專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種聯(lián)苯乙酸及其鹽的抗腫瘤新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種聯(lián)苯乙酸及其鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：聯(lián)苯乙酸(Felbinac，4-Biphenylaceticacid)為非甾體抗炎藥，是芬布芬的活性代謝物，抑制前列腺素的合成，阻斷炎癥介質(zhì)而發(fā)揮鎮(zhèn)痛消炎作用，強(qiáng)度優(yōu)于阿司匹林。聯(lián)苯乙S吏凝膠劑1996年以商品名Traxamgel在英國(guó)上市，以0TC藥物被列入2000年版英國(guó)藥典，目前已在菲律賓、法國(guó)、德國(guó)、韓國(guó)、比利時(shí)和丹麥等十幾個(gè)國(guó)家上市。AHPZ公司統(tǒng)計(jì)，2000年TraxamGel在英國(guó)的總銷(xiāo)售額達(dá)到399萬(wàn)英磅。2005年日本帝國(guó)制藥的聯(lián)苯乙酸巴布劑Seltouch⑧銷(xiāo)售額達(dá)1.27億美元，位居該年全球銷(xiāo)售500強(qiáng)第344位，骨骼和肌肉用藥第7位。腫瘤是人類(lèi)目前尚未攻克的疾病之一，也是患病死亡人最多的疾病之一，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康，以現(xiàn)有藥物為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)新型抗腫瘤藥物是藥學(xué)工作者的重要任務(wù)。我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)，意外發(fā)現(xiàn)聯(lián)苯乙酸及其鹽有4艮好的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，這也為新型抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)提供了研發(fā)思路。。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種聯(lián)苯乙酸及其鹽的抗腫瘤新用途。所述的聯(lián)苯乙酸及其鹽在體外對(duì)肝癌和喉癌細(xì)胞系均有誘導(dǎo)凋亡和抑制增殖，以及降低DNA合成作用。有望成為一種新型的抗腫瘤藥物。我們提供了聯(lián)苯乙酸及其鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。尤其是用于治療肝癌藥物的制備。聯(lián)苯乙酸鹽優(yōu)選聯(lián)苯乙酸氨丁三醇鹽。通過(guò)制藥領(lǐng)域常用的手段可以制備成多種劑型，可以是口服劑型和注射劑，包括膠嚢劑、片劑、顆粒劑、分散片、軟膠嚢、注射液、注射用凍干粉或注射用無(wú)菌分裝粉。我們利用其特性將聯(lián)苯乙酸或鹽作為分化誘導(dǎo)劑，發(fā)現(xiàn)聯(lián)苯乙酸及其鹽能夠顯著抑制人肝癌細(xì)胞株H印G—2細(xì)胞的增殖，并出現(xiàn)劑量依賴(lài)性抑制，聯(lián)苯乙酸及其鹽對(duì)人喉癌細(xì)胞抹亦有劑量依賴(lài)性抑制傾向，但作用明顯弱于肝癌細(xì)胞。聯(lián)苯乙酸及其鹽使腫瘤細(xì)胞DNA合成障礙，從而抑制人肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、增殖等過(guò)程，最終觸發(fā)凋亡機(jī)制，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不得用于解釋唯一限定本發(fā)明。具4實(shí)施例實(shí)施例1:聯(lián)苯乙酸和聯(lián)苯乙酸氨丁三醇對(duì)人肝癌細(xì)胞林和人喉癌細(xì)胞林的抑制作用一、原料與試劑RPMI—1640培養(yǎng)基(美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品)，小牛血清購(gòu)自長(zhǎng)春生物制品研究所，聯(lián)苯乙酸為武漢遠(yuǎn)程醫(yī)藥科技有限公司產(chǎn)品，聯(lián)苯乙酸氨丁三醇鹽為廣東中科藥物研究有限公司制備；流式細(xì)胞儀為美國(guó)Packard公司產(chǎn)品；CO。孵箱(日本Sanyo),人肝癌細(xì)胞抹(HepG—2);人喉癌細(xì)胞抹(Hep—2)由廣州醫(yī)藥工業(yè)研究所贈(zèng)送。二、方法人肝癌細(xì)胞林及喉癌細(xì)胞抹的培養(yǎng)，將H印G—2細(xì)胞和Hep—2細(xì)胞分別接種于50ml無(wú)菌培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(10小牛血清1M0培養(yǎng)液)，置3"C一氧化碳孵箱，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后用O.125胰蛋白酶消化，制備5xl0細(xì)胞懸液，接種于24孔塑料培養(yǎng)板中培養(yǎng)，每孔l.Oml，M小時(shí)后棄培養(yǎng)液，每孔內(nèi)分別加入O、1.25、2.5、5.OmMtL的聯(lián)苯乙酸氨丁三醇完全培養(yǎng)基l.Oml，在37"C,5二氧化碳孵箱培養(yǎng)，不同時(shí)間弈培養(yǎng)液，用胰蛋白酶消化，進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色判斷細(xì)胞增殖抑制率i另設(shè)一組加聯(lián)苯乙酸培養(yǎng)，于結(jié)束前8小時(shí)，每孔中加50giH—TdR1Ci/ffli(上海原子能研究所)，用細(xì)胞收集器收集細(xì)胞，將收集的細(xì)胞濾紙片置于閃爍液中，用液體閃爍計(jì)數(shù)器(美國(guó)Packard公司產(chǎn)品)檢測(cè)CPM值。通過(guò)間4矣免疫熒光法染色，用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期，計(jì)算處于細(xì)胞周期不同時(shí)期的細(xì)胞群體比例。1、聯(lián)苯乙酸與聯(lián)苯乙酸氨丁三醇對(duì)H印G—2細(xì)胞和H印2細(xì)胞FCM的定量分析聯(lián)苯乙酸與聯(lián)苯乙酸氨丁三醇均主要抑制H印G—2細(xì)胞增殖的G期，且與濃度相關(guān)，聯(lián)苯乙酸與耳關(guān)苯乙酸氨丁三醇均對(duì)H印2細(xì)胞增殖抑制亦在G期，且與濃度相關(guān),但弱于對(duì)H印G2抑制作用,見(jiàn)表l,,表l聯(lián)苯乙酸與聯(lián)苯乙酸氨丁三醇對(duì)HepG—2和H印一2細(xì)胞FCM的定量分析<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2、聯(lián)苯乙酸與聯(lián)苯乙酸氨丁三醇鹽對(duì)HepG—2肝癌細(xì)胞增殖抑制作用不同劑量的聯(lián)苯乙酸與聯(lián)笨乙酸氨丁三醇對(duì)H印G—2細(xì)胞有增殖抑制作用，隨著時(shí)間和劑量的遞增而凋亡細(xì)胞逐漸增多?？瞻讓?duì)照與肝癌組間差異顯著，(P<0.01)。喉癌組間有隨時(shí)間和劑量的增加而逐漸加強(qiáng)的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(PX).05)。聯(lián)苯乙酸與聯(lián)苯乙S菱氨丁三醇對(duì)肝癌的抑制作用明顯高于喉癌組。見(jiàn)表2。表2聯(lián)苯乙酸與聯(lián)苯乙酸氨丁三醇對(duì)HePG—S和H印一卩細(xì)胞<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3、聯(lián)苯乙酸與聯(lián)苯乙酸氨丁三醇對(duì)腫瘤細(xì)胞DNA合成的影響H—TdR摻入法檢測(cè)不同濃度聯(lián)苯乙酸與聯(lián)苯乙酸氨丁三醇對(duì)HepG—2肝癌細(xì)胞DNA合成的抑制作用，隨濃度的增加，差異更為明顯，喉癌有一定的抑制作用，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表3。表3聯(lián)苯乙酸與聯(lián)苯乙酸氨丁三醇對(duì)HepG—2和Hep—2細(xì)胞增殖影響的CPM值見(jiàn)表3。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例2:聯(lián)苯乙酸及其鹽的體外抗腫瘤作用聯(lián)苯乙酸溶液的制備方法是取聯(lián)苯乙酸用1%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為8-9的澄清溶液。采用經(jīng)典的細(xì)胞毒活性體外檢測(cè)法MTT法。腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。接種Hela、A549、HCT15、SK-OV-3和XF498細(xì)胞于96孔板，6xl0-4~lxl06個(gè)/ml,每孔180jul，培養(yǎng)24小時(shí)待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)，待檢樣品用DMSO溶解(DMSO濃度《0.1%),順次10倍稀釋?zhuān)靠?0jul，共5個(gè)濃度，設(shè)重復(fù)孔。同時(shí)設(shè)藥物對(duì)照孔(無(wú)細(xì)胞)，細(xì)胞對(duì)照孔(無(wú)藥物，DMSO濃度0.1%),本底對(duì)照組(無(wú)細(xì)胞與藥物)。培養(yǎng)3天加5mg/ml的MTT每孔50jul，5小時(shí)后吸去上清,加DMSO每孔150ju1,震蕩10分鐘,在595nm測(cè)OD值。陽(yáng)性藥物為阿霉素，培養(yǎng)液順次10倍稀釋。無(wú)關(guān)藥物為尼爾雌醇，藥物最高濃度為10jag/ml，殺傷指數(shù)CI-(1-受試藥物OD值/生長(zhǎng)對(duì)照OD值)x100°/再計(jì)數(shù)半效抑制濃度(IC50)表4聯(lián)苯乙酸及其鹽的體外抗胂瘤活性<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權(quán)利要求1、聯(lián)苯乙酸及其鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。2、如權(quán)利要求1所述的聯(lián)苯乙酸及其鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征是用于肝癌藥物的制備。3、如權(quán)利要求1或2所述的聯(lián)苯乙酸及其鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征是所述聯(lián)苯乙酸鹽是指聯(lián)苯乙酸氨丁三醇鹽。4、如權(quán)利要求1所述的聯(lián)苯乙酸及其鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征是藥物劑型為膠嚢劑、片劑、顆粒劑、分散片、軟膠嚢、注射液、注射用凍干粉或注射用無(wú)菌分裝粉。全文摘要本發(fā)明涉及聯(lián)苯乙酸及其鹽的抗腫瘤活性新用途。體外抑制腫瘤實(shí)驗(yàn)顯示，聯(lián)苯乙酸對(duì)Hela、A549、HCT15、SK-OV-3和XF498腫瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用，較低濃度相對(duì)于陽(yáng)性藥物阿霉素既可以達(dá)到較好的效果。有望開(kāi)發(fā)為新型抗腫瘤藥物，用于肝癌、食道癌、喉癌等惡性腫瘤的治療。文檔編號(hào)A61K31/185GK101156841SQ20071002975公開(kāi)日2008年4月9日申請(qǐng)日期2007年8月17日優(yōu)先權(quán)日2007年8月17日發(fā)明者偉王,陳文展申請(qǐng)人:陳文展;王偉