專利名稱：重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)，特別是一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳。
背景技術(shù)：
重組人粒細(xì)胞集落刺激因子是由DNA重組技術(shù)產(chǎn)生的人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)，與天然的粒細(xì)胞集落刺激因子的氨基酸序列和糖鏈完全相同，不同的是重組人粒細(xì)胞集落刺激因子鏈的N端含有蛋氨酸。本品可與靶細(xì)胞膜受體結(jié)合而起作用。粒細(xì)胞集落刺激因子是調(diào)節(jié)骨髓中粒系造血的主要細(xì)胞因子之一，主要刺激粒細(xì)胞系造血，也可使多能造血干細(xì)胞進入細(xì)胞周期；促進髓系造血祖細(xì)胞的增殖、分化和成熟，調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞系細(xì)胞的增殖與分化成熟；并驅(qū)使中性粒細(xì)胞釋至血流，使外周中性粒細(xì)胞數(shù)量增多，并提高其功能，吞噬活性，針對腫瘤細(xì)胞的抗體依賴細(xì)胞細(xì)胞毒活性等。
重組人粒細(xì)胞集落刺激因子適用于癌癥化療等原因?qū)е碌闹行粤＜?xì)胞減少癥。癌癥患者使用骨髓抑制性化療藥物，特別是在強烈的、骨髓剝奪性化學(xué)藥物治療后、注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子有助于預(yù)防中性粒細(xì)胞減少癥的發(fā)生，減輕中性粒細(xì)胞減少的程度，縮短粒細(xì)胞缺乏癥的持續(xù)時間，加速粒細(xì)胞數(shù)的恢復(fù)，提升白細(xì)胞數(shù)量，從而降低合并感染發(fā)熱的危險。重組人粒細(xì)胞集落刺激因子對慢性粒細(xì)胞缺乏癥病人如骨髓異常增生綜合征、周期性中性粒細(xì)胞缺乏癥和再生障礙性貧血等療效非常明顯。
此外，重組人粒細(xì)胞集落刺激因子還可以(1)促進骨髓移植后中性粒細(xì)胞的恢復(fù)。(2)治療伴隨骨髓異常增生綜合征之中性粒細(xì)胞減少癥。(3)治療伴隨再生不良性貧血之中性粒細(xì)胞減少。(4)治療先天性、特發(fā)性中性粒細(xì)胞減少癥。
在現(xiàn)有技術(shù)中，重組人粒細(xì)胞集落刺激因子主要通過皮下注射或靜脈注射的方式給藥，這對于需要用藥的患者極為不方便，同時注射給藥給需要長期用藥的患者帶來很多的痛苦，使得臨床用藥的依從性降低?？诜o藥雖然可以有效解決上述問題，但重組人粒細(xì)胞集落刺激因子在胃液中遭到十分嚴(yán)重的破壞，也就是說，重組人粒細(xì)胞集落刺激因子口服無效。由于受藥物穩(wěn)定性和理化性質(zhì)特點的限制，對于重組人粒細(xì)胞集落刺激因子還沒有合適的制劑形式便于臨床使用，現(xiàn)在還無法有效解決重組人粒細(xì)胞集落刺激因子給藥方式的問題。
微乳制劑可以在很大程度上改善很多藥物的生物利用度，但這種制劑形式對藥物的理化性質(zhì)和穩(wěn)定性有著很高的要求，制備工藝也相當(dāng)復(fù)雜，在制藥工業(yè)的產(chǎn)業(yè)化上有很多的困難。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳，它可以通過鼻腔途徑噴霧給藥。通過鼻腔給藥的方式既可避免口服給藥后，重組人粒細(xì)胞集落刺激因子在胃液中的破壞，大大提高了生物利用度，又避免了皮下或靜脈注射給患者帶來的不便和痛苦，同時由于本發(fā)明將重組人粒細(xì)胞集落刺激因子制備成為微乳制劑，使得鼻腔噴霧給藥途徑對鼻粘膜的刺激性損傷可以忽略不計，通過獼猴的生物利用度實驗，驚奇地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明做到了與注射給藥途徑相比，在生物利用度上無顯著差異。
本發(fā)明的重量組成包括重組人粒細(xì)胞集落刺激因子----------1份表面活性劑------------------------1-5份助表面活性劑----------------------0.5-3份油相------------------------------1-3份水相------------------------------500-2000份所述的表面活性劑是指聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油、十二烷基硫酸鈉、十八烷基硫酸鈉、十六烷基硫酸鈉、卵磷脂、單硬脂酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、脫水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯或泊洛沙姆中的一種或一種以上。
所述的助表面活性劑是指無水乙醇、聚乙二醇200、丙二醇或甘油中的一種或一種以上。
所述的油相是指亞油酸甘油酯、二乙二醇單乙醚、玉米油、大豆油、花生油、葵花籽油、棉籽油、芝麻油或橄欖油中的一種或一種以上。
所述的水相是指水、果汁、生理鹽水或葡萄糖溶液中的一種或一種以上。
本發(fā)明的制備工藝為稱取處方量重組人粒細(xì)胞集落刺激因子，加入處方量的油相中，攪拌使溶解，再加入處方量的表面活性劑、助表面活性劑，攪拌均勻，在水相中分散后即得微乳。
本發(fā)明重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳與重組人粒細(xì)胞集落刺激因子注射劑相比較，由于本劑型制備成氣霧劑經(jīng)鼻腔給藥，使得藥物可以迅速吸收進入人體循環(huán)，既保持較高的生物利用度，避免口服給藥發(fā)生的“首過效應(yīng)”，又避免了皮下或靜脈注射帶來的不便和痛苦。因此，開發(fā)研制本品必將取得廣泛的社會效益和經(jīng)濟效益。
具體實施例方式現(xiàn)通過以下實例進一步來說明本發(fā)明，但本發(fā)明申請的范圍并不僅僅限于以下實施例。
實施例
七種具體處方如下(確定微乳制劑的輔料種類和數(shù)量)處方A重組人粒細(xì)胞集落刺激因子1.0g無水乙醇1.0g丙二醇 0.5g聚氧乙烯氫化蓖麻油 4.0g亞油酸甘油酯2.5g水 1000ml制成1000ml微乳制備工藝稱取1.0g rhG-CSF，加入到2.5g的亞油酸甘油酯中，攪拌使溶解，再加入聚氧乙烯氫化蓖麻油4.0g、無水乙醇1.0g，丙二醇0.5g，攪拌均勻，在1000ml水中分散后即得微乳。
處方B重組人粒細(xì)胞集落刺激因子1.0g無水乙醇1.0g聚乙二醇200 0.5g脫水山梨醇脂肪酸酯 2.0g橄欖油 2.5g水 1000ml制成1000ml微乳制備工藝同處方A。
處方C重組人粒細(xì)胞集落刺激因子1.0g無水乙醇1.0g丙二醇 1.0g卵磷脂 3.0g玉米油 2.5g
果汁1000ml制成1000ml微乳制備工藝同處方A。
處方D重組人粒細(xì)胞集落刺激因子1.0g聚乙二醇200 1.0g丙二醇 1.0g泊洛沙姆3.0g二乙二醇單乙醚 3.0g水 1000ml制成1000ml微乳制備工藝同處方A。
處方E重組人粒細(xì)胞集落刺激因子1.0g無水乙醇2.0g聚氧乙烯氫化蓖麻油 4.0g亞油酸甘油酯2.5g水 1000ml制成1000ml微乳制備工藝同處方A。
處方F重組人粒細(xì)胞集落刺激因子1.0g聚乙二醇200 1.0g丙二醇 1.0g聚氧乙烯氫化蓖麻油 4.0g
亞油酸甘油酯2.5g水 500ml制成500ml微乳制備工藝同處方A。
處方G重組人粒細(xì)胞集落刺激因子1.0g無水乙醇1.0g丙二醇 0.5g聚氧乙烯氫化蓖麻油 3.0g二乙二醇單乙醚 3.0g水 1000ml制成1000ml微乳制備工藝同處方A。
應(yīng)用實例本發(fā)明的動物體內(nèi)藥物代謝動力學(xué)實驗方法如下取6只健康成年獼猴，隨機分成2組，每組3只。第一次試驗，第一組于大腿內(nèi)側(cè)皮下注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子，劑量為150μg/kg，給藥體積0.15ml/kg；第二組動物鼻腔噴霧給藥重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳(按照實施例處方A制備)，劑量為150μg/kg。四周清洗后進行第二次試驗，交叉給藥，即第一組鼻腔噴霧給藥，第二組皮下注射給藥，劑量和給藥體積同前。受試動物于給藥后1、2、4、6、8、10、12、15、24、36、48以及72h從前肢肘靜脈采血，血液在室溫放置30min后，于4000rpm離心10min，分離出血清，-20℃保存。
用ELISA法測定6只健康獼猴交叉皮下注射和鼻腔噴霧給藥后不同時間的血清藥物濃度，實驗數(shù)據(jù)用3P97藥代計算程序進行數(shù)據(jù)處理，經(jīng)擬和優(yōu)度比較，所測定的數(shù)據(jù)符合一室消除模型，得到的藥動參數(shù)為皮下注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子和鼻腔噴霧重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳的平均達峰時間Tmax分別為11.1±1.9h和10.3±1.7h；平均峰濃度Cmax分別為2510±673ng/ml和2430±512ng/ml；平均清除半衰期t1/2ke分別為24.5±3.2h和24.1±2.9h；平均清除率CL分別為3.6±0.8ml/kg/h和2.9±0.8ml/kg/h；平均藥時曲線下面積AUC(0-72h)分別為74926±19852h.ng/ml和69084±25630h.ng/ml；平均殘留時間MRT分別為31.0±2.7h和30.9±2.5h。按照0-72h計算，鼻腔噴霧重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳對皮下注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子的相對生物利用度為92.20±25.61％。經(jīng)過雙側(cè)t檢驗，結(jié)果顯示，鼻腔噴霧重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳對皮下注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子的主要藥動學(xué)參數(shù)(尤其生物利用度)間無顯著性差異，表明兩種給藥的藥代動力學(xué)行為基本一致。平均血藥濃度-時間曲線見說明書附圖
。
權(quán)利要求
1.一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳，其特征在于其重量組成包括重組人粒細(xì)胞集落刺激因子-----------1份表面活性劑-------------------------1-5份助表面活性劑-----------------------0.5-3份油相-------------------------------1-3份水相-------------------------------500-2000份所述的表面活性劑是聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油、十二烷基硫酸鈉、十八烷基硫酸鈉、十六烷基硫酸鈉、卵磷脂、單硬脂酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、脫水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯或泊洛沙姆中的一種或一種以上。所述的助表面活性劑是指無水乙醇、聚乙二醇200、丙二醇或甘油中的一種或一種以上。所述的油相是指亞油酸甘油酯、二乙二醇單乙醚、玉米油、大豆油、花生油、葵花籽油、棉籽油、芝麻油或橄欖油中的一種或一種以上。所述的水相是指水、果汁、生理鹽水或葡萄糖溶液中的一種或一種以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳，其特征在于其重量組成包括重組人粒細(xì)胞集落刺激因子-----------1份聚氧乙烯氫化蓖麻油-----------------1-5份無水乙醇---------------------------0.5-2份丙二醇-----------------------------0-1份亞油酸甘油酯-----------------------1-3份水---------------------------------500-2000份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳，其特征在于其重量組成包括重組人粒細(xì)胞集落刺激因子-----------1份脫水山梨醇脂肪酸酯-----------------1-3份無水乙醇---------------------------0.5-2份聚乙二醇200------------------------0-1份橄欖油-----------------------------1-3份水---------------------------------500-2000份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳，其特征在于其重量組成包括重組人粒細(xì)胞集落刺激因子-----------1份卵磷脂-----------------------------1-5份無水乙醇---------------------------0.5-2份丙二醇-----------------------------0-1份玉米油-----------------------------1-3份果汁-------------------------------500-2000份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳，其特征在于其重量組成包括重組人粒細(xì)胞集落刺激因子-----------1份泊洛沙姆---------------------------5份聚乙二醇200------------------------0.5-2份丙二醇-----------------------------0-1份二乙二醇單乙醚---------------------1-3份水---------------------------------500-2000份。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)，特別是一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳。它由重組人粒細(xì)胞集落刺激因子、表面活性劑、助表面活性劑、油相、水相組成，它們的重量比為1∶(1－5)∶(0.5－3)∶(1－3)∶(500－2000)。制備工藝為將處方量重組人粒細(xì)胞集落刺激因子，加入處方量的油相中，攪拌使溶解，再加入處方量的表面活性劑、助表面活性劑，攪拌均勻，在水相中分散后即得微乳。重組人粒細(xì)胞集落刺激因子適用于癌癥放療、化療等導(dǎo)致的中性粒細(xì)胞減少癥。本發(fā)明提供一種重組人粒細(xì)胞集落刺激因子微乳，制備成氣霧劑經(jīng)鼻腔給藥，既可保持與注射給藥等效的生物利用度，又避免了皮下或靜脈注射帶來的不便和痛苦。
文檔編號A61P35/00GK101062406SQ20071001464
公開日2007年10月31日 申請日期2007年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月17日
發(fā)明者孫勇, 徐麗灑, 徐平, 沈若武, 劉占濤 申請人:青島大學(xué)