專利名稱：：一種含有阿德福韋酯的復(fù)方藥用組合物及其制備方法、用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種以阿德福韋酯和另外一種類核苷(酸)抗病毒藥物為活性成分的藥用組合物及其制備方法、用途，屬于醫(yī)藥
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。技術(shù)背景長期核苷(酸)類似物治療所面臨的主要問題之一是抗病毒耐藥突變株的選擇。耐藥突變株得以篩選的發(fā)生率與治療前的血清HBVDNA水平、病i抑制的速度、療程及以往核苷(酸)類似物治療史等因素有關(guān)。基因型耐藥的發(fā)生率還與耐藥突變檢測(cè)方法的敏感性及所檢測(cè)的患者群體有關(guān)。HBV對(duì)抗病毒藥物的耐藥分為表型耐藥和基因型耐藥。表型耐藥是指在治療期間病毒水平上升，一般用抗病毒藥物濃度(IC50)測(cè)定，IC50增加說明藥物敏感性下降或耐藥程度增加，需要更大的藥物劑量才能抑制變異的病毒?；蛐湍退幨侵覆《揪酆厦富蛲蛔儯纬尚碌牟《净蛐蛄?，一般采用DNA測(cè)序、基因芯片等方法測(cè)定。發(fā)生變異的病毒?？筛淖兤渖飳W(xué)特性，給慢性乙型肝炎防治帶來一系列問題。因此加強(qiáng)HBV變異的研究，具有重要的生物學(xué)及臨床意義HBV對(duì)拉米夫定耐藥是HBVDNA聚合酶突變所致。耐藥基因位點(diǎn)(YMDD)位于聚合酶的C區(qū)(rtM2041或rtM204V),分別是YMDD中的蛋氨酸(M)被異亮氨酸(I)或纈氨酸(V)所替代,形成YIDD或YVDD變異,這兩種變異分別是HBV基因組第739位堿基腺嘌呤被鳥嘌呤取代(A—G)和第741位堿基鳥嘌呤被胸腺嘧癥取代(G—T)。拉米夫定作用靶位為HBVDNA聚合酶C區(qū)。有研究表明,拉米夫定與HBV逆轉(zhuǎn)錄酶的親和力與位于第552位氨基酸側(cè)鏈長度有關(guān)，異亮氨酸和纈氨酸取代蛋氨酸，使側(cè)鏈氨基酸長度縮短,使逆轉(zhuǎn)錄酶dNTP結(jié)合區(qū)增大，不適于拉米夫定結(jié)合，從而誘發(fā)耐藥性。此外，位于逆轉(zhuǎn)錄酶B區(qū)第528位亮氨酸被蛋氨酸取代(L528M)，可增加HBV的復(fù)制能力和耐藥性。拉米夫定所誘導(dǎo)的YMDD變異的比例隨著服藥時(shí)間的延長而增加,第1年、2年、3年、4年的耐藥發(fā)生率分別為14%、38%、49%和66%。當(dāng)變異株成為優(yōu)勢(shì)株時(shí),就可能出現(xiàn)耐藥，病毒重新活躍復(fù)制,病毒載量升高。阿德福韋酯是第一個(gè)核苷酸類似物,它的二磷酸結(jié)構(gòu)形式能直接抑制DNA聚合酶,進(jìn)而抑制HBV復(fù)制。它的抗病毒作用位點(diǎn)不同于拉米夫定,這也是HBV對(duì)阿德福韋酯與拉米夫定不具有交叉耐藥的理論基礎(chǔ)。阿德福韋酯的抗病毒療效與拉米夫定類似，只是在初始階段病毒負(fù)荷下降的速度較慢。在長期接受阿德福韋酯治療的病例中也發(fā)現(xiàn)了耐藥變異株(N236T或A181V),但其發(fā)生率很低。對(duì)于HBeAg陽性病人,應(yīng)用阿德福韋酯1年、2年、3年時(shí)耐藥發(fā)生率分別為0、1.6%和3.1%。朋eAg陰性患者1年、2年、3年的耐藥發(fā)生率分別為O、3.0%和5.9%11%。所有拉米夫定耐藥株對(duì)阿德福韋酯均敏感，而阿德福韋酯耐藥株對(duì)拉米夫定也敏感。到目前為止,還沒有發(fā)現(xiàn)同時(shí)對(duì)這兩種抗病毒藥物都耐藥的病毒株。根據(jù)阿德福韋酯初始治療作用慢、耐藥率低的特點(diǎn)，比較適用于肝臟基礎(chǔ)稍差的病人，能盡可能減少因病毒變異所造成的病情反復(fù)。正是由于阿德福韋酯有這樣的特點(diǎn),不適合用于因病毒復(fù)制所致的重癥肝炎病人，在替代拉米夫定治療YMDD變異株時(shí),要與拉米夫定重疊使用13個(gè)月，根據(jù)病毒和肝功能的情況調(diào)整治療。恩替卡韋是環(huán)氧羥碳脫氧鳥苷，三磷酸結(jié)構(gòu)形式的恩替卡韋主要通過抑制病毒聚合酶的引導(dǎo)、從前基因組到負(fù)鏈的逆轉(zhuǎn)錄和DNA正鏈合成。恩替卡韋可抑制耐拉米夫定毒株的復(fù)制，但抗病毒活性降低。體外實(shí)驗(yàn)表明,拉米夫定耐藥株對(duì)恩替卡韋的敏感性低于野毒株，HBV變異位點(diǎn)為rtl84、rt202、rt2鄰，可能是通過限制恩替卡韋與HBV多聚酶的結(jié)合從而導(dǎo)致耐藥發(fā)生。恩替卡韋對(duì)不同變異病毒株抗病毒活性降低程度不同，對(duì)M204I變異株要求恩替卡韋濃度增髙(約30倍)。m期臨床研究結(jié)果顯示，對(duì)發(fā)生YMDD變異者將恩替卡韋劑量提髙至每日1mg能有效抑制HBVDNA復(fù)制。對(duì)初治患者治療1年時(shí)對(duì)恩替卡韋的耐藥發(fā)生率為O，但對(duì)已發(fā)生YMDD變異患者治療1年時(shí)的耐藥發(fā)生率為5.8%，只有在感染拉米夫定耐藥變異株的病人，才會(huì)出現(xiàn)恩替卡韋耐藥表型。我公司經(jīng)過藥理學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)當(dāng)阿德福韋酷與其它另外一種類核苷(酸)抗病毒藥物合用時(shí)，能顯著預(yù)防其耐藥性的形成。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供了一種以阿德福韋酯和另外一種類核苷(酸)抗病毒藥物為活性成分的藥用組合物，其特征在于，它是阿德福韋酯和另外一種類核苷(酸)抗病毒藥物形成的活性成分，與藥學(xué)上可接受的輔料混合形成的復(fù)方藥用組合物。以上所述的另外的類核苷(酸)抗病毒藥物，包括但不限于拉米夫定、替比夫定、替諾福韋、恩替卡韋等中的一種或幾種。當(dāng)這些藥物形成復(fù)方藥用組合物，其活性成分的組成可以是阿德福韋酯+拉米夫定、阿德福韋酯十替比夫定、阿德福韋酯+替諾福韋、阿德福韋酯+恩替卡韋。在以阿德福韋酯+拉米夫定為活性成分組成的復(fù)方藥用組合物時(shí)，單位劑量中阿德福韋酯的用量為10mg20mg，拉米夫定的用量為25mg400mg。優(yōu)選為50mg200mg。其所能組成的復(fù)方包含但不僅限于阿德福韋酯10mg+拉米夫定100mg;阿德福韋酯20m+拉米夫定100mg。在以阿德福韋酯+替比夫定為活性成分組成的復(fù)方藥用組合物時(shí)，單位劑量中阿德福韋酯的用量為10mg20mg，替比夫定的用量為150mg1200mg。優(yōu)選為300mg800mg，其所能組成的復(fù)方包含但不僅限于阿德福韋酯10mg+替比夫定600mg;阿德福韋酯20mg+替比夫定600邁g。在以阿德福韋酯+替諾福韋為活性成分組成的復(fù)方藥用組合物時(shí)，單位劑量中阿德福韋酯的用量為10mg20mg，替諾福韋的用量為75mg900mg。優(yōu)選為150mg600mg,其所能組成的復(fù)方包含但不僅限于阿德福韋酯10mg+替諾福韋300mg;阿德福韋酯20mg+替諾福韋300mg。在以阿德福韋酯+恩替卡韋為活性成分組成的復(fù)方藥用組合物時(shí)，單位劑量中阿德福韋酯的用量為10mg20mg，恩替卡韋的用量為0.125mg2mg。優(yōu)選為0.25mglmg，其所能組成的復(fù)方包含但不僅限于阿德福韋酯10mg+恩替卡韋0.5mg;阿德福韋酯20mg+恩替卡韋0.5mg。當(dāng)這些藥物形成復(fù)方藥用組合物時(shí)為口服制劑。這些供口服的藥用組合物，可制成片劑、膠囊、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、口含片、滴丸、軟膠囊劑等。通過以下實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步說明本復(fù)方在用于耐藥乙肝病毒的作用1)新組方的藥效學(xué)試驗(yàn)細(xì)胞株及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)所用細(xì)胞為YMDD變異HBVDNA轉(zhuǎn)染的H印G22.2.15細(xì)胞株。該細(xì)胞含有整合的YMDD變異朋VDNA,在培養(yǎng)過程中，能持續(xù)、穩(wěn)定地向培養(yǎng)液中分泌朋sAg及HBVDNA。H印G22.2.15細(xì)胞在含10%的胎牛血清培養(yǎng)液中生長到70%培養(yǎng)瓶面積(約3乂106細(xì)胞，25crri2培養(yǎng)瓶)時(shí)，改用含2%的胎牛血清培養(yǎng)液，并開始給予新組方治療(治療組1(阿德夫韋8ugml、拉苤夫定80ugm11)、治療組2(阿德夫韋8ugml—'+替比夫定24ugmr)、治療組3(阿德夫韋8ugml—'+替諾福韋24ugmr')、治療組4(阿德夫韋8ugml'+恩替卡韋0.4ugml1),總培養(yǎng)液量5ml/25cm2),并應(yīng)用相同的細(xì)胞不含藥物同期培養(yǎng)作對(duì)照(對(duì)照組)，每2d換培養(yǎng)液一次。治療組補(bǔ)充新的相同濃度的新組方，并治療10d。細(xì)胞上清液收集后，進(jìn)行HBV病毒學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)。HBsAg的ELISA定量監(jiān)測(cè)應(yīng)用美國Abbott公司提供的試劑盒定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中冊(cè)sAg的量。HBVDNA定量檢測(cè)應(yīng)用美國Chiron公司提供的試劑盒，應(yīng)用分支鏈DNA法(bDNA)，定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中HBVDNA含量。細(xì)胞生長及毒性監(jiān)測(cè)在治療期間及治療結(jié)桌時(shí)，每日觀察細(xì)胞形態(tài)。在收集細(xì)胞時(shí).先用胰蛋白酶處理，并用Trypan藍(lán)染色計(jì)數(shù)。細(xì)胞毒性應(yīng)用熒光分光光度法測(cè)定總細(xì)胞DNA量來反映。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理定量檢測(cè)的HBsAg、HBVDNA結(jié)果，在對(duì)照組及治療組應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)新組方對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液中HBsAg的抑制作用結(jié)果見圖l。圖l表明，在各治療組，細(xì)胞培養(yǎng)液中的HBsAg，在治療的第2天起，開始下降，至治療結(jié)束時(shí)(第10天)，HBsAg明顯降低。而在對(duì)照組，H印G22.2.15細(xì)胞培養(yǎng)液中的HBsAg隨著培養(yǎng)時(shí)間的進(jìn)展，穩(wěn)定、持續(xù)地分泌，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩組之間在治療第6天開始，差異有顯著性(P〈005.n=6)。新組方對(duì)細(xì)胞外冊(cè)VDNA的抑制作用結(jié)果見圖2。圖2表明，在新組方治療第2天起，細(xì)胞外HBVDNA即開始下降，在治療過程中及治療結(jié)束時(shí)，細(xì)胞外HBVDNA明顯下降。而在對(duì)照組，細(xì)胞外HBVDNA,隨著培養(yǎng)時(shí)間的進(jìn)展，持續(xù)、穩(wěn)定地分泌表達(dá)。g計(jì)學(xué)處理，從治療第4天起，差異有顯著性.而在治療結(jié)束時(shí)(第IO天)，差異有高度顯著性(P〈0.01，n=6)。2)新組方的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)。在治療過程中，對(duì)照組及治療的細(xì)胞形態(tài)，每日用相差顯微鏡觀察，未發(fā)現(xiàn)明顯的變化。治療完成時(shí)，應(yīng)用Trypan藍(lán)染色計(jì)數(shù)，兩組的細(xì)胞總數(shù)，二者之間差異無顯著性(P>005，n=6〉應(yīng)用熒光分光光度法，測(cè)定細(xì)胞總DM。在對(duì)照組及治療組之間，細(xì)胞總DNA量，差異無顯著性(P〉0.05，n=6)。結(jié)果表明在新組方治療過程及治療完成時(shí)，與對(duì)照組相比，新組方對(duì)H印G22.2.15細(xì)胞的形態(tài)、分裂與生長及細(xì)胞DNA的合成無明顯的影響，在該實(shí)驗(yàn)藥物濃度下，新組方細(xì)胞毒性作用不明顯。具體實(shí)施方式通過以下實(shí)例來對(duì)本發(fā)明的阿德福韋酯和其他的類核苷(酸)類藥物組成的復(fù)方制劑做進(jìn)一步具體說明，但并不僅限于以下實(shí)例。實(shí)施例l復(fù)方阿德福韋酯拉米夫定片處方組分用量阿德福韋酯10g拉米夫定100g微晶纖維素80gCMS-Na6g硬脂酸鎂'4g共制成1000片制備方法將阿德福韋酯、拉米夫定分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備用；將微晶纖維:硬脂酸鎂其中中，充分混合均勻，粉末直接壓片，即得。實(shí)施例2:復(fù)方阿德福韋酯拉米夫定膠囊劑處方-組分用量阿德福韋酯20g拉米夫定'100g預(yù)膠化淀粉20g滑石粉5g共制成1000粒制備方法將阿德福韋酯、預(yù)膠化淀粉分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備用；加入到已過80目篩的拉米夫定中，充分混合均勻，最后加入滑石粉，分裝，即得。實(shí)施例3:復(fù)方阿德福韋酯替比夫定咀嚼片劑處方:組分用量阿德福韋酯20g替比夫定600g木糖醇250g甘露醇250g甜橙香精15g阿斯巴甜15g2%PVP-k30乙醇溶液適量硬脂酸鎂10g共制成1000粒制備方法:將阿德福韋酯等原輔料分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備用加入2^PVP-lc30乙醇溶液，制軟材，16目篩制粒，干燥，20目篩整粒，加入其他的矯味劑、甜味劑、助流劑混合均勻，壓片.即得。實(shí)施例4:復(fù)方阿德福韋酯替諾福韋分散片劑處方組分用量阿德福韋酯10g替諾福韋'300g微晶纖維素150gPPVP12gL-HPC3g甜菊苷4g甜橙香精10g微粉硅膠lg75%乙醇溶液適量共制成誦片制備方法-將阿德福韋酯、替諾福韋等原輔料分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勾，備用；加入75%乙醉溶液，制軟材，16目篩制粒，干燥，20目篩整粒，加入其他的矯味劑、甜味劑、助流劑、崩解劑等混合均勻，壓片，即得。實(shí)施例5:復(fù)方阿德福韋酯恩替卡韋口腔崩解片處方<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制備方法:取以上各原輔料，均過100目篩，備用。取恩替卡韋，按照等量遞加法與微粉硅膠、部分預(yù)膠化淀粉、阿德福韋酯混合均勻后，再加入等量其他輔料混合均勻，采用粉末直接壓片法進(jìn)行壓片，即得。實(shí)施例6:復(fù)方阿德福韋酯恩替卡韋滴丸劑處方<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制備方法:將阿德福韋酯和恩替卡韋過80目篩，備用；另將PEG6000、Ploxamer188混合后加熱至約6(TC使熔融；將阿德福韋酯和恩替卡韋加至熔融液中攪拌均勻，移至滴斗中，保溫約601C，調(diào)節(jié)滴頭大小，以一25X:的二甲基硅油為冷卻相，進(jìn)行滴制，過濾，洗滌、選丸，即可。實(shí)施例6:復(fù)方阿德福韋酯恩替卡韋軟膠襄劑處方<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>制備方法:先將約8(mPEG400加熱至40—60'C，加入阿德福韋酯、恩替卡韋，攪拌使溶解,再加入處方量的丙二醇、甘油、吐溫一80，攪拌均勻后，續(xù)加余量PEG400，得到澄明溶液，調(diào)配好膠皮成分，使之稱膠態(tài)，壓制軟膠囊，即可。圖1是新組方對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液中HBsAg的抑制作用結(jié)果示意圖圖2是新組方對(duì)細(xì)胞外HBVDNA的抑制作用結(jié)果示意圖權(quán)利要求1.本發(fā)明為一種以阿德福韋酯和另外一種類核苷(酸)抗病毒藥物為活性成分的藥用組合物，其特征在于，它是阿德福韋酯和另外一種類核苷(酸)抗病毒藥物形成的活性成分，與藥學(xué)上可接受的輔料混合形成的復(fù)方藥用組合物。2.如權(quán)利要求1所述的另外的類核苷(酸)抗病毒藥物，其特征在于，包括但不限于拉米夫定、替比夫定、替諾福韋、恩替卡韋等中的一種或幾種。3.如權(quán)利要求1所述的復(fù)方藥用組合物，其活性成分的組成可以是阿德福韋酯+拉米夫定、阿德福韋酯+替比夫定、阿德福韋酯+替諾福韋、阿德福韋酯+恩替卡韋。4.如權(quán)利要求3所述的復(fù)方藥用組合物，其特征在于，所述各個(gè)組方中的阿德福韋酯的用量為每單位劑量為2rag80mg。優(yōu)選為5mg40mg。特別優(yōu)選為10mg、20mg。5.如權(quán)利要求3所述的阿德福韋酯+拉米夫定復(fù)方藥用組合物，其特征在于，所述的拉米夫定的用量為每單位劑量為25mg400mg。優(yōu)選為50mg200mg。特別優(yōu)選為100mg。6.如權(quán)利要求3所述的阿德福韋酯+替比夫定復(fù)方藥用組合物，其特征在于，所述的替比夫定的用量為每單位劑量為150mg1200mg。優(yōu)選為300mg800mg。特別優(yōu)選為600mg。7.如權(quán)利要求3所述的阿德福韋酯+替諾福韋復(fù)方藥用組合物，其特征在于，所述的替諾福韋的用量為每單位劑量為75rag900mg。優(yōu)選為150mg600mg。特別優(yōu)選為300mg。8.如權(quán)利要求3所述的阿德福韋酯+恩替卡韋復(fù)方藥用組合物，其特征在于，所述的恩替卡韋的用量為每單位劑量為0.125mg2mg。優(yōu)選為0.25mglmg。特別優(yōu)選為0.5mg。9.如權(quán)利要求1所述的復(fù)方藥用組合物，其特征在于，這種藥用組合物為口服制劑。所述的口服制劑可制成片劑、膠囊、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、口含片、滴丸、軟膠囊劑等。10.權(quán)利要求18所述的復(fù)方藥用組合物，可用于乙型病毒肝炎的初期治療或是己經(jīng)產(chǎn)生耐藥性的乙型病毒肝炎的治療。全文摘要本發(fā)明涉及一種以阿德福韋酯和另外一種類核苷(酸)抗病毒藥物為活性成分的藥用組合物及其制備方法、用途。它是以阿德福韋酯和另外一種類核苷(酸)抗病毒藥物為藥用活性成分，與藥學(xué)上可接受的輔料混合形成的藥用組合物，可用于乙型病毒肝炎的治療。本
發(fā)明內(nèi)容以阿德福韋酯和另外一種類核苷(酸)抗病毒藥物為原料，加入一些特定的種類和比例的輔料，按照本發(fā)明所說明的技術(shù)手段制備開發(fā)成片劑、膠囊、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、口含片、滴丸、軟膠囊劑等各種口服制劑。文檔編號(hào)A61P31/20GK101229178SQ20071017815公開日2008年7月30日申請(qǐng)日期2007年11月27日優(yōu)先權(quán)日2007年11月27日發(fā)明者陳瑞晶申請(qǐng)人:北京潤德康醫(yī)藥技術(shù)有限公司