑量朝鮮 槐總異黃酮能夠顯著促進(jìn)雌性幼鼠子宮的生長(zhǎng)，但對(duì)卵巢生長(zhǎng)的促進(jìn)作 用與陽(yáng)性藥物基本一致，同時(shí)中、低劑量朝鮮槐總異黃酮均顯示一定的 促子宮發(fā)育的趨勢(shì)。這些發(fā)現(xiàn)表明，朝鮮槐總異黃酮具有較強(qiáng)的雌激素 樣作用，且其活性要優(yōu)于雌激素，同時(shí)對(duì)不同器官具有一定的選擇性。
本發(fā)明還提供7 —種應(yīng)用朝鮮槐提取物作為植物雌激素類藥物，用 來(lái)預(yù)防乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌和防治骨質(zhì)疏松、更年期綜合癥。
下面以實(shí)施例說(shuō)明該發(fā)明的應(yīng)用，但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例5:
朝鮮槐提取物 10.6g 淀粉 10.6g 微粉硅膠 318mg 羧甲基淀粉鈉 318mg
將以上成分混勻，制粒，灌裝膠囊，制得的膠囊劑主要用于補(bǔ)充雌 激素、防治更年期綜合癥、骨質(zhì)疏松癥和乳腺癌
上述配比中朝鮮槐提取物按照發(fā)明內(nèi)容的制備方法制備，其中含朝
5鮮槐總黃酮20% 65%,微粉硅膠、淀粉和羧甲基淀粉鈉為本領(lǐng)域?qū)I(yè)人 員所熟知的制藥輔料，主要用作填充劑、膨脹劑和崩解劑。
權(quán)利要求
1、朝鮮槐提取物的制備方法，其特征在于它包括(1)用甲醇或乙醇或它們的水溶液提取朝鮮槐的心材、根皮、莖皮、枝皮、葉、葉梗、花、果實(shí)和/或種子；(2)過(guò)濾該提取物并濃縮干燥成浸膏或干粉；(3)用無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸或酶催化水解浸膏或干粉；(4)用脂肪族的酯類或二氯甲烷或三氯甲烷萃取酸水解物或酶水解物；(5)有機(jī)相濃縮至干，獲得朝鮮槐提取物。
2、 如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于所述甲醇或乙醇的濃度 為5%~ 95%。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于所述的甲醇或乙醇的 濃度優(yōu)選為50% ~ 70%。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于步驟(3)中所用的無(wú) 機(jī)酸選自鹽酸、硫酸；有機(jī)酸選自乙酸、甲酸；酶選自a-葡萄糖苷酶或(3-葡萄糖苷酶；步驟(4)中所用的脂肪族的酯類選自乙酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸丁酯。
5、根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于藥材與甲醇或乙醇或 它們的水溶液的質(zhì)量體積比為1: 2~ 1: 25;溫度在室溫到溶劑的回流 溫度范圍內(nèi)；提取方式為超聲振蕩提取、回流提取、浸漬提取。
6、 根據(jù)權(quán)利要求l或5所述的方法，其特征在于藥材與甲醇或乙 醇或它們的水溶液的質(zhì)量體積比優(yōu)選l: 10 ~ 1: 20。.
7、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于溫度優(yōu)選50 100。C。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于提取方式優(yōu)選回流提取。
9、根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于按此方法所制備的朝 鮮槐提取物的總異黃酮苷元的含量為15 85% (重量)。
10、權(quán)利要求1所述方法制備的朝鮮槐提取物在制備雌激素類藥物中 的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及朝鮮槐的提取物及其應(yīng)用，它可以通過(guò)這樣的方法制得，該方法包括下列步驟用甲醇或乙醇提取朝鮮槐的心材、根皮、莖皮、枝皮、葉、葉梗、花、果實(shí)和/或種子；過(guò)濾該提取物并濃縮干燥成浸膏或干粉；用無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸或酶催化水解浸膏或干粉；用脂肪族的酯類或二氯甲烷或三氯甲烷萃取酸水解物或酶水解物；有機(jī)相濃縮至干，獲得朝鮮槐提取物。按此方法制備的朝鮮槐提取物其總異黃酮苷元的含量在15～85％。本發(fā)明還提供了一種應(yīng)用朝鮮槐提取物作為雌激素類藥物，用來(lái)預(yù)防乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌和防治骨質(zhì)疏松、更年期綜合癥。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101474239SQ20091001021
公開日2009年7月8日 申請(qǐng)日期2009年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月21日
發(fā)明者代英輝, 征 崔, 張會(huì)梅, 東 王, 雄 黎 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)藥科大學(xué)