專利名稱：：喜樹果提取物喜果苷的用途及制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥提取物的醫(yī)藥用途，特別是喜樹果提取物喜果苷的醫(yī)藥用途。本發(fā)明還涉及該用途的喜果苷制劑。技術(shù)背景喜果苷，中文名喜果苷、長春苷內(nèi)酰胺；英文名Vincoside-lactam，VCS-LT，結(jié)構(gòu)式自從1966年Wall等首次從喜樹中分離出喜樹堿并發(fā)現(xiàn)其具有顯著抗癌活性后，至今己有20多種化學(xué)成分從中分離出來，包括喜樹堿(camp-tothecine，CPT)、10-羥基喜樹堿、11-羥基喜樹堿、10-甲氧基喜樹堿、喜樹次堿、白樺脂酸、喜果苷(vincoside-lactam，VCS-LT)等。人工合成也取得了可喜的進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn)喜樹果中喜果苷明顯高于喜樹堿及其他類似物。喜樹堿(CPT)及喜果苷(VCS-LT)具有顯著抗白血病和抑制腫瘤的活性，王瑞芳等人研究了胺化超高交聯(lián)吸附樹脂的制備及其對(duì)喜樹堿和喜果苷的色譜分離，結(jié)果表明，超高交聯(lián)吸附樹脂胺化后，對(duì)喜樹堿和喜果苷的吸附量及吸附選擇性顯著增大，可使喜樹堿和喜果苷完全分離。申請?zhí)枮?00410072869.3號(hào)的中國專利申請公開了一種喜果苷的提取方法，采用將喜樹果用乙醇溶液滲渡或乙醇溶液25。C80'C熱提取、提取液通入裝有大孔吸附樹脂(AL-2吸附樹脂)的樹脂柱中吸附、用乙醇水溶液洗滌和解吸、流出液旋蒸濃縮和重結(jié)晶等步驟得到喜果苷產(chǎn)品?，F(xiàn)有技術(shù)中沒有其它關(guān)于喜果苷醫(yī)藥用途的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種喜樹果提取物喜果苷的新的醫(yī)藥用途。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是提供了上述用途的喜果苷制劑。本發(fā)明所述的喜樹果提取物喜果苷的用途是它可以作為有效成份用來制備抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物；或者用來制備治療敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病的藥物；或者用來制備治療鉤端螺旋體病的藥物。以上所述的敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病包括以下疾病急性扁桃體炎、咽喉炎、上呼吸道感染、支氣管炎、肺炎、結(jié)膜炎、麥粒腫、牙周膿腫、中耳炎、燒傷感染、泌尿系統(tǒng)感染或手術(shù)后預(yù)防感染。鉤端螺旋體病簡稱鉤體病，是由致病性鉤端螺旋體引起的自然疫源性急性傳染病，其臨床特點(diǎn)為高熱、全身酸痛、乏力、球結(jié)合膜充血、淋巴結(jié)腫大和明顯的腓腸肌疼痛，重者可并發(fā)肺出血、黃疸、腦膜腦炎和腎功能衰竭等。現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)鉤端螺旋體病一般采取以下方法進(jìn)行治療1、一般治療與對(duì)癥治療早期臥床休息，給予易消化飲食，保持體液與電解質(zhì)平衡。2、病原治療鉤體對(duì)多種抗菌藥物敏感，如青霉素、鏈霉素、慶大霉素、四環(huán)素、氯霉素、頭孢噻吩等以及合成的鹽酸甲唑醇(methimidol)和咪唑酸酯。國內(nèi)首選青霉素G。3、肺彌漫性出血型的治療采取抗菌、解毒、鎮(zhèn)靜、止血、強(qiáng)心為主的綜合措施。本發(fā)明所述用途的喜樹果提取物喜果苷，可以選用現(xiàn)有技術(shù)中所公開的任何一種制備方法制得的喜果苷，也可以選用以下方法制得的喜果苷。一種如以上所述用途的喜樹果提取物喜果苷的制備方法取喜樹果藥材，打碎，用水煎煮，或65%-75%乙醇回流提取2-4次，每次用量8-12倍，分別提取l-2小時(shí)，合并提取液，過濾，回收乙醇至無醇味，加水至8-12L/1KG藥材，靜置，冷藏過夜，離心除去沉淀，澄清液上HPD100或AB-8等弱極性大孔樹脂，藥材/樹脂l:1，先用水洗脫5個(gè)柱體積，然后用25%乙醇洗脫5個(gè)柱體積，再用35%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，最后用55%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集55%乙醇部分，回收乙醇至瓶內(nèi)有黑色粘附物出現(xiàn)，趁熱過濾，濾液冷卻，析出沉淀，過濾，沉淀再次重結(jié)晶，即得純度達(dá)90%以上的喜果苷。上述制備方法的優(yōu)選技術(shù)方案是取喜樹果藥材，打碎，用水煎煮，或70%乙醇回流提取三次，每次用量10倍，分別提取1.5小時(shí)、l小時(shí)、l小時(shí)，合并三次提取液，過濾，回收乙醇至無醇味，加水至10L/1KG藥材，靜置，冷藏過夜，離心除去沉淀，澄清液上HPD100或AB-8等弱極性大孔樹脂，藥材/樹脂l:1，先用水洗脫5個(gè)柱體積，然后用25%乙醇洗脫5個(gè)柱體積，再用35%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，最后用55%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集55%乙醇部分，回收乙醇至瓶內(nèi)有黑色粘附物出現(xiàn)，趁熱過濾，濾液冷卻，析出沉淀，過濾，沉淀再次重結(jié)晶，即得純度達(dá)90%以上的喜果苷。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明還公開了一種如以上所述用途的喜果苷制劑，其特點(diǎn)是，取喜果苷，加入藥學(xué)上可以接受的藥物載體，制成臨床上可接受的任何一種劑型的藥劑。以上所述的喜果苷制劑劑型可以是口服制劑，優(yōu)選劑型為注射劑。制備注射劑時(shí)，所用的助溶劑為堿性物質(zhì)或者醇類物質(zhì)，選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、精氨酸、賴氨酸、葡甲胺、尿素、乙酰胺、硫脲、苯甲酰胺、乙醇、丙二醇或者甘露醇。以下是發(fā)明人所做的藥效學(xué)研究實(shí)驗(yàn)1、體外抗菌作用精密定量稱取受試樣品喜果苷(縮寫為XG，下同)，用無菌水配制成50mg/ml的溶液。然后將配制的藥液分別用適量無菌水進(jìn)行倍比稀釋，使各藥液成一系列濃度梯度，依次是50，25，12.5，6.25，3.13，1.57，0.79，0.40，0.20，0.10(mg/ml)。然后取各梯度藥液2ml，分別加入到無菌平皿(平皿直徑9cm)中，再加入已滅菌融化的保溫于55。C水浴中的MH培養(yǎng)基18ml，立即充分混勻，冷凝后待用。這樣，各含藥平板中藥物的最終濃度依次為5,2.5,61.25,0.625,0.313,0.157，0.079,0.04,0.02,0.01(mg/ml)。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照，只加入20ml的瓊脂培養(yǎng)基。將己預(yù)先活化的各試驗(yàn)菌株分別接種到2ml培養(yǎng)液中，37"培養(yǎng)過夜，再用相應(yīng)的培養(yǎng)液作適當(dāng)?shù)南♂?，使菌液濃度約為1071()S(CFU/ml)(控制菌液濃度方法用分光光度計(jì)測定培養(yǎng)液的光密度，然后作適當(dāng)?shù)南♂?。然后用多點(diǎn)接種儀點(diǎn)種各試驗(yàn)菌于各含藥的MH培養(yǎng)基平板上，空白對(duì)照同時(shí)進(jìn)行。每點(diǎn)含菌量約為104105(CFU)。37°C，培養(yǎng)24小時(shí)，觀察并記錄各菌的最低抑菌濃度MIC值，并計(jì)算MIC。體外抗菌試驗(yàn)結(jié)果表明XG對(duì)各試驗(yàn)菌株均具有抗菌活性。結(jié)果見表1。表lXG體外對(duì)致病性細(xì)菌的MIC值的測定(MIC:mg/ml)菌種MIC菌種MIC金黃色葡萄球菌0.079克氏肺炎桿菌0.040肺炎雙球菌0.040沙雷氏菌0.157大腸桿菌0.079沙門桿菌0.157人葡萄球菌0.040產(chǎn)氣桿菌0.157綠膿桿菌0.157枸櫞酸桿菌0.157科代葡萄球菌0.040綠膿桿菌0.040溶血性鏈球菌0.079志賀氏菌0.079表皮葡萄球菌0.313不動(dòng)桿菌0.079變形桿菌1.250嗜血流感桿菌0.079奇異變形桿菌0.079肺炎鏈球菌0.313陰溝腸桿菌0.313乙型鏈球菌0.079洋蔥假單孢桿菌0.040枯草芽孢桿菌(標(biāo)準(zhǔn))0.0402.體內(nèi)抗菌作用2.1對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護(hù)作用菌液制備:取臨床分離金黃色葡萄球菌接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37°C孵箱培養(yǎng)18h。取出，劃線于血平板上(10%羊紅細(xì)胞營養(yǎng)瓊脂平板)，37°C孵箱培養(yǎng)20h。取出，用6ml5。/。的胃膜素(PH7.2)洗脫菌落，并用4ml生理鹽水溶液將血平板沖洗干凈，合并后吹打，使菌落分散并分別用生理鹽水配成0.33ml/ml、0.20ml/ml、0.11ml/ml、0.06ml/ml濃度菌液備用。選擇合適的菌液濃度取ICR小鼠40只，$3各半，體重1822g。隨機(jī)分組，每組1個(gè)濃度，腹腔注射金黃色葡萄球菌菌液，每鼠0.5ml，觀察感染小鼠死亡數(shù)，結(jié)果感染小鼠死亡率分別為100%、100%、90%、40%。故實(shí)驗(yàn)選用0.11ml/ml濃度菌液。正式試驗(yàn)取ICR小鼠240只，體重1822g，3$各半。取ICR小鼠120只，隨機(jī)分6組，每組20只。正常對(duì)照組(灌胃)、模型組(灌胃)、雙黃連口服液組(10ml/kg)禾卩XGI、II、III組(20mg/kg、100mg/kg、500mg/kg)。以上各組小鼠均灌胃給藥，1次/天x5天。另取ICR小鼠120只，隨機(jī)分6組，每組20只。即正常對(duì)照組(注射)、模型組(注射)、雙黃連注射液組(10ml/kg)和XGI、II、III組(4mg/kg、20mg/kg、100mg/kg)。以上各組小鼠均注射給藥，1次/天x5天。第3天給藥后，除空白對(duì)照組以外，其余各組均腹腔注射金黃色葡萄球菌培養(yǎng)液0.5ml/鼠(菌液濃度0.11ml/ml)。然后繼續(xù)給藥2天。觀察各組動(dòng)物7日內(nèi)死亡情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示XG對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠具有明顯的保護(hù)作用。見表2、表3。表2XG灌胃給藥對(duì)金黃色葡萄球菌感染小數(shù)死亡的保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>##p<0.01與正常對(duì)照組比較；*p<0.05**p<0.01與模型組比較表3XG注射給藥對(duì)金黃色葡萄球菌感染小數(shù)死亡的保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>模型組—17##3.14±1.76##雙黃連注射液組10ml/kg9*5.33±2.45XGI組46**5.78±2.32**XGII組204"5.96±2.34**XGin組1003"6.12±2.64**##p<0.01與正常對(duì)照組比較；*p<0.05**p<0.01與模型組比較2.2對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠的保護(hù)作用菌液制備取臨床分離肺炎雙球菌接種入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37°C孵箱培養(yǎng)18h。取出，劃線于血平板上(1%羊紅細(xì)胞營養(yǎng)瓊脂平板)，37°C孵箱培養(yǎng)24h，取出。用6ml5。/。的胃膜素(PH7.2)洗脫菌落，并用4ml生理鹽水溶液將血平板沖洗干凈，合并后吹打，使菌落分散。用生理鹽水配成lml/ml、0.5ml/ml、0.33ml/ml、0.25ml/ml濃度菌液備用。選擇合適的菌液濃度取ICR小鼠40只,？^各半，體重1822g隨機(jī)分組，每組1個(gè)濃度，腹腔注射肺炎雙球菌菌液0.5ml/鼠，觀察感染小鼠死亡數(shù)，結(jié)果感染小鼠死亡率分別為100.0%，100.0%，60.0%，30,0%。故實(shí)驗(yàn)選用0.45ml/ml濃度菌液(小鼠死亡率估計(jì)8090%之間)。正式試驗(yàn)取ICR小鼠240只，體重1822g，c^各半。取ICR小鼠120只，隨機(jī)分6組，每組20只。正常對(duì)照組(灌胃)、模型組(灌胃)、雙黃連口服液組(10ml/kg)禾nXGI、II、III組(20mg/kg、100mg/kg、500mg/kg)。以上各組小鼠均灌胃給藥，1次/天x5天。另取ICR小鼠120只，隨機(jī)分6組，每組20只。即正常對(duì)照組(注射)、模型組(注射)、雙黃連注射液組(10ml/kg)和XGI、II、III組(4mg/kg、20mg/kg、100mg/kg)。以上各組小鼠均注射給藥，1次/天x5天。第3天給藥1小時(shí)后，除正常對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射肺炎雙球菌培養(yǎng)液0.5ml/鼠(菌液濃度0.45ml/ml)。然后繼續(xù)給藥2天。觀察各組動(dòng)物7日內(nèi)死亡情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示XG灌胃(口服)及注射對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠都具有保護(hù)作用。見表4、表5。表4XG灌胃對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠死亡的保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表5XG注射對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠死亡的保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3、體外抗病毒作用XG對(duì)甲型流感病毒和乙型流感病毒致細(xì)胞病變的抑制作用在長成單層細(xì)胞的MDCK培養(yǎng)板中，每孔感染甲型流感病毒或乙型流感病毒100TCIDso。吸附lh后傾去病毒液，分別加入不同濃度的XG藥液，37"5%(302培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察細(xì)胞病變。同時(shí)設(shè)細(xì)胞對(duì)照組，利巴韋林組(10mg/ml)和病毒對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示XG能夠抑制甲型流感病毒對(duì)MDCK細(xì)胞的毒性作用；也能夠抑制乙型流感病毒對(duì)MDCK細(xì)胞的毒性作用。表明XG具有體外抗病毒的作用。見表6、表7。表6XG對(duì)甲型流感病毒的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>_注-無細(xì)胞病變；+25%細(xì)胞病變；++50%細(xì)胞病變；—75%細(xì)胞病變；卄++100。/。細(xì)胞病變。表7XG對(duì)乙型流感病毒的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注-無細(xì)胞病變；+25。/。細(xì)胞病變；++50%細(xì)胞病變；+++75%細(xì)胞病變；++++100%細(xì)胞病變。4、體內(nèi)抗病毒作用4.1對(duì)甲型流感病毒感染小鼠死亡的保護(hù)作用取ICR小鼠240只，體重1822g，^$各半。取ICR小鼠120只，隨機(jī)分6組，每組20只。正常對(duì)照組(灌胃)、模型組(灌胃)、雙黃連口服液組(10ml/kg)禾BXGI、II、m組(20mg/kg、100mg/kg、500mg/kg)。以上各組小鼠均灌胃給藥。另取ICR小鼠120只，隨機(jī)分6組，每組20只。即正常對(duì)照組(注射)、模型組(注射)、雙黃連注射液組(10ml/kg)和XGI、II、III組(4mg/kg、20mg/kg、100mg/kg)。以上各組小鼠均注射給藥。給藥lh后除空白對(duì)照組外，其余各組在乙醚淺麻醉下，以血凝試驗(yàn)640以上的尿囊液給小鼠滴鼻感染，每鼠30pl(20個(gè)LDso致死量)，觀察14天內(nèi)動(dòng)物感染后發(fā)病及死亡情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示XG灌胃(口服)及注射均可明顯延長甲型流感病毒感染小鼠的存活天數(shù)，顯著降低甲型流感病毒感染小鼠死亡數(shù)。表明XG對(duì)甲型流感病毒感染小鼠具有明顯的保護(hù)作用。見表8、表9。表8XG灌胃對(duì)甲型流感病毒感染小鼠死亡的保護(hù)作用組別劑量死亡數(shù)存活天數(shù)(mg/kg)(只)(x±S)正常對(duì)照組—014±0模型組—l鵬5.22±2.48##雙黃連口服液組lOml/kg139.57±2.79XGI組2010*10.02±3.12XGII組1009頭10.48±2.43*xgm組5008a11.77±2.68"表9XG注射對(duì)甲型流感病毒感染小鼠死亡的保護(hù)作用組別劑量死亡數(shù)存活天數(shù)(mg/kg)(只)(x±S)正常對(duì)照組一014±0模型組一17##6.75±3.69##雙黃連注射液組lOml/kg129.80±3.95**XGI組410.6±3.92**xgii組2011.2±3.40**xgin組1005"12.0±3.26**##p<0.01與空白對(duì)照組比較；*p<0.05**p<0.01與模型組比較4.2對(duì)甲型流感病毒感染小鼠肺病變的影響取ICR小鼠120只，體重1316g，(？？各半。取ICR小鼠60只，隨機(jī)分6組，每組10只。正常對(duì)照組(灌胃)、模型組(灌胃)、利巴韋林組(0.5g/kg)和XGI、II、III組(20mg/kg、100mg/kg、500mg/kg)。以上各組小鼠均灌胃給藥，l次/天x5天。另取ICR小鼠60只，隨機(jī)分6組，每組10只。即正常對(duì)照組(注射)、模型組(注射)、穿琥寧注射液組(133mg/kg)和XGI、II、III組(4mg/kg、20mg/kg、100mg/kg)。以上各組小鼠均注射給藥，1次/天x5天。除空白對(duì)照組外，其余各組于給藥第1天，在乙醚淺麻醉下以病毒尿囊液滴鼻感染小鼠，每鼠3(^1(15個(gè)LDso攻擊量)。然后繼續(xù)給藥4天。末次給藥后將小鼠禁食(不禁水)，次日進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)取肺，用1%甲醛溶液固定后，常規(guī)取材，脫水，石蠟包埋，制片，HE染色后作病理組織學(xué)檢査，觀察肺部病變程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下見表IO、表ll。表10xg灌胃對(duì)甲型流感病毒感染小鼠肺病變的影響病變積分平均積組另lj<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表11xg注射對(duì)甲型流感病毒感染小鼠肺病變的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>#p<0.01與正常對(duì)照組比較；*p<0.05**p<0.01與模型組比較注1.病變積分根據(jù)病變程度不同，依次標(biāo)記為"-"、"+"、"++"、"+++"、"++++"。"-"為無明顯改變，記為o分；"+"為輕度病變改變，記為l分；"++"為中度病理改變，記為2分；"+++"為重度病理改變，記為3分；"++++"為極重度病理改變，記為4分。積分值越高，表示病變程度越重。.2.統(tǒng)計(jì)采用秩和檢驗(yàn)。上述結(jié)果顯示XG能減輕甲型流感病毒所致小鼠的肺部感染，具有抗甲型流感病毒的作用。4.3對(duì)乙型流感病毒感染小鼠死亡的保護(hù)作用取ICR小鼠240只，體重1822g，3各半。取ICR小鼠120只，隨機(jī)分6組，每組20只。正常對(duì)照組(灌胃)、模型組(灌胃)、雙黃連口服液組(10ml/kg)禾PXGI、II、III組(20mg/kg、100mg/kg、500mg/kg)。以上各組小鼠均灌胃給藥。另取ICR小鼠120只，隨機(jī)分6組，每組20只。即正常對(duì)照組(注射)、模型組(注射)、雙黃連注射液組(10ml/kg)和XGI、II、III組(4mg/kg、20mg/kg、100mg/kg)。以上各組小鼠均注射給藥。給藥lh后除空白對(duì)照組外，其余各組在乙醚淺麻醉下，以血凝試驗(yàn)640以上的尿囊液給小鼠滴鼻感染，每鼠40pl(20個(gè)LD5o致死量)，觀察14天內(nèi)動(dòng)物感染后發(fā)病及死亡情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表12、表13。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示XG可明顯延長乙型流感病毒感染小鼠的存活天數(shù),也可降低甲型流感病毒感染小鼠死亡數(shù)。表明XG對(duì)甲型流感病毒感染小鼠具有一定的保護(hù)作用。表12XG灌胃對(duì)乙型流感病毒感染小鼠死亡的保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表13XG注射對(duì)乙型流感病毒感染小鼠死亡的保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>##p<0.01與空白對(duì)照組比較；*p<0.05**p<0.01與模型組比較4.4對(duì)乙型流感病毒感染小鼠肺病變的影響取ICR小鼠120只，體重1316g，c^各半。取ICR小鼠60只，隨機(jī)分6組，每組10只。正常對(duì)照組(灌胃)、模型組(灌胃)、利巴韋林組(0.5g/kg)和XGI、II、III組(20mg/kg、腦mg/kg、500mg/kg)。以上各組小鼠均灌胃給藥，l次/天x5天。另取ICR小鼠60只，隨機(jī)分6組，每組10只。即正常對(duì)照組(注射)、模型組(注射)、穿琥寧注射液組(133mg/kg)和XGI、II、m組(4mg/kg、20mg/kg、100mg/kg)。以上各組小鼠均注射給藥，1次/天x5天。除空白對(duì)照組外，其余各組于給藥第1天，在乙醚淺麻醉下以病毒尿囊液滴鼻感染小鼠，每鼠3(^1(20個(gè)LDsQ攻擊量)。然后繼續(xù)給藥5天。末次給藥后將小鼠禁食(不禁水)，次日進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)取肺，用1%甲醛溶液固定后，常規(guī)取材，脫水，石蠟包埋，制片，HE染色后作病理組織學(xué)檢查，觀察肺部病變程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下見表14、表15。XG灌胃給藥及注射給藥均能減輕乙型流感病毒所致小鼠的肺部感染，具有抗乙型流感病毒的作用。表14xg灌胃對(duì)乙型流感病毒感染小鼠肺病變的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>#p<0.01與正常對(duì)照組比較；*p<0.05**p<0.01與模型組比較頁表15xg注射對(duì)乙型流感病毒感染小鼠肺病變的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>#p<0.01與正常對(duì)照組比較；*p<0.05**p<0.01與模型組比較注1.病變積分根據(jù)病變程度不同，依次標(biāo)記為"-"、"+"、"++"、"+++"、"++++"。"-"為無明顯改變，記為0分；"+"為輕度病變改變，記為l分；"++"為中度病理改變，記為2分；"+++"為重度病理改變，記為3分；"++++"為極重度病理改變，記為4分。積分值越高，表示病變程度越重。2.統(tǒng)計(jì)采用秩和檢驗(yàn)。5、抗炎鎮(zhèn)痛作用5.1對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響取正常ICR小鼠100只，體重2530g，雄性。取50只隨機(jī)分為5組，每組10只小鼠，即正常對(duì)照組(灌胃)、乙酰水楊酸組(0.11g/kg)和XGI、II、III組(20mg/kg、100mg/kg、500mg/kg)，分別灌胃給予相應(yīng)藥物(正常對(duì)照組灌胃給予等容積蒸餾水)，每日一次，連續(xù)3曰。另取50只隨機(jī)分為5組，每組10只小鼠，即正常對(duì)照組(注射)、醋酸地塞米松注射液組(4mg/kg)和XGI、II、m組(4mg/kg、20mg/kg、100mg/kg)，分別注射給予相應(yīng)藥物(正常對(duì)照組注射給予等容積生理鹽水)，每日一次，連續(xù)3日。第3日各灌胃組給藥40min、各注射組給藥5min后，分別用2%巴豆油0.05ml涂于小鼠左耳前后兩面，在致炎4h后處死小鼠，沿耳廓基線剪下左右兩耳，用打孔器(直徑9mm)分別在同一部位取下圓耳片，電子天平稱重，以小鼠左右耳殼重量之差值作為耳殼腫脹度，并計(jì)算腫脹百分率。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>XG灌胃、注射給藥組均能減輕巴豆油致小鼠耳腫脹度，降低腫脹率，與對(duì)照組相比有顯著性差異(p0.05，pO.Ol)。表明XG具有顯著的抗炎作用，結(jié)果見表16。表16XG灌胃及注射對(duì)巴豆油所致小鼠耳腫脹的影響(f±S)組另!i劑量(mg/kg)動(dòng)物數(shù)(只)耳殼腫脹度(mg)腫脹率(％)正常對(duì)照組(灌胃)—1016.8±4.699.5±30.1乙酰水楊酸組1101013.0±4.3*74.7±21.8*XG灌胃I劑量組201013.1±3.8*76.7±23.6*XG灌胃II劑量組1001012.2±4.1*71.5±27.3AXG灌胃in劑量組5001010.1±4.5**59.4±28.7**正常對(duì)照組(注射)_1017.8±2.594.5±16.5醋酸地塞米松注射液組41011.3±4.5AA61.0±31.5AAXG注射I劑量組41013.4±4.1AA71.4±30.5Axg注射ii劑量組20109.1±5.5AA51.2±33.4Mxg注射in劑量組100104.7±2.8AA24.1±15.3M注與正常對(duì)照組(灌胃)相比，*p<0.05,**p<0.01;與正常對(duì)照組(注射)相比，Ap<0.05,AAp<0.015.2對(duì)乙酸腹腔刺激致小鼠疼痛反應(yīng)的影響取正常ICR小鼠100只，體重2530g，雄性。取50只隨機(jī)分為5組，每組10只小鼠，即正常對(duì)照組(灌胃)、乙酰水楊酸組(O.llg/kg)和XGI、II、III組(20mg/kg、100mg/kg、500mg/kg)，分別灌胃給予相應(yīng)藥物(正常對(duì)照組灌胃給予等容積蒸餾水)，每日一次，連續(xù)3曰。另取50只隨機(jī)分為5組，每組10只小鼠，即正常對(duì)照組(注射)、嗎啡組(10mg/kg)和XGI、II、III組(4mg/kg、20mg/kg、100mg/kg)，分別注射給予相應(yīng)藥物(正常對(duì)照組注射給予等容積生理鹽水)，每日一次，連續(xù)3日。第3日各灌胃組給藥40min、各注射組給藥5min后，各組小鼠腹腔注射0.6%乙酸0.2ml/只，觀察注射乙酸后15min內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)的扭體反應(yīng)動(dòng)物數(shù)和扭體反應(yīng)次數(shù)。XG灌胃、注射給藥組均能減少小鼠扭體次數(shù)，與正常對(duì)照組相比有顯著性差異(p0.05，pO.Ol)。表明XG具有鎮(zhèn)痛作用，結(jié)果見表17。表17XG灌胃及注射對(duì)乙酸腹腔剌激致小鼠疼痛反應(yīng)的影響(f±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注與正常對(duì)照組(灌胃)相比，*p<0.05,**p<0.01;與正常對(duì)照組(注射)相比，、<0.05，AAp<0.016、解熱作用對(duì)干酵母所致大鼠發(fā)熱的解熱作用取雄性SD大鼠180只，體重160180g。測正常體溫，每日2次，連續(xù)3日。實(shí)驗(yàn)日每小時(shí)測體溫l次，連續(xù)3次，選取體溫變動(dòng)不高于0.3"C的大鼠用于實(shí)驗(yàn)。取合格大鼠，每鼠于背部皮下注射20n/。干酵母溶液15ml/kg。4小時(shí)后若大鼠體溫升高〉rc者進(jìn)行分組給藥。選取發(fā)熱合格大鼠IOO只，隨機(jī)分為10組(1)空白對(duì)照I組生理鹽水5ml/kg;(2)雙黃連注射液組5ml/kg;(3)XG注射I組2mg/kg;(4)XG注射II組:10mg/kg;(5)XG注射m組:50mg/kg;(6)空白對(duì)照II組生理鹽水5ml/kg;(7)雙黃連口服液組5ml/kg;(8)XG灌胃I組10mg/kg;(9)XG灌胃II組:50mg/kg;(10)XG灌胃III組:250mg/kg。(1)、(2)、(3)、(4)、(5)組均按5ml/kg靜脈注射給藥;(6)、(7)、(8)、(9)、(10)均按5ml/kg灌胃給藥。于給藥后15、30、45、60、90、120、180、240min觀察大鼠體溫變化。結(jié)果進(jìn)行組間比較。顯示，XG注射各給藥組在注射給藥后能明顯降低干18酵母所致大鼠體溫，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異(PO.05,0.01);XG在灌胃給藥后對(duì)亦有一定的降低干酵母所致大鼠體溫升高的作用的，表明XG具有抗高熱的作用，XG靜脈給藥的降溫作用比灌胃給藥作用強(qiáng)。見表18、表19。表18XG對(duì)干酵母所致大鼠發(fā)熱的影響(靜脈注射給藥)(x土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>*p<0.05，**p<0.01與空白對(duì)照II組比較7、抗鉤端螺旋體病作用取健康豚鼠200只.體重150250g，雄性。取100只隨機(jī)分為5組，每組20只，即模型對(duì)照組(灌胃)、利巴韋林組(250mg/kg)和XGI、II、m組(10mg/kg、50mg/kg、250mg/kg)，分別灌胃給予相應(yīng)藥物(模型對(duì)照組灌胃給予等容積蒸餾水)，每日一次，連續(xù)3曰。另取100只隨機(jī)分為5組，每組20只，即模型對(duì)照組(注射)、地塞米松組(5mg/kg)和XGI、II、III組(2mg/kg、10mg/kg、50mg/kg)，分別注射給予相應(yīng)藥物(模型對(duì)照組注射給予等容積生理鹽水)，每日一次，連續(xù)3日。第3日各灌胃組給藥40min、各注射組給藥5min后，各組動(dòng)物靜脈注入強(qiáng)毒力黃疸出血群賴型017株鉤體濃縮菌液(2.5X109條/ml菌液)2ml/只，觀察注射鉤體濃縮菌液后48小時(shí)內(nèi)各組動(dòng)物出現(xiàn)的死亡動(dòng)物數(shù)。48小時(shí)后其余未死亡動(dòng)物一起處死，連同48小時(shí)內(nèi)死亡動(dòng)物做病理觀察。XG灌胃、注射給藥組均能減少鉤體濃縮菌液注射致豚鼠肺出血模型48小時(shí)內(nèi)的死亡動(dòng)物數(shù)，與模型對(duì)照組相比有顯著性差異(pO.Ol)。表明XG具有抗鉤體病作用，結(jié)果見表20。表20XG灌胃及注射對(duì)鉤體濃縮菌液注射致豚鼠肺出血模型48小時(shí)內(nèi)的死亡動(dòng)物數(shù)的影響(^±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注與模型對(duì)照組(灌胃)相比，**p<0.01;與模型對(duì)照組(注射)相比，AAp<0.01病理檢査模型對(duì)照組動(dòng)物肺組織明顯腫脹，廣泛出血達(dá)肺總面積的3/4以上；月干、腎組織輕度腫脹，未見出血。XG灌胃、注射給藥組動(dòng)物除48小時(shí)內(nèi)死亡的動(dòng)物口鼻涌血表現(xiàn)類同模型對(duì)照組外，其余動(dòng)物肝、腎組織腫脹不顯，且未見出血；肺組織均有不同程度的腫脹和出血，出血為散在.電狀或達(dá)一側(cè)肺的1/2。相比較模型對(duì)照組明顯減輕。實(shí)驗(yàn)結(jié)論綜上所述，喜果苷具有一定的抗菌、抗病毒、抗高熱、抗炎、鎮(zhèn)痛等藥理作用，它可以作為有效成份用來制備抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物。而且根據(jù)治療敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病和鉤端螺旋體病的病理及臨床癥狀表現(xiàn)，結(jié)合喜果苷的藥理作用，它也可以用來制備治療敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病的藥物，以及用來制備治療鉤端螺旋體病的藥物。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l。一種喜果苷制劑，取現(xiàn)有技術(shù)工藝所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成片劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例2。一種喜果苷制劑，取現(xiàn)有技術(shù)工藝所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成顆粒劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例3。一種喜果苷制劑，取現(xiàn)有技術(shù)工藝所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成膠囊劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例4。一種喜果苷制劑，取現(xiàn)有技術(shù)工藝所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成丸劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例5。一種喜果苷制劑，取現(xiàn)有技術(shù)工藝所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成滴丸劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例6。一種喜果苷制劑，取下述方法所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成軟膠囊劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。喜果苷的制備方法取喜樹果藥材，打碎，用水煎煮，或65%乙醇回流提取2次，每次用量12倍，分別提取l小時(shí)，合并提取液，過濾，回收乙醇至無醇味，加水至8L/1KG藥材，靜置，冷藏過夜，離心除去沉淀，澄清液上HPD100或AB-8等弱極性大孔樹脂，藥材/樹脂l:1，先用水洗脫5個(gè)柱體積，然后用25%乙醇洗脫5個(gè)柱體積，再用35%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，最后用55%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集55%乙醇部分，回收乙醇至瓶內(nèi)有黑色粘附物出現(xiàn)，趁熱過濾，濾液冷卻，析出沉淀，過濾，沉淀再次重結(jié)晶，即得純度達(dá)90%以上的喜果苷。實(shí)施例7。一種喜果苷制劑，取下述方法所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成注射劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。喜果苷制備方法取喜樹果藥材，打碎，用水煎煮，或75%乙醇回流提取4次，每次用量8倍，分別提取2小時(shí)，合并提取液，過濾，回收乙醇至無醇味，加水至12L/1KG藥材，靜置，冷藏過夜，離心除去沉淀，澄清液上HPD100或AB-8等弱極性大孔樹脂，藥材/樹脂l:1，先用水洗脫5個(gè)柱體積，然后用25%乙醇洗脫5個(gè)柱體積，再用35%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，最后用55%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集55%乙醇部分，回收乙醇至瓶內(nèi)有黑色粘附物出現(xiàn)，趁熱過濾，濾液冷卻，析出沉淀，過濾，沉淀再次重結(jié)晶，即得純度達(dá)90%以上的喜果苷。實(shí)施例8。一種喜果苷制劑，取下述方法所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成輸液劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。喜果苷的制備方法取喜樹果藥材，打碎，用水煎煮，或70%乙醇回流提取三次，每次用量10倍，分別提取1.5小時(shí)、l小時(shí)、l小時(shí)，合并三次提取液，過濾，回收乙醇至無醇味，加水至10L/1KG藥材，靜置，冷藏過夜，離心除去沉淀，澄清液上HPD100或AB-8等弱極性大孔樹脂，藥材/樹脂l:1，先用水洗脫5個(gè)柱體積，然后用25%乙醇洗脫5個(gè)柱體積，再用35%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，最后用55%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集55%乙醇部分，回收乙醇至瓶內(nèi)有黑色粘附物出現(xiàn)，趁熱過濾，濾液冷卻，析出沉淀，過濾，沉淀再次重結(jié)晶，即得純度達(dá)90%以上的喜果苷。實(shí)施例9。一種喜果苷制劑，取實(shí)施例1所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成口服液，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例10。一種喜果苷制劑，取實(shí)施例8中所述制備方法制得的喜果苷，加入藥物載體，制成注射劑，制備時(shí)，所用的助溶劑為氫氧化鈉、氫氧化鉀、精氨酸、賴氨酸、葡甲胺、尿素、乙酰胺、硫脲、苯甲酰胺、乙醇、丙二醇或者甘露醇，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例11。一種喜果苷制劑，取實(shí)施例7中所述制備方法制得的喜果苷，加入藥物載體，制成合劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例12。一種喜果苷制劑，取實(shí)施例6中所述制備方法所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成混懸劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例13。一種喜果苷制劑，取現(xiàn)有技術(shù)中的制備工藝所制得的喜果苷，加入藥物載體，制成靶向制劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例14。一種喜果苷制劑，取實(shí)施例6中所述方法制得的喜果苷，加入藥物載體，制成緩釋制劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例15。一種喜果苷制劑，取實(shí)施例7中所述方法制得的喜果苷，加入藥物載體，制成控釋制劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。實(shí)施例16。一種喜果苷制劑，取實(shí)施例8中所述方法制得的喜果苷，加入藥物載體，制成凍干粉針劑，用于作為抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物，或者用于敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的治療。權(quán)利要求1、喜樹果提取物喜果苷在制備抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物中的用途，或者在制備治療敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的藥物中的用途。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病包括急性扁桃體炎、咽喉炎、上呼吸道感染、支氣管炎、肺炎、結(jié)膜炎、麥粒腫、牙周膿腫、中耳炎、燒傷感染、泌尿系統(tǒng)感染或手術(shù)后預(yù)防感染。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的喜樹果提取物喜果苷的制備方法是如下取喜樹果藥材，打碎，用水煎煮，或65-75%乙醇回流提取2-4次，每次用量8-12倍，分別提取l-2小時(shí)，合并提取液，過濾，回收乙醇至無醇味，加水至8-12L/1KG藥材，靜置，冷藏過夜，離心除去沉淀，澄清液上HPD100或AB-8等弱極性大孔樹脂，藥材/樹脂l:1，先用水洗脫5個(gè)柱體積，然后用25%乙醇洗脫5個(gè)柱體積，再用35%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，最后用55%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集55%乙醇部分，回收乙醇至瓶內(nèi)有黑色粘附物出現(xiàn)，趁熱過濾，濾液冷卻，析出沉淀，過濾，沉淀再次重結(jié)晶，即得純度達(dá)90%以上的喜果苷。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述的喜樹果提取物喜果苷的制備方法是如下取喜樹果藥材，打碎，用水煎煮，或70%乙醇回流提取三次，每次用量10倍，分別提取1.5小時(shí)、l小時(shí)、l小時(shí)，合并三次提取液，過濾，回收乙醇至無醇味，加水至10L/1KG藥材，靜置，冷藏過夜，離心除去沉淀，澄清液上HPD100或AB-8等弱極性大孔樹脂，藥材/樹脂l:1，先用水洗脫5個(gè)柱體積，然后用25%乙醇洗脫5個(gè)柱體積，再用35%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，最后用55%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集55%乙醇部分，回收乙醇至瓶內(nèi)有黑色粘附物出現(xiàn)，趁熱過濾，濾液冷卻，析出沉淀，過濾，沉淀再次重結(jié)晶，即得純度達(dá)90%以上的喜果苷。5、一種如權(quán)利要求1或2所述用途的喜果苷制劑，其特征在于，取喜果苷，加入藥學(xué)上可以接受的藥物載體，制成臨床上可接受的任何一種劑型的藥劑。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種喜果苷制劑，其特征在于，所述藥劑的劑型為注射劑，制備時(shí)，所用的助溶劑為堿性物質(zhì)或者醇類物質(zhì)，選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、精氨酸、賴氨酸、葡甲胺、尿素、乙酰胺、硫脲、苯甲酰胺、乙醇、丙二醇或者甘露醇。全文摘要喜樹果提取物喜果苷在制備抗菌或抗病毒或抗高熱或抗炎或鎮(zhèn)痛藥物中的用途，或者在制備治療敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病或者鉤端螺旋體病的藥物中的用途。所述的敏感細(xì)菌、病毒引起的感染性疾病包括急性扁桃體炎、咽喉炎、上呼吸道感染、支氣管炎、肺炎、結(jié)膜炎、麥粒腫、牙周膿腫、中耳炎、燒傷感染、泌尿系統(tǒng)感染或手術(shù)后預(yù)防感染。本發(fā)明還公開了上述用途的一種喜果苷制劑。文檔編號(hào)A61K31/706GK101313914SQ200710022779公開日2008年12月3日申請日期2007年5月29日優(yōu)先權(quán)日2007年5月29日發(fā)明者崗丁,婭凌,戴翔翎,亮曹,李明慧,王振中,偉肖申請人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司