專利名稱：：青蒿油及其制劑的醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種青蒿油^其制劑的醫(yī)藥用途，即青蒿油及其制劑用于治療和預(yù)防艾滋病、流感:皰疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反應(yīng)疾病的醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)有技術(shù)中，青蒿為常用中藥之一，其抗瘧作用專屬性較強(qiáng)，對(duì)慢性支氣管炎也有療效。關(guān)于青蒿的報(bào)道大多數(shù)是青萬(wàn)素抗瘧作用論述，到目前為止，尚未見(jiàn)到有關(guān)青蒿油具有抗菌抗病毒及解熱尤其包括抗HIV在內(nèi)的反轉(zhuǎn)錄病毒的報(bào)道
發(fā)明內(nèi)容:本發(fā)明的目的在于提供青蒿油及其制劑的醫(yī)藥用途。本發(fā)明的目的是通過(guò)下述技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明的青蒿油及其制劑的醫(yī)藥用途是指用于治療和預(yù)防艾滋病、流感、皰疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反應(yīng)疾病，所述青蒿油的制劑是指口服劑型、注射劑、外用劑型及各種緩控釋劑型，口服劑型包括膠囊劑、片劑、滴丸劑、微丸劑、微囊劑、薄膜包衣片劑、糖衣片劑。本發(fā)明的入藥方式可通過(guò)e-環(huán)糊精包合，制得3-環(huán)糊精包合物，制備方法可以是飽和水溶液法、研磨法、冷凍干燥法、超聲波法，其中應(yīng)用的緩釋包衣技術(shù)包括PH依賴型緩釋包衣技術(shù)、溶蝕延遲包衣技術(shù)、基于結(jié)腸酶降解緩釋包衣技術(shù)等。本發(fā)明青蒿油的提取方法如下將青蒿生藥粉碎(過(guò)10-60目篩)或青蒿生藥提取青蒿素后的青蒿素母液，與水按一定比例(1:1-20)盛入帶冷卻裝置的蒸餾器中，并接揮發(fā)油提取器，加熱蒸餾器，收集揮發(fā)油。青蒿素母液的制備方法如下將青蒿生藥加入石油醚或六號(hào)汽油提取，提取液上層析柱，將流出液回收溶劑得母液A;層析柱加入洗脫劑，洗脫劑石油醚乙酸乙酯=15-95:5，洗脫液濃縮結(jié)晶，將結(jié)晶液過(guò)濾得濾液和青蒿素重結(jié)晶產(chǎn)品，濾液回收溶劑后得母液B，將母液A和母液B合并得青蒿，母液。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是提供了可期待用于治療和預(yù)防艾滋病、流感、皰疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反應(yīng)疾病的醫(yī)藥用途，并發(fā)現(xiàn)其具有很強(qiáng)的治療和預(yù)防艾滋病、流感、皰疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反應(yīng)疾病的作用特點(diǎn)。下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，本發(fā)明不僅限于所述實(shí)施例。具體實(shí)施例方式青蒿素母液的制備將青蒿生藥加入六號(hào)汽油提取，提取液上硅膠柱，將流出液回收溶劑得母液A;硅膠柱加入洗脫劑(石油醚乙酸乙酯=95:5)洗脫，直至將青蒿素洗脫完全，洗脫液濃縮結(jié)晶，將結(jié)晶液過(guò)濾得濾液和青蒿素重結(jié)晶產(chǎn)品，濾液回收溶劑后得母液B，將母液A和母液B合并得青蒿素母液。實(shí)施例二青蒿油殺滅HIV的試驗(yàn)青蒿油與HIV病毒(TCID,1.78X107ml)共孵育l小時(shí)后，用Biomerieux的HIV-1P24試劑盒測(cè)定抗原P24的量，從而推算出HIV病毒的量。抑制率二100X(l-測(cè)定的0D值/HIV病毒液對(duì)照)。青蒿油有體外殺滅HIV的活性青蒿油直接體外殺滅HIV的試驗(yàn)表明，青蒿油對(duì)HIV病毒有一定的直接殺滅的作用，在濃度為0.10mg/ml時(shí)，對(duì)HIV病毒的直接殺滅率達(dá)到了73%以上，抑制效果比較明顯，見(jiàn)表l。表1HIV—1P24抗原檢測(cè)法1僉測(cè)青蒿油對(duì)mv的殺滅作用<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>HIV病毒液對(duì)照1.894培養(yǎng)液對(duì)照0.001試劑盒陽(yáng)性(80pg/ml)0.965試劑盒陰性0.006實(shí)施例三青蒿油體外抑制HIV-1的反轉(zhuǎn)錄酶的活性在有藥物的溶液中加入反轉(zhuǎn)錄酶標(biāo)準(zhǔn)液，然后用Innovagen公司的Retrosys反轉(zhuǎn)錄酶活性測(cè)試試劑盒進(jìn)行測(cè)定。抑制率二100X(1-測(cè)定的0D值/陽(yáng)性對(duì)照)。青蒿油體外抑制HIV-1的反轉(zhuǎn)錄酶活性的試驗(yàn)表明，青蒿油對(duì)HIV-1的反轉(zhuǎn)錄酶有抑制作用，在濃度為0.10mg/ml時(shí)，對(duì)HIV-l的反轉(zhuǎn)錄酶的抑制作用達(dá)到了75.05%，見(jiàn)表2。表2青蒿油體外對(duì)HIV-1的反轉(zhuǎn)錄酶抑制作用的試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>青蒿油對(duì)受HIV感染的細(xì)胞的保護(hù)作用用HIV病毒感染MT4細(xì)胞，在細(xì)胞懸液中加入青蒿油，繼續(xù)培養(yǎng)，四天后，用XTT法測(cè)定細(xì)胞的數(shù)量，與不加青蒿油的HIV感染的MT4細(xì)胞對(duì)比，從而計(jì)算出青蒿油對(duì)受HIV感染的細(xì)胞的保護(hù)作用。細(xì)胞被保護(hù)率二IOOX[I-(細(xì)胞+藥-細(xì)胞+藥+HIV)/(細(xì)胞對(duì)照-細(xì)胞+HIV)]。青蒿油對(duì)受HIV感染的細(xì)胞有較好的保護(hù)率。青蒿油在濃度為0.10mg/ml時(shí)，對(duì)細(xì)胞的保護(hù)率達(dá)到了52.47%，見(jiàn)表3。表3青蒿油對(duì)受HIV-1感染的細(xì)胞的保護(hù)作用的試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例五青蒿油的體外抗乙肝的活性:用表達(dá)乙肝病毒抗原的H印G2.2.15細(xì)胞，在細(xì)胞懸液中加入青蒿油，繼續(xù)培養(yǎng)，四天后，換培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)兩天,然后用乙肝表面抗原和e抗原測(cè)定試劑盒測(cè)定抗原的0D值。抑制率^00X(l-試驗(yàn)孔OD值/細(xì)胞對(duì)照OD值)，細(xì)胞存活率二100X(MTTOD值/H印G2.2.15細(xì)胞對(duì)照的0D值)。體外檢測(cè)了青蒿油對(duì)乙肝抗原表達(dá)細(xì)胞H印G2.2.15的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，青蒿油可以抑制H印G2.2.I5細(xì)胞的表面抗原和e抗原的表達(dá)。青蒿油在250ug/ml時(shí)，對(duì)H印G2.2.15細(xì)胞的表面抗原的表達(dá)抑制率為70.16%，對(duì)H印G2.2.15細(xì)胞的e抗原的表達(dá)抑制率為68.52%，在這個(gè)藥物濃度下細(xì)胞存活率達(dá)到77.51%,見(jiàn)表4、表5、表6。表4青蒿油體外對(duì)H印G2.2.15細(xì)胞的表面抗原表達(dá)抑制作用的試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表5青蒿油體外對(duì)H印G2.2.15細(xì)胞的e抗原表達(dá)抑制作用的試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表6青蒿油體外對(duì)H印G2.2.15細(xì)胞的毒性作用的試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實(shí)施例六青蒿油的抗菌活性青蒿油抗菌活性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法為瓊脂二倍稀釋法測(cè)定最小抑菌濃度(MIC)。試驗(yàn)菌為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、人型葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、鏈球菌。以上菌株來(lái)源為從醫(yī)院收集的臨床病人分離株。菌株用MH瓊脂平皿劃線接種，36-C培養(yǎng)1824小時(shí)，接種環(huán)沾取菌落于滅菌生理鹽水小試管中，制備成濃度107cfu/ml的菌液。用MH瓊脂制備含青蒿油1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320的平皿，同呵制備MH瓊脂平皿為菌對(duì)照平皿。點(diǎn)種器沾取菌液點(diǎn)種與上述平皿上，置36"C孵箱培養(yǎng)1824小時(shí)觀察結(jié)果。菌對(duì)照平皿所有點(diǎn)種部位有菌生長(zhǎng)，含青蒿油平皿點(diǎn)種部位無(wú)菌生長(zhǎng)的濃度即為最小抑菌濃度。結(jié)果見(jiàn)表7。表7青蒿油對(duì)各試驗(yàn)菌的最小抑菌濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例七青蒿油的解熱作用實(shí)驗(yàn)用健康合格日本大耳白家兔，-級(jí)，體重1.8kg2.5kg，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)家兔測(cè)體溫1次，選擇體溫在38.6~39.5°C24只，隨機(jī)平均分成4組，每組6只。分別為模型組、低劑量組、中劑量組，高劑量組(分別為0.2%、0.4%、0.8%乳劑)，并編號(hào)標(biāo)記。給藥方式為口服灌胃，給藥前1小時(shí)測(cè)定體溫1次。模型組灌服蒸餾水，給藥各組灌服各劑量實(shí)驗(yàn)藥液，給藥后立即于耳緣靜脈注射傷寒、副傷寒甲乙三聯(lián)疫苗lml/kg，(菌苗含量10"cfu/ml)，然后于0.5、1、2、4、6小時(shí)各測(cè)體溫1次。計(jì)算各測(cè)定時(shí)間兔體溫的變化(A'C)。用SPSSIO.O統(tǒng)計(jì)軟件分析(見(jiàn)表l)。結(jié)果表明中劑量和高計(jì)量組給藥1小時(shí)、2小時(shí)后體溫的變化(A°C)與模型組有顯著差異(P<0.05)。青蒿油中、高劑量有解熱作用，見(jiàn)表8。表8各實(shí)驗(yàn)組給藥后不同時(shí)間點(diǎn)體溫變化<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例八青蒿油e-環(huán)糊精包合物制備取e-環(huán)糊精100g，加蒸餾水400ml，研勻后加青蒿油的無(wú)水乙醇溶液25ml,充分研磨，冷藏放置過(guò)夜，抽濾，5(TC低溫烘干，得青蒿油0-環(huán)糊精包合物94.2g。實(shí)施例九青蒿油片劑制備取青蒿油P-環(huán)糊精包合物lkg，加入羧甲基淀粉鈉60g，制粒，加入硬脂酸鎂3g，壓片，即得成品。實(shí)施例十青蒿油微丸劑制備取青蒿油P-環(huán)糊精包合物lkg,加入適量粘合劑，攪拌均勻，郭蒸餾水制成軟材，用中藥自動(dòng)制丸機(jī)擠壓制丸，出條片上出條口孔徑1.5-2mm，制得的濕丸在糖衣鍋中旋轉(zhuǎn)滾動(dòng)，以增強(qiáng)其圓整度，即得微丸。實(shí)施例十一青蒿油膠囊制備取青蒿油0-環(huán)糊精包合物lkg，加入羧甲基淀粉鈉60g，制粒，裝入膠囊，即得成品。權(quán)利要求1、一種青蒿油及其制劑的醫(yī)藥用途，其特征在于是指青蒿油及其制劑用于治療和預(yù)防艾滋病、流感、皰疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反應(yīng)疾病的醫(yī)藥用途。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的青蒿油及其制劑的醫(yī)藥用途，其特征在于所述青蒿油的制劑是指口服劑型、注射劑、外用劑型及各種緩控釋劑型，口服劑型包括膠囊劑、片劑、滴丸劑、微丸劑、微囊劑、薄膜包衣片劑、糖衣片劑。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的青蒿油及其制劑的醫(yī)藥用途，其特征在于所述入藥方式是通過(guò)P-環(huán)糊精包合，制得P-環(huán)糊精包合物，制備方法包括飽和水溶液法、研磨法、冷凍千燥法、超聲波法，其中應(yīng)用的緩釋包衣技術(shù)包括PH依賴型緩釋包衣技術(shù)、溶蝕延遲包衣技術(shù)、基于結(jié)腸酶降解緩釋包衣技術(shù)。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的青蒿油及其制劑的醫(yī)藥用途，其特征在于所述青蒿油的提取方法如下將青蒿生藥粉碎或青蒿生藥提取青蒿素后的青蒿素母液，與水埃1:1-20的比例盛入帶冷卻裝置的蒸餾器中，并接揮發(fā)油提取器，加熱蒸餾器，收集揮發(fā)油。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的青蒿油及其制劑的醫(yī)藥用途，其特征在于所述青蒿素母液的制備方法如下將青蒿生藥加入石油醚或六號(hào)汽油提取，提取液上層析柱，將流出液回收溶劑得母液A;層析柱加入洗脫劑，洗脫液濃縮結(jié)晶，將結(jié)晶液過(guò)濾得濾液和青蒿素重結(jié)晶產(chǎn)品，濾液回收溶劑后得母液B，將母液A和母液B合并得青蒿素母液。全文摘要本發(fā)明屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種青蒿油及其制劑的醫(yī)藥用途，即青蒿油及其制劑用于治療和預(yù)防艾滋病、流感、皰疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反應(yīng)疾病的醫(yī)藥用途，青蒿油的制劑是指口服劑型、注射劑、外用劑型及各種緩控釋劑型，口服劑型包括膠囊劑、片劑、滴丸劑、微丸劑、微囊劑、薄膜包衣片劑、糖衣片劑，入藥方式可通過(guò)β-環(huán)糊精包合，制得β-環(huán)糊精包合物，制備方法可以是飽和水溶液法、研磨法、冷凍干燥法、超聲波法，其中應(yīng)用的緩釋包衣技術(shù)包括pH依賴型緩釋包衣技術(shù)、溶蝕延遲包衣技術(shù)、基于結(jié)腸酶降解緩釋包衣技術(shù)等。文檔編號(hào)A61P31/00GK101313928SQ200710049229公開(kāi)日2008年12月3日申請(qǐng)日期2007年6月1日優(yōu)先權(quán)日2007年6月1日發(fā)明者薛永新申請(qǐng)人:薛永新