專利名稱：：確定用強(qiáng)心苷進(jìn)行的癌癥化療中的治療應(yīng)答概率的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及確定用強(qiáng)心苷進(jìn)行的癌癥化療的預(yù)后的方法。特別地，本發(fā)明涉及確定具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的體外或體內(nèi)細(xì)胞疾病或失調(diào)是否治療應(yīng)答于強(qiáng)心苷治療的概率的方法。
背景技術(shù)：
：許多具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)是致命性的。最常見(jiàn)的是癌癥和腫瘤。然而，非癌增生性疾病也可以是威脅生命的，或者導(dǎo)致生活質(zhì)量下降。這些可以包括例如1)自身免疫疾病如抗原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎和變應(yīng)性腦脊髓炎，2)慢性炎性增生性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)作幼年性慢性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松和銀屑病，3)乳腺增生性疾病包括囊性纖維病，4)前列腺增生性疾病包括良性前列腺增生(BPH)，5)眼增生性疾病包括增生性糖尿病視網(wǎng)膜病，和6)血管增生疾病包括動(dòng)脈粥樣硬化和冠狀動(dòng)脈狹窄。已進(jìn)行許多努力以開(kāi)發(fā)這些疾病和失調(diào)的治愈性或緩解性療法；但是，沒(méi)有開(kāi)發(fā)出全面或通用治愈性療法，即使許多化療途徑已證明對(duì)各種不同癌癥、腫瘤和其它類型增生性疾病有效。化療劑由臨床醫(yī)生單獨(dú)或聯(lián)合開(kāi)出處方以試圖開(kāi)發(fā)針對(duì)個(gè)體患者需要的方案。即使如此，開(kāi)發(fā)這些個(gè)體化方案的一個(gè)關(guān)鍵障礙是化療劑對(duì)特異癌癥或腫瘤表型的功效的不可預(yù)測(cè)性。臨床醫(yī)生被迫使用擊中或錯(cuò)過(guò)(hitormiss)途徑對(duì)付這些致死疾病。他們必須依賴特定化療劑的公認(rèn)的或指示的應(yīng)用的歷史回顧，然后預(yù)測(cè)或猜想一特定單一化療劑或化療劑組合是否對(duì)臨床醫(yī)生試圖治愈的癌癥或腫瘤是治療有效的。這種常規(guī)在臨床中成功有限。臨床醫(yī)生需要預(yù)后測(cè)定，以便可以以合理水平的確定性預(yù)測(cè)一特定癌癥或腫瘤表型是否對(duì)特定單一化療劑或治療劑組合有治療應(yīng)答。這種類型的預(yù)后測(cè)定對(duì)于具有有限應(yīng)用歷史的化療劑如剛剛進(jìn)入臨床環(huán)境的那些化療劑非常有用。針對(duì)一或多種這樣的化療劑的預(yù)后測(cè)定對(duì)于臨床醫(yī)生是非常有益的。臨床前研究及患者數(shù)據(jù)的回顧性檢查已提示強(qiáng)心苷(例如蟾毒靈、地高辛、毛地黃毒苷、烏本苷和夾竹桃苷)在治療各種癌癥包括乳腺癌、肺癌、前列腺癌和白血病中的潛在價(jià)值。強(qiáng)心苷的一個(gè)藥理學(xué)作用機(jī)制涉及它們結(jié)合離子交換泵Na，K-ATP酶及抑制該特定酶活性的能力。Na，K-ATP酶是催化Na+和K+穿過(guò)質(zhì)膜的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的跨膜蛋白，是熟知的強(qiáng)心苷的藥理學(xué)受體。這個(gè)酶水解ATP并利用自由能驅(qū)動(dòng)K+轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)細(xì)胞及Na+轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞，對(duì)抗它們的電化學(xué)梯度(Hauptman,P.J.，Garg,R.，andKelly,R.A.Cardiacglycosidesinthenextmillieum.Prog.Cardiovasc.Dis.41:247_254，1999)。Na,K-ATP酶由兩個(gè)異二聚體亞基催化α-亞基和糖基化β-亞基組成。還有Y亞基，但是其還未研究清楚。α_亞基具有ΑΤΡ、Na+、K+和強(qiáng)心苷的結(jié)合位點(diǎn)。β-亞基功能是穩(wěn)定催化α-亞基并且可能也起調(diào)節(jié)作用。4個(gè)不同α同種型(α，α2,α3,α4)和3個(gè)不同β同種型(β，β2，和β3)已在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中被鑒別。每種類型的相對(duì)表達(dá)在正常和疾病狀態(tài)中顯著改變。α同種型的表達(dá)是組織類型特異性的并且8在嚙齒類和人類組織中變化(Blanco，G.andMercer,R.W.IsozymesoftheNa,K-ATP酶heterogeneityinstructure,diversityinfunction.Am.J.Physiol.275(RenalPhysiol.44):F633-F650，1998)。Na,K-ATP酶同種型在人類癌癥如腎癌、肺癌、肝細(xì)胞癌和結(jié)腸癌中的改變的表達(dá)已經(jīng)被報(bào)道與在相應(yīng)正常組織中的那些相反(Rajasekaran，S.Α.，Ball，W.J.，Bander，N.H.，Pardee，J.D.andRajasekaran，A.K.ReducedexpressionofbetasubunitofNa/K-APTaseinhumanclearcellrenalcellcarcinoma.J.Urol.162:574_580，1999；Avila，J.，Lecuona，E.，Morales，M.，Soriano，A.，Alonso，T.，andMartin-Vasallo，P.OppositeexpressionpatternofthehumanNa/K-ATP醜beta-lisoforminstomachandcolonadenocarcinomas.Ann.N.Y.Acad.Sci.834633-635，1997；Espineda，C.，Seligson，D.B.，Ball，W.J.，Rao,J.，Palotie，A.，Horvath,S.，Huang，Y.，Shi.TandRajasekaran，A.K.AnalysisoftheNa，K_ATP酶α-andβ-亞基expressionprofilesofbladdercancerusingtissuemicroarrays.Cancer971851868,2003；Jung，M.H.，Kim,S.C.，Jeon，G.A.，Kim,S.H.，Kim,Y.，Choi，K.S.，Park,S.I.，Joe，M.K.，andKimm，K.Identificationofdifferentiallyexpressedgenesinnormalandtumorhumangastrictissue.Genomics69:281_286，2000)。另夕卜，強(qiáng)心苷對(duì)不同α同種型的表觀親和性相當(dāng)不同。強(qiáng)心苷與α同種型的結(jié)合比與02和03同種型的小，α2和α3同種型對(duì)這種類型藥物的抑制更敏感250倍或更高(Blanco，G.andMercer,R.W.IsozymesoftheNa,K-ATP酶heterogeneityinstructure,diversityinfunction.Am.J.Physiol.275(RenalPhysiol.44):F633_F650，1998)。Sakaietal.(FEBSLetters563151-154,2004)報(bào)道α3亞基同種型的表達(dá)在人類結(jié)腸直腸癌細(xì)胞中相比于正常結(jié)腸直腸細(xì)胞增加。夾竹桃苷和夾竹桃苷元通過(guò)誘導(dǎo)凋亡抑制人類前列腺癌細(xì)胞增殖，這至少部分由于通過(guò)抑制Na，K-ATP酶而增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+所致(McConkey,D.J.，Lin,Y.·，Nutt,L.K.,Ozel,H.Ζ.,andNewman,R.A.CardiacglycosidesstimulateCa2+increasesandapoptosisinandrogen—independent,metastatichumanprostateadenocarcinomacells.CancerRes.60=3807-3812,2000)夾竹桃苷和夾竹桃苷元還通過(guò)膜相互作用和抑制Na，K-ATP酶活性而抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2的輸出(Smith,J.Α.，Madden,Τ.,Vijjeswarapu,Μ.,andNewman,R.Α.Inhibitionofexportoffibroblastgrowthfactor-2(EGF-I)fromtheprostatecancercelllinesPC3andDU145byAnvirzelanditscardiacglycosidecomponent,oleandrin.Biochem.Pharmacol.62469-472,2001)。盡管因?yàn)棣羒βi復(fù)合物被認(rèn)為是“管家基因”，Na，K-ATPAase亞基α1存在于許多組織中，但是α3主要在可激發(fā)組織、腎皮質(zhì)、髓質(zhì)和乳頭以及神經(jīng)組織中中檢測(cè)到。Neriumoleander是廣泛分布于亞熱帶亞洲、美國(guó)西南部和地中海的裝飾植物。其藥學(xué)和毒理學(xué)性質(zhì)已長(zhǎng)久認(rèn)可。其例如已用于治療痔、潰瘍、麻風(fēng)病、蛇咬及甚至誘導(dǎo)流產(chǎn)。夾竹桃苷是夾竹桃提取物的重要組分，是人類腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的強(qiáng)抑制劑(AfaqFetal.Toxicol.Appl.Pharmacol.195:361_369，2004)。夾竹桃苷介導(dǎo)的細(xì)胞死亡與鈣內(nèi)向通量、細(xì)胞色素C從線粒體釋放、caspases8和3的蛋白酶解過(guò)程、聚(ADP-核糖)聚合酶裂解及DNA片段化相關(guān)。已證實(shí)夾竹桃苷是Neriumoleander的主要細(xì)胞毒性成分(Newman,etal.，J.HerbalPharmacotherapy,vol.13，pp.1-15，2001)。夾竹桃苷是外源強(qiáng)心苷，不正常存在于身體內(nèi)。夾竹桃苷在人類中誘導(dǎo)凋亡，但是在鼠腫瘤細(xì)胞系中不誘導(dǎo)凋亡(Pathaketal.，Anti-CancerDrugs,vol.11，pp.455-463，2000)，抑制NF-κB的活化(Mannaetal.，CancerRes.，vol.60,pp.3838-3847，2000)，及部分通過(guò)鈣介導(dǎo)的細(xì)胞色素C釋放而介導(dǎo)細(xì)胞死亡(McConkeyetal.,CancerRes.，vol.60，pp.3807-3812，2000)。夾竹桃熱水提取物(即Anvirzel)的I期臨床試驗(yàn)最近已完成(Mekhailetal.，Am.Soc.Clin.Oncol.，vol.20，p.82b,2001)。已經(jīng)得出結(jié)論夾竹桃提取物可以以高達(dá)1.2ml/m2/d.的劑量安全給予。未發(fā)現(xiàn)劑量限制毒性。烏本苷是身體內(nèi)源強(qiáng)心苷，據(jù)報(bào)道增強(qiáng)A549人類肺腺癌細(xì)胞的體外放射敏感性，但是在修飾正常人肺成纖維細(xì)胞的放射應(yīng)答中無(wú)效(Lawrence，Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.，vol.15，pp.953-958，1988)。烏本苷隨后示出放射敏化不同組織學(xué)類型的人類腫瘤細(xì)胞包括鱗狀細(xì)胞癌和黑素瘤(Verheye-Duaetal.，Strahlenther.Onkol.，vol.176，pp.186-191,2000)。強(qiáng)心苷夾竹桃苷也具有增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)離子輻射的細(xì)胞毒性作用的敏感性的能力(U.S.PatentApplicationSerialNo.10/957，875toNewman,etal.andNasuetal.,CancerLett.Vol185,pp.145-151,2002)。Newmanetal.的U.S.PregrantPatentApplicationPublicationNo.20050112059揭示了通過(guò)給予夾竹桃苷增強(qiáng)癌癥治療中的放療。Chenetal.(BreastCancerResearchandTreatment(2006)，96，1-15)提不強(qiáng)心苷如烏本苷和毛地黃可用于開(kāi)發(fā)抗乳腺癌藥物，作為Na+，K+-ATP酶抑制劑及ER拮抗劑。Smithetal.(BiochemicalPharmacology(2000)，62，1-4)報(bào)道了ANVIRZEL及其關(guān)鍵強(qiáng)心苷成分夾竹桃苷抑制腫瘤生長(zhǎng)因子成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子_2(FGF-2)從前列腺癌細(xì)胞系PC3和DU145的輸出。Newmanetal.(J.ExperimentalTherapeuticsandOncology(2006),5,167-181)報(bào)道了人惡性黑素瘤BRO細(xì)胞與夾竹桃苷保溫導(dǎo)致活性氧超氧化物陰離子的時(shí)間依賴性形成，其介導(dǎo)線粒體損傷、細(xì)胞谷胱甘肽(GSH)庫(kù)喪失及最終腫瘤細(xì)胞死亡。從Nerium物種植物提取糖苷已提供來(lái)自Neriumoleander的藥理學(xué)/治療學(xué)活性成分。它們是夾竹桃苷、nerine及其它強(qiáng)心苷化合物。植物提取物用于治療動(dòng)物中的細(xì)胞增生性疾病。以商標(biāo)ANVIRZEL出售的通過(guò)熱水提取Neriumoleander,獲得的夾竹桃苷提取物是市售的，含有濃縮形式或粉末形式的Neriumoleander熱水提取物。Huachansu是得自蟾蜍皮膚的提取物，其包含蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯，如強(qiáng)心苷蟾毒靈。HuaChanSu在中國(guó)是治療癌癥的批準(zhǔn)藥物。其已用于治療各種癌癥，包括肝癌、胃癌、肺癌、皮膚癌和食道癌?？紤]到強(qiáng)心苷在治療具有與細(xì)胞增殖相關(guān)病因?qū)W的疾病或失調(diào)中的重要用途，需要預(yù)測(cè)疾病或失調(diào)對(duì)強(qiáng)心苷的治療應(yīng)答的方法現(xiàn)有技術(shù)沒(méi)有披露或提示這種方法。發(fā)明_既述本發(fā)明提供了預(yù)測(cè)強(qiáng)心苷或者含有強(qiáng)心苷的組合物對(duì)抗具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的特定表型的功效的方法。本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)這種疾病或失調(diào)對(duì)用強(qiáng)心苷進(jìn)行的治療的敏感性或者治療應(yīng)答依賴于具有該疾病或增生性失調(diào)的細(xì)胞或組織中Na，K-ATP酶亞基的α3同種型與α1同種型表達(dá)的比率。通常細(xì)胞或組織中Na，K-ATP酶的α3同種型與α1同種型表達(dá)的比率越高，那些細(xì)胞對(duì)強(qiáng)心苷更敏感(治療應(yīng)答型)。即，α3同種型(藥物敏感性)與α(藥物不敏感性)同種型的比率越高，該細(xì)胞或者組織對(duì)被強(qiáng)心苷抑制增殖更敏感。本發(fā)明一個(gè)方面提供用于預(yù)測(cè)具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)對(duì)用強(qiáng)心苷或包含強(qiáng)心苷的組合物治療的體內(nèi)治療應(yīng)答的體外預(yù)后測(cè)定，該測(cè)定包括確定樣品中Na，K-ATP酶α-亞基的α3同種型與α1同種型的比率，所述樣品直接或間接得自患有具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或者失調(diào)的對(duì)象的患病體內(nèi)細(xì)胞組織，所述樣品包含Na，K-ATP酶的α亞基的一或多種同種型；以及確定如果對(duì)象用治療相關(guān)劑量的強(qiáng)心苷治療時(shí)對(duì)象中治療應(yīng)答的概率。在一些實(shí)施方案中1)所述測(cè)定進(jìn)一步包括如果所述比率大于或等于至少1則預(yù)測(cè)所述細(xì)胞組織將對(duì)用強(qiáng)心苷治療是治療應(yīng)答性的；2)所述測(cè)定進(jìn)一步如果所述比率在0.5-1.0范圍內(nèi)則預(yù)測(cè)所述細(xì)胞組織將對(duì)用強(qiáng)心苷治療至少是部分治療應(yīng)答性的；3)所述測(cè)定進(jìn)一步包括如果所述比率小于0.3則預(yù)測(cè)所述細(xì)胞組織將對(duì)用強(qiáng)心苷治療基本是無(wú)治療應(yīng)答性的；4)所述測(cè)定還進(jìn)一步包括預(yù)測(cè)具有在1-100范圍內(nèi)的亞基比率的那些組織將比那些具有小于1的同種型比率的組織更具有治療應(yīng)答性的；5)所述測(cè)定進(jìn)一步包括僅具有可檢測(cè)的α3同種型而無(wú)可檢測(cè)的α1同種型的那些組織將是對(duì)強(qiáng)心苷最具有治療應(yīng)答性的；和/或6)所述測(cè)定進(jìn)一步包括預(yù)測(cè)如果所述比率彡2、彡3、彡4、彡5、彡7、彡9、彡10、彡15、彡20、彡25、彡40、彡50、彡75或彡100則所述細(xì)胞組織對(duì)用強(qiáng)心苷治療是治療應(yīng)答性的。在一些實(shí)施方案中，有治療應(yīng)答的概率與根據(jù)下表的Na，K-ATP酶的α3同種型與α同種型的比率相關(guān)在上表中，治療應(yīng)答可以是部分或完全治療應(yīng)答或者進(jìn)展延遲時(shí)間。在一些實(shí)施方案中1)確定步驟包括定量所述體外樣品或生物活檢樣品中每個(gè)Na,K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的表達(dá)水平，并且計(jì)算其比率；2)確定步驟包括確定體外樣品中每個(gè)Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的量相對(duì)于Na,K-ATP酶的α1亞基同種型的量，并且計(jì)算其比率；3)所述測(cè)定進(jìn)一步包括在來(lái)自確定比率的數(shù)據(jù)上進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；4)所述樣品是細(xì)胞組織、細(xì)胞團(tuán)、細(xì)胞裂解物、從這些制備的膜制備物或者其固定的組織病理玻片；5)所述樣品是體外樣品；6)所述樣品包括Na，K-ATP酶的α亞基的至少兩種同種型；7)所述樣品包括Na，K-ATP酶的α亞基的至少α1和α3同種型；8)所述方法進(jìn)一步包括裂解或者破壞細(xì)胞或組織或生物活檢樣品或者固定來(lái)自患病體內(nèi)細(xì)胞組織的用于進(jìn)行組織病理學(xué)檢驗(yàn)的組織切片以形成樣品；9)所述方法進(jìn)一步包括在樣品上進(jìn)行Western印跡測(cè)定或者免疫組織化學(xué)染色測(cè)定以確定樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型相對(duì)于Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的量和相對(duì)表達(dá)，以及計(jì)算其比率；10)所述方法進(jìn)一步包括進(jìn)行凝膠的放射分析或光密度分析以確定樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的含量相對(duì)于Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的含量；11)所述方法進(jìn)一步包括進(jìn)行凝膠的放射分析或光密度分析以檢測(cè)樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的存在及定量其含量；12)將樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的含量相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照樣品和/或陰性對(duì)照樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和/或Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的含量進(jìn)行比較；和/或13)比較組織樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α亞基同種型的含量，其中已知發(fā)生僅α3和α亞基同種型之一的表達(dá)，作為對(duì)照。在一些實(shí)施方案中1)疾病細(xì)胞組織得自對(duì)象如哺乳動(dòng)物；2)疾病細(xì)胞組織得自人、牛、狗、貓、馬、豬或其它有或無(wú)商業(yè)價(jià)值的家養(yǎng)底物；3)具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)是癌癥或者腫瘤或者其它負(fù)面影響人類或動(dòng)物生活質(zhì)量的增生性疾??；和/或4)癌癥或者腫瘤選自如下一組結(jié)腸直腸癌、頭頸部癌、腎上腺皮質(zhì)癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、骨轉(zhuǎn)移、骨肉瘤、腦癌、乳腺癌、宮頸癌、非霍奇金淋巴瘤、直腸癌、食管癌、眼癌、膽囊癌、胃腸道類癌腫瘤、妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病、霍奇金病、卡波西肉瘤、腎癌、喉和下咽癌、肝癌、肺癌(非小細(xì)胞癌及小細(xì)胞癌)、肺類癌腫瘤、惡性間皮瘤、轉(zhuǎn)移癌、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓發(fā)育異常綜合征、鼻腔及副鼻竇癌、鼻咽癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、口腔及口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、陰莖癌、垂體癌、前列腺癌、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺癌、甲狀腺癌、輸尿管癌癥；子宮肉瘤、陰道癌、外陰癌或者Wilm，stumor。在一些實(shí)施方案中1)所述方法進(jìn)一步包括鑒別患有具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的對(duì)象；2)所述方法進(jìn)一步包括從所述對(duì)象獲得疾病細(xì)胞樣品的步驟；3)所述方法包括提供信息，限定如何進(jìn)行Na，K-ATP酶的α亞基的α3和α1同種型的分析；和/或4)所述方法包括提供信息，詳述如何解釋預(yù)后數(shù)據(jù)。在一些實(shí)施方案中，增生性疾病包括但非限于1)自身免疫疾病如抗原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎和變應(yīng)性腦脊髓炎；2)慢性炎性增生性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)作幼年性慢性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松和銀屑??；3)乳腺增生性疾病包括囊性纖維??；4)前列腺增生性疾病包括良性前列腺增生(BPH)；5)眼增生性疾病包括增生性糖尿病視網(wǎng)膜??；和6)血管增生性疾病包括動(dòng)脈粥樣硬化和冠狀動(dòng)脈狹窄。在一些實(shí)施方案中，兩種或多種增生性疾病被同時(shí)治療?；谑褂萌祟惸[瘤細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)室研究據(jù)信特別應(yīng)答強(qiáng)心苷治療的癌癥包括前列腺癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、成骨肉瘤、腦癌(多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)和結(jié)腸癌。癌癥可以是人、非人或動(dòng)物來(lái)源的。在一些實(shí)施方案中1)強(qiáng)心苷選自由夾竹桃苷、烏本苷、蟾毒靈、毛地黃毒苷、地高辛、華蟾毒素(cinobufatalin)、華蟾毒配基和酯蟾毒配基(resibufogenin)組成的組；2)強(qiáng)心苷以純形式存在，其可通過(guò)對(duì)植物或者動(dòng)物來(lái)源進(jìn)行提取而產(chǎn)生，通過(guò)化學(xué)修飾(例如衍生化)可利用的強(qiáng)心苷來(lái)合成或者生產(chǎn)；3)強(qiáng)心苷存在于提取物中；4)強(qiáng)心苷存在于藥物配制品或者組合物中；5)強(qiáng)心苷得自?shī)A竹桃植物物質(zhì)(mass)；6)夾竹桃植物物質(zhì)包括Nerium物種，如Neriumoleander，或者Thevetia物種，如Thevetianerifolia(也己知為黃色夾竹桃)；和/或7)強(qiáng)心苷提取物通過(guò)任選在改性劑存在下超臨界流體(SCF)提取制備。在一些實(shí)施方案中1)SCF提取物除強(qiáng)心苷之外還進(jìn)一步包括至少一種其它藥理學(xué)活性物質(zhì)；2)當(dāng)提取物被給予對(duì)象時(shí)所述其它活性物質(zhì)可以有助于強(qiáng)心苷的治療功效；3)所述其它活性物種起附加或者協(xié)同作用以有助于強(qiáng)心苷的治療功效；和/或4)提取物得自蟾蜍皮膚或者其衍生的分泌物。本發(fā)明另一方面提供適用于進(jìn)行本發(fā)明預(yù)后測(cè)定的試劑盒。所述試劑盒包括a)具有對(duì)Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的結(jié)合親和性的第一種第一抗體；和b)具有對(duì)Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的結(jié)合親和性的第二種第一抗體。所述試劑盒可以適應(yīng)以用于進(jìn)行Western印跡凝膠電泳測(cè)定和/或用于進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色測(cè)定。所述試劑盒任選進(jìn)一步包括a)裂解組合物；b)包含Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的陽(yáng)性對(duì)照樣品；c)包含Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的陽(yáng)性對(duì)照樣品；d)包含Na，K-ATP酶的α1亞基同種型并排除Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的陰性對(duì)照樣品；e)第二抗體，山羊抗小鼠IgG_HRP(其可以用于例如顯示感興趣蛋白質(zhì))；f)適于凝膠電泳分析的凝膠形成材料；g)放射性標(biāo)記的或著色的(染色的能夠產(chǎn)生肉眼或儀器可檢測(cè)信號(hào))分子量標(biāo)記；h)試劑盒使用及進(jìn)行預(yù)后測(cè)定的說(shuō)明；i)光密度計(jì)或放射計(jì)；j)水性液體介質(zhì)；k)凝膠/膜制備試劑盒；1)封閉溶液；m)洗滌緩沖液；η)包含Western印跡分析試劑盒的材料；或者ο)其組合。在試劑盒的一些實(shí)施方案中a)所述第一種第一抗體具有對(duì)Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的特異性結(jié)合親和性；b)所述第二種第一抗體具有對(duì)Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的特異性結(jié)合親和性；c)第二抗體是山羊α小鼠IgG辣根過(guò)氧化物酶或者包含來(lái)自小鼠以外的物種的其它第二抗體，其針對(duì)小鼠IgG產(chǎn)生，具有附著的合適標(biāo)記如辣根過(guò)氧化物酶；和/或d)第一抗體是單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，免疫組織化學(xué)染色試劑盒包括a)抗原解掩蔽溶液(其抗原是高PH或者基于檸檬酸)；b)緩沖液；c)內(nèi)源過(guò)氧化物活性猝滅材料(其可以包含過(guò)氧化氫，任選在甲醇中)；d)抗Na，K-ATP酶α3亞基同種型抗體和/或抗Na，K-ATP酶α1亞基同種型抗體；e)非免疫小鼠IgGl抗體；f)通用抗體試劑，包含抗兔IgG和抗小鼠IgG試劑的混合物；g)初級(jí)化學(xué)染色劑(primarychemicalstain)，如二氨基聯(lián)苯胺；h)通用復(fù)染化學(xué)染色劑，如蘇木精或曙紅；i)特異性細(xì)胞器染色劑，如用于染色細(xì)胞核的染色劑(例如溴乙錠、二苯并咪唑(bisbenzimidazol)或者硫酸鉀鋁)或者用于染色線粒體的染色劑(例如Mitotrackerred，10-壬基吖啶橙)；j)包含免疫組織化學(xué)染色試劑盒的材料；或者k)其兩種或多種的組合。使用組織或細(xì)胞的相鄰切片，染色α1亞基同種型可以以類似于染色α3亞基同種型所用方式進(jìn)行，其中使用針對(duì)α1亞基同種型和α3亞基同種型的合適特異性第一抗體。如本文所用，特異性細(xì)胞器染色劑是用于特異染色細(xì)胞(人、非人或動(dòng)物)中的特定類型細(xì)胞器(線粒體、細(xì)胞核、核仁、高爾基體、空泡等)的試劑或者試劑組I=IO13在一些實(shí)施方案中，免疫組織化學(xué)染色測(cè)定包括步驟a)提供哺乳動(dòng)物組織樣品；b)免疫化學(xué)染色存在于樣品中的Na，K-ATP酶的α-亞基的α3同種型和α1同種型；c)確定樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的含量和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的含量；及d)確定樣品中存在的α3同種型與α1同種型的比率。在一些實(shí)施方案中，免疫組織化學(xué)染色測(cè)定包括步驟a)提供哺乳動(dòng)物組織樣品；b)在組織上進(jìn)行抗原提取程序；C)猝滅組織中的內(nèi)源過(guò)氧化物活性；d)將猝滅的組織暴露于抗Na，K-ATP酶α3亞基同種型和/或抗Na，K-ATP酶α1亞基同種型第一抗體；e)將抗體處理的組織暴露于抗兔IgG、抗小鼠IgG第二抗體或其組合；f)將IgG處理的組織暴露于初級(jí)染色劑；g)將染色的組織暴露于復(fù)染色劑以形成免疫組織化學(xué)染色的組織；h)肉眼或者分光光度手段分析免疫組織化學(xué)染色的組織；和i)定量哺乳動(dòng)物組織中存在的α3和/或α1同種型的量。例如，如果第二抗體是生物素化的，則可以進(jìn)行同種型抗體染色的定量。然后，可以加入VectastatinABC染色劑并保溫30分鐘。洗滌染色切片后，它們?nèi)缓笈c二氨基聯(lián)苯胺底物保溫以顯色合適水平的染色。染色組織的定量然后可以通過(guò)分級(jí)染色劑強(qiáng)度手工進(jìn)行或者用計(jì)算機(jī)化圖像捕獲和數(shù)字掃描感興趣視野而電子進(jìn)行。定量可以進(jìn)一步用商業(yè)可得數(shù)字圖像軟件促進(jìn)。在一些實(shí)施方案中，測(cè)定進(jìn)一步包括步驟j)洗滌從步驟a)獲得的組織；k)洗滌從步驟c)獲得的組織；1)提供陰性對(duì)照切片(不具有腫瘤或癌癥的那些)作為“無(wú)一抗(noprimary)”對(duì)照；m)將陰性對(duì)照切片暴露于非免疫小鼠IgGl抗體；η)洗滌從步驟e)獲得的組織；ο)洗滌從步驟f)獲得的組織；和/或洗滌從步驟g)獲得的組織。洗滌可以用水、緩沖的水、和/或TBS(大約50mMTrisHC1，大約300mMNaCl，大約0.1%Tween20，pH大約7.6)進(jìn)行。陽(yáng)性對(duì)照樣品可以是組織、細(xì)胞團(tuán)、細(xì)胞裂解物或者從這些制備的膜制備物，它們可以通過(guò)生物活檢或者其它外科手術(shù)切除方法獲得。陰性對(duì)照樣品可以是組織、細(xì)胞團(tuán)或者細(xì)胞裂解物或者從這些制備的膜制備物，它們通過(guò)先前分析已知不含有Na，K-ATP酶的α-亞基的α3同種型。在一些實(shí)施方案中，陰性對(duì)照由嚙齒類(小鼠或者大鼠)腫瘤組織的細(xì)胞團(tuán)或者體外生長(zhǎng)的小鼠或者大鼠細(xì)胞組成。根據(jù)本發(fā)明可以采用分析方法，其是確定相對(duì)Na，K-ATP酶α亞基同種型組成和比率的替代手段，以確定α3與α1同種型的比率。這些可以例如包括使用在ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)中的抗體或者蛋白質(zhì)組織或者細(xì)胞裂解物陣列?；蛘?，可以使用Northern印跡分析和相關(guān)技術(shù)(例如rtPCR，實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng))用于測(cè)量不同Na，K-ATP酶α-亞基同種型的mRNA。也可以使用免疫組織化學(xué)染色測(cè)定定量樣品中存在的α-亞基的α3同種型和α1同種型的量。本發(fā)明的另一方面提供用包含強(qiáng)心苷的組合物治療患有具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的對(duì)象的方法，所述方法包括確定樣品中Na，K-ATP酶α-亞基的α3同種型與α1同種型的比率，所述樣品直接或間接得自患有具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或者失調(diào)的對(duì)象的疾病體內(nèi)細(xì)胞組織，所述樣品包含Na，K-ATP酶的α亞基的一或多種同種型；以及如果所述比率彡0.3，彡0.5，彡1或者彡10，則指示給予對(duì)象包含強(qiáng)心苷的組合物。本發(fā)明的另一方面提供用包含強(qiáng)心苷的組合物治療患有具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的對(duì)象的方法，所述方法包括從所述對(duì)象獲得疾病組織樣品，所述疾病具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W，所述樣品包含Na，K-ATP酶的α亞基的一或多種同種型；請(qǐng)求確定樣品中Na，K-ATP酶的α亞基的α3同種型與α1同種型的比率；以及如果所述比率彡0.3，彡0.5，彡1或者彡10，則指示給予對(duì)象包含強(qiáng)心苷的組合物。本發(fā)明的一些實(shí)施方案包括那些實(shí)施方案，其中1)對(duì)象被開(kāi)出處方或給予治療相關(guān)劑量的包含強(qiáng)心苷的組合物；2)對(duì)象根據(jù)處方劑量方案被給予包含強(qiáng)心苷的組合物；3)對(duì)象被給予包含含有強(qiáng)心苷的提取物的組合物；4)所述提取物進(jìn)一步包含一或多種其它治療有效物質(zhì)；5)組合物進(jìn)一步包含一或多種其它治療有效物質(zhì)；6)對(duì)象被給予含有強(qiáng)心苷的植物或動(dòng)物來(lái)源的熱水提取物，每天2mg至22.5；或者7)從0.6至4.Smg范圍的強(qiáng)心苷的植物或動(dòng)物來(lái)源的濃縮提取物(例如超臨界CO2提取物)；或者8)10-500ug范圍內(nèi)的純單化學(xué)形式強(qiáng)心苷。本發(fā)明方法的各個(gè)步驟可以在獨(dú)立設(shè)施中進(jìn)行或者在相同設(shè)施中進(jìn)行。本發(fā)明包括本文披露的本發(fā)明的方面、實(shí)施方案和具體實(shí)施方案的所有組合。附圖簡(jiǎn)述下述附圖組成說(shuō)明書(shū)一部分，描述了發(fā)明的舉例實(shí)施方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)這些附圖和描述能夠無(wú)需過(guò)度實(shí)驗(yàn)實(shí)施本發(fā)明。圖IA描述了作為用于相對(duì)定量Na，K-ATP酶的α-亞基的α1和α3同種型的人類和小鼠細(xì)胞系的Western印跡分析的一部分獲得的凝膠電泳圖的相關(guān)條帶。圖IB描繪了夾竹桃苷濃度(nM)對(duì)人類和小鼠腫瘤的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制百分比的圖。圖2描繪了作為正常及惡性人結(jié)腸細(xì)胞的Western印跡分析的一部分獲得的凝膠電泳圖的相關(guān)條帶的照片。圖3A描繪了夾竹桃苷濃度(nM)對(duì)各種腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制百分比的圖，所述細(xì)胞系的Na，K-ATP酶亞基的α1和α3同種型的相對(duì)表達(dá)不同。圖3Β描繪了夾竹桃苷在兩組不同腫瘤細(xì)胞系中對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的平均IC5tl的條桿圖第一組具有大于1的α3與α1亞基同種型的比率；第二組具有小于1的α3與α1亞基同種型的比率。圖4Α描繪了作為非轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染的人腫瘤細(xì)胞的Western印跡分析的一部分獲得的凝膠電泳圖的相關(guān)條帶的照片。圖4B是證實(shí)在圖4A的非轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中α3同種型的相對(duì)表達(dá)的條桿圖。圖4C描繪了夾竹桃苷濃度(nM)對(duì)圖4A的細(xì)胞的癌癥細(xì)胞生長(zhǎng)抑制百分比的圖。圖5A描繪了作為非轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染的Panc-I細(xì)胞的Western印跡分析的一部分獲得的凝膠電泳圖的相關(guān)條帶的照片。圖5B是證實(shí)在圖5A的非轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中α3同種型的相對(duì)表達(dá)的條桿圖。圖5C描繪了夾竹桃苷濃度(nM)對(duì)圖5A的細(xì)胞的癌癥細(xì)胞生長(zhǎng)抑制百分比的圖。圖6A-6F描繪了來(lái)自DI13782的免疫組織化學(xué)染色的正常皮膚細(xì)胞的照片。圖7A-7H描繪了免疫組織化學(xué)染色的黑素瘤皮膚細(xì)胞的照片圖7A-7B描繪了DI15041細(xì)胞；圖7C-7D描繪了DI15832細(xì)胞；圖7E-7F描繪了DI15833細(xì)胞；圖7G-7H描15繪了DI15834細(xì)胞。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了預(yù)測(cè)患有具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的對(duì)象是否接受通過(guò)用含有強(qiáng)心苷的組合物治療該對(duì)象對(duì)抗該疾病或失調(diào)的臨床益處。所述方法用于確定對(duì)象中的疾病或失調(diào)是否對(duì)用含有強(qiáng)心苷的組合物的治療是治療應(yīng)答性的。換句話說(shuō)，所述方法用于確定在用治療相關(guān)劑量(或者有效劑量)的一或多種強(qiáng)心苷治療后對(duì)象中的治療應(yīng)答的概率。簡(jiǎn)而言之，樣品得自對(duì)象中的疾病組織。樣品包含來(lái)自疾病組織的Na，K-ATP酶的α亞基的一或多種同種型，并且如本文所述分析以確定Na，K_ATP酶的α亞基的α3和α1同種型的相對(duì)量或濃度。然后計(jì)算相對(duì)量或濃度的比率。如果α3同種型與α1同種型的比率大于或等于0.3，則該方法預(yù)測(cè)所述疾病或失調(diào)對(duì)強(qiáng)心苷治療是治療應(yīng)答性的概率增加。例如，如果該比率從0.3至0.45+/-0.05，則有至少20%或者20%至小于30%的概率該疾病或失調(diào)應(yīng)答強(qiáng)心苷治療。如果該比率小于0.2或者小于0.3，則該方法預(yù)測(cè)小于20%概率該疾病或失調(diào)治療應(yīng)答于強(qiáng)心苷治療。一般地，該比率越高，治療應(yīng)答概率越大。例如，如果該比率是從0.5至0.95+/-0.05，則有至少30%或者30%至50%的概率該疾病或失調(diào)應(yīng)答強(qiáng)心苷治療。如果該比率大于或等于1+/-0.05，則有至少50%概率該疾病或失調(diào)應(yīng)答強(qiáng)心苷治療。如果該比率大于10+/-0.05，則有至少75%概率該疾病或失調(diào)應(yīng)答強(qiáng)心苷治療?！爸委煈?yīng)答(therapeuticallyresponsive)”是指患有疾病或失調(diào)的對(duì)象將享有作為強(qiáng)心苷治療結(jié)果的至少一種如下臨床益處疾病或失調(diào)改善、與疾病或失調(diào)相關(guān)的癥狀發(fā)生降低、疾病或失調(diào)的部分康復(fù)(remission)、疾病或失調(diào)的完全康復(fù)或者距進(jìn)展時(shí)間增加。換句話說(shuō)，治療應(yīng)答可以是完全或部分治療應(yīng)答，以及所述方法用于確定治療應(yīng)答的概率，而無(wú)論其是完全還是部分應(yīng)答。如本文所用，“距進(jìn)展的時(shí)間(timetoprogression)”是指疾病被診斷(治療)后直至疾病開(kāi)始惡化(如直至腫瘤開(kāi)始或者持續(xù)生長(zhǎng))的時(shí)間期間、長(zhǎng)度或持續(xù)時(shí)間。其是疾病水平被保持而無(wú)疾病的進(jìn)一步進(jìn)展的時(shí)間期間，并且所述時(shí)間期間當(dāng)疾病開(kāi)始再次進(jìn)展時(shí)終止。疾病的進(jìn)展被定義為患有細(xì)胞增生性疾病的對(duì)象在治療之前或者治療開(kāi)始時(shí)的“分期”。例如，對(duì)象具有的腫瘤的大小、位置和數(shù)目在治療之前或者治療開(kāi)始時(shí)確定。對(duì)象然后用強(qiáng)心苷治療，定期監(jiān)測(cè)腫瘤大小及數(shù)目。在稍后時(shí)間點(diǎn)，腫瘤大小和/或數(shù)目可以增加，因此標(biāo)記疾病進(jìn)展及“距進(jìn)展的時(shí)間”的終點(diǎn)。應(yīng)注意治療應(yīng)答可以是在給予對(duì)象的治療相關(guān)劑量下的完全或者部分應(yīng)答。換句話說(shuō)，預(yù)測(cè)的治療應(yīng)答水平在對(duì)被給予強(qiáng)心苷的對(duì)象不致命的劑量下確定。因此，治療相關(guān)劑量是這樣的治療劑量，在該劑量下疾病或失調(diào)對(duì)強(qiáng)心苷治療的治療應(yīng)答被觀測(cè)到以及在該劑量下對(duì)象可以被給予強(qiáng)心苷而不具有過(guò)量的不想要的或者有害的副作用。治療相關(guān)劑量對(duì)對(duì)象是非致死的，盡管其可能在患者中導(dǎo)致一些副作用。其是對(duì)被給予強(qiáng)心苷的對(duì)象的臨床益處水平超過(guò)該對(duì)象由于給予強(qiáng)心苷所經(jīng)歷的有害副作用的水平的劑量。根據(jù)各種已建立的藥理學(xué)、藥動(dòng)學(xué)和藥物代謝動(dòng)力學(xué)原理，治療相關(guān)劑量可以在對(duì)象之間變化。但是，治療相關(guān)劑量(例如相對(duì)于夾竹桃苷)典型不超過(guò)25、100、250、500或者1000微克強(qiáng)心苷/天，或者其可以在25-500或者25-1000微克強(qiáng)心苷/天范圍。因此，本發(fā)明方法用于當(dāng)對(duì)象被給予治療相關(guān)劑量時(shí)預(yù)測(cè)疾病或失調(diào)的治療應(yīng)答性。本領(lǐng)域已知在對(duì)象中提供靶治療結(jié)果所需的藥物的實(shí)際量可以根據(jù)藥學(xué)基本原理在對(duì)象之間變化。治療相關(guān)劑量可以根據(jù)治療具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)中典型使用的任何劑量方案而給予。治療相關(guān)劑量可以每日給予1次、2次、3次或更多次。其可每隔1天、每隔2天、每隔3天、每半周、每周、每?jī)芍?、每三周、每四周、每月、每?jī)稍?、每半月、每三月、每四月、每半年、每年或者根?jù)上述任意組合給予。例如，治療相關(guān)劑量可以每日一次給予一或多周。“裂解組合物”是指能裂解細(xì)胞的膜以形成細(xì)胞裂解物或者細(xì)胞成分的完全溶解的一或多種物質(zhì)。裂解組合物可以包含下述一或多種物質(zhì)水性液體介質(zhì)、緩沖劑、鹽、螯合劑、表面活性劑、消泡劑、蛋白酶抑制劑及磷酸酶和ATP酶抑制劑。如本文有關(guān)試劑盒所用，“陽(yáng)性對(duì)照樣品”包括Na，K-ATP酶的α3亞基同種型。陽(yáng)性對(duì)照可以進(jìn)一步包括Na，K-ATP酶的α亞基同種型。每種亞基同種型的量或濃度可以獨(dú)立地預(yù)先確定或者是已知的。亞基同種型的量或濃度足以提供關(guān)于亞基同種型存在的陽(yáng)性應(yīng)答，如根據(jù)其是陽(yáng)性對(duì)照的測(cè)定中所用的特定方法確定。例如，在Western印跡測(cè)定中，陽(yáng)性對(duì)照中的亞基同種型的量或濃度足以與相應(yīng)抗體結(jié)合，以便當(dāng)確定亞基存在時(shí)，例如通過(guò)光密度分析或放射分析確定時(shí)，將獲得對(duì)于該亞基同種型存在的陽(yáng)性應(yīng)答。對(duì)于免疫組織化學(xué)染色測(cè)定(如在實(shí)施例27中詳述)，當(dāng)應(yīng)用于凝膠，用電泳與其它蛋白質(zhì)分離及然后用前述第一和第二抗體染色時(shí)或者當(dāng)應(yīng)用于使用數(shù)字圖像捕獲和定量圖像分析軟件的顯微鏡檢查的定量分析時(shí)，陽(yáng)性對(duì)照中的亞基同種型的量或濃度足以允許容易的顯現(xiàn)。如果對(duì)照樣品中的亞基同種型的量或濃度是已知的或者在在分析前預(yù)先確定的，陽(yáng)性應(yīng)答水平可以與所述量或濃度相關(guān)以提供該亞基同種型的校準(zhǔn)曲線。如果Na，K-ATP酶的α3亞基同種型存在于陽(yáng)性對(duì)照樣品中，α3同種型與α1同種型的比率通常在0.3-100或更大的范圍內(nèi)。合適的比率范圍也包括0.3-0.5,0.5-1.0、1.0-20及20-100。如本文有關(guān)試劑盒所用，“陰性對(duì)照樣品，，包括Na，K-ATP酶的α1亞基同種型但排除Na，K-ATP酶的α3亞基同種型。α1亞基同種型的量或濃度足以提供關(guān)于該同種型存在的陽(yáng)性應(yīng)答，如根據(jù)其用作陰性對(duì)照的測(cè)定如Western印跡測(cè)定中所用的特定方法確定。所述量或濃度可以是已知的或者預(yù)先確定的，如果如此，可以用于產(chǎn)生該同種型的校準(zhǔn)曲線。作為本發(fā)明方法和試劑盒的驗(yàn)證部分，本發(fā)明人進(jìn)行了含有強(qiáng)心苷的組合物治療各種癌癥和腫瘤表型的臨床前評(píng)估。評(píng)估用體內(nèi)、離體、體外及在異種移植動(dòng)物模型中進(jìn)行。對(duì)于每種評(píng)估的表型，如本文所述分析組織或細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞樣品以確定Na，K_ATP酶的α3亞基同種型與Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的比率。在許多人類腫瘤細(xì)胞系中觀測(cè)到了應(yīng)答強(qiáng)心苷治療的表型與對(duì)于每種表型的Na，K-ATP酶的α3亞基同種型與Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的比率之間的相關(guān)。結(jié)論是治療應(yīng)答性癌癥或者腫瘤表型(或者具有增加概率的治療應(yīng)答的表型)具有的Na，K-ATP酶的α3亞基同種型與Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的比率為至少0.3。嚙齒類(大鼠或者小鼠)癌細(xì)胞可以用作陰性對(duì)照樣品。圖IA描繪了嚙齒類腫瘤細(xì)胞系的Western印跡分析凝膠的照片。發(fā)明人的數(shù)據(jù)證實(shí)目前測(cè)試的所有嚙齒類(小鼠和大鼠)腫瘤細(xì)胞系均缺乏α3亞基同種型并且它們的體外增殖不被與強(qiáng)心苷(例如烏本苷，夾竹桃苷，蟾毒靈等)保溫顯著抑制。人類腫瘤細(xì)胞系通常對(duì)用含強(qiáng)心苷組合物治療比鼠腫瘤細(xì)胞更敏感(圖1Β)。發(fā)明人相信這個(gè)治療應(yīng)答性中的差異是由于在兩種不同物種中的α3與α1同種型的比率的差異所致，如上所述。應(yīng)注意抗α3同種型抗體可以衍生自許多不同銷售商包括AffinityBioreagents(Golden,CO),Novus(Littleton,CO)或者SigmahemicalCo.(3讓011^^0)，它們?nèi)匡@示對(duì)陽(yáng)性對(duì)照樣品中的(13表位的相等的反應(yīng)性(即結(jié)合)。在人類中，對(duì)于Na，K-ATP酶的α亞基的α3與α1同種型的比率可以根據(jù)組織來(lái)源及惡性狀態(tài)而變化。從總共14個(gè)個(gè)體對(duì)象中的每個(gè)對(duì)象取正常和惡性結(jié)腸組織的組織樣品。如本文所述確定每個(gè)組織樣品的α3與α同種型的比率。圖2數(shù)據(jù)和下表證實(shí)正常組織中相對(duì)缺乏α3同種型，在大約66-70%惡性組織中存在α3同種型。正常和惡性組織均含有α1亞基同種型。確定了培養(yǎng)細(xì)胞系及實(shí)際腫瘤活檢樣品中各種不同人類癌癥和腫瘤表型的Na，K-ATP酶的α亞基的a3t0a1同種型的比率。另外，用來(lái)自體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)確定了每種表型對(duì)用含有強(qiáng)心苷的組合物的治療的相對(duì)敏感性。下表和圖3A中詳述了含有夾竹桃苷的組合物的數(shù)據(jù)。*代表在直至125nM濃度達(dá)到小于50%的生長(zhǎng)抑制**代表在62nM達(dá)到大于50%但小于75%的生長(zhǎng)抑制代表在62nM達(dá)到大于75%的生長(zhǎng)抑制如上表定義，“體外應(yīng)答”代表給定腫瘤細(xì)胞系的增殖在規(guī)定時(shí)間期間用指定濃度藥物(強(qiáng)心苷)抑制的程度?！盁o(wú)應(yīng)答”代表在測(cè)試的多種藥物濃度的任一種下小于50%的生長(zhǎng)抑制。即，沒(méi)有濃度可以被鑒別為IC5tl值(在所述實(shí)驗(yàn)時(shí)間期間產(chǎn)生50%細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的濃度)。因此，如果這個(gè)腫瘤細(xì)胞系在哺乳動(dòng)物如人類中生長(zhǎng)，則該藥物可能對(duì)于產(chǎn)生顯著的腫瘤生長(zhǎng)抑制是無(wú)效的。上表中的“部分應(yīng)答”代表給定強(qiáng)心苷如夾竹桃苷或蟾毒靈相對(duì)于未治療腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制細(xì)胞增殖大于50%但小于75%的能力。因此，如果這個(gè)產(chǎn)物用于治療哺乳動(dòng)物如人類中的腫瘤生長(zhǎng)，這等于腫瘤對(duì)強(qiáng)心苷的部分或小于完全的治療應(yīng)答。最后，上表中的“完全應(yīng)答”代表相對(duì)于未治療腫瘤細(xì)胞群大于75%的腫瘤細(xì)胞增殖抑制。因此，其可以完全抑制腫瘤生長(zhǎng)(或者在哺乳動(dòng)物中可以實(shí)現(xiàn)完全治療應(yīng)答)?；谏鲜鐾N型比率數(shù)據(jù)，方法預(yù)測(cè)1)MDA231、BXPC3和MCF7細(xì)胞系對(duì)用治療相關(guān)量的強(qiáng)心苷治療會(huì)是基本上非應(yīng)答性的；2)SUM149和HCT116細(xì)胞系會(huì)顯示對(duì)用治療相關(guān)量的強(qiáng)心苷治療的至少部分應(yīng)答；及3)CAC02、HT29、LS174T、BRO,D0D-1和PANCl細(xì)胞系會(huì)顯示對(duì)用治療相關(guān)量的強(qiáng)心苷治療的完全治療應(yīng)答。圖3A描繪了夾竹桃苷(以?shī)A竹桃苷提供)的濃度(nM)針對(duì)對(duì)照的生長(zhǎng)百分比的圖。數(shù)據(jù)證實(shí)評(píng)估的細(xì)胞系根據(jù)用人類腫瘤細(xì)胞系增殖的相對(duì)抑制確定的它們對(duì)強(qiáng)心苷治療的應(yīng)答可以分成三個(gè)不同組組I-經(jīng)歷在直至125nM強(qiáng)心苷的濃度下達(dá)到的小于50%的生長(zhǎng)抑制的細(xì)胞；組II-經(jīng)在直至62nM強(qiáng)心苷濃度下達(dá)到的大于或等于50%生長(zhǎng)抑制的細(xì)胞；組III-經(jīng)歷在直至62nM強(qiáng)心苷濃度下達(dá)到的大于或等于75%生長(zhǎng)抑制的細(xì)胞。這些組的舉例的細(xì)胞系是組I-MDA231，BXPC3，MCF-7；組II_SUM149，BR0；組Ill-Panc-l，CaCo2。應(yīng)答數(shù)據(jù)與根據(jù)同種型比率數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)的相同。為了建立本發(fā)明的方法和試劑盒的魯棒性，進(jìn)行了細(xì)胞應(yīng)答數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。圖3B中的數(shù)據(jù)描述了含有夾竹桃苷的組合物體外抑制人腫瘤細(xì)胞增殖的相對(duì)能力。數(shù)據(jù)以平均值Mean士SD示出。夾竹桃苷介導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制在其中相對(duì)亞基含量α3/α1同種型比率>1.0的10個(gè)細(xì)胞系(代表各種固體腫瘤)及其中α3/α同種型比率<1.0的6個(gè)細(xì)胞系中進(jìn)行了檢查。數(shù)據(jù)顯示在這些組之間有8倍(800%)差異。即，與其中α3亞基同種型僅弱表達(dá)的那些細(xì)胞系相比，在其中α3/α1同種型比率>1.0的那些細(xì)胞系中，發(fā)現(xiàn)夾竹桃苷是更有效得多的藥物。數(shù)據(jù)證實(shí)α3/α1亞基同種型的比率可以用于預(yù)測(cè)癌癥或腫瘤細(xì)胞系對(duì)用含強(qiáng)心苷的組織的治療的應(yīng)答性。如下建立α3/α1同種型比率對(duì)靶惡性組織對(duì)強(qiáng)心苷治療的治療應(yīng)答的可預(yù)測(cè)性的相對(duì)重要性的進(jìn)一步證明。人胰腺癌細(xì)胞中α3同種型的表達(dá)的人工負(fù)調(diào)節(jié)，即Na，K-ATP酶的亞基同種型含量的操作，通過(guò)用特異于α3同種型的siRNA(沉默RNA)轉(zhuǎn)染細(xì)胞而實(shí)現(xiàn)。數(shù)據(jù)證實(shí)α3同種型表達(dá)下降(如Western印跡確定(圖4A))。圖4B中詳述了通過(guò)Western印跡定量α3的表達(dá)降低。圖4C證實(shí)其中α3表達(dá)被降低的轉(zhuǎn)染細(xì)胞喪失了它們對(duì)夾竹桃苷治療的敏感性。α3/α1同種型比率對(duì)靶惡性組織對(duì)強(qiáng)心苷治療的治療應(yīng)答的可預(yù)測(cè)性的相對(duì)重要性的進(jìn)一步證明通過(guò)用α1亞基同種型轉(zhuǎn)染Panc-I細(xì)胞建立。Na，K-ATP酶α1亞基同種型轉(zhuǎn)染至正常缺乏α1表達(dá)的Panc-I細(xì)胞。圖5Α中的對(duì)照樣品是非轉(zhuǎn)染的Panc-I細(xì)胞，圖5Α中的αIcDNA樣品是用α1亞基同種型轉(zhuǎn)染的Panc-I細(xì)胞。結(jié)果，在轉(zhuǎn)染的Panc-I細(xì)胞中α3與α1的比率降低(圖5Β)。轉(zhuǎn)染的Panc-I細(xì)胞對(duì)夾竹桃苷治療的敏感性然后被評(píng)估。這些轉(zhuǎn)染細(xì)胞對(duì)夾竹桃苷治療的敏感性下降，證據(jù)為夾竹桃苷的IC50值從非轉(zhuǎn)染Panc-I細(xì)胞的4.InM轉(zhuǎn)變?yōu)樵讦?轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的大于50ηΜ(圖5C)。因此，夾竹桃苷的抗增殖活性在用α1亞基同種型轉(zhuǎn)染的Panc-I細(xì)胞中顯著下降。Na，K-ATP酶亞基的α3和α1同種型的檢測(cè)和定量還可以用免疫組織化學(xué)染色完成，如實(shí)施例27詳述。細(xì)胞用免疫組織化學(xué)染色，從而α3和α同種型被差示染色。每種同種型類型的含量被定量，α3與α同種型的含量比率被確定。同種型的差示免疫組織化學(xué)染色可以通過(guò)各種手段完成。在一些實(shí)施方案中，組織樣品用兩種不同染色劑染色，一種染色劑選擇性或特異性用于α3同種型，另一種染色劑選擇性或特異性用于α1同種型。在一些實(shí)施方案中，兩個(gè)接近但不相同樣品樣品得自同一組織并被染色，以便第一個(gè)樣品被處理以染色α3同種型，第二個(gè)樣品被處理以染色α1同種型。α3和α1同種型的量然后被定量，α3同種型與α1同種型的比率然后被確定?；谒霰嚷?，對(duì)所述組織對(duì)強(qiáng)心苷治療的治療應(yīng)答的可能性進(jìn)行預(yù)測(cè)。免疫組織化學(xué)染色的樣品(細(xì)胞或組織玻片)中Na，K-ATP酶亞基的α3同種型和α1同種型的定量可以通過(guò)手工或自動(dòng)化程序完成。這些包括但非限于合適染色的玻片的設(shè)定區(qū)域的染色強(qiáng)敵的個(gè)體分級(jí)(grading)(例如使用相對(duì)染色強(qiáng)度的目視觀察(例如0-5的密度，其中0是無(wú)可檢測(cè)染色，5代表強(qiáng)染色))，然后匯總設(shè)定數(shù)目的檢查區(qū)域的平均染色強(qiáng)度并比較α3染色相對(duì)于針對(duì)α1染色的玻片的相對(duì)染色，及計(jì)算樣品中的α3與α1的比率。另一種方式是其中α1和α3的相對(duì)染色(即樣品中存在的α3與α1的比率)的定量可以通過(guò)使用顯微鏡檢查染色玻片的設(shè)定區(qū)域及使用數(shù)字分析軟件以確定相對(duì)染色強(qiáng)度。類似地，也可以進(jìn)行計(jì)算機(jī)輔助數(shù)字?jǐn)z像分析以確定相對(duì)同種型染色及計(jì)算α3與α1染色強(qiáng)度的比率，由此確定樣品中α3同種型與α1同種型含量的比率。例如，圖6A-6F示出了來(lái)自DI13782正常皮膚細(xì)胞的照片。圖6A、6C和6Ε示出Na+/K+ATP酶的α亞基免疫反應(yīng)性(免疫組織化學(xué)染色的)。圖6B、6D和6F顯示了相應(yīng)的非免疫(對(duì)照)IgG保溫的切片的照片。在所用正常皮膚供體中可見(jiàn)強(qiáng)2+或3+水平的免疫反應(yīng)性。鱗狀上皮、毛囊上皮、皮脂腺基底膜、汗腺曲管(sweatcoils)及血管中的單個(gè)核淋巴細(xì)胞全部陽(yáng)性染色。Pyloerector肌肉呈弱免疫反應(yīng)性。圖7A-7H示出黑素瘤細(xì)胞的照片。圖7A、7C、7E和7G示出Na+/K+ATP酶的α亞基免疫反應(yīng)性(免疫組織化學(xué)染色的)。圖7B、7D、7F和7Η顯示了相應(yīng)的非免疫(對(duì)照)IgG保溫的切片。圖7A和7B示出DI15838細(xì)胞。圖7C和7D示出DI15840細(xì)胞。圖7E和7F示出DI15842細(xì)胞。圖7G和7H示出DI15844細(xì)胞。所用BCC樣品對(duì)于Na+/K+ATP酶的α亞基均是陽(yáng)性的，強(qiáng)度程度有變化。所有免疫反應(yīng)性均位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)。在組織的差示免疫組織化學(xué)染色后，可以確定α3亞基同種型與α1亞基同種型的比率，可以進(jìn)行對(duì)強(qiáng)心苷治療的治療應(yīng)答性的預(yù)測(cè)。評(píng)估了本發(fā)明的方法對(duì)另一種強(qiáng)心苷的相關(guān)性。華蟾素(Huachansu)是蟾蜍皮膚提取物，含有已知為蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯的強(qiáng)心苷。兩種人胰腺細(xì)胞系(SW1990和Panc-I)對(duì)華蟾素治療的治療應(yīng)答被評(píng)估?；谏媳淼臄?shù)據(jù)，人們會(huì)預(yù)測(cè)SW1990細(xì)胞對(duì)華蟾素沒(méi)有治療應(yīng)答，但是Panc-I細(xì)胞有。應(yīng)答數(shù)據(jù)提供了預(yù)期結(jié)果。下述實(shí)施例包括強(qiáng)心苷在治療癌癥和腫瘤相關(guān)疾病和失調(diào)中的功效的證據(jù)。實(shí)施例21包括治療具有轉(zhuǎn)移性胰腺胃泌素瘤(metastaticpancreaticgastrinoma)患者的病史。本發(fā)明的預(yù)后測(cè)定、方法及試劑盒可以與本領(lǐng)域已知的具有與過(guò)量細(xì)胞組織相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的一或多種其它預(yù)后或診斷測(cè)定、方法及試劑盒聯(lián)合應(yīng)用。例如，如果臨床醫(yī)生要用強(qiáng)心苷與另一種化療劑或放療聯(lián)合治療具有癌癥或腫瘤的對(duì)象，以及已知對(duì)象具有的癌癥或腫瘤的特定表型對(duì)于用所述其它化療劑或放療是至少部分應(yīng)答的，則可以使用本發(fā)明確定當(dāng)用強(qiáng)心苷治療時(shí)對(duì)象中的癌癥或腫瘤的至少部分治療應(yīng)答的概率。如果結(jié)果指示癌癥或腫瘤對(duì)強(qiáng)心苷治療的治療應(yīng)答的概率增加，則臨床醫(yī)生可以處方和/或給予強(qiáng)心苷和其它治療劑或者放療或其組合治療所述癌癥或腫瘤。強(qiáng)心苷可以是已知在具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的治療中具有治療活性的任何強(qiáng)心苷。強(qiáng)心苷可以以純的形式存在，或者可以作為與一或多種其它化合物的混合物存在。強(qiáng)心苷可以作為提取物存在。提取物可以通過(guò)超臨界液體(SCF)二氧化碳(CO2)提取制備或者是這種提取物的化學(xué)修飾形式(例如包括乙醇的提取物或者用SCFCO2和乙醇制備)。提取物可以從植物或動(dòng)物材料獲得。動(dòng)物材料可以是蟾蜍(例如Bufobufo)的溢泌物。植物材料可以是植物物質(zhì)，如得自Nerium物種，如Neriumoleander,或者Thevetia物種，如Thevetianerifolia或Thevetiapuruviana(也已知為黃色夾竹桃)。提取方法可以在Neriumoleander葉的干粉上進(jìn)行，所述干粉根據(jù)如下申請(qǐng)所述方法制備，Addington于2005年2月15日提交的目前在審美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/653，210，或Addington于2006年1月26日提交的美國(guó)申請(qǐng)系列號(hào)11/340，016，Addington于2006年7月28日提交的美國(guó)申請(qǐng)系列號(hào)11/191，650(現(xiàn)在的美國(guó)專利7，402，325，2008年7月22日公開(kāi))，或者2006年7月26日提交的PCT國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/US06/29061，其全部?jī)?nèi)容援引加入本文作參考，或者用本文所述方法制備。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“夾竹桃苷”是指所有已知形式的夾竹桃苷，除非另有說(shuō)明。夾竹桃苷可以外消旋、光學(xué)純的或者光學(xué)富集形式存在。Neriumoleander植物材料可以得自例如商業(yè)植物供應(yīng)商如AldridgeNursery,Atascosa,Texas。提取物可以得自含有強(qiáng)心苷的植物材料的修飾的(例如乙醇)或未修飾的超臨界流體提取。超臨界流體提取物可以包括至少一種其它藥理學(xué)活性成分，當(dāng)提取物被給予對(duì)象時(shí)其有助于強(qiáng)心苷的治療功效。其可以加合或者協(xié)同幫助強(qiáng)心苷的治療功效。提取物可以通過(guò)各種不同方法制備。提取物可以根據(jù)Dr.HuseyinZiyaOzel開(kāi)發(fā)的方法制備(美國(guó)專利5，135，745)，其描述了在水中制備植物提取物的程序。所述水提取物據(jù)報(bào)道含有一些分子量從2KD到30KD的多糖、夾竹桃苷和夾竹桃苷元、奧多諾甙(odoroside)和夾竹桃它羅苷(neritaloside)。多肽據(jù)報(bào)道包括酸性均聚半乳糖酸酸(homopolygalacturonans)或者阿拉伯半乳糖酸酸(arabinogalaturonans)。869，060披露了Nerium物種的熱水提取物及其生產(chǎn)方法。所得提取物然后可被凍干以產(chǎn)生粉末。美國(guó)專利6，565，897(U.S.PregrantPublicationNo.20020114852和PCT國(guó)際出版物No.WO2000/016793,Selvarajetal.)披露了用于制備基本上無(wú)菌提取物的熱水提取方法。Erdemogluetal.(J.Ethnopharmacol.(2003)Nov.89(1)，123-129)披露了基于其抗疼痛和抗炎活性對(duì)植物包括Neriumoleander的水和乙醇提取物的比較。Neriumoleander的有機(jī)溶劑提取物披露于Adomeetal.(Afr.HealthSci.(2003)Aug.3(2)，77-86；乙醇提取物)，el-Shazlyetal.(J.EgyptSoc.Parasitol.(1996),Aug.26(2),461-473；乙醇提取物)，Begumetal.(Phytochemistry(1999)Feb.50(3)，435-438；甲醇提取物)，Ziaetal.(J.Ethnolpharmacol.(1995)Nov.49(1)，33-39；甲醇提取物)，和Vlasenkoetal.(Farmatsiia.(1972)Sept.-Oct.21(5),46-47；醇提取物)。Singhetal.的U.S.PregrantPatentApplicationPublicationNo.20040247660披露了用于治療癌癥的夾竹桃苷的蛋白質(zhì)穩(wěn)定化脂質(zhì)體配制物的制備。Singhetal.的U.S.PregrantPatentApplicationPublicationNo.20050026849披露了含有環(huán)糊精的夾竹桃苷的水溶性配制物。Singhetal.的U.S.PregrantPatentApplicationPublicationNo.20040082521披露了來(lái)自熱水提取物的夾竹桃苷的蛋白質(zhì)穩(wěn)定化納米顆粒配制物的制備。SCF提取可以在超臨界流體中的改性劑如乙醇存在下進(jìn)行，以增強(qiáng)從植物材料中提取希望的化合物。改性劑通常在超臨界流體和被提取化合物之間具有揮發(fā)性，它們必須可與超臨界流體混溶。在一些實(shí)施方案中，改性劑在室溫條件下是液體。作為非限制性例子，改性劑可以選自由乙醇、甲醇、丙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷等組成的組。提取物是藥理學(xué)活性化合物的混合物，如夾竹桃苷或者其它強(qiáng)心苷，oleaside及其它植物材料。來(lái)自超臨界流體方法的夾竹桃苷含有理論范圍為0.9%-2.5%(重量)的夾竹桃苷。已獲得包含不同量的夾竹桃苷的SCF提取物。在一個(gè)實(shí)施方案中，SCF提取物包含大約2%(重量)的夾竹桃苷。如本文數(shù)據(jù)證實(shí)，SCF提取物包含各種成分的混合物。這些成分的一些包括夾竹桃苷、oleasideA、夾竹桃苷元、夾竹桃它羅苷、奧多諾甙(WangX，PlomleyJB,NewmanRAandCisnerosA.LC/MS/MSanalysesofanoleanderextractforcancertreatment,AnalyticalChem.72=3547-3552,2000)，以及其它未鑒別成分。SCF提取物的SCF可提取的未鑒別成分看起來(lái)包括有助于SCF提取物中的夾竹桃苷功效的至少一種其它藥理學(xué)活性成分。即，至少一種其它SCF可提取成分與夾竹桃苷加性或協(xié)同作用以提供觀測(cè)到的功效。提取物的相對(duì)性能還可以不同，如根據(jù)對(duì)一些腫瘤細(xì)胞系的功效所確定。即使如此，如果強(qiáng)心苷以足夠高的量或濃度存在于提取物中以能制備治療相關(guān)劑量，則該提取物被認(rèn)為是本發(fā)明的一部分。下表總結(jié)了強(qiáng)心苷夾竹桃苷的三種不同形式的一些相對(duì)關(guān)功效數(shù)據(jù)。藥物人黑素瘤BRO細(xì)胞人胰腺癌PANC-I細(xì)胞(IC50,μΜ)(IC50,μΜ)*測(cè)試的化合物的IC5tl以那些提取物中的微摩爾(μΜ)夾竹桃苷當(dāng)量濃度表示。即，數(shù)據(jù)表示與未治療細(xì)胞相比抑制50%腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖所需的作為游離化合物或者作為提取物部分的夾竹桃苷的濃度。如上表所示，在Panc-I和BRO細(xì)胞中，超臨界CO2提取物的IC5tl值僅為僅用夾竹桃苷的IC5tl值的50%，提示夾竹桃的超臨界CO2提取物在抑制Panc-I或BRO細(xì)胞生長(zhǎng)中比僅用夾竹桃苷強(qiáng)至少2倍。相比之下，熱水提取物是這三種測(cè)試實(shí)體中強(qiáng)度最差的。數(shù)據(jù)證實(shí)夾竹桃苷及提取物抗人類腫瘤細(xì)胞系的強(qiáng)細(xì)胞毒性，相對(duì)強(qiáng)度如下超臨界CO2提取物>夾竹桃苷>熱水提取物。這些數(shù)據(jù)暗示超臨界CO2提取物的細(xì)胞毒性可能是由于在SCF提取物中除了夾竹桃苷外還存在至少一種其它藥理學(xué)活性成分，以及超臨界CO2提取物的強(qiáng)度比熱水提取物大得多(7.4倍)。數(shù)據(jù)清楚證實(shí)SCF提取物在功效上比熱水提取物甚至夾竹桃苷單獨(dú)顯著改良。功效改良超過(guò)僅基于SCF提取物中的夾竹桃苷的增加濃度可以獲得的預(yù)期改良。本發(fā)明還提供了通過(guò)用本發(fā)明的有效量的提取物如SCF或水提取物治療細(xì)胞而抑制癌癥或腫瘤細(xì)胞增殖的方法。強(qiáng)心苷可以配制成任何合適藥物學(xué)可接受劑型。腸胃外、耳、眼、鼻、吸入、頰、舌下、腸道、局部、口服、經(jīng)口及注射劑型是特別有用的。特定劑型包括固體或液體劑型。舉例的合適劑型包括片劑、膠囊劑、丸劑、囊片、錠劑(troche)、sache及藥物學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它此類劑型。摻入本發(fā)明單位劑量中的夾竹桃苷的量是至少一或多個(gè)劑型并且可以根據(jù)已知藥物原理選擇。特別涉及有效量或者治療相關(guān)量的治療化合物。術(shù)語(yǔ)“有效量”應(yīng)理解是針對(duì)例如藥物，涉及藥物學(xué)有效量。藥物學(xué)有效量是活性成分的量或者數(shù)量對(duì)于所需的或者希望的治療應(yīng)答是足夠的，或者換句話說(shuō)，當(dāng)給予患者時(shí)所述里那個(gè)足以引起可觀的生物學(xué)應(yīng)答。所述可光的生物學(xué)應(yīng)答可以作為單個(gè)或多個(gè)單位劑量的活性物質(zhì)的給予結(jié)果而發(fā)生。單位劑量可以包含一或多個(gè)劑型。應(yīng)理解對(duì)于任一患者的具體劑量水平取決于各種因素，包括被治療的適應(yīng)癥、適應(yīng)癥嚴(yán)重性、患者健康狀況、年齡、性別、體重、飲食、藥理學(xué)應(yīng)答、采用的具體劑型及其它此類因素?？诜o予的希望劑量高至是5劑型，當(dāng)然少如1劑型多達(dá)10劑型是可以被給予的。舉例的劑型含有0.6mgSCF提取物/劑型，總共0.6-60mg(l-10劑水平)/劑。強(qiáng)心苷可以存在于劑型中，量足以提供給對(duì)象12-1200微克或更多或更少的初始劑量夾竹桃苷。對(duì)于用于治療哺乳動(dòng)物，強(qiáng)心苷可以包括在劑型中。一些實(shí)施方案的劑型不是腸溶包衣的并且在0.5-1小時(shí)或更短時(shí)間內(nèi)釋放它們攜帶的強(qiáng)心苷。一些實(shí)施方案的劑型是腸溶包衣的并且在胃下游例如從空腸、回腸、小腸和/或大腸(結(jié)腸)釋放它們攜帶的強(qiáng)心苷。腸溶包衣的劑型在口服給予后1-10小時(shí)內(nèi)將強(qiáng)心苷釋放進(jìn)系統(tǒng)循環(huán)中。基于臨床前動(dòng)物劑量數(shù)據(jù)，預(yù)期50-75%給予劑量的夾竹桃提取物是口服可生物利用的，因此每劑型提供0.25至0.4mg、0.1至50mg、0.1至40mg、0.2至40mg、0.2至30mg、0.2至20mg、0.2至10mg、0.2至5mg、0.2至2.5mg、0.2至2mg、0.2至1.5mg、0.2至lmg、0.2至0.8mg、0.2至0.7或者0.25至0.5mg夾竹桃苷。鑒于成年人平均血液體積是5升，預(yù)期的夾竹桃苷血漿濃度將在0.05至2ng/ml、0.005至10ng/mL、0.005至8ng/mL、0.01至7ng/mL、0.02至7ng/mL、0.03至6ng/mL、0.04至5ng/mL或者0.05至2.5ng/mL范圍內(nèi)。存在于SCF提取物中的夾竹桃苷的推薦日劑量通常是大約0.25至大約50mg每日二次或者大約0.9至5mg每日二次或者大約每12小時(shí)。所述劑量可以是大約0.5至大約IOOmg/日、大約1至大約80mg/日、大約1.5至大約60mg/日、大約1.8至大約60mg/日、大約1.8至大約40mg/日。最大耐受劑量可以是大約IOOmg/日、大約80mg/日、大約60mg/日、大約40mg/日、大約38.4mg/日或者大約30mg/日含有夾竹桃苷的夾竹桃提取物，最小有效劑量可以是大約0.5mg/日、大約Img/日、大約1.5mg/日、大約1.8mg/日、大約2mg/日或者大約5mg/曰。本發(fā)明的試劑盒或者組合物可以包括適于分析學(xué)或者藥學(xué)應(yīng)用的任何賦形劑。應(yīng)注意本文的化合物可具有在本發(fā)明配制中的一或多種功能。例如，化合物可以同時(shí)用作表面活性劑和水混溶溶劑或者同時(shí)用作表面活性劑和水不混溶溶劑。液體組合物可以包含一或多種藥物學(xué)或分析學(xué)可接受的液體載體。液體自體可以是水性、非水性、極性、非極性和/或有機(jī)載體。液體載體包括例如但非限于水混溶溶劑、水不混溶溶劑、水、緩沖液及其混合物。如本文所用，可互換使用的術(shù)語(yǔ)“水溶性溶劑”或者“水混溶溶劑”是指不與水形成雙相混合物或者在水中足夠可溶而提供含有至少5%溶劑的水性溶劑混合物而不液相分離的有機(jī)液體。所述溶劑適于給予人或動(dòng)物。舉例的水溶性溶劑包括例如但非限于PEG(聚(乙二醇))、PEG400(具有大約400的大約分子量的聚(乙二醇))、乙醇、丙酮、烷醇、醇、醚、丙二醇、甘油、醋精(triacetin)、聚(丙二醇)、PVP(聚(乙烯吡咯烷酮))，二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺、甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、哌啶、丙醇、N-甲基乙酰胺、丁醇、soluphor(2-吡咯烷酮)、pharmasolve(N-甲基-2-吡咯烷酮)。如本文所用，可互換使用的術(shù)語(yǔ)“水不溶性溶劑”或“水不混溶溶劑”是指與水形成雙相混合物或者當(dāng)溶劑在水中的濃度超過(guò)5%時(shí)提供相分離的有機(jī)液體。所述溶劑適于給予人或動(dòng)物。舉例的水不溶性溶劑包括例如但非限于中/長(zhǎng)鏈甘油三酯、油、蓖麻油、玉米油、維生素E、維生素E衍生物、油酸、脂肪酸、橄欖油、sofiisan645(二甘油辛酸酯/癸酸酯/硬脂酸酯/羥基硬脂酸己二酸酯)，miglyol,captex(Captex350甘油三辛酸酯/癸酸酯/月桂酸甘油三酯；Captex355甘油三辛酸酯/癸酸甘油三酯；Captex355EP/NF甘油三辛酸酯/月桂酸中鏈甘油三酯)。合適溶劑列于“InternationalConferenceonHarmonisationofTechnicalRequirementsforRegistrationofPharmaceuticalsforHumanUse(ICH)guidanceforindustryQ3CImpurities:ResidualSolvents，，(1997)，其推薦何禾中量的殘余溶劑被認(rèn)為是藥物安全的。舉例的溶劑列為2類或3類溶劑。3類溶劑包括例如乙酸、丙酮、茴香醚、1-丁醇、2-丁醇、醋酸丁酯、叔丁基甲基醚、枯烯、乙醇、乙醚、醋酸乙酯、甲酸乙酯、甲酸、庚烷、醋酸異丁酯、醋酸異丙酯、醋酸甲酯、甲基-ι-丁醇、甲基乙基酮(methylethylketone)、甲基異丁基酮、2-甲基丙醇、戊烷、戊醇、2_戊醇或者醋酸丙可以在本發(fā)明中用作水不混溶溶劑的其它材料包括Captex100丙二醇二癸酸酯；Captex200丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯；Captex200P丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯；丙二醇二辛酸(Dicaprylo)癸酸酯；Captex300甘油三辛酸酯/癸酸酯；Captex300EP/NF甘油三辛酸酯/癸酸酯中鏈甘油三酯；CapteX350甘油三辛酸酯/癸酸酯/月桂酸酯；Captex355甘油三辛酸酯/癸酸酯；Captex355EP/NF甘油三辛酸酯/癸酸酯中鏈甘油三酯中鏈甘油三酯；Captex500醋酸甘油；Captex500P醋酸甘油(藥物級(jí))；CapteX800丙二醇二(2-Ethythexanoate)；Captex810D甘油三辛酸酯/癸酸酯/亞油酸酯；CaptexlOOO甘油三癸酸酯；CaptexCA中鏈甘油三酯；CaptexMCT-170中鏈甘油三酯；CapmulGMO甘油單油酸酯；CapmulGM0-50EP/NF甘油單油酸酯；CapmulMCM:中鏈甘油一酯&甘油二酯；CapmulMCMC8甘油單辛酸酯；CapmulMCMClO甘油單癸酸酯；CapmulPG-8丙二醇單辛酸酯；CapmulPG-12丙二醇單月桂酸酯；Caprol10G100十甘油十油酸酯；Caprol3G0三甘油單油酸酯；CaprolET混合脂肪酸的聚甘油酯；CaprolMPGO六甘油二油酸酯；CaprolPGE860十甘油單、二油酸酯。如本文所用，“表面活性劑”是指包含極性或者帶電荷的親水性成分以及非極性疏水性(親脂性)成分的化合物，即表面活性劑是兩性分子。術(shù)語(yǔ)表面活性劑可以是指一種化合物或者化合物混合物。表面活性劑可以是增溶劑、乳化劑或者分散劑。表面活性劑可以是親水性或者疏水性的。親水性表面活性劑可以是適用于藥物組合物中的任何親水性表面活性劑。這種表面活性劑可以是陰離子、陽(yáng)離子、兩性離子或者非離子表面活性劑，優(yōu)選非離子親水性表面活性劑。如上所述，這些非離子表面活性劑通常具有高于大約10的HLB值。親水性表面活性劑的混合物也包含在本發(fā)明范圍內(nèi)。相似地，疏水性表面活性劑可以是適用于藥物組合物中的任何疏水性表面活性齊U。通常地，合適的疏水性表面活性劑具有低于大約10的HLB值。疏水性表面活性劑的混合物也包含在本發(fā)明范圍內(nèi)。舉例的其它合適的增溶劑包括醇和多元醇，如乙醇、異丙醇、丁醇、苯甲醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇及其異構(gòu)體、甘油、季戊四醇、山梨醇、甘露醇、transcutol、二甲基異山梨醇(dimethylisosorbide)、聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙烯醇、羥丙基甲基纖維素及其它纖維素衍生物、環(huán)糊精及環(huán)糊精衍生物；平均分子量為大約200-6000的聚乙二醇醚，如四氫化糠基醇PEG醚(glycofurol，可商購(gòu)自BASF，商品名為Tetraglycol)或者甲氧基PEG(UnionCarbide)；酰胺，如2-吡咯烷酮、2-哌啶酮、己內(nèi)酰胺、N-烷基吡咯烷酮、N-羥烷基吡咯烷酮、N-烷基哌啶酮、N-烷基己內(nèi)酰胺、二甲基乙酰胺、和聚乙烯吡咯烷酮；酯，如丙酸乙酯、檸檬酸三丁酯、檸檬酸乙?；阴?、乙?；鶛幟仕崛□?、檸檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、丁酸乙酯、乙酸甘油酯、丙二醇一乙酸酯、丙二醇二乙酸酯、己內(nèi)酯及其異構(gòu)體、戊內(nèi)酯及其異構(gòu)體、丁內(nèi)酯及其異構(gòu)體；及本領(lǐng)域已知的其它增溶劑如二甲基乙酰26胺、二甲基異山梨醇酯(ArlasolveDMI(ICI)),N-甲基吡咯烷酮(Pharmasolve(ISP))、單辛精(monooctanoin)、二乙二醇單乙醚(可得自Gattefosse，商品名為Transcutol)和水。增溶劑的混合物也包含在本發(fā)明范圍內(nèi)。除非另有說(shuō)明，本文所述化合物可易于得自標(biāo)準(zhǔn)商業(yè)來(lái)源。所述清澈的液體組合物在目測(cè)是清澈的，其含有基于組合物總重量低于5%、低于3%或者低于重量的懸浮固體。盡管不是必需的，本發(fā)明的組合物或者試劑盒可包含螯合劑、防腐劑、抗氧化劑、吸附劑、酸化劑、堿化劑、防沫劑、緩沖劑、著色劑、電解質(zhì)、鹽、穩(wěn)定劑、張力改性劑、稀釋劑、其它藥物賦形劑，或者這些材料的組合。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抗氧化劑”是指抑制氧化的物質(zhì)，因此用于防止制備物由于氧化而變質(zhì)。這種化合物包括例如但不限于抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、維生素E、維生素E衍生物、丁基羥基茴香醚、二丁基羥基甲苯、次磷酸、硫代甘油、沒(méi)食子酸丙酯、抗壞血酸鈉、亞硫酸氫鈉、次硫酸氫鈉甲醛、偏亞硫酸氫鈉及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它這種材料。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“螯合劑”是指螯合溶液中金屬離子的化合物。舉例的螯合劑包括EDTA(乙二胺四乙酸四鈉)、DTPA(二乙烯三胺五乙酸五鈉)、HEDTA(N-(羥乙基)-乙撐二胺三乙酸的三鈉鹽)、NTA(次氮基三乙酸鈉)、羥乙基亞氨基二乙酸二鈉(Na2EDG)、二(2-羥乙基)甘氨酸鈉(DEGNa)、檸檬酸以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它化合物。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“吸附劑”是指能通過(guò)物理或者化學(xué)(化學(xué)吸附)方式使其它分子保持在其表面上的物質(zhì)。這種化合物包括例如但不限于粉末狀和活性炭以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它材料。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“堿化劑”是指用于提供堿性基質(zhì)的化合物。這種化合物包括例如但不限于氨水溶液、碳酸銨、二乙醇胺、單乙醇胺、氫氧化鉀、硼酸鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、三乙醇胺(triethanolamine)和三乙醇胺(trolamine)以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它堿化劑。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“酸化劑”是指用于提供酸性基質(zhì)的化合物。這種化合物包括例如但不限于乙酸、氨基酸、檸檬酸、反丁烯二酸及其它α羥酸、鹽酸、抗壞血酸和硝酸以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它酸化劑。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“防沫劑”是指防止或者減少在充填組合物的表面上形成的泡沫量的化合物。合適的防沫劑包括例如但不限于二甲硅油、SIMETHICONE、辛苯昔醇及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它防沫劑。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“緩沖劑”是指在稀釋或者加入酸或者堿時(shí)用于抵抗PH改變的化合物。這種化合物包括例如但不限于偏磷酸鉀、磷酸鉀、一價(jià)乙酸鈉(monobasicsodiumacetate)及無(wú)水和脫水檸檬酸鈉以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它這種材料。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“稀釋劑”或者“充填劑”是指用作充填劑以在片劑和膠囊的制備中產(chǎn)生的希望的體積(bulk)、流體性質(zhì)和壓縮特性的惰性物質(zhì)。這種化合物包括例如但不限于磷酸氫鈣、高嶺土、乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纖維素、粉末狀纖維素、沉淀的碳酸鈣、山梨醇和淀粉以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它材料。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“防腐劑”是指用于防止微生物生長(zhǎng)的化合物。這種化合物包括例如但不限于苯扎氯銨、芐索氯銨、苯甲酸、苯甲醇、西吡氯銨、氯丁醇、苯酚、苯乙醇、硝酸苯基汞、乙酸苯汞、硫柳汞、間甲酚、肉豆蔻酰gamma氯化甲基吡啶鐺(myristyIgammapicoliniumchloride)、苯甲酸鉀、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、丙酸鈉、山梨酸、麝香草酚及甲基、乙基、丙基或者丁基對(duì)羥苯甲酸酯以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它防腐劑。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“著色劑”是指用于使藥物制備物著色的化合物。這種化合物包括例如但不限于FD&CRedNo.3、FD&CRedNo.20、FD&CYellowNo.6、FD&CBlueNo.2、FD&CGreenNo.5、FD&COrangeNo.5、FD&CRedNo.8、焦糖和氧化鐵(黑色、紅色、黃色)，其它FD&C染料以及天然著色劑如葡萄皮提取物、紅甜菜粉末、β-胡蘿卜素、胭脂樹(shù)萃、胭脂紅、姜黃、紅辣椒粉、這些材料和組合以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它這種材料。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定劑”是指用于使活性成分在降低所述活性成分的治療活性的物理、化學(xué)或者生物化學(xué)過(guò)程中處于穩(wěn)定的化合物。合適的穩(wěn)定劑包括例如但不限于白蛋白、硅酸、肌酸酐、甘氨酸及其它氨基酸、煙酰胺、乙酰色氨酸鈉、氧化鋅、蔗糖、葡萄糖、乳糖、山梨醇、甘露醇、甘油、聚乙二醇、辛酸鈉和糖精鈉及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它穩(wěn)定劑。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“張力改性劑”是指可用于調(diào)節(jié)液體配制物張力的化合物。合適的張力改性劑包括甘油、乳糖、甘露醇、葡萄糖、氯化鈉、硫酸鈉、山梨醇、海藻糖及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它改性劑。實(shí)施例3和實(shí)施例6描述了舉例的膠囊劑型。實(shí)施例12描述了舉例的片劑劑型。本發(fā)明的組合物也可以包括油如不揮發(fā)油、花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油和橄欖油；脂肪酸如油酸、硬脂酸和異硬脂酸；以及脂肪酸酯如油酸乙酯、豆蔻酸異丙酯、脂肪酸甘油酯和乙酰脂肪酸甘油酯。所述組合物也可以包含醇如乙醇、異丙醇、棕櫚醇、甘油醇和丙醇；甘油縮酮如2，2_二甲基-1，3-二氧戊烷-4-甲醇；醚如聚乙二醇450；石油烴如礦物油和礦脂；水；藥物合適的表面活性劑、懸浮劑或者乳化劑；或者這些材料的混合物。應(yīng)理解藥物配制領(lǐng)域中使用的化合物通常有多種功能或者目的。因此，如果在本文指定的化合物僅提及一次或者用于定義一個(gè)以上的術(shù)語(yǔ)，其目的或者功能不應(yīng)僅限于指定的目的或者功能。所述配制物的一或多種成分可以其游離堿或者藥物學(xué)或者分析學(xué)可接受的鹽形式存在。如本文所用，“藥物學(xué)或者分析學(xué)可接受的鹽”是指這樣的化合物，其已經(jīng)根據(jù)需要通過(guò)與酸反應(yīng)形成離子化結(jié)合對(duì)而被修飾。舉例的可接受的鹽包括例如從無(wú)毒性無(wú)機(jī)酸或者有機(jī)酸中形成的常規(guī)的無(wú)毒性鹽。合適的無(wú)毒性鹽包括得自無(wú)機(jī)酸的那些鹽，所述無(wú)機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磺酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它無(wú)機(jī)酸。從有機(jī)酸中制備的鹽如氨基酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、順丁烯二酸、羥基順丁烯二酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、對(duì)氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、反丁烯二酸、甲基苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羥乙基磺酸及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它有機(jī)酸。其它合適的鹽可見(jiàn)于Remington'sPharmaceuticalSciences,17th.ed.,MackPub1ishingCompany,Easton,PA,1985,p.1418所示，相關(guān)揭示在此并入本文作參考。如本文所用，短語(yǔ)“藥物學(xué)可接受的”是指那些化合物、材料、組合物和/或劑型在合理的醫(yī)生判斷范圍內(nèi)適用于與人和動(dòng)物組織接觸，而無(wú)過(guò)分的毒性、刺激、變態(tài)反應(yīng)或者任何其它問(wèn)題或者并發(fā)癥，與合理的益處/危險(xiǎn)比率相稱。鑒于上述描述和下文實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員能不用過(guò)度實(shí)驗(yàn)而根據(jù)要求實(shí)施本發(fā)明。參考如下詳細(xì)描述本發(fā)明實(shí)施方案的制備程序的實(shí)施例可以更好地理解前文所述內(nèi)容。所有這些實(shí)施例只是為舉例說(shuō)明之目的。如下實(shí)施例不應(yīng)被理解為是詳盡的，而只是舉例說(shuō)明本發(fā)明涵蓋的一小部分實(shí)施方案。夾竹桃苷和MTT購(gòu)自SigmaChemicalCo.(St.Louis，MO)。BODIPY-夾竹桃苷、Mito-TrackerRedCM_H2)(ros、鈣熒光素乙酰氧基甲酯(CAM)和4，-6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)得自MolecularProbes-InvitrogenCorporation(Carlsbad,CA)?？?β-肌動(dòng)蛋白抗體也購(gòu)自Sigma。人胰腺癌細(xì)胞Panc_l，BxPC3,MiaPaca；人結(jié)腸癌細(xì)胞系CaC0_2，D0D-1,HCT-116,HT29，RKO和LST174；嚙齒動(dòng)物黑素瘤B16細(xì)胞；人乳腺癌細(xì)胞SUM149，MCF-7和MDA231；人口腔癌細(xì)胞SCC9和CAL-27；人卵巢癌ES3，TOVl120和SKOV細(xì)胞及人非小細(xì)胞肺癌A549和H1299細(xì)胞得自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(Manassas，VA)，在37°C保持在含有5%CO2的濕潤(rùn)環(huán)境中。人黑素瘤BRO細(xì)胞由StehlinFoundation(Houston,TX)惠贈(zèng)。將得自不同上皮來(lái)源的細(xì)胞系在補(bǔ)加10%熱失活的胎牛血清(FBS)HycloneLaboratoriesInc.，Logan,UT)、50IU/ml青霉素和50μg/ml鏈霉素以及得自GIBCO(Invitrogen)的2mML-谷氨酰胺的組織培養(yǎng)基(InvitrogenCorp.,GrandIsland，NY)(表1)中常規(guī)培養(yǎng)。實(shí)施例1對(duì)粉末狀?yuàn)A竹桃葉的超臨界流體提取方法A使用二氧化碳通過(guò)收獲、洗滌和干燥夾竹桃葉材料，然后利用如在美國(guó)專利No.5，236，132、5，598，979,6,517，015和6，715，705中描述的那些粉碎和脫水設(shè)備處理所述夾竹桃葉材料，由此制備粉末狀?yuàn)A竹桃葉。使用的起始材料的重量為3.94kg。將所述起始材料與純CO2在300巴(30MPa，4351psi)壓力和50°C(122°F)溫度下在提取裝置中組合。使用共197kg的C02，以提供溶劑與原材料比率為501。然后將CO2與原材料的混合物經(jīng)過(guò)分離裝置，該裝置改變混合物的壓力和溫度，并且從二氧化碳中分離提取物。獲得褐色的、粘稠的具有芳香氣味的提取物(65g)。所述顏色可能是由于葉綠素所致。對(duì)于提取物產(chǎn)量確定，將試管和分離儀器用丙酮沖洗，并且使丙酮蒸發(fā)，提供另外的9g提取物。提取物總量為74g。基于起始材料的重量，提取物的產(chǎn)量為1.88%。通過(guò)使用高壓液相層析和質(zhì)譜分析計(jì)算出提取物中夾竹桃苷的含量為560.lmg，或者產(chǎn)量為0.76%。方法B使用二氧化碳與乙醇的混合物通過(guò)收獲、洗滌和干燥夾竹桃葉材料，然后利用如在美國(guó)專利No.5，236，132、5，598，979,6,517，015和6，715，705中描述的那些粉碎和脫水設(shè)備處理所述夾竹桃葉材料，由此制備粉末狀?yuàn)A竹桃葉。使用的起始材料的重量為3.85kg。將所述起始材料與純CO2和作為改性劑的5%乙醇在280巴(28MPa，4061psi)壓力和50°C(122°F)溫度下在提取裝置中組合。使用共160kg的CO2和8kg乙醇，以提供溶劑與原材料比率為43.61。然后將CO2、乙醇與原材料的混合物經(jīng)過(guò)分離裝置，該裝置改變混合物的壓力和溫度，并且從二氧化碳中分離提取物。在除去乙醇后，獲得墨綠色的、粘稠的明顯含有一些葉綠素的提取物(207g)?；谄鹗疾牧系闹亓?，提取物的產(chǎn)量為5.38%。通過(guò)使用高壓液相層析和質(zhì)譜分析計(jì)算出提取物中夾竹桃苷的含量為1.89g，或者產(chǎn)量為2.1%。實(shí)施例2粉末狀?yuàn)A竹桃葉的熱水提取熱水提取典型用于從夾竹桃葉中提取夾竹桃苷及其它活性成分。舉例的熱水提取方法可見(jiàn)于美國(guó)專利No.5，135，745和5，869，060所述。使用5g粉末狀?yuàn)A竹桃葉進(jìn)行熱水提取。向粉末狀?yuàn)A竹桃葉中加入10體積的沸水(基于夾竹桃起始材料的重量)，將該混合物持續(xù)攪拌6小時(shí)。然后過(guò)濾該混合物，收集葉片殘?jiān)?，在相同條件下再次提取。組合過(guò)濾物并凍干。提取物的外觀為褐色。干燥的提取物材料重量為大約1.44g。將34.21mg所述提取物材料溶解于水中，使用高壓液相層析和質(zhì)譜分析進(jìn)行夾竹桃苷含量分析。確定夾竹桃苷的量為3.68mg?；谔崛∥锏牧浚?jì)算出夾竹桃苷產(chǎn)量為0.26%。下表示出實(shí)施例1的兩種超臨界二氧化碳提取與熱水提取之間的夾竹桃苷產(chǎn)量對(duì)比。產(chǎn)量對(duì)比實(shí)施例3:細(xì)胞系人胰腺癌細(xì)胞Panc_l，BxPC3,MiaPaca；人結(jié)腸癌細(xì)胞系CaC0_2，D0D-1,HCT-116,HT29，RKO和LST174；嚙齒動(dòng)物黑素瘤B16細(xì)胞；人乳腺癌細(xì)胞SUM149，MCF-7和MDA231；人口腔癌細(xì)胞SCC9和CAL-27；人卵巢癌ES3、T0V1120和SKOV細(xì)胞，或者人非小細(xì)胞肺癌A549和H1299細(xì)胞得自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(Manassas，VA)，將這些細(xì)胞維持在37°C含有5%CO2的濕潤(rùn)環(huán)境中。人黑素瘤BRO細(xì)胞由StehlinFoundation(Houston,TX)惠贈(zèng)。將衍生自不同上皮來(lái)源的細(xì)胞系在補(bǔ)加了10%熱失活的胎牛血清(FBS)(HycloneLaboratoriesInc.，Logan,UT)、50IU/ml青霉素和50μg/ml鏈霉素以及得自GIBCO(Invitrogen)的2mML-谷氨酰胺的組織培養(yǎng)基(InvitrogenCorp.，GrandIsland,NY)(表1)中常規(guī)培養(yǎng)。實(shí)施例4細(xì)胞毒性的體外確定將細(xì)胞在如下表所示其相應(yīng)培養(yǎng)基中以IXIO4個(gè)細(xì)胞/孔的密度生長(zhǎng)。在保溫24小時(shí)后，用不同濃度的夾竹桃苷(1-500ηΜ)處理細(xì)胞。再過(guò)72小時(shí)后，通過(guò)MTT測(cè)定法(23)評(píng)定細(xì)胞增殖抑制情況。使用V-MaxMicro-plateReaderbyMolecularDevices,Inc.(Sunnyvale,CA)，在570nm波長(zhǎng)及650nm參考波長(zhǎng)讀取吸光度。通過(guò)在使細(xì)胞生長(zhǎng)一段時(shí)間(例如24-72小時(shí))之后對(duì)比經(jīng)處理和未處理的細(xì)胞數(shù)目，可以獲得相對(duì)的細(xì)胞增殖的抑制程度，所述抑制是由于存在指定濃度的夾竹桃提取物或者含有強(qiáng)心苷化合物的其它植物提取物所致。注意=DMEM=Dulbecco，s修改的Eagle，s培養(yǎng)基；MEM=極限必需培養(yǎng)基；FBS=胎牛血清；NEAA=非必需氨基酸；EGF=表皮生長(zhǎng)因子。實(shí)施例5細(xì)胞吸收強(qiáng)心苷的確定在用夾竹桃苷的熒光類似物BODYPI-夾竹桃苷處理之后，通過(guò)熒光顯微鏡確定Panc-I(最高比率α3α1同種型)細(xì)胞和BxPC3細(xì)胞(較低比率α3α1)中夾竹桃苷和烏本苷的吸收情況。將96孔平板中的細(xì)胞用0、5、20和50ηΜ夾竹桃苷處理2小時(shí)或者24小時(shí)。在具有0.5%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中進(jìn)行處理。將細(xì)胞與MitoTrackerRedCM-H2XRos(1μΜ)和選擇性核染料DAPI(lng/ml)(MolecularProbes)同時(shí)保溫。使用OlympusIX-70倒置顯微鏡，通過(guò)熒光顯微鏡方法評(píng)定核形態(tài)、DNA和線粒體染料吸收情況。使用Quantix電荷耦合器相機(jī)和IPLabs軟件(Scanalytics，Inc.，F(xiàn)airfax,VA)獲得圖像。在培養(yǎng)層粘連蛋白包被細(xì)胞培養(yǎng)玻片上培養(yǎng)的以及用BODIBY-夾竹桃苷處理1小時(shí)的細(xì)胞中確定野生型及用α3siRNA轉(zhuǎn)染的Panc-I細(xì)胞中夾竹桃苷吸收情況的改變。實(shí)施例6:Na,K-ATP的α3和α1同種型表達(dá)的確定將細(xì)胞用冷卻的PBS洗滌，及在存在裂解緩沖液(20mMM0PS,2mMEGTA,5mMEDTA,30mMNaF,40mMβ-甘油磷酸，20mM丙酮酸鈉，0.5%TritonX-100和ImM原釩酸鈉與蛋白酶抑制劑混合物)的條件下刮下。然后將細(xì)胞裂解物在冰上超聲處理3分鐘，在4°C再保溫10分鐘，之后在14，000Xg(10分鐘，4°C)離心。通過(guò)BioRadDc蛋白質(zhì)測(cè)定(BioRad,Inc.，Hercules,CA)量化蛋白質(zhì)水平。將等水平的蛋白質(zhì)(50μg)應(yīng)用于預(yù)制凝膠(BioRad)，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法移至聚偏二氟乙烯膜上。在具有0.1%Tween20的Tris-緩沖鹽水中制備的5%脫脂乳封閉緩沖液中保溫1-2小時(shí)之后，用在封閉緩沖液中12，000稀釋的α3(AffinityBioreagents,Golden,CO)和α1(Upstate,LakePlacid,NY)同種型的一抗探查所述膜。使用ECL+檢測(cè)試劑盒和hyper-film(AmershamBiosciences,Piscataway,NJ)通過(guò)化學(xué)發(fā)光觀測(cè)蛋白質(zhì)條帶。通過(guò)Western印跡舉例說(shuō)明相等荷載的樣品的β-肌動(dòng)蛋白的存在。使用AlphaDigiDoc1000軟件(AlphaInnotechCorp.,SanLeandro,CA)量化蛋白質(zhì)條帶。實(shí)施例7皮膚相關(guān)疾病如癌癥的治療，包括但不限于黑素瘤、基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌，以及非癌炎癥性皮膚病，包括但不限于光化性角化病、銀屑病和濕疹的預(yù)防性治療。將SCF提取物給予患有惡性或者非惡性增殖性皮膚病如上述皮膚病的對(duì)象。所述SCF提取物作為乳液或者軟膏或者包含于皮膚貼片中給予對(duì)象，每單位劑量含有0.Olmg-IOmg的SCF提取物。給予對(duì)象每日三次單位劑量，共給予1_14天，或者直至所述皮膚病好轉(zhuǎn)。預(yù)期這種治療明顯減輕或者消除炎癥和導(dǎo)致疾病進(jìn)展的惡性過(guò)程。所述對(duì)象可能經(jīng)歷皮膚損害的嚴(yán)重性降低以及其自身皮膚疾病可能解決。預(yù)期惡性疾病的生長(zhǎng)速度降低或者疾病的嚴(yán)重性的增加得以抑制。預(yù)期已確定的惡性損害實(shí)際上得以消退。實(shí)施例8皮膚相關(guān)疾病如皮膚癌的預(yù)防將SCF提取物給予具有易患皮膚癌傾向的對(duì)象，所述對(duì)象如經(jīng)常暴露于紫外光(日光)或者化學(xué)致癌物質(zhì)的那些對(duì)象。所述SCF提取物作為乳液或者軟膏或者包含于皮膚貼片中給予對(duì)象，每單位劑量含有0.Ol-IOmg的SCF提取物。每當(dāng)預(yù)計(jì)暴露于促進(jìn)致癌的環(huán)境(暴露于日光)時(shí)，每天三次給予所述對(duì)象單位劑量。這種給予可例如制成遮光劑以阻斷日光UV暴露，且SCF提取物可用于防止皮膚組織中腫瘤誘導(dǎo)。預(yù)期SCF在護(hù)膚品中的這種應(yīng)用將阻斷惡性皮膚疾病或者非惡性皮膚疾病的形成和/或進(jìn)展，在這些疾病中，增殖導(dǎo)致疾病惡化(例如光化性角化病、銀屑病和/或濕疹)。實(shí)施例9人或者其它脊椎動(dòng)物中實(shí)體腫瘤的治療含有強(qiáng)心苷的植物或者動(dòng)物的SCF提取物可用于治療直腸癌、肛門癌、結(jié)腸直腸癌、頭頸癌、食管組織癌、肺癌(非小細(xì)胞癌及小細(xì)胞癌)、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、腎癌、膀胱癌、輸尿管癌、卵巢癌、類癌瘤、骨肉瘤、間皮瘤和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤。將SCF提取物給予患有如上述那些實(shí)體瘤的對(duì)象。所述SCF提取物以口服劑型給予，每單位劑量含有l(wèi)_50mg的SCF提取物。每日兩次給予所述對(duì)象單位劑量，每個(gè)治療周期為28天。也許需要三個(gè)治療周期。所述對(duì)象將經(jīng)歷腫瘤生長(zhǎng)增殖速度減慢或者消退。可能出現(xiàn)腫瘤完全消退。SCF提取物治療可用作唯一治療劑或者與細(xì)胞毒性化療或者放療組32合，或者可以與合適的免疫治療組合，而不導(dǎo)致不適當(dāng)?shù)馗蓴_常規(guī)治療的預(yù)期抗腫瘤效力。實(shí)施例10在兩個(gè)人腫瘤細(xì)胞系中使用超臨界CO2制成的Neriumoleander熱水提取物與SCF提取物的細(xì)胞毒性對(duì)比直接對(duì)比這兩種提取物的夾竹桃苷的細(xì)胞毒性潛力。盡管由于提取物中存在的夾竹桃苷濃度而導(dǎo)致其夾竹桃苷濃度不同，但是樣品含有相同量的夾竹桃苷。將BRO(人黑素瘤)和Panc-I(人胰腺癌)細(xì)胞(8XIO3/孔)鋪板于96孔平板中，使其生長(zhǎng)過(guò)夜。然后向細(xì)胞中加入藥物或者提取物。在保溫72小時(shí)后，通過(guò)結(jié)晶紫染色法評(píng)定相對(duì)細(xì)胞增殖情況(相對(duì)于對(duì)照的未處理細(xì)胞)。實(shí)施例11含有夾竹桃苷的溶液的HPLC分析使用如下條件在HPLC(Waters)上分析樣品(夾竹桃苷標(biāo)準(zhǔn)，SCF提取物和熱水提取物)=SymmetryC18column(5.Oym,150X4.6mmI.D.；Waters)；流動(dòng)相MeOHwater=5446(ν/ν)，流速=1.0ml/分鐘。檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)為217nm。通過(guò)將所述化合物或者提取物溶解于固定量的HPLC溶劑中制備樣品，達(dá)到適當(dāng)?shù)膴A竹桃苷靶濃度。實(shí)施例12SCF提取物的抗病毒活性評(píng)估該檢測(cè)包括確定夾竹桃提取物或者陽(yáng)性對(duì)照物(AZT)抑制人周圍血單核細(xì)胞(PBMC)中HIV-I的ROJO毒株增殖的相對(duì)能力。將感染的細(xì)胞暴露于所述藥物或者提取物48小時(shí)。該檢測(cè)用于確定相對(duì)于所述提取物能殺死人PBMC的濃度的夾竹桃提取物的IC5tl(提取物產(chǎn)生的使病毒增殖抑制50%的濃度)。實(shí)際上也就是確定所述提取物的治療指數(shù)。這主要是確定所述提取物是否能殺死HIV-I而不殺死PBMC細(xì)胞自身。觀測(cè)到針對(duì)病毒增殖的IC5tl為大約5.0μg/ml或更低，而殺死細(xì)胞需要的濃度在甚至高如100μg/ml的濃度還未達(dá)到，獲得的數(shù)據(jù)提示夾竹桃提取物應(yīng)可用于抑制HIV-I病毒增殖或者PBMC細(xì)胞內(nèi)病毒的感染性。實(shí)施例13用α3siRNA轉(zhuǎn)染Panc-I細(xì)胞將Panc-I細(xì)胞鋪板于6孔和48孔平板中，使其生長(zhǎng)過(guò)夜。根據(jù)廠商指導(dǎo)，使用siPORTAmineTransfectionAgent(AmbionAustin,TX)禾口0·4μMα3沉默RNA(SantaCruzBiotech.)進(jìn)行α3siRNA分子的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，將細(xì)胞用10_50nM夾竹桃苷處理48小時(shí)。從6孔平板中收集蛋白質(zhì)進(jìn)行Western印跡分析，通過(guò)CalcienAM染色進(jìn)行細(xì)胞生存力評(píng)定。實(shí)施例14正常結(jié)腸組織和結(jié)腸生物活檢組織中α3和α1表達(dá)的確定獲得新鮮冷凍的正常結(jié)腸粘膜和腫瘤組織生物活檢組織，使用液氮冷卻研缽研磨成粉。將樣品暴露于上述裂解緩沖液。然后將裂解物在冰上進(jìn)行超聲處理3分鐘，在4°C保溫10分鐘，及在14，OOOrpmdO分鐘，4°C)離心，隨后如先前所述對(duì)α-亞基的α3和α同種型進(jìn)行Western印跡分析。實(shí)施例15統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用Student'st檢驗(yàn)確定各個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；P<0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)施例16α3抗體敏感性確定為了對(duì)比不同的α3抗體的敏感性，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法將陽(yáng)性和陰性對(duì)照樣品的等量相同裂解物加樣于3個(gè)預(yù)制凝膠上(BioRad，Inc.，Hercules,CA)，然后移至聚偏二氟乙烯33膜上。在具有0.1%Tween20的Tris-緩沖鹽水(TBS-T)中制備的5%脫脂乳封閉緩沖液中保溫1-2小時(shí)之后，用在封閉緩沖液中12，000稀釋的α3抗體探查所述膜，所述α3抗體得自Sigma(StLuoise,MO)、AffinityBioreagents(Golden,CO)禾口Novus(Littleton,CO)。使用ChemiglowWest檢測(cè)試劑盒和AlphaImager(AlphaInnotechCorp.，SanLeandro，CA)，通過(guò)化學(xué)發(fā)光觀測(cè)蛋白質(zhì)條帶。使用AlphaDigiDoc1000軟件(AlphaInnotechCorp.，SanLeandro，CA)，量化并對(duì)比三個(gè)抗體之間的蛋白質(zhì)條帶。通過(guò)針對(duì)β-肌動(dòng)蛋白的Western印跡舉例說(shuō)明每種加樣的樣品。數(shù)據(jù)表明每種選擇的α3抗體的敏感性基本相同。*平均密度基于每個(gè)條帶的絕對(duì)密度除以通過(guò)AlphaDigiDoc1000量化的指定區(qū)域計(jì)算。實(shí)施例17進(jìn)行預(yù)后測(cè)定的試劑盒根據(jù)本發(fā)明的方法，這個(gè)試劑盒可用于通過(guò)使用Western印跡技術(shù)進(jìn)行預(yù)后測(cè)定，如實(shí)施例18詳細(xì)描述。1.裂解組合物2.一抗(在封閉溶液中12000稀釋)α3(AffinityBioreagentsCat#MA3-915)α1(UpstateCat#05_369)3.二抗山羊抗小鼠IgGHRP(SantaCruzCat#sc_2005)4.凝膠/膜制備7.5-10%凝膠(BioRadPrecast)BioRadLaemmli樣品緩沖液(Cat#161_0737)分子量標(biāo)記(Cat#161_0318)運(yùn)行緩沖液(BioRadIOXTris/glycine/SDS)(Cat#161-0732)膜(BioradPVDF)轉(zhuǎn)移緩沖液3.03gTris(終濃度_25mM)14.4g甘氨酸(終濃度-0.192mM)200ml甲醇(20%)直至ILH2O5.封閉溶液于TBS(20mMTrisHCl,150mMNaCl)中5%乳6.洗滌緩沖液TBS-T(20mMTrisHCl,150mMNaCl,0.05%Tween-20)8.陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞人胰腺癌Panc-I細(xì)胞的細(xì)胞裂解物9.陰性對(duì)照細(xì)胞小鼠黑素瘤B16細(xì)胞10.包括詳細(xì)描述α-亞基同種型的western印跡分析方案的說(shuō)明書(shū)。實(shí)施例18細(xì)胞組織的制備方法A從細(xì)胞團(tuán)中制備獲得含有2-4百萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)。用生理平衡溶液(PBS)沖洗以除去培養(yǎng)基。加入100μ1裂解緩沖液。總是保持冷卻(在冰上)。繼續(xù)在實(shí)施例18中的超聲步驟。方法B從平板上的細(xì)胞中制備使1.2-1.5百萬(wàn)個(gè)細(xì)胞在IOOmm組織培養(yǎng)平板上生長(zhǎng)24小時(shí)。小心地輕輕倒出及棄去細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基。將該平板用ImlPBS沖洗2次。加入100μ1裂解緩沖液，從平板刮下細(xì)胞，收集在試管中?？偸潜３掷鋮s(在冰上)。繼續(xù)實(shí)施例18中的超聲步驟。方法C:從組織中制備研磨冷凍的組織。將經(jīng)研磨的組織置于試管中。在最小的5mg研磨的組織中加入100μ1冷卻的裂解緩沖液?？偸潜３掷鋮s(在冰上)。繼續(xù)實(shí)施例18中的超聲步驟。實(shí)施例19通過(guò)Western印跡確定樣品中α-亞基同種型的含量如下程序只是其中本發(fā)明的方法可用于檢測(cè)和量化樣品中Na，K-ATP酶的α-亞基同種型含量的一種方式。可以根據(jù)需要修改步驟順序。Western印跡分析1.冷卻的同時(shí)對(duì)細(xì)胞裂解物進(jìn)行超聲處理，如使用冰浴保持冷卻。2.在4°C以14，OOOrpm旋轉(zhuǎn)裂解物10分鐘。3.收集上清，總是保持在冰上。4.通過(guò)蛋白質(zhì)測(cè)定確定蛋白質(zhì)水平。(見(jiàn)BioRad蛋白質(zhì)分析試劑盒說(shuō)明書(shū))5.制備樣品，基于蛋白質(zhì)分析加樣于凝膠上(50yg蛋白質(zhì)/孔)。a.與樣品一起制備陽(yáng)性和陰性對(duì)照裂解物。i.陽(yáng)性對(duì)照物Panc-I蛋白質(zhì)裂解物ii.陰性對(duì)照物PanC-2或者B16蛋白質(zhì)裂解物。b.向樣品和對(duì)照物中加入Iaemmli樣品緩沖液(LSB)(見(jiàn)LSB說(shuō)明書(shū))c.在95°C加熱樣品與對(duì)照物5分鐘。d.旋轉(zhuǎn)樣品。6.加樣凝膠7.在200伏特電壓下運(yùn)行凝膠，直至染料從凝膠底部去除。8.在100伏特轉(zhuǎn)移1-2小時(shí)。9.在室溫在封閉緩沖液中使膜封閉30分鐘至1小時(shí)。10.將該膜在4°C保溫過(guò)夜。11.用洗滌緩沖液洗滌該膜3次快速洗滌，1-15分鐘洗滌，2-10分鐘洗滌12.將該膜在室溫在II?？贵w中保溫45分鐘至1小時(shí)。13.用洗滌緩沖液洗滌該膜3次快速洗滌，1-15分鐘洗滌，2-10分鐘洗滌14.將該膜在ECL+(AmershamCat#RPN2132)中保溫5分鐘。15.將該膜曝光于膠片(AmershamCat#RPN3114k)，在膠片沖洗裝置上成像。16.使用Alpha成像儀使用AlphaDigiDoc軟件(或者你目前的成像儀)獲取曝光的膠片圖像。17.使用SpotDensoapplicationoftheAnalysistoolsinAlphaDigiDoc,選擇α1和α3圖像的相應(yīng)條帶。18.獲得每個(gè)條帶的累積光密度值(IDV)。19.計(jì)算α3同種型與α1同種型的比率。實(shí)施例20確定Na，K-ATP酶特定α亞基的mRNA的RT-PCR方法RNASTAT-60試劑(Tel-Test,Inc.，F(xiàn)riendswood,TX)用于提取總RNA,將其用DNaseI處理，之后用于逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)中。將IygRNA用小鼠乳腺腫瘤病毒RT(LifeTechnologies，Inc.，Rockville，MD)逆轉(zhuǎn)錄。通過(guò)引物系列α3-NKA3VSAS-2-F5‘-ΝΝΝΝΝΝΝΝΝΝ-3‘(正向)(SEQIDΝ0.3)和-R5'-NNNNNNNN-3‘(反向)擴(kuò)增α3_371bp序列。設(shè)計(jì)這些引物系列以及額外的引物系列，并且使用Oligo6.7MolecularBiologyInsights(Cascade，CO)核實(shí)。引物對(duì)(5'-CAGCTCTGGAGAACTGCTG-3‘(SEQIDNO.1)和5‘-GTGTACTCAGTCTCCACAGA-3‘(SEQIDN0.2))用于RT-PCR分析中，以檢測(cè)GAPDHmRNA。實(shí)施例21含有強(qiáng)心苷的提取物與其它抗癌藥物聯(lián)合治療轉(zhuǎn)移的胰腺胃泌素瘤的臨床評(píng)估下文是用含有強(qiáng)心苷的提取物治療轉(zhuǎn)移的胰腺胃泌素瘤患者的病歷。2002年8月30日在M.D.AndersonCancerCenter就診的懷疑患有胰腺疾病的63歲老年男性。CT掃描顯示胰尾腫塊。在2002年9月17日患者開(kāi)始自己服用含有強(qiáng)心苷_主要是夾竹桃苷_的實(shí)驗(yàn)藥物。在2002年10月9日，患者被診斷為患有高分化的胰腺胰島細(xì)胞腫瘤。建議患者進(jìn)行8個(gè)周期的阿霉素、str印tozocin和5-FU化療，隨后進(jìn)行3個(gè)周期str印tozocin和5-FU化療。在2002年11月13日，患者開(kāi)始建議的治療同時(shí)繼續(xù)自己服用含有夾竹桃苷的藥物。在2003年7月23日，患者結(jié)束建議的化療方案。其原始診斷無(wú)改變。在2003年7月23日之后，患者不再接受化療。在化療方案結(jié)束后，患者繼續(xù)自己服用含有強(qiáng)心苷的提取物。在2007年2月16日，患者被描述為具有放射學(xué)穩(wěn)定疾病(radiologicallystabledisease)?；颊呃^續(xù)自己服用含有強(qiáng)心苷如夾竹桃苷的提取物，Karnofsky評(píng)分結(jié)果為無(wú)癥狀及評(píng)分100分。實(shí)施例22含有強(qiáng)心苷的提取物治療腺癌的臨床評(píng)估一名35歲男性在進(jìn)食規(guī)律飲食之后出現(xiàn)腹部疼痛和腹脹。他在私人診所就診，對(duì)其進(jìn)行螺旋腹部計(jì)算機(jī)輔助X斷層掃描(CAT)。結(jié)論是其胰頭體積增大，胰腺實(shí)質(zhì)密度不均勻，以及在胰頭前方有多個(gè)病變淋巴結(jié)。磁共振成像(MRI)檢查證實(shí)這些發(fā)現(xiàn)。同一天進(jìn)行超聲輔助的細(xì)針穿刺活檢。超聲檢查證實(shí)在胰頭的39X33mm腫瘤。對(duì)生物活檢樣品進(jìn)行的組織病理學(xué)檢驗(yàn)顯示診斷為腺癌。建議進(jìn)行化療，但是患者拒絕。一個(gè)月后，患者開(kāi)始自己服用含有極少量夾竹桃苷的植物提取物治療劑。在一個(gè)月內(nèi)獲得的上腹部MR圖像證實(shí)對(duì)比之下胰頭上剩余的損害為35X25mm。也顯示出在胰頭前方以及胃竇背側(cè)的多個(gè)病變淋巴結(jié)，最大一個(gè)為5mm。在隨后三個(gè)月獲得的MRI圖像示出胰腺內(nèi)的腫瘤經(jīng)測(cè)量為30X25mm。此時(shí)增加含有少量夾竹桃苷的提取物的劑量。三周后進(jìn)行骨閃爍掃描。無(wú)明顯轉(zhuǎn)移腫瘤。七周后獲得的上腹部和下腹部MRI圖像證實(shí)胰頭內(nèi)的腫瘤和所有病變淋巴結(jié)均有消退跡象。兩個(gè)月后獲得的上腹部和下腹部MRI無(wú)明顯胰腺腺癌和/或淋巴結(jié)病變。四個(gè)月后進(jìn)行上腹部和下腹部MRI。持續(xù)表明無(wú)明顯胰腺腺癌和轉(zhuǎn)移腫瘤跡象。在2007年3月，患者持續(xù)表現(xiàn)為腫瘤消退。實(shí)施例23癌癥和腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)可以根據(jù)需要修改如下程序，以優(yōu)化特定癌癥和腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)。Panc-I人胰腺癌細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(Manassas，VA)。將細(xì)胞在補(bǔ)加10_15%胎牛血清(Invitrogen，Carlsbad,CA)U00U/ml青霉素(Invitrogen)和2.5μg/ml抗真菌劑(antimycotic)(Fungizone；Invitrogen)的DMEM培養(yǎng)基中在37°C在5%CO2中培養(yǎng)。在持續(xù)暴露于系列濃度的每種藥物72小時(shí)之后，確定夾竹桃苷和Adriamycin對(duì)于細(xì)胞增殖的相對(duì)抑制作用。如先前所述使用MTT測(cè)定(Mosmarm，1983)，用以評(píng)定相對(duì)于未處理的Panc-I細(xì)胞增殖的細(xì)胞生長(zhǎng)情況。將細(xì)胞暴露于未處理狀態(tài)(對(duì)照組)、夾竹桃苷或者多柔比星(Adriamycin)，72小時(shí)之后評(píng)定細(xì)胞生長(zhǎng)情況。實(shí)施例24細(xì)胞染色如下程序用于使用吖啶橙染色細(xì)胞。將細(xì)胞用1μg/ml吖啶橙在37°C染色15分鐘。用PBS洗滌細(xì)胞，從平板中用胰蛋白酶消化，收集在具有FBS的PBS中，以及通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)分析。實(shí)施例25細(xì)胞周期分析使用如下程序確定細(xì)胞周期。將Panc-I細(xì)胞用夾竹桃苷(0、20和40μΜ)處理72小時(shí)，經(jīng)胰蛋白酶消化，在4°C用70%乙醇固定，使用細(xì)胞DNA流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)試劑系列(Roche)用碘化丙啶染色，然后通過(guò)FACScan(BectonDickinson,SanJose，CA)分析DNA含量。通過(guò)CellQuest軟件(BectonDickinson)分析數(shù)據(jù)。每個(gè)樣品至少分析100，000個(gè)細(xì)胞。實(shí)施例26含有強(qiáng)心苷的提取物治療非小細(xì)胞肺癌的臨床評(píng)估一名81歲男性被診斷為患有肺左上葉非小細(xì)胞肺癌。建議患者進(jìn)行放療，隨后進(jìn)行化療。七周之后，患者開(kāi)始放療，24天內(nèi)完成治療。然后患者開(kāi)始進(jìn)行5次化療，每次化療6天內(nèi)完成，8個(gè)月后完成化療。在完成化療之前27天，重現(xiàn)(restaging)先前左上葉非小細(xì)胞肺癌診斷。進(jìn)行全身PET掃描，確定大面積異常過(guò)度代謝活性涉及左上葉，與患者已知惡性一致。此外，涉及右肺門和前縱隔的敏感(subtle)過(guò)度代謝活性區(qū)域很可能反映累及淋巴結(jié)。胸部CT掃描證實(shí)左上葉中5cm的軟組織密度影像。隨后開(kāi)始化療方案。在一個(gè)月內(nèi)，由于患者的不耐受而停止化療。一周后，進(jìn)行胸部CT掃描以進(jìn)行對(duì)比。在左上葉背側(cè)肺段中存在大約4cm的軟組織團(tuán)塊。左上葉腫瘤團(tuán)塊總體體積間歇減小。在五周內(nèi)，患者開(kāi)始自己服用含有夾竹桃苷的植物提取物。三個(gè)月后，繼續(xù)將胸部PA&Lateral與先前的掃描結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，左上葉中腫瘤團(tuán)塊密度無(wú)變化。一年后，將胸部PA&Lateral與三個(gè)月前的掃描結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，確定在肺門上方左上葉中測(cè)量大約4em的腫瘤團(tuán)塊密度無(wú)變化?；颊呃^續(xù)自己服用含有夾竹桃苷的植物提取物。在四個(gè)月內(nèi)，使用靜脈內(nèi)注射造影劑進(jìn)行胸部CT掃描。觀測(cè)到左上葉中心團(tuán)塊(centralmass)大小縮小大約20%。目前患者繼續(xù)自己服用含有夾竹桃苷的植物提取物，且報(bào)道高Karnofsky評(píng)分。臨床數(shù)據(jù)提示所述植物提取物具有治療益處，因?yàn)樵诨颊咦詈蟮幕熤髱讉€(gè)月出現(xiàn)中心團(tuán)塊大小改變。實(shí)施例27通過(guò)免疫組織化學(xué)染色確定樣品中α-亞基同種型含量如下程序只是其中本發(fā)明的方法可用于檢測(cè)和量化樣品中Na，K_ATP酶的α亞基同種型含量的另一種方式。可以根據(jù)需要改變步驟順序。這個(gè)測(cè)定中使用的材料可以得自VectorLaboratories(Burlingame，CAorPeterborough，England)0免疫組織化學(xué)分析使用新鮮冷凍的人體組織。將切片用二甲苯脫蠟3次(每次5分鐘)，在遞減乙醇系列中再水合(99%X2,90%X2，每次5分鐘)，在蒸餾水中徹底沖洗。通過(guò)將切片在SIf(Vectorantigenunmaskingsolution)(Vector-AMS)ψ^ι^ρΗ(VectorLaboratoriesCatalog#H_3301)下保溫3X5分鐘完成加熱介導(dǎo)的抗原修復(fù)。在抗原修復(fù)之后，將切片在50mMTrisHCl、300mMNaCl,0.1%,ρΗ7.6(TBS)中洗滌2X5分鐘。將切片在于甲醇中0.3%9v/v)過(guò)氧化氫中保溫20分鐘及隨后在TBS中洗滌10分鐘，由此猝滅內(nèi)源過(guò)氧化物活性。將切片與在于TBS中的2.5%(ν/ν)正常馬血清(2.5%NHS)中稀釋的4μg/ml抗-Na,K-ATP酶α3亞基同種型抗體(Sigma-AldrichCat#A273)保溫1小時(shí)。陰性對(duì)照切片與4μg/ml非免疫小鼠IgGl抗體(BiostatDiagnostics,Cat#093101)或者在2.5%NHS(無(wú)一抗對(duì)照物)中保溫。在TBS中洗滌2X5分鐘后，將切片與VectorImmPress通用抗體試劑(抗兔IgG與抗小鼠IgG試劑的混合物；VectorLaboratoriesLtd.，Cat測(cè)P-7500)保溫30分鐘。然后將切片洗滌2X5分鐘，并且與二氨基聯(lián)苯胺(DAB)底物保溫，監(jiān)測(cè)直至產(chǎn)生合適水平染色。通過(guò)將該切片浸入蒸餾水中而終止生色反應(yīng)。38在生色之后，將切片用蘇木精復(fù)染，在遞增乙醇系列(90-99-100%)中脫水，經(jīng)過(guò)兩次二甲苯澄清，在DePeX下蓋玻片。包括證實(shí)結(jié)腸粘膜中cytokeratin免疫反應(yīng)性的分析對(duì)照物，以確認(rèn)ImmPress和生色試劑。包括“無(wú)一抗(noprimary)”對(duì)照物以評(píng)定二抗與其它分析試劑的非特異性結(jié)合。分析染色的切片，使用具有LeicaDFC290相機(jī)的OlympusBX51顯微鏡獲取合適的數(shù)字圖像。免疫組織化學(xué)染色的細(xì)胞的照片在圖6A-6F和7A-7H中示出?？梢匀绫疚乃鰧?duì)所述亞基同種型進(jìn)行量化。在確定樣品中α3同種型與α同種型的比率之后，確定對(duì)于強(qiáng)心苷治療的治療應(yīng)答的可能性。上文詳細(xì)描述了本發(fā)明的特殊實(shí)施方案。應(yīng)意識(shí)到盡管在此舉例描述了本發(fā)明的特定實(shí)施方案，但是在不偏離本發(fā)明精神和范圍內(nèi)可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修改。因此，本發(fā)明除了所附權(quán)利要求書(shū)限制之外不受其它限制。根據(jù)本文揭示，可以不用過(guò)分實(shí)驗(yàn)而制成和實(shí)施本文揭示和要求的所有實(shí)施方案。權(quán)利要求用于預(yù)測(cè)具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)對(duì)于強(qiáng)心苷或者包含強(qiáng)心苷的組合物治療的體內(nèi)治療應(yīng)答的體外預(yù)后測(cè)定，所述測(cè)定包括確定樣品中Na，KATP酶α亞基的α3同種型與α1同種型的比率，所述樣品直接或者間接得自患有具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的對(duì)象的患病體內(nèi)細(xì)胞組織，所述樣品包含Na，KATP酶的α亞基一或多個(gè)同種型；以及確定如果對(duì)象用治療相關(guān)劑量的強(qiáng)心苷治療時(shí)對(duì)象中治療應(yīng)答的概率。2.權(quán)利要求1的測(cè)定，其進(jìn)一步包括如果所述比率高于或者等于至少1，則預(yù)示所述細(xì)胞組織對(duì)于強(qiáng)心苷治療具有治療應(yīng)答。3.權(quán)利要求1的測(cè)定，其進(jìn)一步包括如果所述比率在0.5-1.0范圍內(nèi)，則預(yù)示所述細(xì)胞組織對(duì)于強(qiáng)心苷治療具有至少部分治療應(yīng)答。4.權(quán)利要求1的測(cè)定，其進(jìn)一步包括如果所述比率低于0.3，則預(yù)示所述細(xì)胞組織對(duì)于強(qiáng)心苷治療基本無(wú)治療應(yīng)答。5.權(quán)利要求1的測(cè)定，其進(jìn)一步包括預(yù)示α-亞基同種型比率在1-100范圍內(nèi)的疾病組織與α-亞基同種型比率低于1的相應(yīng)組織相比更具治療應(yīng)答。6.權(quán)利要求1的測(cè)定，其進(jìn)一步包括預(yù)示僅具有可檢測(cè)的α3同種型而無(wú)可檢測(cè)的α1同種型的那些組織對(duì)于強(qiáng)心苷具有最大治療應(yīng)答。7.權(quán)利要求1的測(cè)定，其進(jìn)一步包括如果所述比率>2，則預(yù)示所述細(xì)胞組織對(duì)于強(qiáng)心苷治療具有至少部分治療應(yīng)答。8.權(quán)利要求1的測(cè)定，其進(jìn)一步包括如果所述比率>10，則預(yù)示所述細(xì)胞組織對(duì)于強(qiáng)心苷治療具有至少部分治療應(yīng)答。9.權(quán)利要求1的測(cè)定，其進(jìn)一步包括如果所述比率>25，則預(yù)示所述細(xì)胞組織對(duì)于強(qiáng)心苷治療具有至少部分治療應(yīng)答。10.權(quán)利要求1的測(cè)定，其進(jìn)一步包括如果所述比率>75，則預(yù)示所述細(xì)胞組織對(duì)于強(qiáng)心苷治療具有至少部分治療應(yīng)答。11.權(quán)利要求1的測(cè)定，其中至少部分治療應(yīng)答的概率如下表所示與Na，K-ATP酶的α3同種型與α1同種型的比率相關(guān)12.權(quán)利要求1的測(cè)定，其中確定比率的步驟包括量化體外樣品或者生物活檢組織樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的每一種的表達(dá)水平，并計(jì)算其比率。13.權(quán)利要求1的測(cè)定，其中確定比率的步驟包括確定體外樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型相對(duì)于Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的每一種的量，并計(jì)算其比率。14.權(quán)利要求1的測(cè)定，其進(jìn)一步包括對(duì)從中確定所述比率的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。15.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的測(cè)定，其中所述治療應(yīng)答是完全治療應(yīng)答。16.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的測(cè)定，其中所述樣品是細(xì)胞組織、細(xì)胞團(tuán)、細(xì)胞裂解物、從這些材料中制備的膜制備物，或者其固定的組織病理學(xué)切片。17.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的測(cè)定，其中所述樣品是體外樣品。18.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的測(cè)定，其中所述樣品包含Na，K-ATP酶的α亞基的至少兩個(gè)同種型。19.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的測(cè)定，其中所述樣品包含Na，K_ATP酶的α亞基的至少α1和α3同種型。20.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的測(cè)定，其進(jìn)一步包括裂解或者破壞細(xì)胞、組織或者生物活檢組織樣品；或者固定來(lái)自患病體內(nèi)細(xì)胞組織的用于進(jìn)行組織病理學(xué)檢驗(yàn)的組織切片以形成樣品。21.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的測(cè)定，包括對(duì)樣品進(jìn)行Western印跡分析和/或免疫組織化學(xué)染色分析，以確定樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型相對(duì)于Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的量和相對(duì)表達(dá)水平；并計(jì)算其比率。22.權(quán)利要求1-14和21任一項(xiàng)的測(cè)定，包括對(duì)凝膠進(jìn)行放射分析或光密度分析，以確定樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型相對(duì)于Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的含量。23.權(quán)利要求1-14和21任一項(xiàng)的測(cè)定，包括對(duì)凝膠進(jìn)行放射分析或光密度分析，以檢測(cè)樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的存在并定量其含量。24.權(quán)利要求1-14和21任一項(xiàng)的測(cè)定，進(jìn)一步包括對(duì)比所述樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的含量相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照樣品和/或陰性對(duì)照樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和/或Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的含量。25.權(quán)利要求1-14和21任一項(xiàng)的測(cè)定，進(jìn)一步包括對(duì)比組織樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的含量和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的含量，其中已知僅存在α3和α1亞基之一的表達(dá)作為對(duì)照。26.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的測(cè)定，其中患病細(xì)胞組織得自對(duì)象，如哺乳動(dòng)物。27.權(quán)利要求26的測(cè)定，其中患病細(xì)胞組織得自人、牛、狗、貓、馬、豬或者其它馴養(yǎng)動(dòng)物(無(wú)論有無(wú)商業(yè)價(jià)值)。28.權(quán)利要求1_14、21或者26任一項(xiàng)的測(cè)定，其中具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)是癌癥或者腫瘤或者其它對(duì)于人或動(dòng)物的生活質(zhì)量具有不利影響的增殖性疾病。29.權(quán)利要求28的測(cè)定，其中所述癌癥或者腫瘤選自結(jié)腸直腸癌、頭頸部癌、腎上腺皮質(zhì)癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、骨轉(zhuǎn)移、骨肉瘤、腦癌、乳腺癌、宮頸癌、非霍奇金淋巴瘤、直腸癌、食管癌、眼癌、膽囊癌、胃腸道類癌腫瘤、妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病、霍奇金病、卡波西肉瘤、腎癌、喉和下咽癌、肝癌、肺癌(非小細(xì)胞癌及小細(xì)胞癌)、肺類癌腫瘤、惡性間皮瘤、轉(zhuǎn)移癌、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓發(fā)育異常綜合征、鼻腔及副鼻竇癌、鼻咽癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、口腔及口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、陰莖癌、垂體癌、前列腺癌、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺癌、甲狀腺癌、輸尿管癌癥；子宮肉瘤、陰道癌、外陰癌或者Wilm’s瘤。30.權(quán)利要求28的測(cè)定，其中癌癥選自前列腺癌、肺癌、乳腺癌、犬骨肉瘤(由人骨肉瘤推論)、人腦癌(多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)和人結(jié)腸癌。31.權(quán)利要求1_14、21、26或者28任一項(xiàng)的測(cè)定，進(jìn)一步包括鑒別具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的對(duì)象。32.權(quán)利要求31的測(cè)定，進(jìn)一步包括從對(duì)象獲得患病細(xì)胞的樣品。33.權(quán)利要求1-14、21、26、28、31或者32的測(cè)定，進(jìn)一步包括具體說(shuō)明如何進(jìn)行Na,K-ATP酶的α-亞基的α1和α3同種型分析的信息。34.權(quán)利要求1_14、21、26、28、31、32或者33任一項(xiàng)的測(cè)定，進(jìn)一步包括詳細(xì)描述如何解釋預(yù)后數(shù)據(jù)的信息。35.權(quán)利要求1_14、21或者26的測(cè)定，其中具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)選自1)自身免疫疾病如抗原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎和變應(yīng)性腦脊髓炎；2)慢性炎性增生性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)作幼年性慢性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松和銀屑??；3)乳腺增生性疾病包括囊性纖維?。?)前列腺增生性疾病包括良性前列腺增生(BPH)；5)眼增生性疾病包括增生性糖尿病視網(wǎng)膜??；以及6)血管增生性疾病包括動(dòng)脈粥樣硬化和冠狀動(dòng)脈狹窄。36.權(quán)利要求1_14、21、26、28或者35的測(cè)定，其中所述強(qiáng)心苷以純的形式存在，其可通過(guò)對(duì)植物或者動(dòng)物來(lái)源進(jìn)行提取而產(chǎn)生或是通過(guò)化學(xué)修飾可利用的強(qiáng)心苷合成或者生產(chǎn)的。37.權(quán)利要求36的測(cè)定，其中所述強(qiáng)心苷以提取物形式存在。38.權(quán)利要求37的測(cè)定，其中所述強(qiáng)心苷提取物是通過(guò)超臨界流體(SCF)提取技術(shù)任選在存在改性劑的條件下制備的。39.權(quán)利要求38的測(cè)定，其中SCF提取物進(jìn)一步包含除了強(qiáng)心苷之外的至少一種其它的藥物學(xué)活性劑。40.權(quán)利要求39的測(cè)定，其中當(dāng)將所述提取物給予對(duì)象時(shí)，所述其它活性劑可有助于強(qiáng)心苷的治療效力。41.權(quán)利要求40的測(cè)定，其中所述其它活性劑附加性或協(xié)同地有助于強(qiáng)心苷的治療效力。42.權(quán)利要求36-40或41的測(cè)定，其中所述強(qiáng)心苷存在于藥物配制物或者組合物中。43.權(quán)利要求36-40或41的測(cè)定，其中所述強(qiáng)心苷選自?shī)A竹桃苷、烏本苷、蟾毒靈、毛地黃毒苷、地高辛、華蟾毒素、華蟾毒配基和酯蟾毒配基。44.權(quán)利要求36-40或41的測(cè)定，其中所述強(qiáng)心苷得自?shī)A竹桃植物。45.權(quán)利要求44的測(cè)定，其中所述夾竹桃植物包括Nerium種，如NeriumοIeande；或者Thevetia禾中，如Thevetianerifolia。46.權(quán)利要求36-40或41的測(cè)定，其中所述提取物得自蟾蜍皮膚或者其分泌物。47.適用于進(jìn)行預(yù)后測(cè)定的試劑盒，所述試劑盒包含a)第一種一抗，其具有Na，K-ATP酶的α3亞基同種型結(jié)合親和性；和b)第二種一抗，其具有Na，K-ATP酶的α1亞基同種型結(jié)合親和性。48.權(quán)利要求47的試劑盒，其中所述試劑盒適用于進(jìn)行Western印跡凝膠電泳分析，或者所述試劑盒適用于進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色分析。49.權(quán)利要求47或者48的試劑盒，其進(jìn)一步包含a)裂解組合物；b)包含Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的陽(yáng)性對(duì)照樣品；c)包含Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的陽(yáng)性對(duì)照樣品；d)包含Na，K-ATP酶的α1亞基同種型及排除Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的陰性對(duì)照樣品；e)二抗，山羊抗小鼠IgG-HRP(其可用于例如顯示感興趣的蛋白質(zhì))；f)適于凝膠電泳分析的凝膠形成材料；g)放射標(biāo)記的標(biāo)記物；h)試劑盒及進(jìn)行預(yù)后測(cè)定的說(shuō)明；i)光密度計(jì)或者輻射計(jì)；j)水性液體介質(zhì)；k)凝膠/膜制備試劑盒；1)封閉溶液；m)洗滌緩沖液；η)包含Western印跡分析試劑盒的材料；或者ο)上述材料的組合。50.權(quán)利要求47-49任一項(xiàng)的試劑盒，其中第一種一抗對(duì)于Na，K-ATP酶的α3亞基同種型具有特異性結(jié)合親和性。51.權(quán)利要求47-50任一項(xiàng)的試劑盒，其中第二種一抗對(duì)于Na，K-ATP酶的α1亞基同種型具有特異性結(jié)合親和性。52.權(quán)利要求47-51任一項(xiàng)的試劑盒，其中二抗是山羊α小鼠IgG辣根過(guò)氧化物酶，或者包含來(lái)自除小鼠之外的其它物種的附著有適合的標(biāo)記諸如辣根過(guò)氧化物酶的抗小鼠IgG的其它二抗。53.權(quán)利要求47-52任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述一抗是單克隆抗體。54.權(quán)利要求49-53任一項(xiàng)的試劑盒，其中陽(yáng)性對(duì)照樣品選自組織、細(xì)胞團(tuán)、細(xì)胞裂解物以及從通過(guò)生物活檢或者其它手術(shù)切除方式可以獲得的這些材料中制備的膜制備物。55.權(quán)利要求49-54任一項(xiàng)的試劑盒，其中陰性對(duì)照樣品選自組織、細(xì)胞團(tuán)或者細(xì)胞裂解物以及從不含有Na，K-ATP酶的α-亞基的α3同種型的這些材料中制備的膜制備物。56.權(quán)利要求55的試劑盒，其中陰性對(duì)照包含嚙齒動(dòng)物(小鼠或大鼠)腫瘤組織或者在體外生長(zhǎng)的小鼠或大鼠細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)。57.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的發(fā)明，包含確定相對(duì)Na，K-ATP酶α-亞基組合物和同種型比率的可選方式，其中所述可選方式包括在ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)或者蛋白質(zhì)組織或者細(xì)胞裂解物陣列中使用抗體；使用Northern印跡分析及相關(guān)技術(shù)(例如rtPCR)測(cè)量不同Na，K-ATP酶亞基同種型的mRNA；或者使用免疫組織化學(xué)染色分析。58.使用包含強(qiáng)心苷的組合物治療對(duì)象中具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的方法，所述方法包括a)確定樣品中Na，K_ATP酶的α亞基的α3同種型與α1同種型的比率，所述樣品直接或者間接得自患有具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的對(duì)象的患病體內(nèi)細(xì)胞組織，所述樣品包含Na，K-ATP酶的α亞基的一或多個(gè)同種型；b)如果所述比率>0.3，則提示給予該對(duì)象包含強(qiáng)心苷的組合物。59.使用包含強(qiáng)心苷的組合物治療對(duì)象中具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的方法，所述方法包括a)從對(duì)象中獲得患病組織的樣品，所述疾病具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W，所述樣品包含Na，K-ATP酶的α亞基的一或多個(gè)同種型；b)確定樣品中Na，K-ATP酶的α亞基的α3同種型與α1同種型的比率；c)如果所述比率>0.3，則提示給予該對(duì)象包含強(qiáng)心苷的組合物。60.權(quán)利要求58或59的方法，其中開(kāi)出處方并給予所述對(duì)象治療相關(guān)劑量的包含強(qiáng)心苷的組合物。61.權(quán)利要求60的方法，其中根據(jù)處方劑量給藥方案給予所述對(duì)象包含強(qiáng)心苷的組合物。62.權(quán)利要求61的方法，其中給予所述對(duì)象含有包含強(qiáng)心苷的提取物的組合物。63.權(quán)利要求62的方法，其中所述提取物進(jìn)一步包含一或多種其它治療有效的藥劑。64.權(quán)利要求58-63任一項(xiàng)的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含一或多種其它治療有效的藥劑。65.權(quán)利要求58-64任一項(xiàng)的方法，其中給予所述對(duì)象包含強(qiáng)心苷的植物或者動(dòng)物來(lái)源的熱水提取物。66.權(quán)利要求65的方法，其中給予所述對(duì)象2mg-22.5mg強(qiáng)心苷/天。67.權(quán)利要求58-64任一項(xiàng)的方法，其中給予所述對(duì)象包含0.6-4.8mg強(qiáng)心苷的植物或者動(dòng)物來(lái)源的超臨界流體提取物。68.權(quán)利要求58-64任一項(xiàng)的方法，其中給予所述對(duì)象包含10-500μg純強(qiáng)心苷的組合物。69.確定患有具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的對(duì)象中這種疾病或失調(diào)對(duì)于強(qiáng)心苷治療產(chǎn)生至少部分治療應(yīng)答的概率的方法，所述方法包括a)確定樣品中Na，K-ATP酶的α3同種型與α1同種型比率，所述樣品直接或者間接得自對(duì)象的患病細(xì)胞組織，所述樣品包含Na，K-ATP酶的α亞基的一或多個(gè)同種型；b)確定如果對(duì)象用治療相關(guān)劑量的強(qiáng)心苷治療時(shí)對(duì)象中治療應(yīng)答的概率，其中至少部分治療應(yīng)答的概率如下表所示與Na，K-ATP酶的α3同種型與α1同種型的比率相關(guān)70.權(quán)利要求69的方法，其中確定所述比率的步驟包括量化體外樣品或者生物活檢組織樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的每一個(gè)的表達(dá)水平，并計(jì)算其比率。71.權(quán)利要求70的方法，進(jìn)一步包括對(duì)從中確定所述比率的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。72.權(quán)利要求71的方法，進(jìn)一步包括裂解或者破壞細(xì)胞、組織或者生物活檢組織樣品；或者固定來(lái)自患病體內(nèi)細(xì)胞組織的用于進(jìn)行組織病理學(xué)檢驗(yàn)的組織切片以形成樣品。73.權(quán)利要求72的方法，包括對(duì)所述樣品進(jìn)行Western印跡分析或者免疫組織化學(xué)染色分析，以確定樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的量及相對(duì)表達(dá)水平；并計(jì)算其比率。74.權(quán)利要求73的方法，進(jìn)一步包括對(duì)比所述樣品中Na，K_ATP酶的α3亞基同種型和Na，K_ATP酶的α1亞基同種型的含量與陽(yáng)性對(duì)照樣品和/或陰性對(duì)照樣品中Na，K_ATP酶的α3亞基同種型和/或Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的含量。75.權(quán)利要求74的方法，進(jìn)一步包括鑒別患有具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的對(duì)象。76.權(quán)利要求75的方法，進(jìn)一步包括從所述對(duì)象中獲得患病細(xì)胞的樣品。77.權(quán)利要求76的方法，進(jìn)一步包括提供闡明如何進(jìn)行Na，K-ATP酶的α-亞基的α同種型和α3同種型分析的信息。78.權(quán)利要求77的方法，進(jìn)一步包括提供詳細(xì)說(shuō)明如何解釋預(yù)后數(shù)據(jù)的信息。79.權(quán)利要求73的方法，其中Western印跡分析包括a)第一種一抗，其具有Na，K-ATP酶的α3亞基同種型的結(jié)合親和性；b)第二種一抗，其具有Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的結(jié)合親和性。80.權(quán)利要求74的方法，包括進(jìn)行凝膠放射分析或光密度分析，以確定樣品中Na，K-ATP酶的α3亞基同種型和Na，K-ATP酶的α1亞基同種型的含量；確定所述樣品中存在的α3同種型與α1同種型的比率。81.權(quán)利要求73的方法，其中所述免疫組織化學(xué)染色分析包含a)抗原解掩蔽溶液；b)緩沖液；c)內(nèi)源過(guò)氧化物活性猝滅材料；d)抗-Na，K-ATP酶α3亞基同種型抗體和抗-Na，K-ATP酶α1亞基同種型抗體；e)非免疫小鼠IgGl抗體；f)包含抗兔IgG和抗小鼠IgG試劑的混合物的通用抗體試劑；g)初級(jí)化學(xué)染色劑；h)通用復(fù)染化學(xué)染色劑；i)特殊細(xì)胞器官染色劑；或者j)前述兩或多種的組合。82.權(quán)利要求81的方法，包括a)提供哺乳動(dòng)物組織樣品；b)對(duì)樣品中存在的Na，K-ATP酶的α-亞基的α3同種型和α1同種型進(jìn)行免疫化學(xué)染色；c)確定樣品中Na，K-ATP酶的α3同種型和Na，K-ATP酶的α1同種型的含量；d)確定樣品中存在的α3同種型與α1同種型的比率。83.權(quán)利要求69、73、79或者81的方法，其中具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)選自以下疾病組成的組1)自身免疫疾病，如抗原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎和變應(yīng)性腦脊髓炎；2)慢性炎性增生性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)作幼年性慢性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松和銀屑?。?)乳腺增生性疾病，包括囊性纖維??；4)前列腺增生性疾病，包括良性前列腺增生(BPH)；5)眼增生性疾病，包括增生性糖尿病視網(wǎng)膜??；6)血管增生性疾病，包括動(dòng)脈粥樣硬化和冠狀動(dòng)脈狹窄；7)癌癥；和/或8)腫瘤。84.權(quán)利要求83的方法，其中所述強(qiáng)心苷選自?shī)A竹桃苷、烏本苷、蟾毒靈、毛地黃毒苷、地高辛、華蟾毒素、華蟾毒配基和酯蟾毒配基組成的組。全文摘要本發(fā)明提供了預(yù)后測(cè)定和試劑盒及其使用方法。所述試劑盒和測(cè)定用于確定具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的患病細(xì)胞或者組織對(duì)于強(qiáng)心苷治療的治療應(yīng)答的可能性。所述試劑盒和測(cè)定用于確定得自患病細(xì)胞或者組織的Na，K-ATP酶的α亞基的同種型比率。所述試劑盒可用于預(yù)測(cè)對(duì)象中癌癥或者腫瘤對(duì)于強(qiáng)心苷治療的治療應(yīng)答。所述試劑盒和測(cè)定可以摻入用含有強(qiáng)心苷的組合物治療具有與過(guò)量細(xì)胞增殖相關(guān)的病因?qū)W的疾病或失調(diào)的方法中。文檔編號(hào)A61K31/58GK101909637SQ200880123615公開(kāi)日2010年12月8日申請(qǐng)日期2008年11月6日優(yōu)先權(quán)日2007年11月13日發(fā)明者O·C·阿丁頓,P·楊,R·A·紐曼申請(qǐng)人:菲尼克斯生物技術(shù)公司