用于防治血管性癡呆的天麻植物提取物及其制備方法

專利名稱：用于防治血管性癡呆的天麻植物提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種含有派立辛A、 B、 C和/或其衍生物的天麻(^"r^^/a e/a" A/咖e)植物提取物在制備 防治血管性癡呆疾病的藥物中的用途。從中藥天麻中提取、精制得到 的植物提取物及其提取方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代的生活方式，引起血管性癡呆患者日益增加，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究 認(rèn)為，血管性癡呆(VD)為多因素疾病，與高血壓、糖尿病、高血脂等 致動(dòng)脈粥樣硬化的因素有關(guān)。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，血管性癡呆的發(fā)生常與 皮層病變，尤其是左側(cè)皮層缺血及丘腦、海馬的缺血改變密切相關(guān)。 此外，雙側(cè)、多發(fā)性腦梗塞，重要位置的缺血梗塞以及大面積腦損害 對(duì)本病的發(fā)生有重要作用。不僅卒中的發(fā)生發(fā)展與VD有著密切的因果 關(guān)系，長期慢性腦部缺血亦可導(dǎo)致VD的發(fā)生。
血管性癡呆病人一般生活不能自理，時(shí)時(shí)需要家人照料，給患者、家 庭、社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。從已知的安全性較高的中藥材中提取中藥有 效成分，研制和開發(fā)中藥新藥是很有必要的。
天麻別名明天麻、白龍草、赤箭根。為蘭科多年生寄生草本植物天 麻6^Wr^f/a e/Wa A/w邁e的塊莖。多年生植物，生于濕潤的林下，現(xiàn) 多栽培。在我國主要產(chǎn)自四川、云南、貴州、湖北和陜西等地。在中藥 中天麻主要用于息風(fēng)止痙、平肝潛陽、祛風(fēng)止痛及偏正頭痛等。
派立辛(parishin)是植物天麻中的一種主要化學(xué)成分，文獻(xiàn)1_5 才艮道了派立辛(parishin) A、 B、 C的結(jié)構(gòu)如下parishin A parishin B parish'm C
其中，派立辛A (parishin A)在以前的文獻(xiàn)中通常簡(jiǎn)稱為派立 辛(parishin),本文中為與另外兩個(gè)已知的派立辛類化合物(派立 辛B、 C)區(qū)分開，將其稱為派立辛A (parishin A)。
參考文獻(xiàn)
1、 LiY. M. ， Zhou Z丄,Hong Y. F. New phenol ic derivat ives from "/eo/a尸a6er/.戶/a/ "1993， 59 ( 4 ) : 363-5。
2、 Un J. H. ， Liu Y. C. ， Hau J. P. , " s/. Parishins B and C from rhizomes of ""rod/a 戶力7foc力e/z7/"/y, 1996， 42 ( 2 ): 549-551。
3、 周俊，浦湘渝，楊雁賓。新鮮天麻的九種酚性成分。存夢(mèng) 遞孩，1981， 26 ( 18 ) : 1118-1120。
4、 Dahmen J. ， Leander K. Studies on 0rchidaceae glucosides. Part 7. The structure of parishin, a glucoside from 「a/ da i ar/; 力//.戶Ar^ocAe邁/s^ry， 1976， 15 ( 12 ): 1986—7。
5、 Taguchi H. ， Yosioka I. , Yamasaki K. , et al. Studies on the constituents of Ca"rod/a e/"a A7咖e. ， 1981, 29 ( 1 ) : 55-62。
盡管文獻(xiàn)報(bào)道了通過正相和反相硅膠進(jìn)行反復(fù)多次色譜分離，得 到派立辛衍生物的單體;ft令物的方法，但從未報(bào)道過這些單體化合物 與防治血管性癡呆的作用有關(guān)。
由于天麻中化學(xué)成分復(fù)雜，而派立辛類化合物極性有較大差別， 利用適合工業(yè)化生產(chǎn)的單次色譜分離技術(shù)富集高含量(大于50°/。)派 立辛衍生物有較大難度，目前還沒有文獻(xiàn)報(bào)道得到了高含量(大于50%)的派立辛衍生物的天麻植物提取物，也沒有報(bào)道過利用色譜分離 技術(shù)實(shí)現(xiàn)制備富含派立辛其衍生物的天麻植物提取物的方法，也從未
物(特別是派立辛A、 B、 C)或混合物具有增智和防治血管性癡呆作 用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了含有派立辛衍生物(特別是派立辛A、 B、 C)的天 麻植物提取物或者派立辛單體化合物或混合物在制備防治血管性癡呆 等疾病的藥物中的用途。其中該提取物中派立辛衍生物總含量為35% 以上，優(yōu)選派立辛衍生物總含量為50%以上的提取物。所述派立辛衍 生物可以為派立辛衍生物中任意單體，特別是派立辛A、 B、 C，也可 以為派立辛衍生物中任意多種單體化合物的混合物。
現(xiàn)通藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，天麻有效部位各劑量組可以不同程度地 提高擬血管性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，減輕模型大鼠的神經(jīng)病理損 傷。其可能的作用環(huán)節(jié)包括①有效謙導(dǎo)腦損傷修復(fù)過程中神經(jīng)元生長 相關(guān)蛋白的合成，抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的過度增殖，促進(jìn)腦缺血損傷后神 經(jīng)元突起再生。②調(diào)控退化的谷氨酸神經(jīng)元的突觸活性，重建腦內(nèi) Glu/GABA學(xué)習(xí)記憶調(diào)節(jié)系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)③改善腦內(nèi)膽堿能系統(tǒng)的功能④抗脂 質(zhì)過氧化，激活抗自由基氧化酶S0D活性，加快腦組織自由基的清除速 率，減少自由基代謝產(chǎn)物MDA的堆積，與目前一線的陽性對(duì)照藥多奈哌 齊比較，藥效優(yōu)于多奈哌齊。表明派立辛衍生物的單體化合物或混合 物以及含有派立辛衍生物(特別是派立辛A、 B、 C)的植物提取物具 有防治血管性癡呆作用。
所述"單體"定義為單一化合物。
本發(fā)明還提供了一種含有派立辛衍生物的天麻植物提取物，該提 取物中派立辛衍生物總含量為35%以上，優(yōu)選派立辛衍生物總含量為 50%以上，更優(yōu)選派立辛衍生物總含量為50%-95%,優(yōu)選所述派立辛衍生物為派立辛A、 B、 C。
本發(fā)明還提供了 一種制備含有派立辛衍生物植物天麻提取物的方 法，其中提取物中派立辛衍生物總含量為35%以上，優(yōu)選派立辛衍生物 總含量為50%以上，更優(yōu)選派立辛衍生物總含量為50%-95%，優(yōu)選所述 派立辛f汙生物為派立辛A、 B、 C。
通過我們對(duì)分離純化工藝的研究，發(fā)現(xiàn)通過獨(dú)特的提取、精制工 藝是可以得到富含派立辛衍生物的天麻植物提取物。
本發(fā)明還提供了含有天麻植物提取物的藥物組合物及其制劑以及 所述天麻植物提取物在保健品和制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用，特別是在制備血管 性癡呆疾病的保健品和藥物中的應(yīng)用，所述天麻植物提取物中派立辛衍 生物總含量為35%以上，優(yōu)選派立辛衍生物總含量為50%以上，更優(yōu)選 派立辛衍生物總含量為50%-95%，優(yōu)選所述派立辛衍生物為派立辛A、 B、 C。其中百分比％未經(jīng)特別說明，均為重量百分比％。
本發(fā)明所指派立辛衍生物結(jié)構(gòu)通式如下
R40
其中，R2和R3各自獨(dú)立地選自、 ' 0GIU
H2C、 /"OH H2C、 ^OMe
等；
R4選自氫、Cl-C6烷基(優(yōu)選甲基，乙基，丙基，乙丙基，丁基，
異丁基)，Cl-C6烷基苯基(優(yōu)選千基)，對(duì)羥基節(jié)基，或
H2C、 ^"OH H2C~4 i>~OMe
等；
Glu表示P-D-吡喃葡萄糖基，Me表示甲基。
本發(fā)明制備所述天麻植物提取物的工藝方法如下 1，提取方法將植物天麻(塊莖)粉碎，然后用20-100% (其中優(yōu)選50-95% )Cl-C6烷基醇的水溶液作為溶劑在0*C-溶劑回流的溫 度(優(yōu)選室溫至溶劑回流的溫度)下提取，提取液經(jīng)常壓或減壓濃縮 得浸膏；其中所述C1-C6烷基醇優(yōu)選為甲醇、乙醇、異丙醇或正丁醇 或它們組成的混合溶劑，其中更優(yōu)選甲醇、乙醇。
2.精制方法
將浸膏用色譜方法精制、純化，用洗脫溶劑洗脫，收集富含派立 辛A、 B、 C類化合物的流份，濃縮，過濾，干燥，檢測(cè)并收集富含派 立辛衍生物的植物提取物。
其中所述用于精制、純化的色譜方法為大孔吸附樹脂色譜、正相 硅膠和反相硅膠色譜，或者它們的組合，或者將提取得到的浸膏混合 于硅膠或硅藻土中，晾干后用洗脫溶劑進(jìn)行回流洗脫；所述洗脫溶劑 為水，C1-C6烷基醇，如甲醇、乙醇、異丙醇或正丁醇等，鹵代烴， 如二氯甲烷、氯仿(三氯甲烷)等，醚類溶劑，如乙醚、甲基叔 丁醚等，酮類溶劑，如丙酮、2-丁酮等，酯類溶劑，如乙酸乙酯、 甲酸乙酯等，以及由上述溶劑組成的混合溶劑，其中優(yōu)選的洗脫溶劑 為氯仿(三氯甲烷)、乙酸乙酯、乙醇、甲醇和水中的一種或數(shù)種混 合溶劑。所述精制方法中，當(dāng)用苯乙烯型大孔吸附樹脂精制時(shí)，洗脫 溶劑優(yōu)選為水和10-75%的乙醇或甲醇水溶液；當(dāng)用反相硅膠色譜精 制時(shí)，洗脫溶劑優(yōu)選為水和10-50%的乙醇或甲醇水溶液；當(dāng)用正相 硅膠精制時(shí)，洗脫溶劑優(yōu)選為三氯甲烷或乙酸乙酯和90-100%乙醇水 溶液或甲醇組成的混合溶劑，它們的比例優(yōu)選為10:1-2:1。
其中所述制備方法中，富含派立辛A、 B、 C類化合物的流份是通 過薄層層析(TLC)、紫外(UV)、高壓液相色鐠(HPLC)等方法檢測(cè) 的，其中優(yōu)選HPLC檢測(cè)方法。
優(yōu)選本發(fā)明得到的天麻植物提取物中派立辛衍生物的總含量是通 過HPLC方法檢測(cè)的。優(yōu)選用高效液相外標(biāo)法測(cè)定，以派立辛A作標(biāo)準(zhǔn)， 計(jì)算其中派立辛類化合物的總含量。按照上述方法得到的天麻植物提取物中派立辛衍生物總含量為
25%以上，優(yōu)選派立辛衍生物總含量為50%以上，更優(yōu)選派立辛衍生物 總含量為50%-95%，優(yōu)選所述派立辛衍生物為派立辛A、 B、 C。
按照上述方法得到的含有派立辛衍生物的天麻植物提取物具有益 智、增強(qiáng)記憶的作用。
本發(fā)明介紹的制備方法是提供具有高含量派立辛衍生物的天麻植 物提取物制備方法中的一種，并不意味著只有通過上述方法得到的高含 量派立辛衍生物的天麻植物提取物才能用作制備防治血管性癡呆等疾 病的藥物?？梢韵胍姡绢I(lǐng)域技術(shù)人員用其他方法獲得的富含派立辛衍 生物的天麻植物提取物也會(huì)具有同樣的藥物作用。
用以上提取和精制方法制備中藥天麻中的植物提取物，其中有效 成分-派立辛衍生物在植物提取物中的含量可高達(dá)50%以上。其中大孔 吸附樹脂法精制更適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
利用本發(fā)明方法得到的植物提取物可以與藥物上可接受的載體一起 制成藥物制劑，例如注射劑、片劑、膠嚢、口服液或滴丸等。利用本 發(fā)明方法得到的植物提取物制備所需藥物的各種劑型時(shí)，可以按照藥學(xué) 領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。優(yōu)選本發(fā)明的這類藥物制劑可以被口服、腸 胃外給藥。優(yōu)選制劑是口服或靜脈內(nèi)給藥的。
本發(fā)明組合物的無菌可注射形式可以是水性或油性混懸劑。這些 混懸劑可以按照本領(lǐng)域已知的技術(shù)、利用適合的分散或潤濕劑和懸浮 劑加以配制。無菌的可注射制劑還可以是在無毒的腸胃外可接受的稀 釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液劑或混懸劑，例如在1， 3-丁二醇中的 溶液?？梢圆捎玫目山邮艿妮d體和溶劑有水、林格氏溶液和等滲的氯 化鈉溶液。另外，無菌的不揮發(fā)油也經(jīng)常被用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為 此，可以采用任何溫和的不揮發(fā)油，包括合成的單-或二-甘油酯。脂 肪酸、例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制備注射劑，它們是天然的 藥學(xué)上可接受的油，例如橄欖油或蓖麻油，尤其是它們的聚氧乙基化形式。這些油溶液劑或混懸劑還可以含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，例 如羧甲基纖維素或相似的分散劑，它們普遍用于配制藥學(xué)上可接受的 劑型，包括乳劑和混懸劑。出于制劑的目的，還可以使用其他常用的 表面活性劑，例如吐溫類、司盤類，和其他乳化劑或生物利用度增強(qiáng) 劑，它們普遍用在藥學(xué)上可接受的固體、液體或其他劑型的制造中。
本發(fā)明藥物組合物可以按任意口服可接受的劑型口服給藥，包括但 不限于膠嚢劑、片劑、水性混懸劑或溶液劑。在口用片劑的情況下，常 用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。就 按膠嚢劑型口服給藥而言，有用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。 當(dāng)口用需要水性混懸劑時(shí)，活性成分是與乳化和懸浮劑聯(lián)用的。如果需 要的話，還可以加入某些甜味劑、矯味劑或著色劑。
如果必要的話， 一旦患者的條件有所改善，可以給以本發(fā)明化合物、 組合物或組合的維持劑量。隨后，可以根據(jù)癥狀減少給藥的劑量或頻率 或者劑量與頻率至已改善的條件得以保留的水平，當(dāng)癥狀已經(jīng)減輕至所 需水平，應(yīng)當(dāng)停止治療。不過， 一旦疾病癥狀有任何復(fù)發(fā)，患者可能需 要在長期基礎(chǔ)上接受間歇性治療。
本發(fā)明的藥物制劑中還可以包含其他用于治療血管性癡呆病的活 性劑或與其他治療血管性癡呆的藥物一起或順序給藥。
還應(yīng)當(dāng)理解的是，任意特定患者的具體劑量和治療制度將依賴于多 種因素，包括所采用的具體提取物的活性、年齡、體重、 一般健康狀況、 性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄速率、藥物組合、主治醫(yī)師的判斷和所治 療的特定疾病的嚴(yán)重性。
具體實(shí)施例方式
下面的制備實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)實(shí)施例可進(jìn)一步i兌明本發(fā)明，但不以任 何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1:1. 提取中藥天麻藥材1紹，粉碎后加入50%乙醇浸泡提取3次， 每次24小時(shí)。合并提取液，回收乙醇并濃縮至稠浸膏，加入蒸餾水加 熱溶解，冷卻至室溫，靜置24小時(shí)，離心甩濾，得澄清濾液。
2. 精制上述濾液通過經(jīng)處理的HPD-IOO型大孔吸附樹脂，用水 和10%、 20。/0、 30%、 40%、 50%、 75%的乙醇梯度洗脫，HPLC檢測(cè)， 收集富含派立辛類化合物的流份，合并，減壓濃縮，噴霧干燥即得植 物提取物4. 48g。經(jīng)過高效液相色譜法測(cè)定，其中派立辛類化合物含量 為51.8%。
實(shí)施例2:
1. 提取中藥天麻藥材lkg，粉碎后加入50%乙醇，50。C溫浸泡 提取3次，每次6小時(shí)。合并提取液，回收乙醇并濃縮至稠浸膏，加 入蒸餾水加熱溶解，冷卻至室溫，靜置24小時(shí)，離心甩濾，得澄清濾 液。
2. 精制上述濾液通過經(jīng)處理的HP-20型大孔吸附樹脂，用水和 10%、 20%、 30%、 40%、 50%、 75%的乙醇梯度洗脫，HPLC檢測(cè)， 收集富含派立辛類化合物的流份，合并，減壓濃縮，噴霧干燥即得植 物提取物4.42g。經(jīng)過高效液相色i普法測(cè)定，其中派立辛類化合物含量 為52. 60/。。
實(shí)施例3:
1. 提取中藥天麻藥材lkg,粉碎后加入50%乙醇浸泡過夜后， 加熱回流提取3次，每次3. O小時(shí)。合并提取液，回收乙醇并濃縮至 稠浸膏，加入蒸餾水加熱溶解，冷卻至室溫，靜置24小時(shí)，離心甩濾， 得澄清濾液。
2. 精制上述濾液通過經(jīng)處理的HP-20型大孔吸附樹脂，用水、 10%、 20%、 30%、 40%、 50%和75%濃度的曱醇依次梯度洗，HPLC 檢測(cè)，收集富含派立辛類化合物的流份，合并，減壓濃縮，噴霧干燥即得植物提取物4. 68g。經(jīng)過高效液相色譜法測(cè)定，其中派立辛類化合 物含量為54. 4%。
實(shí)施例4:
1. 提取中藥天麻藥材lkg，粉碎后加入75%乙醇，室溫浸提3 次，每次24. 0小時(shí)。合并提取液，回收乙醇并濃縮至稠浸膏，加入蒸 餾水加熱溶解，冷卻至室溫，靜置24小時(shí)，離心甩濾，得澄清濾液。 減壓濃縮得濃縮液。
2. 精制濃縮液通過反相硅膠柱(C-18)，用水和10°/。醇溶液洗 脫后，再用50%濃度的醇溶液洗脫，HPLC檢測(cè)，收集富含派立辛類化 合物的流份，合并，減壓濃縮，干燥得植物提取物2. 18g。經(jīng)過高效 液相色譜法測(cè)定，其中派立辛類化合物含量為66. 2%。
實(shí)施例5:
1. 提取中藥天麻藥材1 kg，粉碎后，加入75%乙醇浸泡過夜后， 75。C加熱浸提3次，每次6. O小時(shí)。合并提取液，回收乙醇并濃縮至 稠浸膏。
2. 精制浸膏硅膠拌樣，通過正相硅膠(100-200目)色鐠柱，氯 仿-甲醇(9:1)洗脫后，再用氯仿-甲醇(5:1)洗脫，HPLC檢測(cè)，收 集富含派立辛類化合物的流份，合并，減壓濃縮，干燥得植物提取物 4. 51g。經(jīng)過高效液相色譜法測(cè)定，其中派立辛類化合物含量為50. 3%。
實(shí)施例6:
1. 提取，沖藥天麻藥材1 kg ，粉碎后，加入75°/ 乙醇浸泡過夜后, 加熱回流提取3次，每次3. O小時(shí)。合并提取液，回收乙醇并濃縮至 稠浸膏。
2. 精制浸膏硅膠拌樣，通過正相硅膠(100-200目)柱，乙酸乙 酯-95%乙醇(10: 1 )洗脫后，再用乙酸乙酯-95%乙醇(3: 1 )和乙酸乙
12酯-95%乙醇(2:1)依次洗脫，HPLC檢測(cè)，收集富含派立辛類化合物 的流份，合并，減壓濃縮，干燥得植物提取物4. 88g。經(jīng)過高效液相 色譜法測(cè)定，其中派立辛類化合物含量為56.0%。
實(shí)施例7:
1. 提取中藥天麻藥材lkg，粉碎后加入95。/。乙醇室溫浸提3次， 每次24. 0小時(shí)。合并提取液，回收乙醇并濃縮至稠浸膏，加入蒸餾水 加熱溶解，冷卻至室溫，靜置24小時(shí)，離心甩濾，得澄清濾液。減壓 濃縮得濃縮液。
2. 精制'.濃縮液通過反相硅膠(C-18)柱，水和10%乙醇溶液洗脫 后，再用50%濃度的醇溶液洗脫，HPLC檢測(cè)，收集富含派立辛類化合 物的流份，合并，減壓濃縮，干燥得植物提取物1.69g。經(jīng)過高效液 相色譜法測(cè)定，其中派立辛類化合物含量為60. 9%。
實(shí)施例8:
1. 提取中藥天麻藥材lkg,粉碎后，加入95%乙醇，75。C溫浸 提取3次，每次8. 0小時(shí)。合并提取液，回收乙醇并濃縮至稠浸膏。
2. 精制浸膏硅膠拌樣，通過正相硅膠(100-200目)柱，氯仿-甲醇(9:1)洗脫后，再用氯仿-甲醇(5:1)洗脫，HPLC檢測(cè)，收集 富含派立辛類化合物的流份，合并，減壓濃縮，千燥得植物提取物 1.22g。經(jīng)過高效液相色譜法測(cè)定，其中派立辛類化合物含量為55， 1%。
實(shí)施例9:
1. 提取中藥天麻藥材1 kg，粉碎后，力jr入95。/。乙醇浸泡過夜后r 加熱回流提取3次，每次4. 0小時(shí)。合并提取液，回收乙醇并濃縮至 稠浸膏。
2. 精制浸膏硅膠拌樣，通過正相硅膠(100-200目)柱，乙酸乙 酯-95%乙醇(10:1)洗脫后，再用乙酸乙酯-95%乙醇(5:1)和乙酸乙酯-95%乙醇(3:1)洗脫，HPLC檢測(cè)，收集富含派立辛類化合物的流 份，合并，減壓濃縮，干燥得植物提取物1. 86g。經(jīng)過高效液相色譜 法測(cè)定，其中派立辛類化合物含量為55.8%。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例
天麻植物提取物對(duì)于擬血管癡呆大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響
下文中采用的縮寫"clb"是指派立辛A、 B、 C和/或其衍生物含 量大于50%的天麻提取物。
學(xué)習(xí)記憶能力的觀察與評(píng)價(jià)是癡呆的臨床與實(shí)驗(yàn)研究中不可缺少 的 一項(xiàng)重要指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)為了能客觀地評(píng)價(jià)藥物對(duì)模型動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶 能力，特地選用國際上常用于檢測(cè)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的水迷宮。其檢測(cè) 的是大鼠在多次的訓(xùn)練中，學(xué)會(huì)尋找固定位置的隱蔽平臺(tái)，形成穩(wěn)定的 空間位置認(rèn)知，這種空間認(rèn)知是是一種以異我為參照點(diǎn)的參考認(rèn)知，所 形成的記憶是一種空間參考記憶。從信息的加工和提取方式來看，這種 空間參考記憶進(jìn)入意識(shí)系統(tǒng)，其儲(chǔ)存的機(jī)制主要涉及邊緣系統(tǒng)(如海馬) 以及大腦皮層有關(guān)腦區(qū)，應(yīng)該屬于陳述性記憶，而臨床健忘和癡呆的病 人，正是陳述性記憶首先受損而且比較突出。所以從檢測(cè)的記憶屬性來 說，運(yùn)用Morris水迷宮來進(jìn)行防治此類疾病有效藥物的篩選研究是比 較恰當(dāng)?shù)摹?br> 1. 實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)驗(yàn)藥品為制備實(shí)施例1中所獲得的樣品(clb)，代號(hào)1210-A。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)SD大白鼠，雄性，體重190一210g ，由北京維通
利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司供給，合格證號(hào)為scxk (京)2002-0003。實(shí)驗(yàn)
條件下自然々大食，適應(yīng)環(huán)境三天后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
儀器 Morris水迷宮DMS-2系統(tǒng)由中國科學(xué)院藥物研究所提供
2. 實(shí)驗(yàn)方法
2. 1擬血管癡呆大鼠模型制備雄性SD大鼠，體重190一210g， 10%水合氯醛腹腔注射麻醉，仰臥固 定，頸前部去毛消毒后沿正中切開，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，雙重絲線結(jié)扎后 切斷，縫合傷口 。假手術(shù)組僅游離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，各組大鼠同條件詞養(yǎng)。
2. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組(11=1())、模型組(n-15)、 1210-A小劑量組 (n=15)、 1210-A大劑量組(n-15)、 1210 - A中劑量組(n=15)、陽性藥 多奈哌齊組(n-15)、陽性藥尼莫地平組(n-15)。
2. 3給藥
術(shù)后24小時(shí)給藥，1210-A小劑量組大鼠按0. 8mg/kg、 1210-A 大劑量組大鼠按7. 5mg/kg、 1210 - A中劑量組大鼠按2. 5mg/kg灌胃給 藥；陽性藥多奈哌齊組按0. 58mg/kg、尼莫地平組按9mg/kg灌胃給藥。 假手術(shù)組及模型組動(dòng)物灌胃給等容量生理鹽水。連續(xù)給藥40天，從第 42天起進(jìn)行Morris水迷宮訓(xùn)練。
Morris水迷宮主要由圓形水池和自動(dòng)攝象及電腦分析系統(tǒng)組成，通 過迷宮上方的攝像系統(tǒng)對(duì)大鼠在迷宮中的探索過程進(jìn)行全程拍攝，如大 鼠的運(yùn)動(dòng)軌跡、運(yùn)動(dòng)時(shí)間、運(yùn)動(dòng)距離、運(yùn)動(dòng)方式等，避免了人為因素的 影響。平臺(tái)放在西南象限(第m象限)正中距池壁22cm處，測(cè)試前將 水注入池中，水深30cm(即水面高出平臺(tái)表面lcm，使大鼠不能見到站 臺(tái))，水溫控制在20—2rC之間，室溫25*C。實(shí)驗(yàn)時(shí)要求各種實(shí)驗(yàn)條件 保持不變。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程分為隱藏平合獲得實(shí)驗(yàn)(hidden-platform acquisition training)和空間搜索實(shí)驗(yàn)(probetrial testing)兩部分。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1:對(duì)擬血管癡呆大鼠定位航行試驗(yàn)逃避潛伏期的影響 結(jié)果見表1 。各組大鼠經(jīng)過、猙泳剩練尋找平臺(tái)的時(shí)間越來越短，第1 、 2天各組動(dòng)物逃避潛伏期未見明顯差異，從第3天游泳訓(xùn)練開始模型組 大鼠逃避潛伏期較假手術(shù)組明顯延長(P<0. 05),說明模型大鼠存在明 顯的空間學(xué)習(xí)記憶障礙；1210 - A各劑量組大鼠逃避潛伏期均較模型組 大鼠有不同程度減少，特別是小劑量組在游泳3、 4天明顯比模型組縮
15短(P<0. 05);陽性藥尼莫地平在游泳第4天也明顯比模型組縮短 (P<0. 05)。
表l.藥物對(duì)擬血管癡呆大鼠Morris水迷宮逃避潛伏期的影響((x ± s)
組別 _搜索平臺(tái)潛伏期時(shí)間/s
第1曰第2曰第3曰第4曰
假手術(shù)組79.99 ±19. 8851.55 ±27. 0325.08 ±16. 59*14. 11 ± 7. 75*
模型84.52 ± 12. 6869.90 ± 18. 1948. 31 ± 22. 4641. 15 ±25. 05
1210 - a大85.48 ± 15. 6567.26 ± 22. 5545. 33± 19. 4829. 48 ± 17. 49
mo - a中73.13 ±27.1155.76 ± 24. 7237. 80 ±19. 5325. 29 ±12. 59*
1210 - a小84.38 ± 13. 9063.55 ± 18. 8330. 06 ±14. 55*17. 27 ±9. 40*
多奈哌齊80.11 ± 20. 8651. 21 ±23. 7135. 80 ± 19. 4044. 27 ±27. 28
尼莫地平86.64 ± 9. 6668. 64 ±24. 6337. 88 ±15. 3623. 75 ±11. 37*
注與模型組比較*P<0.05
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2:對(duì)擬血管癡呆大鼠定位航行試驗(yàn)游泳路徑的影響 結(jié)果見表2。經(jīng)過游泳訓(xùn)練各組動(dòng)物尋找平臺(tái)所游的路徑越來越短， 各組大鼠第l、 2天游泳訓(xùn)練的路徑未見明顯差異，但從第3天游泳訓(xùn)練開 始，模型組大鼠的游泳路徑與假手術(shù)組比較明顯延長(P<0. 05); 1210 - A各劑量組游泳路徑均較模型組大鼠有不同程度減少，特別是小劑量 組在游泳3、 4天明顯比模型組縮短(P<0，05)。表2.藥物對(duì)擬血管癡呆大鼠Morris水迷宮游泳訓(xùn)練游泳路徑的影響(x土s)
組別 _搜索平臺(tái)路徑/cm_
第1曰第2曰第3曰第4曰
假手術(shù)組994. 86 ± 224. 45849. 69 ± 498, 53357. 13 ± 275. 97*250. 23 ± 134. 24
模型1007. 243 ± 164. 55953. 63 ± 375. 18791. 25 ±311.06586. 75 ± 356. 44
1210-A大1148. 25 ± 273. 52929. 80 ± 273. 79721.18±321.95435. 74 ± 242. 45
1210-A中994.37 ± 387.08809. 74 ± 375. 74541. 52 ± 347. 27393. 0± 223. 66
mo - A小1010.831±316.59935. 84 ± 267. 74472. 46 ± 209. 31*276, 74 ± 140. 11*
多奈哌齊1169. 31 ± 357. 16835. 99 ± 503. 39728. 24 ± 525. 27750. 11 ± 596. 93
尼莫地平1112. 201 ± 202. 04956. 10 ± 373. 71492. 18 ± 204.71316.63±161.73
注與模型組比較*P<0.05
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3:對(duì)擬血管癡呆大鼠Morris水迷宮空間探索能力的影響 空間探索試驗(yàn)通過記錄撤除迷宮中平臺(tái)后各組大鼠在原平臺(tái)象限 運(yùn)動(dòng)的時(shí)間、路徑以及準(zhǔn)確穿過原平臺(tái)所在位置的次數(shù)來反映大鼠經(jīng)過 前10次游泳訓(xùn)練對(duì)平臺(tái)的空間記憶能力。若動(dòng)物確實(shí)對(duì)平臺(tái)在水迷宮 的空間位置形成了較強(qiáng)的記憶，再次被放入迷宮中時(shí)，會(huì)在原平臺(tái)所在范 圍附近有目的地尋找平臺(tái)。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)過訓(xùn)練后，各組大鼠 在平臺(tái)象限游泳時(shí)間與總游泳時(shí)間的比值(tP/tT)及平臺(tái)象限的游泳距 離占總游泳距離的比值(dP/dT)沒有明顯差異。但模型組大鼠和假手術(shù)組 相比準(zhǔn)確穿越原平臺(tái)所在位置的次數(shù)明顯減少(P<0.05)，說明空間記憶 能力受到損害。1210 - A各組大鼠準(zhǔn)確穿越厚平臺(tái)所在位置的次數(shù)比模 型組均有不同程度的提高，特別是小劑量組差異明顯(P0.05)。表3.1210-A對(duì)擬血管癡呆大鼠Morris水迷宮空間探索能力的影響(x±s)
組別ntP/tT (%)dP/dT (%)穿環(huán)次數(shù)(次)
假手術(shù)組927. 77 ±6. 6329. 93 ±4. 67*1.22 ±0.67*
模型1122. 65 ±9. 6621. 04 ±9. 260. 55 ±0.82*
1210-A大1327. 31 ± 11. 4825. 37 ±11. 480. 85 ± 0. 80
1210-A中1223. 67 ±9. 3923. 67 ±9. 390. 83 ±0. 72
1210-A小1326. 31 ± 7. 4724. 83 ±8. 911. 23± 1. 09*
多奈哌齊922. 75 ±8. 4622. 75 ± 8. 460. 22 ± 0. 44
尼莫地平1025.81±12.6725. 81 ± 12. 670. 84 ± 0. 81
注與模型組比較*P<0.05 。
權(quán)利要求
1.一種天麻植物提取物在制備防治血管性癡呆疾病的藥物中的用途，其中所述植物提取物中派立辛衍生物總合量為35％以上，所述衍生物可以為一種派立辛衍生物的單體化合物，也可以為派立辛衍生物中任意多種化合物的混合物；所述派立辛衍生物結(jié)構(gòu)通式如下其中，R1，R2和R3各自獨(dú)立地選自 id="icf0002" file="A2008101324040002C2.tif" wi="35" he="10" top= "93" left = "152" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/> id="icf0003" file="A2008101324040002C3.tif" wi="65" he="10" top= "104" left = "19" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>等；R4選自氫、C1-C6烷基(優(yōu)選甲基，乙基，丙基，乙丙基，丁基，異丁基)，C1-C6烷基苯基(優(yōu)選芐基)，對(duì)羥基芐基，或 id="icf0004" file="A2008101324040002C4.tif" wi="34" he="10" top= "126" left = "154" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/> id="icf0005" file="A2008101324040002C5.tif" wi="65" he="10" top= "137" left = "19" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>等；Glu表示β-D-吡喃葡萄糖基，Me表示甲基。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述派立辛衍生物總含量為50% 以上。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述派立辛衍生物總含量為 50%-95%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的用途，其中所述派立辛衍生物為派 立親A、 B、或C，其中派立辛(parishin) A、 B、 C的結(jié)構(gòu)式如下<formula>formula see original document page 3</formula>
5.派立辛衍生物在制備血管性癡呆疾病的藥物中的用途，所述衍生 物可以為一種派立辛衍生物的單體化合物，也可以為派立辛衍生物中任 意多種化合物的混合物；所述派立辛衍生物結(jié)構(gòu)通式如下<formula>formula see original document page 3</formula>其中，R2和R3各自獨(dú)立地選自 <formula>formula see original document page 3</formula>R4選自氫、Cl-C6烷基(優(yōu)選甲基，乙基，丙基，乙丙基，丁基，異丁基)，C1-C6烷基苯基(優(yōu)選千基)，對(duì)羥基千基，或 。1 # Glu表示p-D-吡喃葡萄糖基，Me表示曱基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中所述派立辛衍生物為派立辛A、 B、 或C，其中派立辛(parishin) A、 B、 C的結(jié)構(gòu)式如下<formula>formula see original document page 3</formula>
全文摘要
本發(fā)明涉及含有派立辛衍生物的天麻植物提取物在制備用于防治血管性癡呆等疾病的藥物的用途。本發(fā)明還涉及從植物天麻(Gastrodiaelata Blume)中提取、精制植物提取物的制備方法，其中有效成分為派立辛衍生物，特別是派立辛A，B，C。其中采用醇提取，提取物經(jīng)色譜方法精制、純化，得到派立辛衍生物含量在35％，特別是50％以上的植物提取物。本發(fā)明的藥物劑型優(yōu)選包括注射劑、片劑、膠囊、軟膠囊、口服液或滴丸等。
文檔編號(hào)A61K36/88GK101628086SQ20081013240
公開日2010年1月20日 申請(qǐng)日期2008年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月15日
發(fā)明者曄 劉, 猛 張, 珂 王, 石建功, 趙立敏, 陳明霞 申請(qǐng)人:北京科萊博醫(yī)藥開發(fā)有限責(zé)任公司