專利名稱：從構(gòu)樹葉中提取一種黃酮類物質(zhì)在制備抗皮膚真菌感染藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別一種從構(gòu)樹葉中提取一種黃酮類物質(zhì)在制備抗 皮膚真菌感染藥物的應(yīng)用。
二背景技術(shù)：
構(gòu)樹葉來源于?？茦?gòu)屬植物構(gòu)樹(Broussonetia papyrifera (Ll)Vent .)的葉
片，構(gòu)樹葉又名構(gòu)葉、谷樹葉，性味甘、涼，功效清熱涼血，收斂利濕。 通常用于鼻衄、吐血、崩漏、腸炎、痢疾、白濁、濕疹，歷代本草及民間用藥 均表明其具有治療皮膚病，如皮癬、濕癢、癬瘡等功效，《本草綱目》云"去 風(fēng)濕腫脹……，癬瘡"，皮膚真菌感染是一種常見病癥，有人研究發(fā)現(xiàn)，構(gòu)樹葉 乙醇提取物具有抗真菌感染的作用，提示構(gòu)樹葉中的生物堿、苷類及苷元、萜 類等極性較強(qiáng)的物質(zhì)具有抗菌活性，隨著菌株的變異和耐藥性的增強(qiáng)，加之化 學(xué)藥物本身的副作用，使化學(xué)藥物的應(yīng)用受到了限制，從而使眾多學(xué)者對(duì)中草 藥抗真菌進(jìn)行了大量研究，但至今未見有從構(gòu)樹葉中提取黃酮類物質(zhì)用于制備 抗皮膚真菌感染藥物的報(bào)導(dǎo)。構(gòu)樹在我國(guó)分布十分廣泛，藥材來源充足，那么 能否從構(gòu)樹葉中提取用于研制出新的抗皮膚真菌感染的藥物呢？如能成功，不 但可以充分利用資源，減少皮膚病患者的痛苦，還可以創(chuàng)造出更大經(jīng)濟(jì)效益和 社會(huì)效益。
三
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述情況，本發(fā)明之目的就是提供一種從構(gòu)樹葉中提取一種黃酮類物 質(zhì)在制備抗皮膚真菌感染藥物的應(yīng)用，可有效用于制備抗皮膚真菌感染的藥物， 解決抗皮膚真菌感染的藥物問題，其解決的技術(shù)方案是，取構(gòu)樹葉，粉碎，打
成粗粉，加入10-8倍量構(gòu)樹葉粗粉重量體積的質(zhì)量濃度為70%的乙醇，加熱回 流提取2次，每次兩小時(shí)，合并兩次的提取液，減壓濃縮，回收溶劑至無醇味， 所得濃縮液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收 正丁醇，得構(gòu)樹葉黃酮類浸膏，即得抗皮膚真菌感染的黃酮類物質(zhì)，得率為0.2%， 將其溶于適量水中并加入吐溫-80溶解均勻，每200g構(gòu)樹葉粗粉提取的黃酮類物質(zhì)中加吐溫-80 3g溶解，得溶解液，使溶解液每毫升含2g黃酮類物質(zhì)，作為 藥液，藥液經(jīng)10(TC， 45min滅菌，然后4"C保存，備用；所說的重量體積是指 固體物質(zhì)(構(gòu)樹葉)用g，液體(乙醇)用ml，如構(gòu)樹葉IO倍量重量體積的乙 醇，即lg構(gòu)樹葉加10ml乙醇，以此類同。本發(fā)明方法簡(jiǎn)便，所得黃酮類物質(zhì) 純度高達(dá)95%，穩(wěn)定性好，有效用于制備抗皮膚真菌感染的藥物，開辟了構(gòu)樹 葉制備藥物的新領(lǐng)域，是中醫(yī)藥學(xué)上的一大創(chuàng)新，造福于人類。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)際情況對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。 在具體實(shí)施中，本發(fā)明可取粉碎后的構(gòu)樹葉粗粉200g，加入10倍量構(gòu)樹葉 粗粉重量體積的質(zhì)量濃度為70M的乙醇2000ml，加熱回流提取兩小時(shí)，備用； 再取構(gòu)樹葉粗粉加8倍量構(gòu)樹葉粗粉重量體積的質(zhì)量濃度為70%的乙醇1600ml， 加熱回流提取兩小時(shí)，合并兩次的提取液，減壓濃縮，回收溶劑至無醇味，所 得提取的濃縮液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位， 回收正丁醇，得構(gòu)樹葉黃酮類浸膏，將其溶于適量水中并加入吐溫-80 3g，溶解 至100ml，得溶解液，使溶解液成為每毫升含2g黃酮類物質(zhì)的藥液，藥液經(jīng)100 °C， 45min滅菌，4"C保存，備用。
本發(fā)明的黃酮類物質(zhì)有效用于制備抗皮膚真菌感染的藥物，并為試驗(yàn)所證 明，有關(guān)試驗(yàn)資料如下
經(jīng)以下對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果表明，本發(fā)明對(duì)各種真菌抑制作用比較穩(wěn)定
1、 藥物培養(yǎng)基的制作將本發(fā)明藥液2ml加入8ml沙氏瓊脂培養(yǎng)基(蛋白 胨10g,水1000毫升,瓊脂15g,葡萄糖40g)中混勻，使成為終濃度為400 mg/ml的 藥物培養(yǎng)基,分裝大試管并作等倍稀釋，即第一管至第八管依次為400mg/ml,200 mg/ml， 100mg/ml, 50mg/ml, 25 mg/ml，12.5mg/ml, 6.25 mg/ml, 3.125 mg/ml的濃度。
2、 對(duì)照藥液的制備取硝酸咪康唑軟膏(每克含硝酸咪康唑20毫克)10g， 溶于適量水中并加入數(shù)滴吐溫-80增溶，最后定容至100ml，使硝酸咪康唑濃度 為0.2g/ml。 100°C， 45min滅菌后低溫保存。3、 對(duì)照培養(yǎng)基的制作硝酸咪康唑培養(yǎng)基濃度為含硝酸咪康唑20mg/ml; 另設(shè)不含任何抗菌成分的空白對(duì)照培養(yǎng)基。
4、 供試菌種紅色毛癬菌(Trichophyton rubmm)、克柔氏念珠菌(Candidiasis kmsei)、緊密著色霉菌(Fonsecaea compactum)、 石膏樣毛癬菌(Trichophyton mentagrophytes)、 皮炎著色霉菌(Exophiala dermatitides)、 申克氏孢子絲菌
(Sporothrix schenckii)、煙熏色曲霉菌(Aspergillus flimigatus)、白色念珠菌 (Candidiasis albicans)、 新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)、 熱帶念珠菌 (Candidiasis tropicalis)。
取各培養(yǎng)基試管，分為本發(fā)明黃酮類物質(zhì)組、對(duì)照組、空白組，放入高壓 滅菌鍋中進(jìn)行滅菌，滅菌后必須在37t:下恒溫培養(yǎng)24h，確定無菌生長(zhǎng)，方可 使用，用斜面接種法接種相應(yīng)菌種，置2Sr培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5天后觀察，以肉 眼未見菌落生長(zhǎng)的最低濃度為該部位的最小抑菌濃度(MIC)，通過觀察，構(gòu)樹 葉不同溶劑提取物黃酮類物質(zhì)的抑菌效果如下
構(gòu)樹葉黃酮浸膏的最低抑菌濃度(mg/ml)
白色念煙熏色 珠菌 曲霉菌紅色毛 癬菌皮炎著 色霉菌石膏樣 毛癬菌新型隱 球菌申克氏 抱子絲 菌熱帶念 珠菌克柔氏 念珠菌緊密著 色霉菌
黃酮組— —50■400—200400400200
空白組
對(duì)照組20 202020202020202020
"一"表示不能完全抑制真菌生長(zhǎng)
構(gòu)樹葉黃酮浸膏對(duì)致病真菌的抑制作用
白色念 煙熏色 珠菌 曲霉菌紅色毛 癬菌皮炎著 色霉菌石膏樣 毛癬菌新型隱 球菌申克氏 孢子絲 菌熱帶念 珠菌克柔氏 念珠菌緊密著 色霉菌
黃酮組+++ ++一一—++————
空白組+++ +++十+++++++十+++十十十+十十++++++
對(duì)照組
+++表示菌落生長(zhǎng)旺盛；++表示菌落明顯，但不如空白組旺盛；+表示有零 星或少量菌落存在； 一表示真菌被抑制。并經(jīng)多次試驗(yàn)(20次以上)，并對(duì)不同 皮膚真菌感染試驗(yàn)，均取得了相同或類似的結(jié)果，表明本發(fā)明抗皮膚真菌感染 性能穩(wěn)定、可靠，有臨床意義。
5綜上所述，構(gòu)樹葉黃酮類提取物對(duì)多種皮膚病致病真菌都有抑制作用。通
過以上試驗(yàn)，經(jīng)計(jì)算黃酮類提取物對(duì)10種致病真菌MIC值的標(biāo)準(zhǔn)差為173.85， 表明構(gòu)樹葉中黃酮類化合物不但抗菌譜較廣，而且對(duì)各種真菌抑制作用比較穩(wěn) 定，故其抑制皮膚病致病真菌效果較為理想，由于其來源于天然植物成分，毒 副作用相對(duì)較小，具有開發(fā)成為廣譜抗菌藥物的潛力。
權(quán)利要求
1、一種從構(gòu)樹葉中提取一種黃酮類物質(zhì)，其特征在于，所說的該黃酮類物質(zhì)是由構(gòu)樹葉，粉碎，打成粗粉，加入10-8倍量構(gòu)樹葉粗粉重量體積的質(zhì)量濃度為70％的乙醇，加熱回流提取2次，每次兩小時(shí)，合并兩次的提取液，減壓濃縮，回收溶劑至無醇味，所得濃縮液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收正丁醇，得構(gòu)樹葉黃酮類浸膏，即得抗皮膚真菌感染的黃酮類物質(zhì)，得率為0.2％，將其溶于適量水中并加入吐溫-80溶解均勻，每200g構(gòu)樹葉粗粉提取的黃酮類物質(zhì)中加吐溫-803g溶解，得溶解液，溶解液每毫升含2g黃酮類物質(zhì)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從構(gòu)樹葉中提取一種黃酮類物質(zhì)，其特征在于， 所說的該黃酮類物質(zhì)是由構(gòu)樹葉粗粉200g，加入IO倍量構(gòu)樹葉粗粉重量體積的 質(zhì)量濃度為7(P/。的乙醇2000ml，加熱回流提取兩小時(shí)，備用；再取構(gòu)樹葉粗粉 加8倍量構(gòu)樹葉粗粉重量體積的質(zhì)量濃度為70%的乙醇1600ml，加熱回流提取 兩小時(shí)，合并兩次的提取液，減壓濃縮，回收溶劑至無醇味，所得提取的濃縮 液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收正丁醇， 得構(gòu)樹葉黃酮類浸膏，將其溶于適量水中并加入吐溫-80 3g，溶解至100ml，得 溶解液，溶解液每毫升含2g黃酮類物質(zhì)。
3、 權(quán)利要求1或2所述的從構(gòu)樹葉中提取一種黃酮類物質(zhì)，在于制備抗皮 膚真菌感染藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及從構(gòu)樹葉中提取一種黃酮類物質(zhì)在制備抗皮膚真菌感染藥物的應(yīng)用，可有效用于制備抗皮膚真菌感染的藥物，解決抗皮膚真菌感染的藥物問題，其解決的技術(shù)方案是，取構(gòu)樹葉，粉碎，打成粗粉，加入乙醇，加熱回流提取提取液，減壓濃縮，回收溶劑至無醇味，所得濃縮液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收正丁醇，得構(gòu)樹葉黃酮類浸膏，即得抗皮膚真菌感染的黃酮類物質(zhì)，得率為0.2％，將其溶于適量水中并加入吐溫-80溶解均勻，得溶解液，溶解液每毫升含2g黃酮類物質(zhì)，本發(fā)明方法簡(jiǎn)便，所得黃酮類物質(zhì)純度高，穩(wěn)定性好，有效用于制備抗皮膚真菌感染的藥物，是中醫(yī)藥學(xué)上的一大創(chuàng)新，造福于人類。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101439093SQ20081023159
公開日2009年5月27日 申請(qǐng)日期2008年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月31日
發(fā)明者璨 崔, 陳隨清, 魏雅磊 申請(qǐng)人:河南中醫(yī)學(xué)院