專(zhuān)利名稱(chēng)：細(xì)胞松弛素d在制備抗腫瘤藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為細(xì)胞松弛素D (CytochalasinD)在制備抗腫瘤藥物中 的用途。
背景技術(shù)：
細(xì)胞松弛素D是一種真菌的代謝產(chǎn)物，王鈞等曾經(jīng)從竹菌(￡"g/eraW_yCM goete》7)中分 離得到，而我們也從一株分離自海南粗榧的內(nèi)生真菌S49中分離得到。前人研究認(rèn)為細(xì)胞松 弛素D是一種細(xì)胞微絲抑制劑，作用于食管癌細(xì)胞ECa109、乳腺癌細(xì)胞((MA782/5S-8102)、 人體肝癌BEL-7402等腫瘤細(xì)胞后，可使多數(shù)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多核和排核等現(xiàn)象，而正常的人 胚肺細(xì)胞則不產(chǎn)生上述異?，F(xiàn)象。正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞松弛素D的不同反應(yīng)，使得細(xì) 胞松弛素D可以選擇性地殺死腫瘤細(xì)胞，從而應(yīng)用于腫瘤的治療。目前細(xì)胞松弛素D僅作為 一種研究生命現(xiàn)象的工具應(yīng)用于對(duì)細(xì)胞分裂、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核的關(guān)系等的研究中， 未見(jiàn)將其應(yīng)用于對(duì)腫瘤的治療中。我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)，細(xì)胞松弛素D對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞株也 具有一定的選擇性，對(duì)食管癌細(xì)胞ECal09、胃癌細(xì)胞SGC-7901、肝癌細(xì)胞SMMC-7721等 活性顯著，但是對(duì)慢性骨髓性白血病細(xì)胞K562卻并未顯示出活性。因此，可以將細(xì)胞松弛 素D針對(duì)性地應(yīng)用于制備治療食管癌、胃癌和肝癌的藥物中。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開(kāi)細(xì)胞松弛素D (CytochalasinD)在制備抗腫瘤藥物中的新用途。 細(xì)胞松弛素D可以從真菌中利用包括吸附樹(shù)脂柱層析、硅膠柱層析、反相硅膠柱層析， 減壓柱層析等多種常規(guī)分離手段獲得，或者通過(guò)合成以及半合成手段獲得?？蓡为?dú)應(yīng)用或者 合用，或與適宜的賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成各種劑型，應(yīng)用于制備治療食管癌、胃 癌和肝癌的藥物中。
細(xì)胞松弛素D的結(jié)構(gòu)如下
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不限制本發(fā)明。
實(shí)施例1:內(nèi)生真菌S49的發(fā)酵培養(yǎng)及細(xì)胞松弛素D的提取分離
發(fā)酵培養(yǎng)基(PD):馬鈴薯200g,葡萄糖20g，定容至1L， pH自然。
內(nèi)生真菌S49經(jīng)PDA培養(yǎng)基斜面活化，接種于1L三角瓶，28 °C靜置培養(yǎng)30 d，得發(fā) 酵液48L。
將菌株S49的48L發(fā)酵液固液分離后，發(fā)酵上清液于50。C減壓濃縮至5 L。用乙酸乙 酯萃取后得到乙酸乙酯浸膏(6.0g)，之后經(jīng)硅膠柱柱層析、重結(jié)晶得到細(xì)胞松弛素D(l.lg)。
實(shí)施例2:細(xì)胞松弛素D的結(jié)構(gòu)鑒定
細(xì)胞松弛素D為白色針狀結(jié)晶，噴上體積分?jǐn)?shù)10%的硫酸顯棕黃色。碘化鉍鉀顯色劑顯 色呈陽(yáng)性。EI/MS[M+] 508.3，分子式為C3QH37N06。根據(jù)核磁共振及高分辨質(zhì)譜等譜圖數(shù)據(jù) 分析，鑒定了它的結(jié)構(gòu)。并根據(jù)2D-NMR技術(shù)對(duì)其13C-NMR， ^-NMR數(shù)據(jù)進(jìn)行了歸屬。 !H-NMR (400MHz， CD3OD>5: 7.33 (2H, d, /= 7.12 Hz， H-3'， H-5')， 7.27 (1H， t， /= 7.36, 10.28, 17.64 Hz， H-4'), 7.15 (2H, d， >/= 7.24 Hz， H-2', H-6')， 6.12 (1H， dd， </= 2.52， 15.68 Hz, H-13), 5.70 (1H, dd, /= 9.68, 15.48, 25.24 Hz， H-19), 5.64 (1H, d， ■/= 2.00 Hz， H-21), 5.36 (1H， m, H-14), 5.31(1H, s， H-12), 5.15 (1H， dd， /= 2.2， 15.76 Hz， H-20), 5.10(1H， s, H-12), 3.82 (1H， d， J= 10.64 Hz， H-7), 3.25 (1H， m, H隱3)， 2.86 (1H， t, /= 3.48， 10.16, 13.64 Hz, H-8)， 2.82 (1H, t， 《/- 7.40， 5.00, 12.40 Hz, H-IO)， 2.76 (2H, m, H-4, H-16)， 2.69 (1H, t, /= 4.08， 9.32, 13.40 Hz， H-IO)， 2.5.3 (1H, q, /= 11.12, 23.60,34.84 Hz, H-15)， 2.16 (1H， t,J- 4.20, 8.32 Hz， H-4), 2.28 (3H， s， H-25), 2.01 (1H， t， /= 5.76, 10.04 Hz, H-15), 1.52 (3H, s, H-23)， 1.21 (3H， d， /= 6.8 Hz， H-22)， 0.95 (3H， (!， / = 6.68 Hz, H-ll)。 13C-NMR(100 MHz， CD3OD) <5: 173.7 (C-l)， 53.5 (C-3)， 50.0 (C-4)， 32.6 (C-5),147.6 (C-6)， 69.8 (C陽(yáng)7)， 47.0 (C-8), 53.3 (C-9)， 45.3 (C-10) ， 13.6 (C陽(yáng)ll), 114.3 (C-12)， 132.3 (C-13)， 134.1 (C-14), 37.7 (C-15) , 42.3 (C-16), 210.2 (C-17), 77.6 (C-18), 130.6 (C-19), 127.6 (C-20), 77.1 (C-21)， 19.4 (C-22), 24.2 (C-23), 169.6 (C-24)， 20.8 (C-25)， 137.2 (C-l')， 129.1 (C-2'， C-6')， 128.9 (C-3'， C-5')， 127.0 (C-4')。
實(shí)施例3:細(xì)胞松弛素D的體外抑瘤實(shí)驗(yàn)
采用MTT法測(cè)試了細(xì)胞松弛素D對(duì)人體的食管癌細(xì)胞ECal09、胃癌細(xì)胞SGC-7901、 肝癌細(xì)胞SMMC-7721、慢性骨髓性白血病細(xì)胞K562的體外抑瘤活性(結(jié)果見(jiàn)表1)?；钚詼y(cè) 試方法如下實(shí)驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組(水)、DMSO溶劑對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(絲裂霉素C)和8個(gè) 不同濃度(0.8, 1.6, 3.2, 6.3, 12.5, 25， 50, 100 )的待測(cè)樣品，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)平行。收集對(duì)數(shù)生 長(zhǎng)期細(xì)胞，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，按每孔4500個(gè)癌細(xì)胞量接種于96孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于 5%C02、濕度90%以上、37'C溫箱中培養(yǎng)。24 h后取出加入一定量的待測(cè)樣品，繼續(xù)培養(yǎng)3 d后取出置于顯微鏡下觀察每孔細(xì)胞形態(tài)，記錄細(xì)胞形態(tài)變化情況，接著每孔加入5 mg/mL 的MTT溶液(溶于平衡鹽溶液PBS) 50pL，37t:反應(yīng)4h后，將細(xì)胞培養(yǎng)液吸出，每孔加入 lOOnLDMSO將Formazane充分溶解，將細(xì)胞培養(yǎng)板置于MK3酶標(biāo)儀上，用570nm波長(zhǎng)測(cè) 各孔的吸光度(A)，按下列公式求生長(zhǎng)抑制率。
生長(zhǎng)抑制率(％) =(1——用藥組平均A值 Q%
陰性對(duì)照組平均A值7
以樣品濃度為橫坐標(biāo)，以抑制率為縱坐標(biāo)，作圖并求出抑制率為50%時(shí)樣品的濃度(1<:5())，
樣品活性結(jié)果即以半數(shù)抑制濃度(IC5C)表示。
表l、細(xì)胞松弛素D的體外抑瘤結(jié)果 化合物_ ,mr')
ECal09 SMMC-7721SGC-7901 K562 細(xì)胞松弛素D 5.1 2.8 1.3 無(wú)活性
實(shí)施例4:細(xì)胞松弛素D 5g與微晶纖維素40g及硬脂酸鎂5g混合，混合物用單沖壓片 機(jī)打成直徑5mm，重量200mg的片劑。本片劑中每片含細(xì)胞松弛素D 20mg。
實(shí)施例5:細(xì)胞松弛素D20g與乳糖25g及硬脂酸鎂5g混合，以每500mg填充膠囊。 本膠囊劑中，每個(gè)膠囊含細(xì)胞松弛素D 200mg。
權(quán)利要求
1、細(xì)胞松弛素D在制備抗腫瘤藥物中的用途。細(xì)胞松弛素D的結(jié)構(gòu)如圖所示2、如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞松弛素D在制備抗腫瘤藥物中的用途，其特征在于細(xì)胞松弛素D可單獨(dú)應(yīng)用或者合用，或與適宜的賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成各種劑型用于制備抗腫瘤藥物。
2、 如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞松弛素D在制備抗腫瘤藥物中的用途，其特征在于細(xì)胞 松弛素D可單獨(dú)應(yīng)用或者合用，或與適宜的賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成各種劑型用于 制備抗腫瘤藥物。
3、 如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞松弛素D在制備抗腫瘤藥物中的用途，其特征在于細(xì)胞松弛素D的制劑，可用于制備治療食管癌、胃癌和肝癌的抗腫瘤藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為細(xì)胞松弛素D(Cytochalasin D)在制備抗腫瘤藥物中的用途。細(xì)胞松弛素D的結(jié)構(gòu)式如下，可以從真菌中利用包括吸附樹(shù)脂柱層析、硅膠柱層析、反相硅膠柱層析，減壓柱層析等多種常規(guī)分離手段獲得，或者通過(guò)合成以及半合成手段獲得?？蓡为?dú)應(yīng)用或者合用，或與適宜的賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成各種劑型，應(yīng)用于制備治療食管癌、胃癌和肝癌的藥物中。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101416962SQ20081018690
公開(kāi)日2009年4月29日 申請(qǐng)日期2008年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月5日
發(fā)明者嬌 吳, 戴好富, 梅文莉, 蘋(píng) 陳, 黃玖利 申請(qǐng)人:中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所