減少非毒素蛋白質(zhì)的肉毒桿菌毒素組合物和其局部施用及透皮遞送方法

專利名稱：減少非毒素蛋白質(zhì)的肉毒桿菌毒素組合物和其局部施用及透皮遞送方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的肉毒桿菌毒素組合物，其可以局部施用用于多種 治療、美學(xué)和/或化妝目的，并且其具有比現(xiàn)有皮下注射包含肉毒桿菌 毒素的組合物改善的安全特征。
背景技術(shù)：
皮膚保護(hù)身體器官免受外部環(huán)境的威脅，并起保持體溫的恒溫器 作用。其由幾個(gè)不同層組成，每層都具有特定的功能。主要的層包括 表皮、真皮和皮下組織。表皮是覆蓋真皮的上皮細(xì)胞的分化層，其由 結(jié)締組織組成。表皮和真皮都受皮下組織的進(jìn)一步支持，皮下組織是 脂肪組織的內(nèi)層。
表皮，皮膚的最上層，僅僅為0. 1至1. 5毫米厚(Inlander, Skin, New York, NY: People's Medical Society, 1-7 (1998))。其由角質(zhì) 形成細(xì)胞組成，根據(jù)它們的的分化狀態(tài)，其被分成幾層?？梢赃M(jìn)一步 將表皮分成角質(zhì)層和有活力的表皮，該有活力的表皮由granular melphigian和基細(xì)胞組成。角質(zhì)層是吸濕性的，需要至少10%重量的 水分以保持其彈性和柔軟性。吸濕性部分歸于角蛋白的持水能力。當(dāng) 角質(zhì)層喪失其柔軟性和彈性時(shí)，其變得粗糙且脆，產(chǎn)生干燥皮膚。
真皮，其位于表皮之下，為1.5至4亳米厚。其是皮膚的三層中 最厚的。另外，真皮也是皮膚結(jié)構(gòu)的主要部分，包括汗腺和脂腺(其通 過皮膚中稱為氣孔或痤瘡的孔分泌物質(zhì))、毛嚢、神經(jīng)末梢和血管或及 淋巴管(Inlander, Skin, New York, NY: People's Medical Society, 1-7 (1998))。然而，真皮的主要組分是膠原和彈性蛋白。
皮下組織是皮膚的最深層。其起用于身體熱量保存的絕緣體和用
于器官保護(hù)的減震器作用(Inlander, Skin, New York, NY: People's Medical Society, 1-7 (1998))。另外，皮下組織也貯藏用于能源儲(chǔ) 備的脂肪。皮膚的pH通常為5至6之間。該酸性是由于存在來自于皮 脂腺分泌物的兩性氨基酸、乳酸和脂肪酸。術(shù)語"酸外膜(acid mantle)"指在皮狹的大多數(shù)區(qū)域存在水溶性物質(zhì)。皮膚的緩沖能力部 分應(yīng)歸于儲(chǔ)存在皮膚角質(zhì)層中的這些分泌物。
皺紋，年齡的指示特征之一，可能是由于皮膚受環(huán)境損害而蓄積 的生物化學(xué)、組織學(xué)和生理學(xué)變化引起(BenedeUo， International Journal of Dermatology, 38: 641-655 (1999))。另外，存在可能引 起面部皺紋的皺褶、皺紋和皺痕(creases)的第二因子(Stegman等人， The Skin of the Aging Face Cosmetic Dermatological Surgery, 第 2版，St. Louis編著，M0: Mosby Year Book: 5-15 (1990))。這些 第二因子包括恒量重力、皮膚上經(jīng)常和恒量的位置壓力(例如，在睡眠 期間)牽拉和由于面部肌肉收縮引起的反復(fù)面部運(yùn)動(dòng)(Stegman等人.， The Skin of the Aging Face Cosmetic Dermatological Surgery, 第 2版,St. Louis編著，M0: Mosby Year Book: 5-15 (1990)),
為了可能緩和某些年齡體征，已經(jīng)使用了不同的技術(shù)。這些技術(shù) 從包含ct羥酸和視黃醇的面部增濕劑到外科手術(shù)方法和注射神經(jīng)毒 素。例如，在1986年，Jean和Alastair Carruthers， 一對(duì)由目艮整 形外科醫(yī)生和皮膚科醫(yī)生組成的夫妻組合，研究了一種使用A型肉毒 桿菌毒素治療眉間區(qū)域與運(yùn)動(dòng)相關(guān)的皺紋的方法(Schantz和Scott, In Lewis GE(Ed)Biomedical Aspects of Botulinum, New York: Academic Press, 143-150 (1981))。在1992年，Carruthers'使用A 型肉毒桿菌毒素來治療皺紋引起該方法最初^i^布(Schantz和Scott, In Lewis GE(Ed)Biomedical Aspects of Botulinum, New York: Academic Press, 143-150 (1981))。直到1994年，同一組合報(bào)道了 對(duì)于面部的其它運(yùn)動(dòng)相關(guān)的皺紋的經(jīng)驗(yàn)(Scott， Ophthalmol, 87: 1044-1049 (1980))。這依次引起誕生了使用A型肉毒桿菌毒素進(jìn)行化 妝處理的時(shí)代。
感興趣地，據(jù)說A型肉毒桿菌毒素是人類所知最致命的天然生物 劑。C. botulinum的芽胞可在土壤中找到，并可在不正確地殺菌和密 封的食物容器中生長。攝入該細(xì)菌可導(dǎo)致肉毒中毒，其可能是致命的。 肉毒桿菌毒素通過阻止突觸傳遞或釋放的乙酰膽堿穿過神經(jīng)肌接點(diǎn)而 導(dǎo)致產(chǎn)生肌肉麻痹，并且其被認(rèn)為也以其它方式起作用。其作用主要 是阻斷通常引起肌肉痙享或收縮的信號(hào)，導(dǎo)致麻痹。然而，已經(jīng)使用 肉毒桿菌毒素的肌肉-麻痹效應(yīng)用于治療功效。已經(jīng)使用控制給藥肉毒 桿菌毒素來提供肌肉麻痹以治療病癥，例如以骨骼肌活動(dòng)過度為特征 的神經(jīng)肌肉失調(diào)。已經(jīng)用肉毒桿菌毒素治療的病癥包括偏側(cè)面肌痙車、 成年人發(fā)病的痙攣性斜頸、肛裂、眼瞼痙攣、大腦性癱瘓、頸張力障 礙、偏頭痛、斜視、顳下頜關(guān)節(jié)障礙和各種類型的肌痛性痙卑和肌痙 攣。近來，在治療和化妝面部應(yīng)用中已經(jīng)利用肉毒桿菌毒素的肌肉-麻痹效應(yīng)，所述應(yīng)用比如治療皺紋、皺眉線(frown lines)及其它面部 肌肉痙攣或收縮的后果。
除了 A型肉毒桿菌毒素之外，存在七種其它的血清學(xué)不同形式的 肉毒桿菌毒素，其也由革蘭氏陽性菌肉毒桿菌產(chǎn)生。在這八種血清學(xué) 不同類型的肉毒桿菌毒素中，可引起麻痹的七種被稱為肉毒桿菌毒素 血清型A、 B、 C、 D、 E、 F和G。這些中的每種以用特定類型的抗體中 和為特征。肉毒桿菌毒素蛋白質(zhì)分子的分子量，對(duì)于所有七種這些活 性肉毒桿菌毒素血清型，為約150kD。不同血清型的肉毒桿菌毒素在 動(dòng)物種類方面不同，它們影響它們引起的麻痹的嚴(yán)重性和持續(xù)時(shí)間。 例如，已經(jīng)確定A型肉毒桿菌毒素的功效為B型肉毒桿菌毒素的500 倍以上，如通過在大鼠中產(chǎn)生的麻瘠速率來測定。另外，已經(jīng)確定B 型肉毒桿菌毒素在靈長類中以480 U/kg的劑量是無毒的，為A型靈長 類LD50的約12倍。由于肉毒桿菌毒素的分子尺寸和分子結(jié)構(gòu)，其不 能穿過角質(zhì)層和多層皮下組織。
當(dāng)由肉毒桿菌細(xì)菌釋放時(shí)，肉毒桿菌毒素為毒素復(fù)合物的組分， 所述毒素復(fù)合物包含約150kD的肉毒桿菌毒素蛋白質(zhì)分子和締合的非
毒素蛋白質(zhì)的組合。這些內(nèi)源性的非毒素蛋白質(zhì)被認(rèn)為包括血凝素蛋
白質(zhì)和非血凝素蛋白質(zhì)家族。所述非毒素蛋白質(zhì)被認(rèn)為穩(wěn)定毒素復(fù)合 物中的肉毒桿菌毒素分子和保護(hù)它防止變性，例如，當(dāng)毒素復(fù)合物被 攝取時(shí)被消化酸變性.因此，所述毒素復(fù)合物的非毒素蛋白質(zhì)保護(hù)肉 毒桿菌毒素的活性和增加全身穿透，特別是當(dāng)經(jīng)由胃腸道給藥所述毒 素復(fù)合物時(shí)。更特別地，人們相信某些非毒素蛋白質(zhì)特別地增加穿透 胃腸上皮細(xì)胞，而其它非毒素蛋白質(zhì)穩(wěn)定血液中的肉毒桿菌毒素分子。 另外，非毒素蛋白質(zhì)在毒素復(fù)合物中的存在典型地引起毒素復(fù)合物具 有比單純的肉毒桿菌毒素分子更大的分子量，所述單純的肉毒桿菌毒
素分子的分子量為約150kD,如之前指出的。例如，肉毒桿菌細(xì)菌可 以產(chǎn)生A型肉毒桿菌毒素復(fù)合物，其具有約900 kD、 500 kD或300 kD 的分子量。感興趣地，B型和C型肉毒桿菌毒素顯然產(chǎn)生僅為700 kD 或500 kD的復(fù)合物。D型肉毒桿菌毒素產(chǎn)生300 kD和500 kD兩種復(fù) 合物。E型和F型肉毒桿菌毒素產(chǎn)生僅僅為約300 kD的復(fù)合物。
為了向肉毒桿菌毒素提供另外的穩(wěn)定性，通常通過在制備期間將 毒素復(fù)合物與外源性穩(wěn)定劑(例如明膠、多糖或最常見的另外的白蛋白) 組合來穩(wěn)定它們。所述穩(wěn)定劑在不同的環(huán)境中起結(jié)合和穩(wěn)定毒素復(fù)合 物的作用，所述環(huán)境包括與制備、運(yùn)輸、貯藏和給藥相關(guān)的那些。
典型地，通過仔細(xì)地控制注射包含肉毒桿菌毒素復(fù)合物和白蛋白 的組合物向患者給藥肉毒桿菌毒素，但是存在與該方法相關(guān)的一些問 題。不僅注射有痛苦，而且，為了獲得期望的治療或化妝效果，它們 通常必須遞送足夠的毒素以在注射部位周圍建立大的皮下毒素槽 (wells)。甚至更糟的是，當(dāng)要處理的區(qū)域大時(shí)，可能需要多個(gè)注射。 而且，因?yàn)樽⑸涞亩舅貜?fù)合物包含非毒素蛋白質(zhì)和白蛋白，其穩(wěn)定該 肉毒桿菌毒素，且增加了所述毒素復(fù)合物的分子量，所以該毒素復(fù)合 物在體內(nèi)具有長半衰期，不易擴(kuò)散進(jìn)入組織，可能在患者中引起不想 要的抗原應(yīng)答。而且，因?yàn)樗龇嵌舅氐鞍踪|(zhì)和白蛋白穩(wěn)定血液中的 肉毒桿菌毒素，必須仔細(xì)地進(jìn)行注射，以便他們不會(huì)將大量毒素釋放 到患者的血流中，其可導(dǎo)致致命的全身中毒。因此，典型地必須精確 地通過深入了解人體解剖學(xué)的高度訓(xùn)練的醫(yī)學(xué)專業(yè)人員進(jìn)行注射。
鑒于前述討論的所有問題，高度需要提供一種給藥肉毒桿菌毒素 的方法，其無痛苦且需要比基于常規(guī)注射方法更少毒素。另外，如果 這樣的方法能降低肉毒桿菌毒素的抗原性和血液穩(wěn)定性，而增加肉毒 桿菌毒素復(fù)合物在體內(nèi)的擴(kuò)散速率，從而使得使用肉毒桿菌毒素進(jìn)行 各種治療、美學(xué)和/或化妝目的是安全的，則其是高度需要的.還將需 要提供一種為了獲得安全給藥毒素的給藥方法，其不會(huì)決定性地依賴 醫(yī)學(xué)專業(yè)人士精確地注射肉毒桿菌毒素。
發(fā)明概述
本發(fā)明提供一種解決上述問題的方法，其通過提供可以無痛苦且 容易地局部施用于上皮細(xì)胞的治療用肉毒桿菌毒素組合物來實(shí)現(xiàn)。與
常規(guī)市售的結(jié)合外源性白蛋白的肉毒桿菌毒素復(fù)合物(例如B0T0X⑧或 MY0BL0C )相比，在本發(fā)明的局部組合物中的肉毒桿菌毒素復(fù)合物具 有降低的抗原性、較低的血穩(wěn)定性、較好的安全特征和較高的穿過皮 膚上皮細(xì)胞的擴(kuò)散速率。另外，通過使用該組合物與本發(fā)明的相關(guān)方 法，獲得與常規(guī)基于注射的給藥方法相同的臨床結(jié)果需要更少的肉毒 桿菌毒素。
本發(fā)明的一個(gè)方面是認(rèn)識(shí)到從肉毒桿菌細(xì)菌獲得的肉毒桿菌毒素 復(fù)合物中的內(nèi)源性非毒素蛋白質(zhì)(即無毒的血凝素和非血凝素蛋白 質(zhì))，其不期望地增加所述毒素復(fù)合物的穩(wěn)定性和毒性，同時(shí)不期望地 降低所述毒素?cái)U(kuò)散穿過皮膚上皮細(xì)胞的能力。本發(fā)明進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到當(dāng) 在常規(guī)制備期間將外源性穩(wěn)定劑比如白蛋白結(jié)合到肉毒桿菌毒素時(shí)， 這些作用加強(qiáng)了。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是提供肉毒桿菌毒素復(fù)合 物，其中血凝素、非毒素非血凝素和/或外源性白蛋白的含量比常規(guī)市 售獲得的肉毒桿菌毒素(例如B0T0X⑧或MY0BL0C )選擇性和獨(dú)立地減 少了。
本發(fā)明的另 一個(gè)方面是認(rèn)識(shí)到可以將某些非天然分子(即，不能在 從肉毒桿菌細(xì)菌獲得的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中找到的分子)加入到肉 毒桿菌毒素復(fù)合物中，特別是減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中，以改善 肉毒桿菌毒素復(fù)合物擴(kuò)散穿過皮膚上皮細(xì)胞的能力。在一個(gè)特別優(yōu)選
的實(shí)施方案中，非天然的分子非共價(jià)地結(jié)合肉毒桿菌毒素復(fù)合物，并
且起親皮膚(skin-tropic)"粘附分子"的作用，其改善該毒素復(fù)合物 粘附和穿透皮膚上皮細(xì)胞的能力，并且進(jìn)一步降低肉毒桿菌毒素復(fù)合 物在血液中的穩(wěn)定性。例如，所述粘附分子可以是某些蛋白質(zhì)，比如 唾液蛋白。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于化妝或治療處理的組合 物，其包括肉毒桿菌毒素復(fù)合物(或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物)和靶 向皮膚的非天然粘附分子，所述粘附分子增加所述組合物的透皮滲透。 所述組合物任選地可包含加入的外源性穩(wěn)定劑，比如白蛋白。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種通過優(yōu)選地向需要這種治療的受試者或患 者的皮膚局部施用有效量的本發(fā)明之內(nèi)的組合物產(chǎn)生生物效應(yīng)的方 法。所述生物效應(yīng)可包括，例如肌肉麻痹、減少分泌過多或出汗、治 療神經(jīng)性疼痛或偏頭痛、減少肌肉痙卑、預(yù)防或減少痤瘡、減少或增 加免疫應(yīng)答、減少皺紋或預(yù)防或治療各種其他病癥。
本發(fā)明同時(shí)提供用于制備包含肉毒桿菌毒素復(fù)合物(或減少的肉 毒桿菌毒素復(fù)合物)和粘附分子的制劑或可依次用于產(chǎn)生這種制劑的 預(yù)混物的試劑盒。還提供包含用于向受試者順次給藥肉毒桿菌毒素復(fù) 合物(或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物)和粘附分子的手段的試劑盒。
發(fā)明詳述
本發(fā)明涉及包含肉毒桿菌毒素的新的組合物，更特別地，涉及能 轉(zhuǎn)運(yùn)或遞送肉毒桿菌毒素穿過皮膚上皮細(xì)胞(也稱為"透皮遞送")的 新組合物，其具有改善的皮膚粘附和滲透性、降低的抗原性和血液穩(wěn) 定性。如本文描述的，可以使用本發(fā)明的組合物，如局部施用向受試 者提供肉毒桿菌毒素用于各種治療、美學(xué)和/或化妝目的。本發(fā)明的組 合物還具有比其它肉毒桿菌毒素的組合物和遞送方法改善的安全特 征。而且，這些組合物可以獲得有益地減少對(duì)肉毒桿菌毒素的免疫應(yīng) 答。
如本文使用的術(shù)語"肉毒桿菌毒素"指任一種已知類型的肉毒桿
菌毒素(即，約150kD的肉毒桿菌毒素蛋白質(zhì)分子)，無論是由細(xì)菌生 成的還是通過重組體技術(shù)生成的，和可能隨后發(fā)現(xiàn)的任何這樣的類型， 包括新發(fā)現(xiàn)的血清型和設(shè)計(jì)的變異體或融合蛋白。如上所述，目前已 經(jīng)表征了七種免疫分離的肉毒桿菌神經(jīng)毒素，即肉毒桿菌神經(jīng)毒素血 清型A、 B、 C、 D、 E、 F和G,每種都以用特定類型的抗體中和為特征。 所述肉毒桿菌毒素血清型為市售獲得的，例如，售自 Sigma-Aldrich(St. Louis, M0)和Metabiologics， Inc. (Madison, Wisconsin)和其它來源。不同血清型的肉毒桿菌毒素在動(dòng)物種類方面 不同，它們影響它們引起的麻痹的嚴(yán)重性和持續(xù)時(shí)間。至少兩種肉毒 桿菌毒素，A型和B型，是以用于治療某些病癥的制劑市售獲得的。 例如，A型包含在具有trademark B0T0X⑧的Allergan制劑中和具有 商標(biāo)DYSPORT⑧的Ipsen制劑中，B型包含在具有商標(biāo)MYOBLOC⑧的Elan 制劑中。
在本發(fā)明的組合物中使用的術(shù)語"肉毒桿菌毒素"可以可選地指 肉毒桿菌毒素衍生物，即，具有肉毒桿菌毒素活性但包含相對(duì)于天然 存在的或重組體天然肉毒桿菌毒素在任何部分或任何鏈上有一個(gè)或多 個(gè)化學(xué)或功能改變的化合物。例如，所述肉毒桿菌毒素可以是修飾的 神經(jīng)毒素，即與天然的相比具有至少一個(gè)其氨基酸被刪除、修飾或替 換的神經(jīng)毒素，或者所述修飾的神經(jīng)毒素可以是重組生成的神經(jīng)毒素 或其衍生物或片段。例如，所述肉毒桿菌毒素可以是已經(jīng)以一種方式 修飾的一種，例如增加其性質(zhì)或減少不想要的副作用，但仍然保持期 望的肉毒桿菌毒素活性。所述肉毒桿菌毒素可以是由細(xì)菌生成的肉毒 桿菌毒素復(fù)合物的任一種，如上所述。可選地，本發(fā)明所用的肉毒桿 菌毒素可以是使用重組或合成化學(xué)技術(shù)制備的毒素，例如重組體肽、 融合蛋白、雜種神經(jīng)毒素，例如通過不同肉毒桿菌毒素血清型的亞基 或域制備的(例如，參見美國專利6,444,209)。所述肉毒桿菌毒素也 可以是整個(gè)分子的一部分，其已經(jīng)顯示出具有必需的肉毒桿菌毒素活 性，并且在這種情況下，可以本身使用或作為組合或軛合分子例如融 合蛋白的部分使用?？蛇x地，所述肉毒桿菌毒素可以是肉毒桿菌毒素
前體的形式，其本身可以是無毒的，例如無毒的鋅蛋白酶，當(dāng)在蛋白 酶剪切時(shí)其變成有毒的。
如本文使用的術(shù)語"肉毒桿菌毒素復(fù)合物"或"毒素復(fù)合物"指
約150 kD的肉毒桿菌毒素蛋白質(zhì)分子(屬于肉毒桿菌毒素血清型A-G 的任一種)與內(nèi)源性非毒素蛋白質(zhì)(即，由肉毒桿菌細(xì)菌生成的血凝素 蛋白質(zhì)和非毒素非血凝素蛋白質(zhì))的組合。然而，應(yīng)當(dāng)注意所述肉毒桿 菌毒素復(fù)合物不必來源于呈一種單一毒素復(fù)合物的肉毒桿菌細(xì)菌.例 如，可以首先重組制備肉毒桿菌毒素或修飾的肉毒桿菌毒素，然后將 其與非毒素蛋白質(zhì)混合。重組體肉毒桿菌毒素還可以是購買的(例如，
購自List Biological Laboratories, Campbell, CA),然后將其與
非毒素蛋白質(zhì)混合。
本發(fā)明還涉及"減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物"，其中所述肉毒桿 菌毒素復(fù)合物具有比在由肉毒桿菌細(xì)菌生成的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中 發(fā)現(xiàn)的天然數(shù)量相比減少量的非毒素蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，使 用任何常規(guī)蛋白質(zhì)分離方法以從來源于肉毒桿菌細(xì)菌的肉毒桿菌毒素 復(fù)合物中提取一部分血凝素蛋白質(zhì)或非毒素非血凝素蛋白質(zhì)來制備減 少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物。例如，減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物可以通 過將其暴露在pH 7. 3下的紅細(xì)胞分離肉毒桿菌毒素復(fù)合物產(chǎn)生(例如 參見EP 1514556 Al，在此將其引入作為參考)?？梢允褂肏PLC、透析、 柱、離心及其它方法來從蛋白質(zhì)中提取蛋白質(zhì)。可選地，當(dāng)通過混合 合成產(chǎn)生的肉毒桿菌毒素與非毒素蛋白質(zhì)產(chǎn)生減少的肉毒桿菌毒素復(fù) 合物時(shí)，人們可僅僅向該混合物中加入比天然存在的肉毒桿菌毒素復(fù) 合物更少的血凝素或非毒素非血凝素蛋白質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，可以獨(dú)立 地以任何量減少在減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中的任何非毒素蛋白質(zhì) (例如血凝素蛋白質(zhì)或非毒素非血凝素蛋白質(zhì)或兩種)。在某些示例性 的實(shí)施方案中， 一種或多種非毒素蛋白質(zhì)減少了相對(duì)于在肉毒桿菌毒 素復(fù)合物中通常發(fā)現(xiàn)量的至少約0. 5%、 1%、 3%、 5%、 10%、 20%、 30%、 40%、 50°/。、 60%、 70%、 80%或90%。肉毒桿菌細(xì)菌生成七種不同血清型 的毒素，市售制劑為用不同相對(duì)量的非毒素蛋白質(zhì)(即，不同量的毒素復(fù)合物)制備的。例如，Myobloc含有5000 U的B型肉毒桿菌毒素/ml 和0. 05%的人血清白蛋白、0. OIM丁二酸鈉和O. 1M氯化鈉。Dysport 含有500 U的A-型肉毒桿菌毒素血凝素復(fù)合物與125 mcg的白蛋白和 L4mg的乳糖.在一個(gè)特別感興趣的實(shí)施方案中，從所述肉毒桿菌毒 素復(fù)合物中除去了基本上所有通常在來源于肉毒梭狀芽胞桿菌細(xì)菌的 肉毒桿菌毒素復(fù)合物中發(fā)現(xiàn)的非毒素蛋白質(zhì)(例如>95%的血凝素蛋白 質(zhì)和非毒素非血凝素蛋白質(zhì))。而且，盡管在某些情況下可以以相同的 數(shù)量減少內(nèi)源性非毒素蛋白質(zhì)的量，本發(fā)明還涉及以不同的量減少每 種內(nèi)源性非毒素蛋白質(zhì)，和減少至少一種內(nèi)源性非毒素蛋白質(zhì)，但不 減少其它的。
除了 (或代替)減少使肉毒桿菌毒素復(fù)合物不穩(wěn)定的內(nèi)源性非毒素 蛋白質(zhì)的用量之外，本發(fā)明還涉及減少通常在制備期間加入的外源性 穩(wěn)定劑的用量。這種外源性穩(wěn)定劑的一個(gè)實(shí)例是白蛋白，其在制備肉 毒桿菌毒素復(fù)合物期間的通常加入量等于在天然存在的肉毒桿菌毒素 復(fù)合物中內(nèi)源性非毒素、非血凝素組分中發(fā)現(xiàn)的白蛋白含量的1000 倍。根據(jù)本發(fā)明，加入外源性白蛋白的用量可以是少于常規(guī)千倍過量 的外源性白蛋白的任何用量。在本發(fā)明的某些示例性的實(shí)施方案中， 加入在天然存在的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中僅僅約500x、 400x、 300x、 200x、 100x、 50x、 10x、 5x、 lx、 0. 5x、 0. lx或0. Olx用量的白蛋白。 在一個(gè)實(shí)施方案中，不向本發(fā)明的組合物加入作為穩(wěn)定劑的外源性白 蛋白。在其它實(shí)施方案中，將除了 (或代替)白蛋白之外的外源性穩(wěn)定 劑加入本發(fā)明的治療用局部組合物中。例如，本發(fā)明涉及的其它穩(wěn)定 劑包括乳糖、明膠和多糖。
根據(jù)本發(fā)明的"粘附分子"可以是具有至少下述性質(zhì)的蛋白質(zhì)或 其它分子(1)其不會(huì)在天然存在的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中發(fā)現(xiàn)(即"非 天然的")；(2)其起穩(wěn)定下述復(fù)合物的作用肉毒桿菌毒素復(fù)合物或 減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物，尤其是已經(jīng)與少量或沒有過量的外源性 白蛋白或其它穩(wěn)定劑混合的那些；和(3)當(dāng)與肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減 少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物混合時(shí)，其促進(jìn)肉毒桿菌毒素的透皮滲透，
能使所述毒素以足夠產(chǎn)生期望的治療或化妝作用的量給藥至肌肉和/ 或其它皮膚相關(guān)的結(jié)構(gòu)。 一般而言，如果可存在轉(zhuǎn)運(yùn)而沒有共價(jià)修飾 所述肉毒桿菌毒素，則其是優(yōu)選的。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，粘附 分子能夠結(jié)合特定的皮膚組分，其中非限制性的實(shí)例包括角質(zhì)形成細(xì) 胞、表皮細(xì)胞和毛嚢。例如，根據(jù)本發(fā)明的粘附分子可以是能結(jié)合下
述物質(zhì)的蛋白質(zhì)角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子、角質(zhì)形成細(xì)胞結(jié)合蛋白、 表皮生長因子(EGF)、 EGF樣蛋白質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子比如神經(jīng)生長因 子、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)營養(yǎng)因子-3和神經(jīng)營養(yǎng)因子-4/5.在 本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，所述治療用局部組合物包括多于一種不同 類型的非天然粘附分子。
在一個(gè)特別感興趣的實(shí)施方案中，所述非天然粘附分子為唾液蛋 白。不希望受任何特定的科學(xué)理論的束溥，人們相信唾液蛋白促進(jìn)肉 毒桿菌毒素的皮膚粘附和透皮滲透，同時(shí)增加肉毒桿菌毒素在皮膚和 體外的穩(wěn)定作用，和減少用于改善的安全特征的血液和系統(tǒng)活性。本 發(fā)明涉及的唾液蛋白的非限制性實(shí)例包括骨唾液蛋白I(也稱為BSPI、 骨唾液蛋白、骨橋蛋白、0PN、分泌的磷蛋白1、 Spp 1、早期T淋巴 細(xì)胞活化蛋白質(zhì)-l、 ETA-1、泌尿道結(jié)石蛋白質(zhì)、nephropontin)和骨 唾液蛋白II(也稱為BSPH、整聯(lián)蛋白結(jié)合唾液蛋白、細(xì)胞結(jié)合唾液蛋 白、BNSP)。唾液蛋白為市售獲得的，例如，售自Chemicon International?？梢允褂闷渌Y(jié)合和內(nèi)在化上皮細(xì)胞尤其是皮膚和膀 胱上皮細(xì)胞的粘附分子?？梢约尤胝掣椒肿拥募易灞热玮}粘素、整聯(lián) 蛋白、免疫球蛋白超家族、選擇素及其它跨膜唾液蛋白比如 podocalyxin。
一般而言，粘附分子在根據(jù)本發(fā)明的組合物中的濃度應(yīng)當(dāng)足夠使 肉毒毒素透皮遞送。而且，不希望受到理論的束縛，人們相信透皮轉(zhuǎn) 運(yùn)速率符合受體介導(dǎo)的動(dòng)力學(xué)，因此透皮轉(zhuǎn)運(yùn)隨粘附分子的增加量增 加，直至飽和點(diǎn)，此時(shí)，轉(zhuǎn)運(yùn)速率變成恒定值。因此，在一個(gè)優(yōu)選的 實(shí)施方案中，粘附分子的加入量等于恰在飽和前的最大化透皮滲透速 率的量。粘附分子在本發(fā)明的局部組合物中有用的濃度范圍為約0.1
ng至約1. 0 mg每單位如本文描述的肉毒桿菌毒素組合物。更優(yōu)選地， 所述粘附分子在本發(fā)明的局部組合物中的范圍為約0.1 mg至0. 5 mg 每單位的肉毒桿菌毒素。例如，在骨唾液蛋白I的情況下，其為本發(fā) 明涉及的唾液蛋白的一個(gè)實(shí)例，有用的范圍為約0.1 ng至約1.0 mg， 更優(yōu)選約0. 1 mg至約0. 5 mg。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選地為要用于需要特別地治療的受試者或患 者，即人類或其它哺乳動(dòng)物的皮膚或上皮的產(chǎn)品形式。術(shù)語"需要的" 是指包括藥物或健康相關(guān)的需要，例如治療包括不想要的面部肌肉痙 攣的病癥，及化妝和主觀需要，例如，改變或改善面部組織的形態(tài)。 通常，所述組合物是通過混合肉毒桿菌毒素(包含與非毒素蛋白質(zhì)的締 合或與減量非毒素蛋白質(zhì)的締合)與非天然粘附分子，和通常與一種或 多種附加藥學(xué)可接受的栽體或者賦形劑制備的。在它們的最簡單的形 式中，它們可包含單一的含水藥學(xué)可接受的栽體或稀釋劑，比如緩沖 鹽水。然而，所述組合物可包含典型地在局部藥用或化妝用組合物中 的其他成分，即，皮膚用或藥學(xué)可接受的栽體、賦形劑或介質(zhì)，即與 它們所要施用的組織相容的栽體、賦形劑或介質(zhì)。如本文使用的術(shù)語 "皮膚用或藥學(xué)可接受的"指如此描述的適于與這些組織接觸使用或 用于患者而沒有異常毒性、不相容性、不穩(wěn)定性、變態(tài)反應(yīng)等的組分 或成分。視情況而定，本發(fā)明的組合物可包括通常在本領(lǐng)域，特別是 在化妝和皮膚病學(xué)中考慮使用的任何成分。
根據(jù)它們的形式，本發(fā)明的組合物可包括溶液劑、乳劑(包括微乳 劑)、混懸液、乳骨劑、洗劑、凝膠劑、散劑或其它用于施用到皮膚及 其中可使用所述組合物的其它組織典型的固體或液體組合物。這樣的 組合物除了包含肉毒桿菌毒素和非天然粘附分子之外，可包含典型地 在這樣的產(chǎn)品中使用的其它成分，比如抗微生物劑、增濕劑和水化劑、 滲透劑、防腐劑、乳化劑、天然油或合成油、溶劑、表面活性劑、清 潔劑、膠凝劑、潤膚劑、抗氧劑、芳香劑、填充劑、增稠劑、蠟、去 味劑、染料、著色劑、散劑、粘度調(diào)節(jié)劑和水，且任選地包括麻醉藥、 抗癢活性劑、植物提取物、調(diào)節(jié)劑、染黑或發(fā)光劑、閃光劑(glitter)、濕潤劑、云母、礦物質(zhì)、多酚、硅酮或其衍生物、防曬劑(sunblocks)、 維生素和phytomedicinals。
根據(jù)本發(fā)明的組合物可以是控釋或緩釋組合物的形式，其中所述 肉毒桿菌毒素和非天然粘附分子被包囊或者將其包含在物質(zhì)內(nèi)，使得 它們以控制的方式隨著時(shí)間推移釋放在皮膚上?？梢詫⑺霭ㄈ舛?桿菌毒素和非天然粘附分子的組合物包含在基質(zhì)、脂質(zhì)體、小嚢、微 膠囊、微球等之內(nèi)，或者包含在固體顆粒物質(zhì)之內(nèi)，所有這些選擇和/ 或構(gòu)建的物質(zhì)能提供肉毒桿菌毒素釋放一段時(shí)間?？梢詫⑷舛緱U菌毒 素和非天然粘附分子包嚢在一起(例如，包囊在同一膠囊中)或者分別 包囊(在單獨(dú)的膠囊中)。
可以將肉毒桿菌毒素以能產(chǎn)生癱瘓、產(chǎn)生松弛、緩解收縮、預(yù)防 或緩解痙攣、減少腺排出或其它預(yù)期效果的有效量遞送至皮膚下的肌 肉或皮膚下腺結(jié)構(gòu)。相對(duì)于可注射的或可植入的物質(zhì)，用這種方式局 部遞送肉毒桿菌毒素可以獲得減少劑量、降低毒性和得到用于預(yù)期效 果的更精確的劑量最佳化。
施用本發(fā)明的組合物以便給藥有效量的肉毒桿菌毒素。如本文使 用的術(shù)語"有效量，，指如上定義的肉毒桿菌毒素的量，即足夠產(chǎn)生期 望的肌肉癱瘓或其它生物學(xué)或美學(xué)效應(yīng)，但無疑是安全量，即，能避 免嚴(yán)重副作用的足夠低的量。預(yù)期效果包括松弛某些肌肉，目的是例 如減少細(xì)紋線和/或皺紋的形態(tài)，特別是在臉上的，或者以其他方式調(diào) 整面部形態(tài)比如增寬眼睛、提升嘴角或使從上唇散開的平滑紋線或一 般性緩解肌緊張。上述提及的功效， 一般性緩解肌緊張可以在面部或 其它地方獲得。本發(fā)明的組合物可包含用于作為單一劑量治療應(yīng)用的 適當(dāng)有效量的肉毒桿菌毒素，或者可以是更濃縮的，用于在給藥部位 稀釋或者用于多種應(yīng)用。通過使用本發(fā)明的靶向皮膚的非天然粘附分 子，可以透皮給藥肉毒桿菌毒素至受試者以治療病癥比如不想要的面 部肌肉或其它肌痙攣、多汗、痤瘡或其中想要緩解肌肉疼痛或痙攣的 體內(nèi)其他地方的病癥。局部給藥肉毒桿菌毒素用于透皮遞送至肌肉或 其它皮膚相關(guān)結(jié)構(gòu)?？梢赃M(jìn)行給藥至例如腿、肩部、背部(包括腰部)、
腋下、掌心、足部、頸、腹股溝、手背或足背、肘、上肢、膝、大腿、 臀、軀干、骨盆或其中期望給藥肉毒桿菌毒素的身體的任何其它部分。
也可以進(jìn)行給藥肉毒桿菌毒素以治療其它的病癥，包括但不限于 治療神經(jīng)性疼痛、預(yù)防或減輕偏頭痛或其它的頭痛、預(yù)防或減輕痤瘡、 預(yù)防或減輕張力障礙或張力障礙收縮(無論是主觀的或臨床的)、預(yù)防 或減輕與主觀或臨床上的多汗相關(guān)的癥狀、減少分泌過多或出汗、減 少或增加免疫應(yīng)答、或治療其它已經(jīng)建議或執(zhí)行通過注射給藥肉毒桿 菌毒素的其它病癥。
最優(yōu)選地，由醫(yī)師或其它衛(wèi)生保健專業(yè)人員或在其指導(dǎo)下給藥所 述組合物。它們可以按單一的治療或在隨時(shí)間的一系列周期性治療給 藥。為了透皮遞送肉毒桿菌毒素用于上述的目的，局部施用如上所述 的組合物至其中期望該作用的部位的皮膚。因?yàn)槠湫再|(zhì)，應(yīng)當(dāng)以一定 的施用速率和施用頻率慎重地施用最優(yōu)選用量的所施用的肉毒桿菌毒 素，所述速率和頻率將產(chǎn)生期望的結(jié)果而不會(huì)引起任何不良的或不期
望的結(jié)果。因此，例如，本發(fā)明的局部組合物應(yīng)當(dāng)以如下速率施用 從約1 U至約20， 000 U，優(yōu)選從約1 U至約10， 000 U的肉毒桿菌毒 素/cm2的皮膚表面。例如，可以優(yōu)選地使用在這些范圍內(nèi)的較高劑量 與控釋物質(zhì)的組合，或使在除去之前在皮膚上停留時(shí)間較短的物質(zhì)。
本發(fā)明還包括用于遞送如上所述的包含肉毒桿菌毒素的組合物透 過皮膚的透皮遞送裝置。這樣的裝置可以是結(jié)構(gòu)簡單的如皮膚貼劑， 或者可以是更復(fù)雜的裝置，其包括用于配藥和監(jiān)測組合物配藥的工具， 和任選的用于從一個(gè)或多個(gè)方面監(jiān)測患者病癥包括監(jiān)測患者對(duì)正在配 藥的物質(zhì)的反應(yīng)的工具。
通常，所述組合物和這樣的裝置可以預(yù)制備或預(yù)安裝在所述裝置 中，或者可以更遲些制備，例如使用包含用于在施用時(shí)或在施用前混 合的兩種成分(肉毒桿菌毒素和非天然粘附分子)的試劑盒。非天然粘 附分子的含量或其與肉毒桿菌毒素的比例將取決于選擇在正討論的組 合物中使用的載體。在一個(gè)給定情況下，可以容易地確定載體分子的 適當(dāng)?shù)挠昧炕虮壤?，例如，通過進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)試驗(yàn)比如如下所述的
那些試驗(yàn)。
通常，本發(fā)明還涉及用于給藥肉毒桿菌毒素(優(yōu)選地如減少的肉毒 桿菌毒素復(fù)合物)至需要其的受試者或患者的方法，其中將有效量的肉 毒桿菌毒素與粘附分子一起局部給藥，如本文描述的。"一起"是指 在一個(gè)組合的步驟中給藥兩種組分(肉毒桿菌毒素和粘附分子)，其可 包括在局部給藥至受試者前混合它們或分別給藥它們，但是以一種使 得它們一起起效以提供必需遞送有效量的治療蛋白質(zhì)的方式。例如， 可以首先將包含粘附分子的組合物施用于受試者的皮膚，然后通過施 用皮膚貼劑或包含肉毒桿菌毒素的其它裝置。可以將所述肉毒桿菌毒 素以干燥形式加入皮膚貼劑中或其它配藥裝置中，并且可以在施用貼 劑之前將粘附分子施用于皮膚表面，以便兩種組分一起起作用，獲得 期望的透皮遞送。因此，在那種情況下，所述兩種物質(zhì)(粘附分子和肉 毒桿菌毒素)組合起作用或或許相互作用以形成組合物或原位組合。因 此，本發(fā)明還包括具有用于配藥肉毒桿菌毒素經(jīng)皮膚的裝置和液體劑、 凝膠、乳骨劑等的試劑盒，所述劑型包含粘附分子，并且適于應(yīng)用于 受試者的皮膚或上皮細(xì)胞。用于給藥本發(fā)明的組合物的試劑盒，在衛(wèi) 生保健專業(yè)人員的指導(dǎo)下給藥或由患者或受試者給藥，也可包括適于 那些目的的常規(guī)涂藥器。
本發(fā)明的組合物適用于具有pH為從約4.5至約6.3的生理環(huán)境 下，因此，其可具有這樣的pH。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以貯藏在室溫
下或者冷凍條件下。
應(yīng)當(dāng)理解本文描述的下述實(shí)施例和實(shí)施方案僅僅是用于闡述的目 的，根據(jù)其的各種改良和變化將由本領(lǐng)域技術(shù)人員提出，并且應(yīng)當(dāng)包 括在本申請(qǐng)的精神和限度及附加權(quán)利要求的范圍內(nèi)。將所有本文引用 的出版物、專利和專利申請(qǐng)以其全部引入作為參考用于所有的目的。
實(shí)施例l.使用唾液蛋白的體內(nèi)肉毒桿菌毒素的轉(zhuǎn)運(yùn) 該試驗(yàn)證實(shí)了在單次給藥后，唾液蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)大的復(fù)合物透過完整 的皮膚的用途，所述復(fù)合物包含完整標(biāo)記的蛋白質(zhì)肉毒桿菌毒素。
選擇Botox⑤商標(biāo)的A型肉毒桿菌毒素(Allergan， Irvine, CA) 用于該試驗(yàn)。根據(jù)制造商的說明重構(gòu)肉毒桿菌毒素。用計(jì)算的12倍摩 爾過量的石危代NHS-LC生物素(Pierce Chemical, Rockford， IL)生物 素化等分試樣的蛋白質(zhì)。將2. 0單元的肉毒桿菌毒素/等分試樣(即， 總共20U)和計(jì)算的MW比為4:1的唾液蛋白混合至均勻，并用磷酸鹽 緩沖鹽水稀釋至200微升。將得到的組合物與1.8 ml的Cetaphil 洗劑混合至均勻，并等分為200微升的部分。
測定用包含唾液蛋白的肉毒桿菌毒素組合物單次處理后透皮遞送 功效的動(dòng)物試驗(yàn)
在應(yīng)用處理期間，經(jīng)由吸入異氟烷來麻醉動(dòng)物。在麻醉后，對(duì) C57BLK/6小鼠(n-10)進(jìn)行局部施用計(jì)量的200微升劑量的適當(dāng)?shù)奶?理，將其應(yīng)用到背側(cè)顱骨部分的皮膚(選擇該皮膚，因?yàn)樾∈蟛荒苡米?或四肢觸及該區(qū)域)。對(duì)動(dòng)物不進(jìn)行脫毛。在初步處理后30分鐘，經(jīng) 由吸入C02對(duì)小鼠處以安樂死，由不知情的觀察者收集足夠厚的處理 的皮膚碎片。將處理的碎片分成三個(gè)等份；將顱骨部分固定在10%中 性緩沖的福爾馬林中12-16小時(shí)，然后保存在70%乙醇中直至石蠟包 埋。驟冷中心部分，由不知情的觀察者按下述直接施用于生物素測定。 驟冷處理的脊尾碎片用于增溶研究。
如下進(jìn)行生物素測定。簡單地，在室溫下，將各個(gè)碎片浸入 NeutrAvidin (Pierce Biotechnology, Rockford, IU緩沖溶液中1 小時(shí)。為了測定堿性磷酸酶活性，在生理鹽水中洗滌橫切片四次，然 后將其浸入NBT BCIP (Pierce Biotechnology)中約1小時(shí)。然后，在 生理鹽水中洗滌切片，用具有平面-復(fù)消色差透鏡的Nikon E600顯微 鏡進(jìn)行整體照像。由不知情的觀察者使用Image Pro Plus軟件(Media Cybernetics, Silver Spring, MD)經(jīng)分批(batch)圖像分析確定總的 陽性染色，并標(biāo)準(zhǔn)化至總橫截面積以測定各自的陽性染色百分?jǐn)?shù)。接 著，通過使用Statview軟件(Abacus, Berkeley, CA)以單向AN0VA 重復(fù)測量值在95%置信度的顯著性分析測定平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差。結(jié)果 證實(shí)在皮膚完整的鼠科模型中局部給藥后，唾液蛋白能有效地轉(zhuǎn)運(yùn)肉 毒桿菌毒素。
實(shí)施例2.透皮給藥肉毒桿菌毒素治療面部皺紋
女性希望減少從她上唇左側(cè)延伸出的細(xì)紋線。將一種透皮貼劑施 用于她的包含細(xì)紋線的面部，所述透皮貼劑包含含有1單元A型肉毒 桿菌毒素、0.01 mg唾液蛋白且基本上不含非毒素蛋白質(zhì)和白蛋白的 組合物。僅僅在受試者睡眠當(dāng)晚施用該貼劑。在1-7天內(nèi)，細(xì)紋線的 形態(tài)極大地減少。當(dāng)繼續(xù)施用該貼劑時(shí)，持續(xù)保持這一有益的效果。 由于不含動(dòng)物衍生白蛋白或明膠引起的抗原性降低允許重復(fù)使用該肉 毒桿菌毒素組合物.
權(quán)利要求
1.一種用于透皮遞送肉毒桿菌毒素的組合物，其包括肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物；和粘附分子；其中所述粘附分子與肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物形成復(fù)合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包括外源性 穩(wěn)定劑。
3. 權(quán)利要求1的組合物，其中所述由粘附分子和肉毒桿菌毒素復(fù) 合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物形成的復(fù)合物是非共價(jià)的。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的組合物，其中所述粘附分子是唾 液蛋白。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中所述減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合 物包含與直接從肉毒桿菌中提取的天然存在于肉毒桿菌毒素復(fù)合物中 的量相比減少量的血凝素蛋白質(zhì)或非毒素、非血凝素蛋白質(zhì)或兩者。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中所述外源性穩(wěn)定劑為白蛋白。
7. 權(quán)利要求6的組合物，其中所述白蛋白的存在量等于在天然存 在的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中白蛋白含量的約500、 400、 300、 200、 100、 50、 10、 5、 1、 0. 5、 0. 1或0. 01倍。
8. 權(quán)利要求1的組合物，其中所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的 肉毒桿菌毒素復(fù)合物包含選自下述的肉毒桿菌毒素肉毒桿菌毒素衍 生物、重組體肉毒桿菌毒素、改性的肉毒桿菌毒素、A型肉毒桿菌毒 素、B型肉毒桿菌毒素、C型肉毒桿菌毒素、D型肉毒桿菌毒素、E型 肉毒桿菌毒素、F型肉毒桿菌毒素和G型肉毒桿菌毒素。
9. 一種給藥受試者肉毒桿菌毒素的方法，包括局部施用根據(jù)權(quán)利 要求1的組合物。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所迷組合物施用于選自受試者 身體的下述區(qū)域臉、腋、手掌、手、足部、腰、頸、腿、腹股溝、 臂、肘、膝、骨盆、臀部和軀干。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的肉毒桿菌毒素組合物，其可以局部施用用于多種治療、美學(xué)和/或化妝目的。該組合物可包括肉毒桿菌毒素復(fù)合物，其中血凝素、非毒素非血凝素和/或外源性白蛋白的含量相對(duì)于常規(guī)市售肉毒桿菌毒素選擇性地和獨(dú)立地減少了。該組合物進(jìn)一步包含對(duì)肉毒桿菌毒素非天然的和非共價(jià)結(jié)合所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物的分子，從而其起親皮膚“粘附分子”的作用，其改善該毒素復(fù)合物粘附和穿透皮膚上皮細(xì)胞的能力。與現(xiàn)有皮下注射的包含肉毒桿菌組合物相比，該組合物具有改善的安全特征。本發(fā)明還涉及使用這種組合物的方法。
文檔編號(hào)A61K39/08GK101355962SQ200680050584
公開日2009年1月28日 申請(qǐng)日期2006年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月17日
發(fā)明者J·M·瓦烏戈 申請(qǐng)人:雷文斯治療公司