專利名稱：一種治療艾滋病的中藥制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥，特別涉及一種治療艾滋病的中藥制劑。
背景技術(shù)：
艾滋病在全球迅速傳播，2005年為止感染艾滋病毒總?cè)藬?shù)已達(dá)6900多萬(wàn)。2006年又新增感染者430萬(wàn)人。自從1985年中國(guó)報(bào)告首例艾滋病病歷迄今，中國(guó)約有100萬(wàn)艾滋病病毒感染者，近年來(lái)增長(zhǎng)幅度超過(guò)30％，衛(wèi)生部公布的最新數(shù)字表明截至2007年4月30日，中國(guó)內(nèi)地累計(jì)報(bào)告艾滋病病毒感染者203527例，其中艾滋病病人52480例，死亡16155例。有專家預(yù)測(cè)，中國(guó)如不能采取有效干預(yù)行動(dòng)控制艾滋病傳播，預(yù)計(jì)到2010年中國(guó)艾滋病病毒感染者將可能達(dá)到1200萬(wàn)。艾滋病已經(jīng)嚴(yán)重危害人民群眾的身體健康，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，成為我國(guó)當(dāng)前重大衛(wèi)生問(wèn)題和社會(huì)問(wèn)題，直接影響到我國(guó)的社會(huì)穩(wěn)定和國(guó)民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。
當(dāng)前，西藥治療艾滋病雖然取得的相當(dāng)?shù)某删停嬖谥恍┟黠@的缺陷，主要是價(jià)格昂貴、服藥程序復(fù)雜嚴(yán)格、停藥后病毒載量急劇反彈、嚴(yán)重毒副反應(yīng)、大量耐藥毒株出現(xiàn)、部分病人免疫功能未改善、生活質(zhì)量差等弱點(diǎn)。而用中藥治療艾滋病，具有藥源豐富、價(jià)格低廉、服用方便、無(wú)毒副作用、有效保護(hù)和改善免疫功能、早期介入治療、可應(yīng)對(duì)復(fù)雜多變的臨床表現(xiàn)等優(yōu)勢(shì)。因此，開發(fā)治療艾滋病的中藥新藥勢(shì)在必行。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種副作用小、療效顯著的治療艾滋病的中藥制劑。
本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種治療艾滋病的中藥制劑，其特殊之處在于是由以下重量份數(shù)的原料制成
牛蒡子3-9g 黃芩3-9g 桑白皮6-12g 仙鶴草6-12g千里光6-12g 地膚子6-12g 人參2-6g 黃芪10-25g 天花粉6-12g 紫花地丁6-12g 甘草6-12g。
所述中藥制劑為水煎劑、顆粒劑、膠囊、片劑或其它可藥學(xué)的劑型。
功能祛風(fēng)清熱，化痰除濕，兼以補(bǔ)肺。
主治艾滋病屬上焦肺衛(wèi)證，表現(xiàn)為發(fā)熱或發(fā)熱惡寒、咽喉疼痛、咳嗽喘促、倦怠乏力、皮膚潰瘍或皮疹、瘰癘痰核，舌紅苔黃厚或舌紅少苔，脈數(shù)或細(xì)數(shù)等。
本發(fā)明的原料中以既能疏風(fēng)清熱，又可解毒宣肺的牛蒡子為君；黃芩、桑白皮清泄肺中火毒痰濁為臣；人參、黃芪、天花粉等補(bǔ)肺之氣陰，千里光、地膚子、仙鶴草、紫花地丁等祛風(fēng)清熱除濕透毒，為佐；甘草益氣和中，調(diào)和諸藥為使。
現(xiàn)將國(guó)內(nèi)外對(duì)該制劑的臨床觀察，總結(jié)如下國(guó)內(nèi)觀察2005年12月至2006年4月，我們對(duì)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院10例HIV/AIDS患者，應(yīng)用按實(shí)施例1制備的本發(fā)明的藥物(以下簡(jiǎn)稱艾乃吉1號(hào))顆粒進(jìn)行為期3個(gè)月的臨床觀察。
1臨床資料1.1診斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《HIV/AIDS診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》(GB16000-1995)、1993年美國(guó)疾病控制中心(CDC)修正的HIV感染分類、AIDS診斷標(biāo)準(zhǔn)與CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)分期方法。
1.2病例選擇納入標(biāo)準(zhǔn)①符合中華人民共和國(guó)HIV/AIDS診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡為18～55歲；③CD4細(xì)胞數(shù)為100-400/mm3。
排除標(biāo)準(zhǔn)①年齡＜18歲或＞65歲；②妊娠期及哺乳期婦女，精神病患者；③急性HIV感染者；④嚴(yán)重機(jī)會(huì)性感染和腫瘤者；⑤非HIV所致的免疫缺陷綜合征者；⑥合并有心、肺、肝、腎、造血和內(nèi)分泌系統(tǒng)嚴(yán)重原發(fā)性疾病者；⑦吸毒人員正在接受戒毒治療或正在吸毒者。1.3一般資料 10例患者均為北京佑安醫(yī)院感染科的門診病人，均經(jīng)酶聯(lián)免疫法(ELISA)和蛋白印記法(WB)確診為HIV抗體陽(yáng)性，符合納入標(biāo)準(zhǔn)。其中男性9例，女性1例；年齡23-37歲，平均29.1歲；已婚2例，未婚8例；傳播途徑輸血1例，同性性接觸7例，雙性性接觸2例；HIV感染者8例，AIDS 2例；可能感染時(shí)間最短為8個(gè)月，最長(zhǎng)約10年。臨床表現(xiàn)乏力3例、發(fā)熱2例、咳嗽7例、胸痛1例、瘍疹2例、自汗盜汗1例、脫發(fā)1例、腹瀉6例、口腔糜爛3例、咽痛5例。全部病人均在知情同意情況下進(jìn)行臨床觀察。
2觀察方法2.1給藥方法 艾乃吉1號(hào)，主要由牛蒡子、黃芩、桑白皮、人參等組成。經(jīng)水提醇沉后，制成顆粒，每包10g(含生藥40g)。由濟(jì)南利蒙制藥有限公司制備。用法每日2次，每次10g，飯后1小時(shí)口服。用藥期間不應(yīng)用其他抗艾滋病藥物及免疫制劑，對(duì)所出現(xiàn)的機(jī)會(huì)性感染，可與對(duì)癥處理。
2.2觀察項(xiàng)目與方法2.2.1中醫(yī)癥狀體征采集及體重測(cè)定 主要觀察乏力、發(fā)熱、咳嗽、胸痛、瘍疹、瘰疬痰核、自汗盜汗、脫發(fā)、納呆、消瘦、腹瀉、口腔糜爛、咽痛等。采用積分法，分別以無(wú)(0)、輕(1)、中(2)、重(3)數(shù)字積分表示，于0、1、2、3月四時(shí)點(diǎn)觀察，并于0、3月測(cè)呼吸、心率、血壓、體重。
2.2.2 T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè) 采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)10例患者治療前后(0、3月)外周 CD3絕對(duì)數(shù)、CD4絕對(duì)數(shù)及百分比、CD8絕對(duì)數(shù)及百分比、CD4/CD8等。
2.2.3血漿病毒載量 采用熒光定量PCR方法測(cè)定10例患者治療前后(0、3月)血漿HIV-RNA拷貝數(shù)。
2.2.4安全性檢測(cè) 測(cè)定10例患者治療前后(0、3月)血常規(guī)及肝、腎功能等。
以上檢測(cè)項(xiàng)目均在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院進(jìn)行。
3療效標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)國(guó)家中醫(yī)藥管理局《5省中醫(yī)藥治療艾滋病項(xiàng)目臨床技術(shù)方案(試行)》，從免疫功能、病毒載量、癥狀體征三方面進(jìn)行評(píng)價(jià)。
3.1免疫指標(biāo) 有效CD4逐漸上升，療后CD4升高≥30％或50/mm3；穩(wěn)定CD4無(wú)變化或逐漸上升，療后CD4升高或下降＜30％或50/mm3；無(wú)效CD4下降≥30％或50/mm3。
3.2病毒載量 有效血漿HIV-RNA水平下降，拷貝數(shù)降低≥0.5log/ml；穩(wěn)定HIV-RNA拷貝數(shù)上升或下降＜0.5log/ml；無(wú)效血漿中HIV-RNA水平持續(xù)上升，拷貝數(shù)上升≥0.5log/ml。
3.3癥狀與體征 有效臨床癥狀體征改善較明顯，總積分下降≥1/3；穩(wěn)定臨床癥狀體征改善不明顯，總積分下降＜1/3；無(wú)效臨床癥狀體征無(wú)改善或加重，總積分不下降，或有所增加。
4觀察結(jié)果4.1免疫功能 主要以CD4絕對(duì)數(shù)及CD4/CD8比值變化為觀察指標(biāo)。10例患者治療前后的免疫指標(biāo)變化見表1。
表1 治療前后HIV/AIDS患者CD4及CD4/CD8變化
結(jié)果顯示，CD4絕對(duì)數(shù)增加5例，降低5例；CD4/CD8比值增加4例，無(wú)變化1例，降低5例。根據(jù)療效標(biāo)準(zhǔn)，有效1例，穩(wěn)定9例，無(wú)效0例。
4.2病毒載量 10例患者治療前后的血漿病毒載量變化見表2。
表2 治療前后HIV/AIDS患者的病毒載量變化
結(jié)果顯示，10例患者中6例下降，其中下降幅度≥0.5log/ml者4例；增加4例，增加幅度≥0.5log/ml1例。根據(jù)療效標(biāo)準(zhǔn)，有效4例，穩(wěn)定5例，無(wú)效1例。
4.3癥狀體征及體重變化 癥狀體征消失(治療后/治療前)分別為乏力2/3例、發(fā)熱1/2例(減輕1例)、咳嗽5/7例(減輕1例)、胸痛1/1例、瘍疹0/2例、自汗盜汗1/1例、脫發(fā)0/1例、腹瀉5/6例、口腔糜爛2/3例、咽痛2/5例。體重增加≥2kg者2例，穩(wěn)定者7例，下降≥2kg者1例。根據(jù)療效標(biāo)準(zhǔn)，有效5例，穩(wěn)定5例，無(wú)效0例。
4.4安全性評(píng)價(jià) 10例患者治療前后肝、腎功能均無(wú)異常，血常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)無(wú)明顯變化。治療期間2例出現(xiàn)輕度腹瀉，未經(jīng)處理自行緩解；咽痛、耳癢耳鳴2例，用藥緩解。
國(guó)外觀察2004年7月至2005年3月間在肯尼亞SEEBOUND中醫(yī)院診治的38例治療情況報(bào)告如下1病例選擇主要根據(jù)病史、臨床癥狀體征及實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行診斷。所有患者均經(jīng)酶聯(lián)免疫法(ELISA)和蛋白印跡法(WESTERN BLOT)確診為HIV抗體陽(yáng)性。在美國(guó)疾病控制中心(CDC)的診斷和分期標(biāo)準(zhǔn)(1993)基礎(chǔ)上，參考中醫(yī)三焦辨證方法入選病例。其中屬上焦肺衛(wèi)證38例，根據(jù)臨床表現(xiàn)，自擬中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)如下①發(fā)熱或發(fā)熱惡寒；②咳嗽或喘促、痰少難咯或痰多；③胸痛胸悶；④皮膚瘙癢、丘疹或疥瘡、潰瘍；⑤瘰癘痰核；⑥咽痛；⑦舌紅絳黃厚或舌紅少苔，脈細(xì)或數(shù)。
主證為①～⑥任一種或一種以上，合并⑦者，可確診。
2一般資料男19例，女19例；年齡25-65歲；病程5個(gè)月-9年。按CDC分類AC期1例，ARC期26例，AIDS期11例。臨床表現(xiàn)發(fā)熱或發(fā)熱惡寒19例，咳嗽37例，喘促氣短5例，痰少難咯9例，痰多7例，胸痛20例，胸悶6例，皮膚瘙癢、丘疹或癤瘡、潰瘍23例，瘰癘痰核11例，咽痛5例，倦怠乏力33例，納呆食少26例，消瘦20例，腹瀉時(shí)作15例，精神萎靡或錯(cuò)亂1例，頭發(fā)干枯、稀疏10例，頭暈3例，頭痛2例，心悸1例，肢體刺痛1例，尿頻、尿痛1例。
3治療方法用艾乃吉1號(hào)顆粒，由牛蒡子、黃芩、桑白皮等，制成顆粒，每包10g(含生藥40g)；每次1包，每日2次，連服3個(gè)月。治療期間，未用其他抗病毒藥和免疫功能增強(qiáng)劑。
4觀察指標(biāo)及方法患者均為門診病例，采用治療前后自身對(duì)照方法，主要觀察臨床癥狀體征、治療前后CD4細(xì)胞數(shù)及病毒載量的變化。檢測(cè)儀器用美國(guó)產(chǎn)THE CUAVA SYSTEM。在治療前及治療后的第1、2、3個(gè)月末觀察并記錄臨床表現(xiàn)的變化情況。
5結(jié)果5.1療效評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)參考國(guó)家中醫(yī)藥管理局5省中醫(yī)藥治療艾滋病臨床技術(shù)方案(試行)及臨床實(shí)際情況，從癥狀體征、免疫學(xué)、病毒學(xué)方面進(jìn)行評(píng)定。
5.1.1癥狀體征改善情況以病人的自覺(jué)感覺(jué)及醫(yī)生觀察記錄為準(zhǔn)，分為癥狀體征消失、明顯改善、改善、無(wú)改善四等級(jí)。
5.1.2免疫功能判定標(biāo)準(zhǔn)(CD4絕對(duì)數(shù))有效CD4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)升高≥30％；無(wú)效CD4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)升高＜30％或下降者。
5.1.3病毒載量判定標(biāo)準(zhǔn)有效病毒載量降低≥0.5log/ml；無(wú)效病毒載量降低＜0.5log/ml或升高者。
5.2療效
5.2.1癥狀體征改善情況 癥狀體征消失20例，明顯改善16例，改善2例，無(wú)改善0例；5.2.2免疫功能(CD4絕對(duì)數(shù))有效28例，無(wú)效10例。有效率73.68％；5.2.3病毒載量有效19，無(wú)效19。有效率50％；治療前后病毒載量的變化均具有非常顯著性差異。見表2。
表1病人治療前后CD4細(xì)胞數(shù)的變化(
/mm3)
表2病人治療前后病毒載量的變化(
×103copies/ml)
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1取牛蒡子9g，黃芩9g，桑白皮12g，仙鶴草12g，千里光12g，地膚子12g，人參6g，黃芪20g、天花粉12g、紫花地丁10g、甘草12g。以上藥物混合水煎，濃縮，制成顆粒劑，每日2-3次，每次10g，口服。
實(shí)施例2取牛蒡子3g，黃芩3g，桑白皮5g，仙鶴草9g，千里光9g，地膚子9g，人參2g，黃芪15g、天花粉9g，紫花地丁8g、甘草9g。以上藥物混合水煎，濃縮，制成膠囊，每日2-3次，每次6-8粒，口服。
實(shí)施例3取牛蒡子6g，黃芩6g，桑白皮9g，仙鶴草9g，千里光9g，地膚子9g，人參6g，黃芪19g、天花粉6g，紫花地丁12g，甘草6g。以上藥物混合水煎，每日1劑，每日2-3次，口服。
實(shí)施例4按實(shí)施例1制備的本發(fā)明的藥物(以下簡(jiǎn)稱艾乃吉1號(hào))主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)資料我們對(duì)的艾乃吉1號(hào)主要藥效學(xué)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下1對(duì)免疫功能恢復(fù)的實(shí)驗(yàn)1.1實(shí)驗(yàn)材料動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，SPF動(dòng)物(無(wú)特定病原動(dòng)物)，體重18-20克，年齡3.5-4周歲。(購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品鑒定所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證編號(hào)SCXK(京)2005-0004)。
藥物①艾乃吉1號(hào)(由牛蒡子、黃芩、桑白皮、人參等十幾味中藥組成，山東省醫(yī)藥工業(yè)研究所中藥室提供，性狀為粉劑)。②貞芪扶正顆粒(吉林通化神源藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)國(guó)藥準(zhǔn)字Z22022497，產(chǎn)品批號(hào)040306 005，有效期至2006年2月)試劑①抗小鼠CD3、CD4、CD8單克隆熒光抗體(美國(guó)eB公司生產(chǎn)，深圳達(dá)科為生物技術(shù)有限公司經(jīng)銷)。②環(huán)孢酶素(瑞士諾華大藥廠，產(chǎn)品批號(hào)S001，有效期至2008年9月)。
儀器Couter EPI CS XL型流式細(xì)胞儀(美國(guó)庫(kù)爾特公司生產(chǎn))。
1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1動(dòng)物分組 取120只實(shí)驗(yàn)小鼠，隨機(jī)分為6組，即正常對(duì)照組、模型組、艾乃吉1號(hào)觀察組(低、中、高劑量共3組)、陽(yáng)性藥對(duì)照組，每組20只。其中，艾乃吉1號(hào)觀察組根據(jù)成人用藥量(20g藥/60kg體重)，分別設(shè)立為成人每公斤體重用藥量的5倍、10倍、20倍三個(gè)實(shí)驗(yàn)觀察組；陽(yáng)性藥對(duì)照組以成人每公斤體重(30g/60kg)的10倍量為貞芪扶正顆粒用藥量。
1.2.2造模與給藥 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在二級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SYXK(京)2005-0024，有效期至2010年7月29日)內(nèi)飼養(yǎng)3d后，給小鼠腹腔注射環(huán)孢酶素(正常對(duì)照組除外)建立免疫抑制模型小鼠，隔日注射一次，共注射3次。于第三次注射后次日開始灌胃給藥。每次0.5ml，日一次，連續(xù)灌胃兩周。正常對(duì)照組與模型組小鼠同時(shí)灌胃0.5毫升蒸餾水。
1.2.3外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè) 給藥兩周后眼眶取血，用肝素抗凝，按照試劑使用說(shuō)明取0.1ml抗凝血與抗小鼠單克隆熒光抗體孵育結(jié)合后在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1.免疫抑制小鼠CD3T細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果(％)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2.免疫抑制小鼠CD4T細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果(％)
*與正常對(duì)照比較P＜0.01**與模型組比較P＜0.05***與模型組比較P＞0.05****與模型組比較P＜0.01
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。
表3.免疫抑制小鼠CD4/CD8比值結(jié)果
*與正常對(duì)照比較P＜0.05**與模型組比較P＞0.05結(jié)果表明艾乃吉1號(hào)對(duì)提高免疫抑制小鼠CD3T細(xì)胞百分率和CD4T細(xì)胞百分率有一定作用，其中低劑量組(5倍用藥組)與模型組比較CD4T細(xì)胞百分率的提高較為明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；CD4/CD8比值各組間百分率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
2體外抗HIV活性檢測(cè)2.1實(shí)驗(yàn)材料藥物與試劑①艾乃吉1號(hào)；②陽(yáng)性對(duì)照藥疊氮胸苷(AZT)，購(gòu)自SIGMA公司；③四甲基偶氮唑鹽(MTT)，購(gòu)自SIGMA公司。使用時(shí)用PBS配制成5mg/ml的溶液，0.22μm膜過(guò)濾；④二甲基亞砜(DMSO)，購(gòu)自SIGMA公司；人免疫缺陷病毒HIV-1 IIIB株，由美國(guó)引進(jìn)。
VironostikaHIV-1 Antigen Microelisa System試劑盒。
MT-4細(xì)胞，傳代人T淋巴細(xì)胞系。
RPMI1640+10％胎牛血清細(xì)胞培養(yǎng)液。
96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。
ZS-2板式酶標(biāo)儀(北京市新風(fēng)機(jī)電技術(shù)公司)。
CO2孵箱。
以上由中國(guó)人民解放軍艾滋病檢測(cè)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室提供。
2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1 CPE法測(cè)定病毒對(duì)細(xì)胞的感染性滴度(TCID50) 將MT-4細(xì)胞接種于96孔板，每孔100μl，細(xì)胞濃度為2.5×104個(gè)/ml(終濃度)，將病毒原液用培養(yǎng)液依次10倍稀釋共8個(gè)濃度加至細(xì)胞孔內(nèi)，每濃度4孔，37℃，5％CO2溫箱培養(yǎng)。每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞病變(CPE)。細(xì)胞病變?cè)?5％以下為+，26～50％病變?yōu)?+，51～75％病變?yōu)?++，76～100％病變?yōu)?+++。記錄細(xì)胞病變程度(CPE)。用Reed-Muench法計(jì)算病毒的感染性滴度(TCID50)。
2.2.2 MTT法測(cè)定送檢藥物對(duì)MT-4細(xì)胞的半數(shù)毒性濃度(TC50) 將MT-4細(xì)胞接種于96孔板，每孔100μl，細(xì)胞濃度為2.5×104個(gè)/ml(終濃度)。分別加入5000、2500、1250、625、312.5、156.2、78.12、39.06μg/ml受試藥物100μl，每濃度4孔；陽(yáng)性對(duì)照藥AZT的濃度分別為400、200、100、50、25、12.25、6.125、3.0625μM，每孔100μl，每濃度4孔，培養(yǎng)3d后加5mg/ml MTT染色4h，吸棄上清加DMS0100μl溶解約0.5h，用酶聯(lián)檢測(cè)儀測(cè)定OD570nm吸收值，Reed-Muench法計(jì)算TC50。
2.2.3 CPE法測(cè)定送檢藥物的抗病毒活性 將MT-4細(xì)胞接種于96孔板，每孔50μl，細(xì)胞濃度為2.5×104個(gè)/ml(終濃度)。在不同的孔中分別加入1250、625、312.5、156.2、78.12、39.06μg/ml的受試藥物50μl，然后每孔加100μlHIV-1病毒(100TCID50)。設(shè)陽(yáng)性對(duì)照(細(xì)胞+AZT+病毒)、病毒對(duì)照(細(xì)胞+病毒+培養(yǎng)液)、細(xì)胞對(duì)照(細(xì)胞+培養(yǎng)液)、藥物對(duì)照(藥物+細(xì)胞+培養(yǎng)液)。當(dāng)病毒對(duì)照孔細(xì)胞病變?yōu)?+++時(shí)，記錄細(xì)胞病變結(jié)果(細(xì)胞病變?cè)?5％以下為+，26～50％病變?yōu)?+，51～75％病變?yōu)?++，76～100％病變?yōu)?+++，正常細(xì)胞為-)。試驗(yàn)重復(fù)3次。用Reed-Muench法計(jì)算藥物對(duì)病毒的半數(shù)抑制濃度IC50。
2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.3.1 HIV-1 IIIB株對(duì)MT-4細(xì)胞的TCID50為10-5。
2.3.2 藥物對(duì)MT-4細(xì)胞半數(shù)毒性濃度(TC50) 送檢藥物的最大無(wú)毒濃度為312.5μg/ml，在此濃度下細(xì)胞形態(tài)與對(duì)照細(xì)胞相同。計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的半數(shù)毒性濃度TC50為774μg/ml；陽(yáng)性對(duì)照藥物AZT對(duì)細(xì)胞半數(shù)毒性濃度TC50為49.22μM。
2.3.3藥物的抗病毒活性測(cè)定 送檢藥物對(duì)HIV-1 IIIB株的IC50值為298μg/ml，治療指數(shù)TI是2.6；陽(yáng)性對(duì)照藥物AZT對(duì)HIV-1 IIIB株IC50值1.96nM，治療指數(shù)TI是25112。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。
表4受試藥物抗HIV-1的效果
注TI(Therapeutic Index，治療指數(shù))＝TC50/IC50結(jié)果表明，在MT-4細(xì)胞/HIV-1IIIB和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，艾乃吉1號(hào)抑制病毒復(fù)制的治療指數(shù)為2.6，有一定的體外抑制HIV作用。
實(shí)施例5 艾乃吉1號(hào)動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)研究(最大給藥量試驗(yàn))1.動(dòng)物昆明種小鼠，體重18-22g，雌雄各半，由山東魯抗醫(yī)藥集團(tuán)有限公司提供，許可證號(hào)S CXK(魯)20030006號(hào)。飼養(yǎng)條件用小鼠塑料籠飼養(yǎng)，雌、雄分養(yǎng)，每籠5只，自由飲食，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在18～24℃，通風(fēng)良好，濕度40-70％，正常飼養(yǎng)三天后供試。
2.受試物艾乃吉1號(hào)由山東泰坤中醫(yī)藥研究開發(fā)有限公司提供，批號(hào)040907208。用時(shí)以0.5％羧甲基纖維素鈉配制成最大濃度0.6g/ml。
3.主要試劑羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，白色粉末，由北京華博源科技開發(fā)中心提供，批號(hào)980305，用于溶解藥物時(shí)濃度為0.5％。
方法昆明種小鼠40只，體重18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分成2組，給藥組20只，對(duì)照組20只。給藥體積為0.4ml/10g，對(duì)照組給予同容量0.5％羧甲基纖維素鈉，禁食12小時(shí)后于次日早晚各1次口服灌胃給藥。給藥后觀察動(dòng)物反應(yīng)及死亡情況，每日1次，連續(xù)觀察14天。記錄藥前及3、7、14天動(dòng)物體重及每日毒性反應(yīng)癥狀和死亡動(dòng)物分布，并對(duì)死亡及觀察結(jié)束小鼠進(jìn)行尸檢，肉眼觀察記錄病變情況。
結(jié)果小鼠于第一次給藥后未見明顯異常，第二次給藥后活動(dòng)次數(shù)減少，后漸恢復(fù)。次日觀察肛周有藥物排泄，未見其他明顯異常。
藥后14天內(nèi)未見動(dòng)物死亡。給藥組藥后3、7、14天體重增長(zhǎng)與對(duì)照組比較，基本一致，結(jié)果見表1。
表1.艾乃吉1號(hào)給藥對(duì)小鼠體重(g)的影響。
N＝10，P＞0.05 vs Veh.
試驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物剖檢，心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、腸等主要臟器未見明顯異常。
結(jié)論艾乃吉1號(hào)以最大給藥濃度和最大體積，一日兩次口服給予小鼠48g/kg，第二次給藥后可見小鼠活動(dòng)次數(shù)減少，后漸恢復(fù)。次日觀察肛周有藥物排泄，未見其他明顯異常。14日內(nèi)未見動(dòng)物死亡，動(dòng)物體重增長(zhǎng)正常。
艾乃吉1號(hào)的小鼠最大給藥量為48g/kg。
權(quán)利要求
1.一種艾滋病的中藥制劑，其特征在于是由以下重量份數(shù)的原料制成牛蒡子3-9g 黃芩3-9g 桑白皮6-12g 仙鶴草6-12g千里光6-12g 地膚子6-12g人參2-6g 黃芪10-25g天花粉6-12g 紫花地丁6-12g 甘草6-12g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療艾滋病的中藥制劑，其特征在于所述中藥制劑為水煎劑、顆粒劑、膠囊、片劑或其它可藥學(xué)的劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥，特別公開了一種治療艾滋病的中藥制劑。該治療艾滋病的中藥制劑，其特殊之處在于是由以下重量份數(shù)的原料制成牛蒡子3－9g、黃芩3－9g、桑白皮6－12g、仙鶴草6－12g、千里光6－12g、地膚子6－12g、人參2－6g、黃芪10－25g、天花粉6－12g、紫花地丁6－12g、甘草6－12g。本發(fā)明具有安全可靠、療效顯著、副作用小的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K9/16GK101085113SQ20071001665
公開日2007年12月12日 申請(qǐng)日期2007年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月3日
發(fā)明者王小平, 蔡蕊 申請(qǐng)人:山東泰坤中醫(yī)藥有限公司