專利名稱：：鞣花酸化合物及其制備和在抗癌藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種抗癌藥物及其制備方法，具體地說是以九牛造為原料提取分離得到的兩種具有抗癌活性鞣花酸類化合物及其制備方法和在抗癌藥物中的應用。
背景技術：
：癌癥是危害人類健康的大敵。我國每年新發(fā)癌癥病例約有160萬人，每年死于癌癥的約有130萬人，全國因癌癥而死亡的人數(shù)逐年上升，我國為肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等癌癥的高發(fā)區(qū)域，癌癥死亡率居高不下。癌癥給患者的身心都造成了難以修復和治愈的創(chuàng)傷。目前尚無有效的藥物可以治愈大多數(shù)癌癥患者，化療藥物對癌癥雖有一定療效，但毒副作用大，中成藥對癌癥的療效普遍較低，療效均不理想。目前臨床應用的抗癌藥物大多為細胞毒性藥物，在抑制腫瘤細胞增殖的同時，機體正常細胞的增殖也被抑制，如造血干細胞等，從而導致骨髓造血機能受損，紅細胞或白細胞水平低下，往往是抑制了腫瘤的增殖，但也破壞了患者的免疫力，最終很難取得良好的治療效果，也限制了化療藥物的臨床應用。因此，開發(fā)高效低毒、靶向性強的抗腫瘤藥物成為抗腫瘤藥物開發(fā)的熱點。經(jīng)資料查閱目前還沒有文獻報道這兩種鞣花酸化合物3，3'-di-0-methylellagicacid禾口3，3'-di-0—methylellagicacid-4—O—P-D-xylopyroside用于抗肝癌、胃癌等癌癥的治療。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種鞣花酸化合物，是一種高效、抗癌譜廣的抗癌單體化合物，具體地說是以九牛造為原料提取分離得到的兩種鞣花酸類化合物及其在制備治療肝癌胃癌藥物方面的應用。本發(fā)明的技術方案是這樣實現(xiàn)的本發(fā)明九牛造的浸膏中其抗癌的活性物質(zhì)主要是本發(fā)明的鞣花酸類物質(zhì)。本發(fā)明從九牛造(又名五朵云、翻天印、震天雷，EuphorbiahylonomaHand-Mazz.)中提取分離了兩種鞣花酸化合物，它們是3，3'-di-0-methylellagiGacid^i3，3'畫'di一O一methykllagiGadd一4一0一3-D—xylopyroside，其分子式分別為C16H1()08或C21H18012，結(jié)構(gòu)分別如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>或3，3'誦di一O一methylellagicacid一4一0一P-D一xylopyroside本發(fā)明兩種鞣花酸類化合物3，3'-di-O-methylellagicacid和3，3'-di-O-methylellagicacid—4'-0-P-D—xylopyroside的制備方去，其步驟是a、將九牛造粉碎后用體積濃度為50100%乙醇浸泡312h,回流提取15次，每次16h,合并提取液，減壓濃縮至浸膏；b、向浸膏中加入110倍量水，再分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，回收溶劑，分別得到石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分；c、將氯仿部分進行硅膠柱層析，先用石油醚-乙酸乙酯后用氯仿-甲醇為洗脫劑進行梯度洗脫，中間洗脫下來的化合物即為3，3'-di-O-methylellagicacid—4，一O-(3-D-xylopyroside;d、將乙酸乙酯部分也進行柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑進行梯度洗脫，中間洗脫下來的化合物即為3，3'-di-O-methylellagicacid。所述的C步驟洗脫劑石油醚-乙酸乙酯梯度變化為100:11:100，氯仿-甲醇梯度變化為100:11:100。所述的D步驟洗脫劑氯仿-甲醇梯度變化為100:11:100。3，3'-di-O-methylellagicacid或3，3'-di-O-methylellagicacid-4'-0—3-D—xyl叩yroside在制備抗肝癌或胃癌藥物中的應用。采用MTT法。取對數(shù)生長期SMMC-7721肝癌細胞，用完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為3XK)4個/ml，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔接種200ul，常規(guī)培養(yǎng)24h后加入化合物終濃度為10，25，50，80，IOOpg/ml,另設無藥物(含配制藥物的乙醇)培養(yǎng)液和空白對照孔，每個藥物濃度設5個復孔。加藥后將96孔板置于C(V恒溫箱37'C培養(yǎng)。在24、48、72h不同時間點，分別取出細胞板，每孔加入20u1質(zhì)量濃度為5mg/ml的MTT，常規(guī)培養(yǎng)4h，吸棄上清，每孔加入DMS0150ia，充分振蕩混勻，使沉淀結(jié)晶充分溶解，以490nm為檢測波長，利用酶標儀檢測各孔吸光度(OD)值。抑制率(％)=(1—處理組0D值/對照組0D值)X100%試驗結(jié)果表明，隨著3，3'國di-O-methylellagicacid和3，3'-di-O-methylellagicacid—4'—O-P-D-xylopyroside各自、濃度的升高，其對人肝癌細胞的抑制率也升高，當3，3'-di-O-methylellagicacid的濃度為100Ug/ml時對人肝癌細胞的抑制率高達75.3%,當和3，3'-di—O-methylellagicacid—4'—0—P曙D—xylopyroside的濃度為100ug/ml時對人肝癌細胞的抑制率高達64.9%。本發(fā)明中兩種鞣花酸類化合物在治療胃癌的藥物方面的應用。采用MTT法。取對數(shù)生長期SGC—7901胃癌細胞，用完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為3X104個/ml，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔接種200ul，常規(guī)培養(yǎng)24h后加入化合物終濃度為10，25,50，80，100ug/ml,另設無藥物(含配制藥物的乙醇)培養(yǎng)液和空白對照孔，每個藥物濃度設5個復孔。加藥后將96孔板置于C(V直溫箱37'C培養(yǎng)。在24、48、72h不同時間點，分別取出細胞板，每孔加入20u1質(zhì)量濃度為5mg/ml的MTT，常規(guī)培養(yǎng)4h,吸棄上清，每孔加入DMS0150y1，充分振蕩混勻，使沉淀結(jié)晶充分溶解，以490nm為檢測波長，利用酶標儀檢測各孔吸光度(0D)值。抑制率(％)=(l—處理組0D值/對照組0D值)X100%試驗結(jié)果表明，隨著3，3'-di-O—methylellagicacid和3，3'-di-O-methylellagicacid—4'-0-P-D—xylopyroside各自濃度的升高，其對人胃癌細胞的抑制率也升高，當3，3'-di-O-methyldlagicacid的濃度為100ug/ml時對人胃癌細胞的抑制率高達75.5%，當和3，3'-di-O-methylellagicacid-4'一0—P-D-xylopyroside的、濃度為100ug/ml時對人胃癌細胞的抑制率高達70.5%。本發(fā)明的兩種鞣花酸化合物3，3'-di-O-methylellagicacid和3，3'醫(yī)di—O—methylellagicacid-4'-O—P國D-xylopyroside是從中藥材九牛造中提取分離出來的抗癌單體化合物，毒副作用小，抗癌譜廣，對癌細胞有很明顯的抑制作用。本發(fā)明的兩種鞣花酸化合物3，3'-di-O-methyldlagicacid禾口3,3'-di—O—methylellagicacid-4—0—P-D—xylopyroside經(jīng)抗癌藥理試驗，結(jié)果表明其抗癌活性高。3，3'-di-O-methylellagicacid和3，3'-di—O—methylellagicacid—4'-0—釤國D—xylopyroside的濃度均為lOOpg/ml時對人肝癌細胞的抑制率分別高達75.3%和64.9%，對人胃癌細胞的抑制率分別高達75.5%和70.5%。據(jù)文獻報道，鞣花酸類物質(zhì)具有很強的抗腫瘤和抗突變作用，小鼠體內(nèi)實驗和人組織體外實驗都表明鞣花酸類物質(zhì)對各種腫瘤細胞都有很好的抑制作用，特別是對結(jié)腸癌、食道癌、肺癌、肝癌、乳腺癌和皮膚癌等腫瘤細胞效果顯著。SehrawatAnuradha等研究表明3,3'-di-O-methylellagicacid以50mg/kgbodywt.的劑量灌喂小鼠后產(chǎn)生肝癌腫瘤啟動抑制作用，據(jù)此推斷該化合物的木糖苷3，3'-di-O-methylellagicacid—4'—O-P-D—xyl叩yroside在動物體內(nèi)也同樣具有較好的抗癌活性，因此初步推斷本發(fā)明中的兩種鞣花酸類化合物3，3'-di-O-methyldlagicacid和3,3，-di-O-methylellagicacid—4'—O-3-D—xylopyroside對各種癌癥尤其是肝癌和胃癌具有較好的作用，從而這兩種鞣花酸化合物與藥學上可接受的載體及輔料結(jié)合后可以用于制備抗肝癌或抗胃癌藥物。'圖l是本發(fā)明3，3'-di—O—methylellagicacid的^-NMR圖譜；圖2是本發(fā)明3，3'-di—O—methylellagicacid的13C-NMR圖譜；圖3是本發(fā)明3，3'-di—O—methylellagicacid-4'-O—P-D-xylopyroside的^-NMR圖譜；圖4是本發(fā)明3，3'-di—O—methylellagicacid—4'—O—P-D—xylopyroside的13C-NMR圖譜；圖5是本發(fā)明3，3'-di-O-methylellagicacid-4'-0—P-D-xylopyroside的DEPT圖譜；圖6中A是空白對照組作用48h后SMMC-7721細胞的光鏡下形態(tài)圖；圖6中B是3，3'-di-O-methylellagicacid在濃度為10ng/mL時作用48h后SMMC-7721細胞的光鏡下形態(tài)圖6中C是3，3'-di-O-methylellagicacid在濃度為50ng/mL時作用48h后SMMC-7721細胞的光鏡下形態(tài)圖6中D是3，3'-di—O—methylellagicacid在濃度為lOO^g/mL時作用48h后SMMC-7721細胞的光鏡下形態(tài)圖7中A是空白對照組作用48h后SGC-7901細胞的光鏡下形態(tài)圖；圖7中B是3，3'-di-O-methylellagicacid-4，一O-P-D-xylopyroside在濃度為10pg/mL時作用48h后SGC-7901細胞的光鏡下形態(tài)圖；圖7中C是3，3'-di—O—methylellagicacid-4，-0-P-D-xylopyroside在濃度為50ng/mL時作用48h后SGC-7901細胞的光鏡下形態(tài)圖7中D是3，3'-di-O-methylellagicacid-4'—O—P畫D-xylopyroside在濃度為lOO^g/mL時作用48h后SGC-7901細胞的光鏡下形態(tài)圖。下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的內(nèi)容作進一步詳細說明。具體實施方式實施例1:兩種鞣花酸化合物3，3'-di-O-methylellagicacid和3，3'-di-O-methylellagicacid—4'-0—P-D-xylopyroside的提取分離方法①九牛造藥材于2005年10月采自陜西省太白縣境內(nèi)，經(jīng)自然風干后粉碎，將粉碎的九牛造9kg用85%乙醇浸泡12h,回流提取3次，每次4h，合并提取液，減壓濃縮至浸膏；②向浸膏中加入適量水，再分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，回收溶劑，分別得到石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分各20g、89g、170g;③將氯仿部分進行硅膠柱層析，先用石油醚-乙酸乙酯后用氯仿-甲醇為洗脫劑進行梯度洗脫，等量收集洗脫液每份150ml，共收集324份，將洗脫液分別做硅膠薄層層析，薄層板噴以10%硫酸乙醇溶液顯色，合并相同的洗脫液，從其中合并的212240份中析出了晶體，再以甲醇重結(jié)晶得到針狀結(jié)晶，即為本發(fā)明的3，3'國di-O-methylellagicacid-4'—O—卩-D-xylopyroside;④將乙酸乙酯部分也進行柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑進行梯度洗脫，等量收集洗脫液每份150ml，共收集350份，將洗脫液分別做硅膠薄層層析，薄層板噴以10%硫酸乙醇溶液顯色，合并相同的洗脫液，從其中合并的87-142份中析出了晶體，再以丙酮重結(jié)晶得到的晶體即為本發(fā)明的3，3'-di-O-methylellagicacid。實施例2:兩種鞣花酸化合物3，3'-di-O-methylellagicacid和3，3'國di-O-methylellagicacid-4'—O—P-D—xylopyroside的結(jié)構(gòu)鑒定乙酸乙酯部分柱層析時洗脫液中析出的晶體為淡黃色粉末狀結(jié)晶，熔點為332-334"C，MS顯示分子量為344，分子式為C16H1()08。通過iH-NMR和"C-NMR圖譜(見附圖1和附圖2)提示得其為鞣花酸類物質(zhì)，其化學結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>附圖1iH-NMR圖譜中波譜數(shù)據(jù)及歸屬如下'H-NMR(DMSO-d6)Sppm:4.05(6H,s，2xOCH3)，7.54(2H，s，H-5,H-5')，10.79(2H，s，0H-4，OH國4，)。附圖213C-NMR圖譜波譜數(shù)據(jù)及歸屬如下"C畫NMR(DMSO誦d6)5ppm:111.46(s，C-l,C-l，)，141.25(s，C國2，C陽2')，140.23(s，C-3，C-3，)，152.23(s，C-4，C畫4，)，U1.69(d,C國5，C-5，)，112.18(s，C曙6，C-6，)，158.52(s，C-7，C-7，)，61.00(q，2xOCH3)。'H-NMR、13C-NMR圖譜數(shù)據(jù)經(jīng)與文獻對照基本一致，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)確定此化合物為3，3，國di-o國methylellagicacid。氯仿部分柱層析時洗脫液中析出的晶體為白色粉末狀結(jié)晶，熔點為227-229°C，MS顯示分子量為462，分子式為C21H18012。通過1H-NMR，13C-NMR和DEPT圖譜提示得其為鞣花酸類物質(zhì)，其化學結(jié)構(gòu)式如下3，3'畫di-O-methylellagicacid-4一0-0-D-xylopyroside附圖3'H-NMR圖譜中波譜數(shù)據(jù)及歸屬如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>^誦NMR(DMSO)5ppm:S7.48(1H，d，J=5.3，H國5)，S7.73(1H，d，J=3.2，H畫5)，54.05(1H,s，3-OCH3)，54.08(1H，s，3，-OCH3)，S10.8(1H，s，4國OH)。附圖413C-NMR圖譜波譜數(shù)據(jù)及歸屬如下13C-NMR(DMSO)Sppm:111.07(C畫l)，140.94(02)，140.19(C國3)，151.26(04)，m.65(C畫5)，111.82(C-6)，158.37(C畫7)，114.19(C-1，)，141.58(C畫2')，141.98(C-3，)，152.84(C-4,)，112.02(C-5，)，112.72(C-6，)，152.40(C-7，)，101.94(C-r)，73.09(C-2"),76.17(C-3，，)，69.31(C-4"),65.84(C-5，，)，61.48(3-OCH3)，61.02(3，-OCH3)。附圖5DEPT圖譜波譜數(shù)據(jù)及歸屬如下DEPT譜提示該化合物有S111.89，111.60,101.84，76.18,73.08，69.28，61.68，61.02處為甲基或次甲基碳原子信號，S65.84為亞甲基碳原子信號，其余的均為季碳信號。'H-NMR、"C-NMR及DEPT圖譜數(shù)據(jù)經(jīng)與文獻對照基本一致，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)確定此化合物為3，3'-di-O-methylellagicacid-4'-O-P-D-xylopyroside。實施例3:3，3'-di-0-methylellagicacid禾口3，3'-di-O-methylellagicacid-4'-0-P-D—xylopyroside抗肝癌作用1.細胞培養(yǎng)與單體化合物人肝癌細胞株SMMC-7721由西安交通大學醫(yī)學研究試驗中心提供，細胞培養(yǎng)于含1(F。小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，培育在37。C、5%0)2的飽和濕度培養(yǎng)箱中，每23天細胞匯合時，用0.25%胰蛋白酶消化傳代，取對數(shù)生長期細胞用于試驗。兩個單體化合物是經(jīng)化學結(jié)構(gòu)鑒定的九牛造中鞣花酸物質(zhì)3，3'-di—O—methylellagicacid禾卩3,3'-di—O—methylellagicacid—4一0-P陽D-xyiopyroside。2.試驗方法采用MTT法測定九牛造中鞣花酸類物質(zhì)3，3'-di-O-methylellagicacid和3，3'-di-O-methylellagicacid—4'—O—P-D—xyiopyroside(用DMSO溶解)對肝癌細胞生長抑制作用。取對數(shù)生長期SMMC-7721肝癌細胞，用完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為3X104個/ml，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔接種200ul，常規(guī)培養(yǎng)24h后加入化合物終濃度為IO，25，50，80，100ug/ml,另設無藥物(含配制藥物的乙醇)培養(yǎng)液和空白對照孔，每個藥物濃度設5個復孔。加藥后將96孔板置于C02恒溫箱37。C培養(yǎng)。在24、48、72h不同時間點，分別取出細胞板，每孔加入20ul質(zhì)量濃度為5mg/ml的MTT，常規(guī)培養(yǎng)4h，吸棄上清，每孔加入DMS0150"1，充分振蕩混勻，使沉淀結(jié)晶充分溶解，以490nm為檢測波長，利用酶標儀檢測各孔吸光度(OD)值。抑制率(％)=(l—處理組OD值/對照組OD值)X100%3.試驗結(jié)果結(jié)果如表l所示，隨著3，3'-di—O-methylellagicacid和3，3'-di-0—methylellagicacid-4'-0-e曙D-xylopyroside各自濃度的升高，其對人肝癌細胞的抑制率也升高，當3，3'-di-O-methylellagicacid的濃度為100ug/ml時對人肝癌細胞的抑制率高達75.3%，當和3，3'-di-O-methylellagicacid—4'—0-P-D-xylopyroside的濃度為100yg/ml時對人肝癌細胞的抑制率高達64.9%。表1樣品1、2對SSMC-7721細胞的生長抑制率樣品濃度(|ig/ml)24h48h72h1010.2±0.8413.9±1.0215.8±U32517.3±1.0518.3±0.8519.5±0.8615020.6±1.2523.5±0.1332.2±1.278027.1±0.6732.7±0.3862,4±0.9310030.3±0.5835.6±1.5475.3±1.561010.2±0.2813.6±0.6722.3±1.07<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>其中3，3'-di-O-methylellagicacid在不同濃度時作用于人SMMC-7721肝癌細胞后肝癌細胞的光鏡下形態(tài)可見附圖6。由附圖6可以看出，在空白對照組中基本上都為活細胞，而在給藥組中都有不同比例的死細胞，并且隨著藥液濃度的增大，死細胞所占的比例越大，其中當藥液濃度達到IOOUg/ml時，死細胞的比例高達約3/4。實施例4:3，3'-di-O-methylellagicacid禾口3，3'-di-O-methylellagicacid-4'-0—P-D-xylopyroside的抗胃癌作用1.細胞培養(yǎng)與單體化合物人胃癌細胞株SGC-7901由西安交通大學醫(yī)學研究試驗中心提供，細胞培養(yǎng)于含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，培育在37。C、5%(:02的飽和濕度培養(yǎng)箱中，每23天細胞匯合時，用0.25%胰蛋白酶消化傳代，取對數(shù)生長期細胞用于試驗。兩個單體化合物是經(jīng)化學結(jié)構(gòu)鑒定的九牛造中鞣花酸物質(zhì)3，3'-di—O—methylellagicacid禾口3，3'-di—O—methylellagicacid—4—O—P-D—xylopyroside。2.試驗方法采用MTT法測定九牛造中鞣花酸類物質(zhì)3，3'-di-O-methylellagicacid禾口3，3'-di-O—methylellagicacid-4'—O—3-D—xylopyroside(用DMSO溶解)對胃癌細胞生長抑制作用。取對數(shù)生長期SGC—7901胃癌細胞，用完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為3x104個/ml，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔接種200ti1，常規(guī)培養(yǎng)24h后加入化合物終濃度為10，25，50，80，100pg/ml，另設無藥物(含配制藥物的乙醇)培養(yǎng)液和空白對照孔，每個藥物濃度設5個復孔。加藥后將96孔板置于C02恒溫箱37。C培養(yǎng)。在24、48、72h不同時間點，分別取出細胞板，每孔加入20^1質(zhì)量濃度為5mg/ml的MTT，常規(guī)培養(yǎng)4h,吸棄上清，每孔加入DMSO150pl，充分振蕩混勻，使沉淀結(jié)晶充分溶解，以490nm為檢測波長，利用酶標儀檢測各孔吸光度(OD)值。抑制率(％)=(l—處理組OD值/對照組OD值)xioo%3.試驗結(jié)果結(jié)果如表2所示，隨著3，3'國di-O-methylellagicacid和3，3'-di-O—methylellagicacid—4'—O—3-D—xylopyroside各自濃度的升高，其對人胃癌細胞的抑制率也升高，當3，3'-di-O-methylellagicacid的濃度為100ug/ml時對人胃癌細胞的抑制率高達75.5%,當和3，3'-di-O-methylellagicacid-4'-0-P-D—xylopyroside的濃度為100ug/ml時對人胃癌細胞的抑制率高達70.5%。表2樣品l、2對SGC-7901細胞的生長抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>1—3，3'-di—O—methylellagicacid2—3，3'-di—O-methylellagicacid—4—O—P-D—xylopyroside其中3，3'-di-O-methylellagicacid-4_0-|3-D—xylopyroside在不同濃度時作用于人SGC-7901胃癌細胞后胃癌細胞的光鏡下形態(tài)可見附圖7。由附圖7可以看出，在空白對照組中基本上都為活細胞，而在給藥組中活細胞數(shù)下降，并且隨著藥液濃度的增大，活細胞的比列越來越小，對應的死細胞所占的比例越來越大，其中當藥液濃度達到10(^g/ml時，死細胞的比例可達到7/10左右。權利要求1.抗癌鞣花酸類化合物，其特征在于，它們是3，3’-di-O-methylellagicacid或3，3’-di-O-methylellagicacid-4‘-O-β-D-xylopyroside，分子式分別為C16H10O8或C21H18O12，其化學結(jié)構(gòu)分別為id="icf0001"file="S2008100182305C00011.gif"wi="77"he="35"top="82"left="79"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>3，3’-di-O-methylellagicacid或者id="icf0002"file="S2008100182305C00012.gif"wi="112"he="38"top="144"left="69"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>3，3’-di-O-methylellagicacid-4-O-β-D-xylopyroside2、一種制備權利要求1所述的抗癌鞣花酸類化合物制備方法，其特征在于，包括下列步驟a、將九牛造粉碎后用體積濃度為50100%乙醇浸泡312h，回流提取15次，每次16h,合并提取液，減壓濃縮至浸膏；b、向浸膏中加入110倍量水，再分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，回收溶劑，分別得到石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分；c、將氯仿部分進行硅膠柱層析，先用石油醚-乙酸乙酯后用氯仿-甲醇為洗脫劑進行梯度洗脫，中間洗脫下來的化合物即為3，3'-di-O-methylellagicacid—4一0-(3-D—xylopyroside;d、將乙酸乙酯部分也進行柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑進行梯度洗脫，中間洗脫下來的化合物即為3，3'-di-0-methylellagicacid。3、根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的C步驟洗脫劑石油醚-乙酸乙酯梯度變化為100:11:100，氯仿-甲醇梯度變化為100:l1:亂4、根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的D步驟洗脫劑氯仿-甲醇梯度變化為100:11:100。5、一種如權利要求1所述的3，3'-di-O-methylellagicacid或3，3'-di—O—methylellagicacid_4'—O—P-D—xylopyroside在帝U備抗肝癌或胃癌藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了鞣花酸化合物及其制備和在抗癌藥物中的應用，該化合物都是從九牛造(大戟屬植物湖北大戟的根及地上部分)提取分離得到的抗癌單體化合物，其制備方法是首先將風干的九牛造粉碎后用乙醇提取，濃縮得浸膏；其次，再用氯仿和乙酸乙酯萃取，分別經(jīng)過柱層析，再用洗脫劑洗脫分別得到兩種鞣花酸化合物，經(jīng)抗癌藥理實驗對人肝癌細胞和胃癌細胞的生長有明顯的抑制作用，并具有抗癌譜廣抗癌活性較強等優(yōu)點，從而這兩種鞣花酸化合物與藥學上可接受的載體及輔料結(jié)合后可以用于制備抗肝癌或抗胃癌藥物。文檔編號A61K31/7048GK101289453SQ200810018230公開日2008年10月22日申請日期2008年5月16日優(yōu)先權日2008年5月16日發(fā)明者卜筱茜,穎徐,林譚,郭增軍申請人:西安交通大學