專利名稱：一種復方魚腥草滴丸的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復方魚腥草滴丸質(zhì)量控制方法，具體地說是通過薄層色譜定性法和高效液相定量法控制復方魚腥草滴丸的質(zhì)量。
背景技術(shù)：
上呼吸道感染、急性扁桃體炎、咽炎、慢性支氣管炎是臨床上常見病、多發(fā)病，臨床治療以使用抗微生物化學藥為多見，但治標不治本，反復使用這些藥物反而導致耐藥菌產(chǎn)生，同時較多的毒副作用也使應用受到限制。傳統(tǒng)的中藥劑型雖然可以克服化藥帶來的不良反應，但其本身的釋藥系統(tǒng)不完善以及質(zhì)量不穩(wěn)定、可控性差的缺陷使臨床推廣應用受到限制。復方魚腥草滴丸兼顧了上述兩者的優(yōu)點，克服了它們的不足，是一個利用現(xiàn)代技術(shù)和先進適用技術(shù)改造傳統(tǒng)中藥劑型的現(xiàn)代中藥，尤其是對其質(zhì)量控制指標達到一個較高水平。
本處方中應用了魚腥草、黃芩、板藍根、連翹、金銀花，通過對其理化性質(zhì)及藥理藥效學研究表明，測定其結(jié)構(gòu)明確的有效活性成分作為質(zhì)量控制指標是一個優(yōu)選方案。
魚腥草(Herba houttuyniae)為三白草科植物蕺菜Houttuynia cordataThunb.的干燥地上部分。
其化學成分主要為1、揮發(fā)性成分含揮發(fā)油約0.05％，油中有效成分為醛酮化合物、癸酰乙醛(魚腥草素Decanoylacetaldehyde)、月桂醛(Lauraldehyde)；并含有醛酮化合物2-十一烷酮(2-undecanone)、倍半萜人合物丁香烯(caryophyllene)、單萜烯化合物α-蒎烯(α-pinene)、莰烯(camphene)等；2、黃酮類化合物含有槲皮素(quercetin)，槲皮苷(quercitrin)、異槲皮苷(isoquercitrin)等；另外還含有有機酸及脂肪酸、無機鹽類等等(陰健.中藥現(xiàn)代化研究與臨床應用，I，457頁。)。
CH3CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C-CH3甲基正壬酮[3]魚腥草的含量測定主要測定總?cè)┩衔?、癸酰乙醛、?蒎烯等，近年來的研究主要測定方法有比色法、容量法、紅外光譜法、氣相層析法、滴定法等(陰健.中藥現(xiàn)代研究與臨床應用，I，458頁)。
黃芩(Radix scutellariae)為唇形科植物黃芩Scutellariabaicalensis Georgi.的干燥根。
其主要成分為黃酮類。黃酮 黃芩苷元(baicalein)、黃芩苷(baicalin)、5、6-二羥基-黃酮-7-O-葡萄糖苷(5，6-dihydroxy-7-O-glucoside-flavone)、白楊黃素(chrysin)、5，7，2’-三羥基-黃酮(5，7，2’-trihydrox-y-flavone)、5，7，2’，3’-四羥基黃酮(5，7，2’，3’-tetraflavone)、去甲漢黃芩素(nor-wogonin)、漢黃芩素(Wogonin)、漢黃芩苷(Wogonoside)、黃芩新素I(skullcapflavoneI)、黃芩新素II(skullcapflavone II)等；二氫黃酮7，2’，6’-三羥基-5-甲氧基二氫黃酮(7，2’，6’-trihydroxy-5-methoxyflavanone)等；查爾酮 7，2’，6’-三羥基-5-甲氧基-查爾酮(7，2’，6’-trihydroxy-5-methoxychalcone)等；二氫黃酮醇3，5，7，2’，6’-五羥基二氫黃酮醇(3，5，7，2’，6’-pentahydroxy flavanonll)等；黃酮醇3，5，7，2’，6’-五羥基黃酮醇(3，5，7，2’，6’-pentahydroxyflavanonol)等；還含有苯乙醇葡萄糖苷、氨基酸、揮發(fā)油等(陰健.中藥現(xiàn)代研究與臨床應用，I，560頁)。黃芩素R＝H黃芩新素I R1＝R2＝H黃芩苷R＝gluA黃芩新素II R1＝R2＝OCH3[7]漢黃芩素R＝H漢黃芩苷R＝gluA[7]黃芩的含量測定主要有比色法、雙波長紫外分光光度法、薄層層析-比色法、薄層掃描法、高效液相色譜法等(陰健.中藥現(xiàn)代研究與臨床應用，I，560頁)。板藍根(Radix isatidis)為十字花科植物菘藍Isatisindigotica Fort.的干燥根。板藍根中含有總氨基酸3.8％，氨基酸中有精氨酸、谷氨酸、酪氨酸、脯氨酸、纈氨酸、亮氨酸、γ-氨基丁酸等，以及蛋白質(zhì)、樹脂狀物等。靛藍、靛玉紅、1-硫氰酸-2-羥基-3-丁烯、左旋5-乙烯基惡唑啶-2硫酮、色胺酮、青黛酮、腺苷、尿苷、次黃嘌吟、尿嘧啶、棕櫚酸、水楊酸、β-谷甾醇、γ-谷甾醇、胡蘿卜苷等，此外尚含有蔗糖20.3％、樹脂等(苗明三李振國.現(xiàn)代實用中藥質(zhì)量控制技術(shù)，617頁)。
連翹(Fructus forsythiae)為木犀科植物連翹Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實。
其主要化學成分為1、揮發(fā)性成份主要存在于種子中，含量平均3.8％。其烴類有α-蒎烯(α-pinene)、莰烯(camphene)、β-蒎烯(β-pinene)、對聚傘花烯、檸檬烯、γ、松油烯、β-水芹烯、香葉烯、β-羅勒烯等；醛酮類有樟腦(camphor)、香葉醛(geranial)；醇酯醚類有龍腦(borneol)等。
2、苯乙醇甙類連翹酯甙(forsythoside)A，B，C，D，連翹酚(forsythol)其次為。另外還有含有三萜類、香豆素類等成分(陰健.中藥現(xiàn)代研究與臨床應用，I，356-357頁)。連翹的含量測定主要有薄層掃描法、反射法等(陰健.中藥現(xiàn)代研究與臨床應用，I，357頁)。金銀花(Floslonicerae)為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、紅腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山銀花Lonicera confusa DC.或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或帶初開的花。
其主要化學成分為金銀花中揮發(fā)油中含有30多種成份，主要有芳樟醇(linalool)、(-)-順-2，6，6-三甲基-2-乙烯基-5-羥基四氫吡喃[(-)-cis-2，6，6-trimethyl-2-ethenyl-5-hydroxytetrapyrane]、蒎烯(pinene)、1-己烯(1-hexene)、順-3-己烯醇-1(cis-3-hexenol-1)等，另外花蕾中含有木犀草素(luteolin)、肌醇(inositol)。分離出綠原酸(chlorogenicacid)和異綠原酸(isochlorogenic acid)等(陰健.中藥現(xiàn)代研究與臨床應用，I，449頁)。
金銀花中含量測定主要有容量法、比色法、薄層層析斑點定量法、氣相層析法、紫外分光光度法、高效液相法等(陰健.中藥現(xiàn)代研究與臨床應用，I，450-452頁)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種復方魚腥草滴丸的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明的質(zhì)控方法采用了現(xiàn)代技術(shù)薄層色譜法鑒別復方魚腥草滴丸中魚腥草的甲基正壬酮、黃芩中的黃芩苷、板藍根中的精氨酸、連翹中的連翹苷、金銀花中的綠原酸。
本發(fā)明是這樣來實現(xiàn)的，其實施步驟如下一、魚腥草中甲基正壬酮的檢測方法1、供試品的制備取復方魚腥草滴丸30g，加水500ml，按揮發(fā)油測定法甲法(中國藥典2000版一部附錄XD)在測定器刻度部分加滿水，加入2ml醋酸乙酯，提取揮發(fā)油4小時，放冷，分取蠟酸乙酯層，作為供試品溶液。
2、對照品溶液的制備另取甲基正壬酮對照品，加醋酸乙酯到制成每ml含0.1ml的溶液，作為對照品溶液。
3、檢測方法照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶出液6μl，對照品溶液4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(7～9∶3～1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜中相應位置上，顯相同顏色的斑點。
二、黃芩中黃芩苷的檢測方法1、供試品的制備取復方魚腥草滴丸2g，加溫水20ml，超聲10分鐘，調(diào)PH1.5~2，80℃保溫1h，離心，棄去上清液，沉淀水洗二次，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試液。
2、對照品溶液的制備另取黃芩甙對照品，加甲醇制成每ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。
3、檢測方法照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試液1μl，對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(5～8∶0.5～2∶1～3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上顯相同顏色的斑點。
三、連翹中連翹苷的檢測方法1、供試品的制備取復方魚腥草滴丸30g，加水100ml，溫熱溶解，調(diào)PH1.5~2，80℃保溫1h，離心，取上清液，乙醚提取三次(60，40，40ml)，母液用醋酸乙酯提取三次(50，50，50ml)，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，10ml水溶解，加在D101大孔樹脂柱(內(nèi)徑1.6cm，長度18cm，大孔樹脂量為柱長2/3量)上，用100ml水洗脫，再用25％-50％乙醇50ml洗脫，收集洗脫液(備用)，繼用50％-80％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，加10ml水溶解，加入中性氧化鋁適量，拌勻，減壓干燥，加入中性氧化鋁柱(200~300目，5g，內(nèi)徑1.5~2cm，干法裝柱)，50％-80％乙醇洗脫100ml，收集洗脫液，蒸干，殘渣加2ml甲醇使溶解，作為供試液。
2、對照品溶液的制備另取連翹甙對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。
3、檢測方法照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試液3μl，對照品溶液1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點。
四、金銀花中綠原酸的檢測方法1、供試品溶液的制備取鑒別(三)下25％-50％乙醇洗脫液，水浴蒸干，甲醇溶解，定容于5ml量瓶，作為供試液。
2、對照品溶液的制備另取綠原酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。
3、檢測方法照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試液2μl，對照品溶液2μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm熒光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
五、板藍根中精氨酸的檢測1、供試品溶液的制備取本品5g，加水150ml溫熱溶解，加在氫型強酸性陽離子交換樹脂柱上(內(nèi)徑2cm，長25cm)，加水300ml沖洗(1ml/分鐘)，洗至接近無色，再用0.25N-0.7N氨水400ml洗脫，收集洗脫液(1ml/分鐘)，水浴蒸干，殘渣加1ml稀乙醇溶解，作為供試品溶液。
2、對照品溶液的制備另取精氨酸對照品，加稀乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。
3、檢測方法照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試液、對照品溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(19∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜的相應位置顯相同顏色斑點。
六、高效液相色譜法測定黃芩苷含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)流動相；檢測波長為240-340nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算，應不低于2300。
對照品溶液的制備精密稱取在40℃-90℃減壓干燥3-6小時的黃芩苷適量，加30％70％甲醇制成每1ml含20μg-40μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品1.5g-3.0g，研碎，取0.1g-1.0g，精密稱定，加2ml-20ml水溫熱溶解，加0.5ml-5ml 6mol/L鹽酸溶液，搖勻，40℃-90℃保溫0.5-2小時，放置過夜，離心，傾去上清液，沉淀加70％乙醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加50％-90％乙醇至刻度，搖勻，過濾，棄去初濾液，精密吸取續(xù)濾液1ml-4ml，水浴蒸干，加30％-70％乙醇分次溶解，并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加30％70％乙醇至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定即得。
本品含黃芩以含黃芩苷(C21H18O11)計，不得少于2.0％。
本發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明的質(zhì)控方法采用了現(xiàn)代技術(shù)薄層色譜法鑒別復方魚腥草滴丸中魚腥草的甲基正壬酮、黃芩中的黃芩苷、板藍根中的精氨酸、連翹中的連翹苷、金銀花中的綠原酸，并通過大量實驗確定了用高效液相色譜法測定黃芩苷含量的條件和方法，從而建立了用靈敏度高、重現(xiàn)性好、精確度高的定性定量控制復方魚腥草滴丸質(zhì)量的方法。
具體實施例方式
實施例1魚腥草1100g黃芩333g板藍根330g連翹116g 金銀花116g取魚腥草、板藍根、連翹、金銀花加12倍量的水浸泡5小時，蒸餾，揮發(fā)油另器保存，備用；藥渣過濾，濾液[I]另存；藥渣加10倍量的水繼續(xù)煎煮2次，每次1小時，合并煎液，濾過，與濾液[I]合并，濃縮至在60℃時測相對密度1.15左右，放冷，加乙醇使含醇量達到70％，放置24小時，過濾，濾液回收乙醇并繼續(xù)濃縮成流浸膏，備用；取黃芩，加10-12倍量的水煎煮二次，每次2小時，濾過，合并濾液，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值1-3，80℃保溫1小時，靜置24小時，濾過，沉淀用乙醇洗，再用水洗至PH5-6，減壓低溫干燥，粉碎，得黃芩提取物粉，加入到上述流浸膏中，加入揮發(fā)油，混勻，取PEG-6000熔融，將藥物加入到熔融液態(tài)基質(zhì)中，藥物與基質(zhì)配比1∶3。在85℃保溫狀態(tài)下滴制，以液狀石蠟或二甲基硅油為冷凝劑，冷卻溫度-5℃，收集滴丸，擦拭，即得。
(1)取本品30g，加水500ml，按揮發(fā)油測定法甲法(中國藥典2000版一部附錄XD)在測定器刻度部分加滿水，加入2ml醋酸乙酯，提取揮發(fā)油4小時，放冷，分取蠟酸乙酯層，作為供試品溶液。另取甲基正壬酮對照品，加醋酸乙酯到制成每ml含0.1ml的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶出液6μl，對照品溶液4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜中相應位置上，顯相同顏色的斑點。
(2)取本品2g，加溫水20ml，超聲10分鐘，調(diào)PH1.5~2，80℃保溫1h，離心，棄去上清液，沉淀水洗二次，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試液。另取黃芩甙對照品，加甲醇制成每ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試液1μl，對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上顯相同顏色的斑點。
(3)取本品30g，加水100ml，溫熱溶解，調(diào)PH1.5~2，80℃保溫1h，離心，取上清液，乙醚提取三次(60，40，40ml)，母液用醋酸乙酯提取三次(50，50，50ml)，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，10ml水溶解，加在D101大孔樹脂柱(內(nèi)徑1.6cm，長度18cm，大孔樹脂量為柱長2/3量)上，用100ml水洗脫，再用30％乙醇50ml洗脫，收集洗脫液(備用)，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，加10ml水溶解，加入中性氧化鋁適量，拌勻，減壓干燥，加入中性氧化鋁柱(200~300目，5g，內(nèi)徑1.5~2cm，干法裝柱)，70％乙醇洗脫100ml，收集洗脫液，蒸干，殘渣加2ml甲醇使溶解，作為供試液。另取連翹甙對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試液3μl，對照品溶液1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點。
(4)取鑒別(3)下30％乙醇洗脫液，水浴蒸干，甲醇溶解，定容于5ml量瓶，作為供試液。另取綠原酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試液2μl，對照品溶液2μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm熒光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
(5)取本品5g，加水150ml溫熱溶解，加在氫型強酸性陽離子交換樹脂柱上(內(nèi)徑2cm，長25cm)，加水300ml沖洗(1ml/分鐘)，洗至接近無色，再用0.5N氨水400ml洗脫，收集洗脫液(1ml/分鐘)，水浴蒸干，殘渣加1ml稀乙醇溶解，作為供試品溶液。另取精氨酸對照品，加稀乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試液、對照品溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(19∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜的相應位置顯相同顏色斑點。
實施例2魚腥草1166g 黃芩290g板藍根290g連翹126g金銀花126g取魚腥草、板藍根、連翹、金銀花加10倍量的水浸泡4小時，蒸餾，揮發(fā)油另器保存，備用；藥渣過濾，濾液[I]另存；藥渣加10倍量的水繼續(xù)煎煮2次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，與濾液[I]合并，濃縮至在60℃時測相對密度1.15左右，放冷，加乙醇使含醇量達到70％，放置48小時，過濾，濾液回收乙醇并繼續(xù)濃縮成流浸膏，備用；取黃芩，加10-12倍量的水煎煮二次，每次2.5小時，濾過，合并濾液，適當濃縮后用鹽酸調(diào)節(jié)PH值1.5，80℃保溫1小時，靜置24小時，濾過，沉淀用乙醇洗，再用水洗至PH5-6，減壓低溫干燥，粉碎，得黃芩提取物粉，加入到上述流浸膏中，加入揮發(fā)油，混勻，取PEG-6000和PGE4000混合熔融，將藥物加入到熔融液態(tài)基質(zhì)中，藥物與基質(zhì)配比1∶4為宜。在80℃保溫狀態(tài)下滴制，以液狀石蠟或二甲基硅油為冷凝劑，冷卻溫度-3℃，收集滴丸，擦拭，即得。
黃芩苷含量測定按照高效液相色譜法(中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算，應不低于2500。
對照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥4小時的黃芩苷適量加50％甲醇制成每1ml含30ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品2.5g，研碎，取0.5g，精密稱定，加10ml水溫熱溶解，加1.5ml 6mol/L鹽酸溶液，搖勻，80℃保溫1小時，放置過夜，離心，傾去上清液，沉淀加70％乙醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻，過濾，棄去初濾液，精密吸取續(xù)濾液2ml，水浴蒸干，加50％乙醇分次溶解，并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加50％乙醇至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定即得。
實驗1色譜條件色譜柱Shimpack VP-ODS Φ4.6×150mm；流動相甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)；檢測波長280nm；柱溫室溫；流量1ml/min。波長選擇黃芩苷的最大吸收波長為280nm，故選擇280nm為檢測波長；流動相的確定，以甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)作為流動相，黃芩苷對照品出峰時間約為11分鐘。樣品中，黃芩苷同其他組分能達到基線分離，分離度為＝13.756，且陰性對照無干擾。
實驗2系統(tǒng)適用性實驗。
①理論板數(shù)(n)、拖尾因子(T)與分離度(R)的測定取供試品溶液20ul，注入液相色譜儀中，測得n＝6124(40830×0.15)，T＝1.02，R＝13.756，理論板數(shù)經(jīng)多次測定及參照有關(guān)文獻定為不低于2000。
②重復性試驗黃芩苷對照品溶液(29ug/ml)連續(xù)進樣6次(20ul定量環(huán))，結(jié)果峰面積積分值較為穩(wěn)定，RSD＜2％，見表1表1 黃芩苷重復性試驗結(jié)果
實驗表明供試品中黃芩苷保留時間與對照品一致，在此條件下，與其他組分均能達到基線分離，且系統(tǒng)適用性實驗完全符合要求。
實驗3標準曲線的制備及線性關(guān)系的考察精密吸取黃芩苷對照品溶液(69.6ug/ml)2ul、4ul、8ul、12ul、16ul、20ul按上述色譜條件依法測定峰面積，以峰面積為縱坐標，黃芩苷量(ug)為橫坐標繪制標準曲線，實驗數(shù)據(jù)經(jīng)直線回歸得回歸議程為Y＝1525581.739X-6616.553 r＝0.99996(n＝6)結(jié)果見表2。
表2 標準曲線考察結(jié)果
實驗表明黃芩苷對照品在0.1392ug~1.3920ug范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。
實驗4精密度試驗精密進樣20ul(供試液)，重復進樣6次，結(jié)果見表3，相對標準偏差，RSD＝1.0％。
表3 精密度試驗結(jié)果
實驗結(jié)果表明本法精密度較好。
實驗5重現(xiàn)性試驗取同一批號的樣品6份，按正文含量測定項下的方法測定供試品黃芩苷的含量，結(jié)果見表4，其相對標準偏差RSD＝1.64％。
表4 重現(xiàn)性試驗結(jié)果
實驗表明本方法重現(xiàn)性較好。
實驗6穩(wěn)定性試驗取供試品溶液，在室溫下，間隔1小時進樣一次，測定峰面積，結(jié)果見表5，實驗表明，黃芩苷在所測的5小時內(nèi)穩(wěn)定，相對標準偏差RSD＝2.41％。
表5 穩(wěn)定性試驗結(jié)果
實驗7加樣回收率試驗取已知含量的樣品(含量為2.40％)6份，分別添加黃芩苷對照品，按正文含量測定項下方法測定，平均回收率為97.57％，RSD＝1.17％。結(jié)果見表6，實驗表明，本法準確性較好。
表6 加樣回收率試驗
實驗8樣品測定及含量限度的確定。
按正文[含量測定]項下方法，對三批樣品中黃芩苷的含量進行測定，結(jié)果見表7。
表7 樣品含量測定結(jié)果
實驗表明本品含量最高值為2.41％，最低值為2.17％。按黃芩飲片的含量限度8％計算，制劑中黃芩苷的理論含量應不低于2.4％，考慮到生產(chǎn)和貯存過程中難免有損失，因此將本品中黃芩苷的含量限度定為不得少于2.0％為宜。
權(quán)利要求
1.一種復方魚腥草滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括如下步驟(1)魚腥草中的甲基正壬酮檢測取復方魚腥草滴丸30g，加水500ml，按揮發(fā)油測定法甲法，在測定器刻度部分加滿水，加入2-5ml醋酸乙酯，提取揮發(fā)油2-5小時，放冷，分取蠟酸乙酯層，作為供試品溶液，另取甲基正壬酮對照品，加醋酸乙酯到制成每ml含0.1ml的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶出液6μl，對照品溶液4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜中相應位置上，顯相同顏色的斑點；(2)黃芩中的黃芩苷檢測取復方魚腥草滴丸1-3g，加溫水10-30ml，超聲10分鐘，調(diào)PH1.5～2，80℃保溫1h，離心，棄去上清液，沉淀水洗二次，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試液，另取黃芩甙對照品，加甲醇制成每ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試液1μl，對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水為展開劑展開，取出晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上顯相同顏色的斑點；(3)連翹中的連翹苷檢測取復方魚腥草滴丸30g，加水100ml，溫熱溶解，調(diào)PH1.5～2，80℃保溫1h，離心，取上清液，乙醚提取三次，母液用醋酸乙酯提取2-3次，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，10ml水溶解，加在D101大孔樹脂柱上，用100ml水洗脫，再用25％-50％乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，繼用50％80％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，加10ml水溶解，加入中性氧化鋁適量，拌勻，減壓干燥，加入中性氧化鋁柱，50％-80％乙醇洗脫100ml，收集洗脫液，蒸干，殘渣加2ml甲醇使溶解，作為供試液，另取連翹甙對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試液3μl，對照品溶液1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點；(4)金銀花中的綠原酸檢測取鑒別(3)下25％-50％乙醇洗脫液，水浴蒸干，甲醇溶解，定容于5ml量瓶，作為供試液，另取綠原酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試液2μl，對照品溶液2μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm熒光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(5)板藍根中的氨基酸檢測取復方魚腥草滴丸5g，加水150ml溫熱溶解，加在氫型強酸性陽離子交換樹脂柱上，加水300ml沖洗，洗至接近無色，再用0.2N-0.7N氨水400ml洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，殘渣加1ml稀乙醇溶解，作為供試品溶液。另取精氨酸對照品，加稀乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試液、對照品溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜的相應位置顯相同顏色斑點。
2.如權(quán)利要求1所述的復方魚腥草滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于含黃芩以黃芩苷計不少于2.0％，五個定性鑒別均呈正反應則判定該產(chǎn)品合格。
3.如權(quán)利要求1所述的復方魚腥草滴丸的質(zhì)量控制方法，其特征在于色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸為流動相；檢測波長為240-340nm，理論板數(shù)按黃芩苷峰計算，應不低于2300。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種復方魚腥草滴丸的質(zhì)量控制方法。該方法使用高效液相色譜法測定復方魚腥草滴丸中黃芩苷的含量、用薄層色譜法對魚腥草中的甲基正壬酮、黃芩中的黃芩苷、連翹中的連翹苷、金銀花中的綠原酸、板藍根中的精氨酸進行定性鑒別，通過上述定性定量方法控制復方魚腥草滴丸的質(zhì)量可以使產(chǎn)品達到安全、有效、穩(wěn)定、可控的效果。
文檔編號A61P11/04GK101040951SQ20071005211
公開日2007年9月26日 申請日期2007年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月29日
發(fā)明者艾樣開, 陳科茂, 鄭俊鳳, 徐發(fā)紅 申請人:江西天施康中藥股份有限公司