專利名稱：包含去?；L素釋放肽或其衍生物作為活性成分的皮膚修復(fù)促進(jìn)治療劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生長素釋放肽(ghrelin)相關(guān)物質(zhì)的皮膚細(xì)胞增殖活 性。更具體地，本發(fā)明涉及其中將所述物質(zhì)用作活性成分的用于皮膚 損傷治療的皮膚損傷治療劑或組合物、皮膚再生促進(jìn)劑和培養(yǎng)皮膚細(xì) 胞的方法。
背景技術(shù)：
無須回顧皮膚移植術(shù)的悠久歷史，很明顯，皮膚是最早嘗試移植 治療的組織。此外，展望對(duì)移植和再生的將來的研究，通過皮膚形成 研究、使用毛發(fā)的再生研究等，認(rèn)為皮膚是允許最容易接近的組織， 并且其形成/再生過程已經(jīng)得到充分驗(yàn)證。另外，皮膚移植和再生是可 以直接應(yīng)用于各種皮膚病如熱損傷、遺傳性大皰性表皮松解和男性型
禿發(fā)的研究領(lǐng)域，并且預(yù)期在皮膚損傷或皮膚損害中起到重要作用(參 見，Kyoto University 21st Century Center of Excellence Program "Establishment of International COE for Integration of Transplantation Therapy and Regenerative Medicine" 的網(wǎng)址 -Study on Skin Transplantation and Regeneration, http: //www. kuhp. kyoto-u. ac. jp/~ coe/邁ember15. html)。
皮膚移植所需的培養(yǎng)的皮膚取決于疾病、傷害程度和移植面積而 不同。盡管在中等或輕度燒傷的情況中單獨(dú)移植培養(yǎng)表皮是適合的， 但是對(duì)于全層皮膚破壞的患者，需要包含真皮層的培養(yǎng)皮膚。期望形 成的培養(yǎng)皮膚作為傷口敷料起作用并且可能釋放生理活性物質(zhì)用于治 療患有包括糖尿病的疾病的患者的難治性皮膚潰瘍(參見，Takamura: Bio Venture, 1: 58 (2001))。目前，有兩類培養(yǎng)皮膚片用于皮膚移植 一種是根據(jù)Green等人 開發(fā)的方法的正常表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(參見，Rheinwald和Green: Cell, 6: 331 (I975));另一種是由Bell等人開發(fā)的皮膚等價(jià)組織(參見，Bell 等人Science, 211: 1052 (1981))。 Green等人使用3T3細(xì)胞作為支 持細(xì)胞，以抑制表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的分化，并且成功地獲得了充分的 增殖。根據(jù)該方法，表皮角質(zhì)形成細(xì)胞在培養(yǎng)過程中多層化，以形成 片狀結(jié)構(gòu)，并且已經(jīng)證明與活體結(jié)構(gòu)相似的培養(yǎng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)臨床上可用 作皮膚組織代替物。使用材料例如膠原，Bell等人預(yù)先制備了相當(dāng)于 真皮的部分，并且在其上面培養(yǎng)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞。在這種方法中， 必須使用促進(jìn)用于人造組織形成的細(xì)胞三維摻入的材料，膠原凝膠是 用于該目的的適合材料(參見，Hata: Jikken Igaku Extra Number, 19: 2121 (2001))。
一旦制備了細(xì)胞的支架，下一個(gè)必需品是促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化的 物質(zhì)(參見，Ueda: Bio Venture, 1: 32 (2001))。人們對(duì)于IGF、 TGF-P、 FGF等的臨床應(yīng)用保持謹(jǐn)慎，強(qiáng)調(diào)其可能引起人體其它部分中細(xì) 胞分化和形成的異常。因此期望發(fā)現(xiàn)/開發(fā)非常安全的具有這種活性的 物質(zhì)。
在用于受損皮膚的移植治療或再生藥物中，未來的培養(yǎng)的胎兒皮 膚細(xì)胞的應(yīng)用也是期望的，因?yàn)橐浦驳绞軗p區(qū)域的培養(yǎng)的胎兒皮膚細(xì) 胞分化和增殖為正常皮膚，也就是說，具有皮膚修復(fù)能力(參見， Hohfeld等人Lancet, 366: 788-790 (2005))。然而，因?yàn)樘浩つw 細(xì)胞的增殖速度緩慢，期望開發(fā)促進(jìn)增殖的技術(shù)。
生長素釋放肽是在1999年在胃中發(fā)現(xiàn)的激素。它是這樣的肽，即， 具有由28個(gè)殘基組成的氨基酸序列并且具有其中序列中N末端的第三 個(gè)氨基酸被脂肪酸酰化的非常罕見的化學(xué)結(jié)構(gòu)(參見，Kojima等人 Nature, 402， 656-660 (1999);和參見W001/07475)。生長素釋放肽 作用于生長激素促泌素-受體la (GHS-Rla，參見Haward等人Science 273: 974-977 (1996))并且被描述為促進(jìn)垂體分泌生長激素(GH)的內(nèi) 源性的腦-胃腸道激素(參見，Kojima等人Nature, 402，656-660 (1999))。近來的研究顯示，生長素釋放肽增進(jìn)食欲，生長素 釋放肽的皮下給藥增加體重和體脂肪，并且生長素釋放肽具有例如改 善心臟功能的活性(參見，Wren等人Endocrinology 141: 4325-4328 (2000); Nakazato等人Nature 409: 194-198 (2001); Shintani等人Diabetes 50: 227—232 (2001); Lely等人Endocr. Rev. 25: 426-457 (2004);和Korbonits等人Front Neuroendocrino. 25: 27-68 (2004))。
因?yàn)樯L素釋放肽具有GH分泌促進(jìn)活性和食欲刺激活性，由此預(yù) 期生長素釋放肽另外有效地發(fā)揮用于將脂肪轉(zhuǎn)化為能量的脂肪燃燒活 性，和通過GH表現(xiàn)出的合成代謝活性強(qiáng)化肌肉的作用(參見，Akamizu 和Kangawa: Saishin Igaku， 60: 1569-1573 (2005))。
生長素釋放肽最初從大鼠分離，并且作為作用于GHS-Rla的內(nèi)源
性GHS純化。從那以后，已經(jīng)從除大鼠以外的多種脊推動(dòng)物發(fā)現(xiàn)了具 有類似一級(jí)結(jié)構(gòu)的生長素釋放肽的氛基酸序列，例如人、小鼠、豬、 雞、鰻魚、牛、馬、綿羊、牛蛙、鱒魚和狗。人
:GSS (正辛?；? :GSS (正辛酰基) 大鼠
:GSS (正辛?；? :GSS (正辛?；? 小鼠
:GSS (正辛?；?
豬
:GSS (正辛酖基)
牛
:GSS (正辛?；?
羊
:GSS (正辛?；? 狗
:GSS (正辛?；? 鰻魚
:GSS (正辛酰基)
:GSS (正辛?；? :GSS (正辛酰基)
雞
:GSS (正辛酰基) :GSS (正辛酰基) :GSS (正辛?；? 牛蛙
:GLT (正辛酰基) :GLT (正癸?；? :GLT (正辛酰基)
羅非魚 :GSS (正辛?；?
鯰魚
:GSS (正辛?；? :GSS (正辛?；?
馬
:GSS (正丁酰基) (上述表達(dá)中，
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(seq id no: 1 (seq id no: 2
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(seq id no: 7
(seq id no: 8
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(seq id no: 10 )
(seq id no: 11 (seq id no: 12
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FLSPEHHKVQHRKESKKPPAKLKPR (seq id no: 21 )
氨基酸殘基表示為單字符表示法)。上述的肽具有其中第三位的絲氨酸殘基(S)或蘇氨酸殘基(T)的側(cè) 鏈羥基被脂肪酸例如辛酸和癸酸酰化的特定結(jié)構(gòu)。除了生長素釋放肽 之外， 一直沒有分離具有疏水性修飾結(jié)構(gòu)的生理學(xué)活性肽的情況。
已經(jīng)報(bào)道了去酰基形式(去?；L素釋放肽)作為通過分解生長 素釋放肽的修飾部位的?；a(chǎn)生的代謝物。已知其具有例如抑制心 肌細(xì)胞凋亡和抑制脂肪細(xì)胞中脂質(zhì)分解的活性(參見，Baldanzi等人 J. Cell Biol., 195: 1029-1037 (2002)和Muccioli等人Eur. J. Pharmacol" 498: 27-35 (2004))。
就本發(fā)明人所知，還沒有發(fā)現(xiàn)報(bào)道涉及去?；L素釋放肽對(duì)皮
發(fā)明公開
本發(fā)明要解決的問題
本發(fā)明涉及利用具有皮膚細(xì)胞增殖活性的物質(zhì)的用于皮膚損傷治 療的皮膚損傷治療劑、皮膚再生促進(jìn)劑和培養(yǎng)皮膚細(xì)胞的方法。
解決問題的手段
本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，據(jù)報(bào)道是通過分解生長素釋放肽的修飾部位 的酰基(例如第三位的絲氨酸殘基的辛?；?產(chǎn)生的代謝物的去?；?長素釋放肽在懷孕的大鼠羊水和胎兒的血液中有存在?？紤]到去酰基 生長素釋放肽在羊水和胎兒血液中的功能和作用，預(yù)期去?；L素
釋放肽具有胎兒皮膚細(xì)胞增殖活性。
本發(fā)明人研究了去?；L素釋放肽如何作用于皮膚細(xì)胞，并且 發(fā)現(xiàn)在皮膚細(xì)胞中存在有去?；L素釋放肽受體、去?；L素 釋放肽作用于皮膚細(xì)胞以增加胞內(nèi)的鈣、并且去?；L素釋放肽表 現(xiàn)出皮膚細(xì)胞的增殖活性。
也就是說，本發(fā)明涉及包含去酰基生長素釋放肽作為活性成分的 用于皮膚損傷治療的皮膚再生促進(jìn)劑、用于通過培養(yǎng)皮膚細(xì)胞產(chǎn)生的 培養(yǎng)皮膚細(xì)胞片的形成促進(jìn)劑、和在培養(yǎng)皮膚移植時(shí)使用的皮膚修復(fù)促進(jìn)劑和治療劑。
本發(fā)明還涉及皮膚損傷治療方法、促進(jìn)通過培養(yǎng)皮膚細(xì)胞生產(chǎn)的 培養(yǎng)皮膚細(xì)胞片形成的方法、和在移植培養(yǎng)皮膚時(shí)促進(jìn)皮膚修復(fù)的方 法以及通過修復(fù)促進(jìn)治療上述疾病的方法，包括給予去?；L素釋 放肽。
此外，本發(fā)明涉及去?；L素釋放肽用于皮膚損傷治療中的皮 膚再生促進(jìn)劑、通過培養(yǎng)皮膚細(xì)胞生產(chǎn)的培養(yǎng)皮膚細(xì)胞片形成的促進(jìn) 劑的應(yīng)用，和用于生產(chǎn)在移植培養(yǎng)皮膚時(shí)使用的皮膚修復(fù)促進(jìn)劑和治 療劑的應(yīng)用。
基于以上所述，本發(fā)明具體地涉及以下事項(xiàng)。
(1) 用于皮膚損傷的治療劑，包含去?；L素釋放肽或具有與 去?；L素釋放肽實(shí)質(zhì)上相同生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活 性成分。
(2) (l)的治療劑，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥用鹽
(i) 具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽，
(ii) 具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末 端到第四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五個(gè)氨基酸殘基到C末 端的氨基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽， (Ui) (1)和(2)的肽，其中C末端被酰胺化。
(3) (2)的治療劑，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1表示
的氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
(4) (2)的治療劑，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1表示 的氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或其可 藥用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
(5) (l)到(4)中任一項(xiàng)的治療劑，包括每個(gè)單位制劑0.001 mg 到100 mg的量的活性成分。
(6) 皮膚再生促進(jìn)劑，包含去酰基生長素釋放肽或具有與去?；?br>
生長素釋放肽實(shí)質(zhì)上相同生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活性成分。
(7) (6)的皮膚再生促進(jìn)劑，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥用鹽(i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列 的肽，(ii)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列 的N末端到第四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五個(gè)氨基酸殘基 到C末端的氨基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的 肽，(iii) (1)和(2)的肽，其中C末端被酰胺化。
(8) (7)的皮膚再生促進(jìn)劑，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1表示的氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
(9) (7)的皮膚再生促進(jìn)劑，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1表示的氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽 或其可藥用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
(10) (6)到(9)中任一項(xiàng)的皮膚再生促進(jìn)劑，包括每個(gè)單位制劑 0.001 mg到100 mg的量的活性成分。
(11) 促進(jìn)培養(yǎng)皮膚細(xì)胞增殖的方法，使用去酰基生長素釋放肽或 具有與去?；L素釋放肽實(shí)質(zhì)上相同生理活性的肽、或其可藥用鹽 作為活性成分。
(12) (ll)的方法，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥用鹽 (i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽，(U) 具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端到第 四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五個(gè)氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l) 和(2)的肽，其中C末端被酰胺化。
(13) (12)的方法，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1表示的
氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
(14) (12)的方法，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1表示的 氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或其可藥 用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
(15) (11)到(14)中任一項(xiàng)的方法，其中培養(yǎng)皮膚細(xì)胞的增殖在包 含0.0000001 mg/mL到0. 1 mg/mL量的活性成分的培養(yǎng)基中進(jìn)行。
(16) 治療皮膚損傷的方法，包括將去?；L素釋放肽或具有與去?；L素釋放肽實(shí)質(zhì)上相同生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活 性成分給予需要治療皮膚損傷的哺乳動(dòng)物。
(17) (16)的方法，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥用鹽 (i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽,(ii) 具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端到第 四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五個(gè)氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l) 和(2)的肽，其中C末端被酰胺化。
(18) (17)的方法，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1表示的 氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
(19) (17)的方法，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1表示的 氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或其可藥 用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
(20) (16)到(19)中任一項(xiàng)的方法，其中活性成分以每次給藥 0. 001 mg到100 mg的量給予。
(21) 促進(jìn)皮膚再生的方法，包括將去?；L素釋放肽或具有與 去?；L素釋放肽實(shí)質(zhì)上相同生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活 性成分給予需要皮膚再生的哺乳動(dòng)物。
(22) (21)的方法，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥用鹽 (i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽，(ii) 具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端到第 四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五個(gè)氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l) 和(2)的肽，其中C末端被酰胺化。
(23) (22)的方法，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1表示的 氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
(24) (22)的方法，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1表示的 氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或其可藥 用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。(25) (n)到(24)中任一項(xiàng)的方法，其中活性成分以每次給藥
0. 001 mg到100 mg的量給予。
(26) 去?；L素釋放肽或具有與去酰基生長素釋放肽實(shí)質(zhì)上相 同生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活性成分用于生產(chǎn)皮膚損傷治療 劑的應(yīng)用。
(27) (26)的應(yīng)用，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥用鹽 (i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽，(ii) 具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端到第 四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五個(gè)氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l) 和(2)的肽，其中C末端被酰胺化。
(28) (27)的應(yīng)用，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1表示的
氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
(29) (27)的應(yīng)用，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1表示的 氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或其可藥 用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
(30) (26)到(29)中任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中皮膚損傷治療劑的每個(gè)單 位制劑包含0. 001 mg到100 mg的量的活性成分。
(31) 去?；L素釋放肽或具有與去?；L素釋放肽實(shí)質(zhì)上相 同生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活性成分用于生產(chǎn)皮膚再生促進(jìn) 劑的應(yīng)用。
(32) (31)的應(yīng)用，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥用鹽 (i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽，(ii) 具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端到第 四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五個(gè)氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l) 和(2)的肽，其中C末端被酰胺化。
(33) (32)的應(yīng)用，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1表示的
氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。(3W(32)的應(yīng)用，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1表示的 氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或其可藥 用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
(3" (31)到(3W中任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中皮膚再生促進(jìn)劑的每個(gè)單 位制劑包含0. 001 mg到100 mg的量的活性成分。
本發(fā)明的有利效果
本發(fā)明揭示了去?；L素釋放肽具有皮膚細(xì)胞增殖活性。因此， 本發(fā)明通過加入該物質(zhì)以便在培養(yǎng)皮膚細(xì)胞時(shí)促進(jìn)細(xì)胞增殖，使得能 夠?yàn)橹委熝杆賾?yīng)用培養(yǎng)皮膚細(xì)胞。也就是說，有可能在其中培養(yǎng)皮膚 細(xì)胞以制備片狀人造皮膚并且用其覆蓋受損的皮膚表面的皮膚修復(fù)治 療過程中更快地為患者提供由培養(yǎng)皮膚細(xì)胞制成的人造皮膚片。此外， 通過將皮膚細(xì)胞直接移植到裂傷或創(chuàng)傷部位、隨后對(duì)移植部位給予去 ?；L素釋放肽，使得促進(jìn)愈合變?yōu)橛锌赡堋?br>
此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在皮膚細(xì)胞中存在有以前未知的去酰基生
長素釋放肽受體。這個(gè)發(fā)現(xiàn)使得使用胎兒皮膚細(xì)胞篩選作用于去?；?br>
生長素釋放肽受體的物質(zhì)和使用該細(xì)胞制備去酰基生長素釋放肽受體 抗體成為有可能。
附圖簡述
圖1為顯示去酰基生長素釋放肽增加單個(gè)培養(yǎng)的胎兒皮膚細(xì)胞中 胞內(nèi)鈣的活性的圖。-
圖2為顯示去?；L素釋放肽和去?；L素釋放肽 (1-15)-冊(cè)2在培養(yǎng)的胎兒皮膚細(xì)胞中的增殖活性的圖。
實(shí)施發(fā)明的最佳模式
本發(fā)明的藥物可用作用于哺乳動(dòng)物(個(gè)體生物)的藥物，哺乳動(dòng)物 包括人。用于本發(fā)明的物質(zhì)的實(shí)例包括沒有在生長素釋放肽的修飾部 位的?；?例如第三位的絲氨酸殘基的辛?；?的去酰基生長素釋放肽。
作為去酰基生長素釋放肽，如上所述，可使用具有與來源于人類 的生長素釋放肽以及來源于大鼠、小鼠、豬、牛及其它動(dòng)物的生長素
釋放肽相同氨基酸序列的肽及其衍生物。
優(yōu)選地，對(duì)于個(gè)體生物，使用來源于相同個(gè)體生物的去?；L 素釋放肽。例如，優(yōu)選將具有與來源于人的生長素釋放肽相同氨基酸
序列的去?；L素釋放肽用于人體。去?；L素釋放肽為包括28 個(gè)氨基酸的肽(SEQ ID NO: 1)。
去?；L素釋放肽的衍生物包括選自以下的肽(a)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端到第四個(gè)氨基酸 殘基的氨基酸序列并且從第五個(gè)氨基酸殘基到C末端的氨基酸序列中 缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(b)具有SEQ ID NO : 1 到SEQ ID NO : 21所示氨基酸序列的肽，和(a)的肽，其中C末端被 酰胺化，該肽具有實(shí)質(zhì)上與去酰基生長素釋放肽相同的生理活性。這 其中，優(yōu)選的肽是例如具有如下氨基酸序列的肽，其中SEQ ID NO: 1 所示氨基酸序列的氨基末端第5到第28個(gè)氨基酸殘基中一個(gè)或幾個(gè)氨 基酸被置換、添加和/或缺失，并且其具有增加胞內(nèi)釣離子濃度的活性。 可添加的氨基酸殘基的優(yōu)選的實(shí)例包括堿性氨基酸，特別是賴氨酸。 期望衍生物的氨基酸序列與天然氨基酸序列相比的同源性為70%，優(yōu) 選為80%，更優(yōu)選為90%,更優(yōu)選為95%,最優(yōu)選為97%。這些條件在 具有與來源于其它動(dòng)物的生長素釋放肽相同氨基酸序列的去?；L 素釋放肽(SEQ ID NO : 2到SEQ ID NO : 22)中是一樣的。其C末端
中。 、- 、 土 、 —
本發(fā)明的去?；L素釋放肽和衍生物可通過常規(guī)方法制備。例 如，它們可以從天然的原料分離、或通過重組DNA技術(shù)和/或化學(xué)合成 產(chǎn)生。在氨基酸殘基中需要修飾(?；?時(shí)，可根據(jù)已知的方法進(jìn)行修 飾反應(yīng)。例如，在使用重組DNA技術(shù)的生產(chǎn)方法中，可以通過培養(yǎng)用 表達(dá)栽體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞、然后從培養(yǎng)物收集目標(biāo)肽得到本發(fā)明的去?；L素釋放肽及其衍生物，所述表達(dá)載體具有編碼本發(fā)明的肽的腿。
摻入基因的載體的實(shí)例包括大腸桿菌載體(例如，pBR322， pUC18 和pUC19)、枯草桿菌栽體(例如pUB110、 pTP5和pC194)、酵母載體(例 如YEp、 YRp和YIp)、和動(dòng)物細(xì)胞載體(例如逆轉(zhuǎn)錄病毒和痘苗病毒)。 可以使用任何其它載體，只要它們?cè)谒拗骷?xì)胞中穩(wěn)定地保持目的基因。 將載體引入到適合的宿主細(xì)胞中。作為將目的基因摻入質(zhì)?；?qū)⑵湟?入宿主細(xì)胞的方法，可使用例如在Molecular Cloning (Sambrook等人， 1989)中描述的方法。
為了允許目標(biāo)肽基因在質(zhì)粒中表達(dá)，以使其起作用的方式將啟動(dòng) 子連接于基因的上游。
用于本申請(qǐng)的啟動(dòng)子可為任何啟動(dòng)子，只要它適合于用于表達(dá)目
的基因的宿主細(xì)胞。例如，當(dāng)被轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞是埃希氏桿菌屬時(shí)， 可^f吏用lac啟動(dòng)子、trp啟動(dòng)子、lpp啟動(dòng)子、人PL啟動(dòng)子、recA啟 動(dòng)子等；當(dāng)宿主細(xì)胞是桿菌屬時(shí)，可使用SP01啟動(dòng)子、SP02啟動(dòng)子 等；當(dāng)宿主細(xì)胞是酵母菌時(shí)，可使用GAP啟動(dòng)子、PH05啟動(dòng)子、ADH 啟動(dòng)子等；和當(dāng)宿主細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，可使用SV40-來源的啟動(dòng)子、 逆轉(zhuǎn)錄病毒來源的啟動(dòng)子等。
使用包含目的基因的上述得到的載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。要使用的宿 主細(xì)胞可為細(xì)菌(例如埃希氏桿菌屬和桿菌屬)、酵母菌(例如酵母菌 屬、畢赤氏酵母屬和假絲酵母屬)、和動(dòng)物細(xì)胞(例如CHO細(xì)胞和COS 細(xì)胞)。液體培養(yǎng)基作為培養(yǎng)基是適合的，并且特別優(yōu)選培養(yǎng)基包含要 培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長所需的碳源和氮源。如果期望，可加入維生素、 生長促泌素、血清等。
在培養(yǎng)之后，從培養(yǎng)物分離本發(fā)明的肽并且通過常規(guī)方法純化。 例如，從培養(yǎng)的細(xì)菌形式或細(xì)胞提取目標(biāo)物質(zhì)如下進(jìn)行通過在培養(yǎng) 之后收集細(xì)菌形式或細(xì)胞、將其懸浮在包含蛋白改性劑(例如鹽酸胍) 的緩沖溶液中、用超聲等將細(xì)菌形式或細(xì)胞粉碎、和將其離心。為了 從上清液純化目標(biāo)物質(zhì)，可以使用幾種分離和純化方法，例如凝膠滲透、超濾、透(滲)析、SDS-PAGE和各種色i普技術(shù)，根據(jù)目標(biāo)物質(zhì)的 分子量、溶解度、電荷(等電點(diǎn))和親和力，以適當(dāng)?shù)慕M合使用上述分 離和純^1方法。
本發(fā)明的去酰基生長素釋放肽及其衍生物可以通過常規(guī)方法化學(xué) 合成。例如，該物質(zhì)可以如下制備通過液相方法和/或固相方法將具 有保護(hù)基的氨基酸縮合、延長肽鏈、用酸除去全部保護(hù)基、和通過上 述純化方法純化得到的粗產(chǎn)物。
對(duì)于肽的生產(chǎn)方法，已經(jīng)已知各種方法。本發(fā)明的肽還可以通過 已知的方法容易地制備，例如，經(jīng)典的肽合成方法或固相方法。
對(duì)于用于本發(fā)明的去酰基生長素釋放肽及其衍生物的鹽，優(yōu)選可
藥用鹽。其實(shí)例包括無機(jī)堿的鹽、有機(jī)堿的鹽、無機(jī)酸的鹽、有機(jī)酸 的鹽、堿性氨基酸的鹽和酸性氨基酸的鹽。
優(yōu)選的無機(jī)堿的鹽的實(shí)例包括堿金屬鹽，例如鈉鹽和鉀鹽；堿土 金屬鹽，例如釣鹽和鎂鹽；鋁鹽；銨鹽；等等。
優(yōu)選的有機(jī)堿的鹽的實(shí)例包括三甲胺、三乙胺、吡啶、曱基吡啶、 乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環(huán)己基胺、N，N， -二芐基乙二胺等 的鹽。
優(yōu)選的無機(jī)酸的鹽的實(shí)例包括鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸 等的鹽。
優(yōu)選的有機(jī)酸的鹽的實(shí)例包括甲酸、醋酸、三氟乙酸、富馬酸、 草酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、琥珀酸、蘋果酸、甲磺酸、苯磺酸、 對(duì)甲苯磺酸等的鹽。
優(yōu)選的堿性氨基酸的鹽的實(shí)例包括精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸等的 鹽，而優(yōu)選的酸性氨基酸的鹽的實(shí)例包括天冬氨酸、谷氨酸等的鹽。
在上述鹽中，最優(yōu)選鈉鹽和鉀鹽。
關(guān)于去?；L素釋放肽的生理活性，有可能將胞內(nèi)鈣增加活性 用作為指標(biāo)選擇衍生物，使用其中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)去?；L素釋放肽受體
的大鼠胎兒皮膚細(xì)胞。作為測(cè)量胞內(nèi)鈣離子濃度的方法，可使用已知 的方法。例如，可使用FLIPR(Fluorometric Imaging Plate Reader,Molecular Devices Co. ， Ltd.)，其利用由釣離子濃度波動(dòng)引起的 Fluo-4 AM (Molecular Probe Co. ， Ltd.)的熒光強(qiáng)度變動(dòng)(Ko j ima等 人Nature, 402: 656-660 (1999))。此外，為了證實(shí)具有鉤增加活 性的肽在體外或體內(nèi)是否具有去?；L素釋放肽活性，可使用已知 的方法。例如，可以在使[1251]標(biāo)記的去?；L素釋放肽結(jié)合于大鼠 胎兒的皮膚細(xì)胞之后，在結(jié)合測(cè)定法中通過驅(qū)逐實(shí)驗(yàn)(ejection experiment)來測(cè)量體外活性。為了確認(rèn)體內(nèi)去酰基生長素釋放肽活 性，在將具有鈣增加活性的肽注射到動(dòng)物的外周靜脈中之后測(cè)量心肌 細(xì)胞凋亡、或脂肪組織或血清中的脂質(zhì)濃度，或者測(cè)量胎兒皮膚中的 鈣濃度。對(duì)于去?；L素釋放肽衍生物及其制備方法，可參考例如 J. Med. Chem.， 43, pp. 4370-4376， 2000。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的去?；L素釋放肽具有皮膚細(xì)胞增殖活性， 并且特別地顯著增加胎兒皮膚細(xì)胞的數(shù)目。
也就是說，本發(fā)明的去?；L素釋放肽可用作皮膚損傷治療(例 如創(chuàng)傷、擦傷和灼傷)的皮膚再生促進(jìn)劑的活性成分、用作通過培養(yǎng)皮 膚(例如表皮、真皮、和皮膚)細(xì)胞生產(chǎn)培養(yǎng)皮膚細(xì)胞片的形成促進(jìn)劑 的活性成分、和用作在灼傷損傷、難治性皮膚潰瘍、遺傳性大皰性表 皮松解、褥瘡、肥滿性瘢痕、胎記、重癥過敏性皮膚病和脫發(fā)中移植 培養(yǎng)的皮膚時(shí)的皮膚修復(fù)促進(jìn)劑和治療劑的活性成分。
此外，本發(fā)明的去酰基生長素釋放肽對(duì)個(gè)體生物的給藥用于皮膚 損傷治療(例如創(chuàng)傷、擦傷和灼傷)的方法；通過培養(yǎng)皮膚(例如表皮、
真皮、和皮膚)細(xì)胞生產(chǎn)培養(yǎng)皮膚細(xì)胞片的形成促進(jìn)的方法；在灼傷損
傷、難治性皮膚潰瘍、遺傳性大皰性表皮松解、褥瘡、肥滿性瘢痕、 胎記、重癥過敏性皮膚病和脫發(fā)中移植培養(yǎng)的皮膚時(shí)促進(jìn)皮膚l務(wù)復(fù)的
方法；和通過修復(fù)促進(jìn)治療上述疾病的方法。
此外，本發(fā)明的去?；L素釋放肽可用于生產(chǎn)皮膚損傷治療(例 如創(chuàng)傷、擦傷和灼傷)的皮膚再生促進(jìn)劑、用于生產(chǎn)通過培養(yǎng)皮膚(例 如表皮、真皮、和皮膚)細(xì)胞生產(chǎn)培養(yǎng)皮膚細(xì)胞片的形成促進(jìn)劑、和用 于生產(chǎn)在灼傷損傷、難治性皮膚潰瘍、遺傳性大皰性表皮松解、褥瘡、肥滿性瘢痕、胎記、重癥過敏性皮膚病和脫發(fā)中移植培養(yǎng)的皮膚時(shí)的 皮膚修復(fù)促進(jìn)劑和治療劑。
包含去酰基生長素釋放肽或其藥理學(xué)可接受的鹽的本發(fā)明的藥物 可通過將其與藥理學(xué)可接受的載體、賦形劑、補(bǔ)充劑等混合用于個(gè)體 生物(例如人、小鼠、大鼠、兔、狗、貓、牛、馬、豬和靈長類動(dòng)物)。
優(yōu)選本發(fā)明的藥物通過非腸道途徑例如靜脈內(nèi)、皮下和肌肉注射 以預(yù)定量的單次劑量或多次劑量給予進(jìn)行皮膚再生治療的個(gè)體。當(dāng)個(gè) 體是成年人，特別是家庭治療的成年人時(shí)，優(yōu)選經(jīng)鼻、經(jīng)肺或栓劑給 藥。
在本發(fā)明中，對(duì)于藥物的劑量沒有具體限制，并且可以取決于預(yù) 定的用途、和個(gè)體的年齡、體重、種類、要給藥的個(gè)體的癥狀、營養(yǎng) 狀況、和并用藥物而適當(dāng)選擇。當(dāng)藥物以單次或多次劑量給予成年人
時(shí)，作為活性成分的去?；L素釋放肽的量優(yōu)選為0. 001 mg到100 mg，更優(yōu)選為0. 01 fflg到10 mg。
優(yōu)選將上述劑量每天給藥一次或幾次，持續(xù)1到24周、更優(yōu)選1 到12周。
可藥用載體的實(shí)例包括通常用作藥物配制材料的各種有機(jī)或無機(jī) 的栽體物質(zhì)。將這種載體作為用于固體制劑的賦形劑、潤滑劑、粘合 劑或崩解劑混合；和作為用于液體制劑的溶劑、增溶劑、助懸劑、張 力調(diào)節(jié)劑、緩沖劑和無痛化劑混合。
如果期望，可以使用制劑添加劑例如防腐劑、抗氧化劑、著色劑、 和甜味劑。
優(yōu)選的賦形劑的實(shí)例包括乳糖、蔗糖、D-甘露醇、淀粉、結(jié)晶纖 維素、輕質(zhì)無水硅酸等。
優(yōu)選的潤滑劑的實(shí)例包括硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石粉、膠態(tài)氧 化硅等。
優(yōu)選的粘合劑的實(shí)例包括結(jié)晶纖維素、蔗糖、D-甘露醇、糊精、 羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮等。
優(yōu)選的崩解劑的實(shí)例包括淀粉、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、交聯(lián)羧曱纖維素鈉、羧曱淀粉鈉等。
優(yōu)選的溶劑的實(shí)例包括注射溶劑、醇類、丙二醇、聚乙二醇、芝 麻油、玉米油等。
優(yōu)選的增溶劑的實(shí)例包括聚乙二醇、丙二醇、D-甘露醇、苯曱酸 爺酯、乙醇、三氨基曱烷(trisaminomethane)、膽固醇、三乙醇胺、 碳酸鈉、檸檬酸鈉等。
優(yōu)選的助懸劑的實(shí)例包括表面活性劑，例如硬脂酰三乙醇胺、月 桂硫酸酯鈉、月桂酰基氨基丙酸、卵磷脂、苯扎氯銨、節(jié)索氯銨、和 單硬脂酸甘油酯；親水聚合物，例如聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、 羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、和羥 基丙基纖維素；等等。
優(yōu)選的張力調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括氯化鈉、甘油、D-甘露醇等。
優(yōu)選的緩沖劑的實(shí)例包括磷酸鹽、乙酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽等。
優(yōu)選的無痛化劑的實(shí)例包括苯曱醇等。
優(yōu)選的防腐劑的實(shí)例包括對(duì)羥基苯甲酸酯類、三氯叔丁醇、苯甲 醇、苯乙醇、脫氫乙酸、山梨酸等。
優(yōu)選的抗氧化劑的實(shí)例包括亞硫酸鹽、抗壞血酸等。
本發(fā)明的藥物的優(yōu)選形式是適于非腸道給藥的制劑。適合于非腸 道給藥的制劑形式的實(shí)例包括用于靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下或肌肉內(nèi)給藥 的可注射溶液；靜脈內(nèi)液體；栓劑；經(jīng)皮吸收劑；經(jīng)粘膜吸收劑和吸 入劑。在這些劑型中，優(yōu)選可注射溶液的形式；特別是在個(gè)體是家庭 治療的成年人時(shí)，優(yōu)選經(jīng)粘膜的吸收劑、吸入劑和栓劑的劑型。因?yàn)?這些制劑形式是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，他們有可能選擇適合于預(yù)定 給藥途徑的制劑形式，并且如果期望，他們有可能使用可用于制藥工 業(yè)的一種或多種添加劑將藥物配制為藥物組合物的形式。
例如，如下制備和提供可注射溶液或靜脈內(nèi)液體形式的藥物通
應(yīng)用的一種或多種添加劑(例如緩沖溶液、糖溶液、張力調(diào)節(jié)劑、PH 調(diào)節(jié)劑、無痛化劑和防腐劑)一起溶解在注射用蒸餾水中、使溶液經(jīng)過滅菌過濾并將濾液置于安瓿或小瓶中，或者將得到的濾液凍干以生產(chǎn) 凍干劑型。添加劑的實(shí)例包括糖類，例如葡萄糖、甘露醇、木糖醇和
乳糖；親水聚合物，例如聚乙二醇；醇類，例如甘油；氨基酸，例如 甘氨酸；蛋白質(zhì)，例如血清白蛋白；鹽，例如NaCl和檸檬酸鈉；酸類， 例如醋酸、酒石酸和抗壞血酸；表面活性劑，例如吐溫80;還原劑， 例如亞硫酸鈉；等等。這些制劑通過在使用時(shí)將它們?nèi)芙庥谧⑸溆谜?餾水或鹽水溶液中而作為可注射溶液或靜脈內(nèi)液體使用。用于鼻內(nèi)給 藥(經(jīng)鼻給藥)的藥劑例如滴鼻劑和鼻內(nèi)噴霧劑對(duì)于經(jīng)粘膜給藥來說也 是優(yōu)選的，并且對(duì)于經(jīng)肺給藥還優(yōu)選吸入劑等。
優(yōu)選每個(gè)單位制劑的活性成分(例如去?；L素釋放肽、其衍生 物、或其藥理學(xué)可接受的鹽)的含量為0. OOlmg到100mg，優(yōu)選為0.01 mg到10 mg，將其每天給藥一次或幾次。
如下處理分離的皮膚細(xì)胞將分離的皮膚細(xì)胞在培養(yǎng)溶液中培養(yǎng)， 隨后將0. 1 nM到1 uM、優(yōu)選1 nM到100 nM的去酰基生長素釋放肽、 其衍生物、或其藥理學(xué)可接受的鹽加入到通過滅菌過濾或高壓滅菌制 備的培養(yǎng)溶液中。也就是說，優(yōu)選使用的培養(yǎng)溶液包含0.0000001 mg/mL到0. 1 mg/fflL的作用于GHS-Rla的物質(zhì)用于增殖皮膚細(xì)胞。如 實(shí)施例2中所示，這種處理促進(jìn)了皮膚細(xì)胞的增殖，所述皮膚細(xì)胞在 正常情況下幾乎沒有增殖進(jìn)展。
實(shí)施例
以下通過實(shí)施例具體地描述本發(fā)明。
(實(shí)施例1) 去?；L素釋放肽在培養(yǎng)的大鼠胎兒皮膚細(xì)胞中
的胞內(nèi)鈣增加活性
將妊娠第17天的Wistar大鼠在麻醉下進(jìn)行剖腹手術(shù)，取出胎兒。 從胎兒取得一小片皮膚，用在冷的Hank's溶液中的膠原酶處理，用 木瓜蛋白酶消化，并且通過移液管吸取機(jī)械分離。這樣得到胎兒皮膚 細(xì)胞的分散液。從分散液得到單個(gè)細(xì)胞，向其中加入生長素釋放肽，并且進(jìn)行鉤成像。對(duì)于釣成像，使用釣成像設(shè)備(IMACS, Hamamatsu Photonics)。也就是說，在通過340 nm/380 nm光進(jìn)行激發(fā)時(shí)測(cè)量510 認(rèn)波長的發(fā)射的比例。將Fura-2用作鈣顯像劑。使用得自大鼠的去 酰基生長素釋放肽(SEQ ID NO: 3)。
結(jié)果表示在圖1中。在圖1中，I、 II和III是拍照的點(diǎn)，但是 在本說明書中省略了照片。實(shí)線曲線顯示響應(yīng)生長素釋放肽的細(xì)胞， 而虛線曲線顯示響應(yīng)去?；L素釋放肽的另一細(xì)胞。分別將生長素 釋放肽和去酰基生長素釋放肽加入到不同的細(xì)胞中。
當(dāng)去酰基生長素釋放肽(l x l(T6 M)作用于單個(gè)大鼠胎兒的皮膚細(xì) 胞時(shí)，觀察到胞內(nèi)4丐增加。這表明在大鼠胎兒的皮膚細(xì)胞中存在有響 應(yīng)去酰基生長素釋放肽的受體，并且加入去?；L素釋放肽增加胞 內(nèi)鈣，誘導(dǎo)去酰基生長素釋放肽的活性。
(實(shí)施例2) 去?；L素釋放肽和去?；L素釋放肽 (1-15)-冊(cè)2在培養(yǎng)的胎兒皮膚細(xì)胞中的增殖活性
從妊娠第17天的Wistar大鼠取得大鼠胎兒的皮膚細(xì)胞，并以與 實(shí)施例l相同的方法得到其分散液。將分散的細(xì)胞懸浮在包含2%胎牛 血清、青霉素(100U/mL)、鏈霉素(100 jiig/mL)和表皮生長因子EGF(5 ng/mL)的MCDB15 3HAA培養(yǎng)基(F-Peptide Co. ， Ltd., Yamagata, Japan) 中，并且以3x 104細(xì)胞/孔的量接種在聚乙烯亞胺涂層的96孔多孔 板上。向其中加入去?；L素釋放肽(O. 05到500 pmol/mL(nM))或 去?；L素釋放肽(1-15)-NH2(SEQ ID NO: 22) (0. 001到1 pmol/mL(nM))和5-溴-2，-脫氧尿苷(BrdU)(，)，然后培養(yǎng)24小時(shí)。
a-i5)、-NH2的培養(yǎng)l用作對(duì)照。在培養(yǎng):束之后，:集細(xì)胞:然后使
用 Proliferation ELISA Kit (Roche Diagnostic GmbH. Manheim， Germany)測(cè)量攝入到胎兒皮膚細(xì)胞中的BrdU的量，以研究皮膚細(xì)胞生 長活性。
結(jié)果如圖2中所示。當(dāng)去?；L素釋放肽和去酰基生長素釋放肽(1-15) -NH2作用于 培養(yǎng)的胎兒皮膚細(xì)胞時(shí)，BrdU的攝入增加。因此，證實(shí)了去?；L 素釋放肽或去?；L素釋放肽(1-15)-冊(cè)2具有允許胎兒皮膚細(xì)胞增 殖的活性。
本發(fā)明的皮膚損傷治療劑、皮膚再生促進(jìn)劑、培養(yǎng)皮膚細(xì)胞的生 長促進(jìn)方法、和皮膚再生促進(jìn)方法可以應(yīng)用于藥學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
權(quán)利要求
1.用于皮膚損傷的治療劑，包含去酰基生長素釋放肽或具有與去 ?；L素釋放肽實(shí)質(zhì)上相同生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活性成
2. 權(quán)利要求l的治療劑，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥 用鹽(i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽， (ii)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端 到第四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l)和 (2)的肽，其中C末端被酰胺化。
3. 權(quán)利要求2的治療劑，其中活性成分為具有由SEQ ID NO 1 表示的氨基酸序列的舦或其可藥用鹽。
4. 權(quán)利要求2的治療劑，其中活性成分是具有由SEQ ID NO 1 表示的氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或 其可藥用鹽，其中笫15個(gè)氨基酸被酰胺化。
5. 權(quán)利要求1到4中任一項(xiàng)的治療劑，包括每個(gè)單位制劑0. 001 mg 到100 mg的量的活性成分。
6. 皮膚再生促進(jìn)劑，包含去?；L素釋放肽或具有與去?；?長素釋放肽實(shí)質(zhì)上相同生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活性成分。
7. 權(quán)利要求6的皮膚再生促進(jìn)劑，其中活性成分為選自以下的肽 或其可藥用鹽(i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸 序列的肽，(ii)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端到第四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五氨基酸殘基到 C末端的氨基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽， (iii) (1)和(2)的肽，其中C末端被酰胺化。
8. 權(quán)利要求7的皮膚再生促進(jìn)齊'J，其中活性成分為具有由SEQ ID NO: 1表示的氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
9. 權(quán)利要求7的皮膚再生促進(jìn)劑，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1表示的氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列 的肽或其可藥用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
10. 權(quán)利要求6到9中任一項(xiàng)的皮膚再生促進(jìn)劑，包括每個(gè)單位制 劑0. 001 mg到100 mg的量的活性成分。
11. 用于促進(jìn)培養(yǎng)皮膚細(xì)胞增殖的方法，使用去?；L素釋放肽 或具有與去?；L素釋放肽實(shí)質(zhì)上相同生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活性成分。
12. 權(quán)利要求11的方法，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥 用鹽(i)具有如SEJJ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽， (ii)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端剖第四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l)和 (2)的肽，其中C末端被酰胺化。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1 表示的氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
14. 權(quán)利要求12的方法，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1表示的氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或 其可藥用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
15. 權(quán)利要求11到14中任一項(xiàng)的方法，其中培養(yǎng)皮膚細(xì)胞的增殖 在包含0.0000001 mg/mL到0. 1 mg/mL量的活性成分的培養(yǎng)基中進(jìn)行。
16. 皮膚損傷的治療方法，包括對(duì)需要治療皮膚損傷的哺乳動(dòng)物給 實(shí)質(zhì)上相同生理活性的肽、或其可藥用鹽。
17. 權(quán)利要求16的方法，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥 用鹽(i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽， (ii)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端 到第四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l)和 (2)的肽，其中C末端被酰胺化。
18. 權(quán)利要求17的方法，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1 表示的氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
19. 權(quán)利要求17的方法，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1 表示的氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或 其可藥用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
20. 權(quán)利要求16到19中任一項(xiàng)的方法，其中活性成分以每次給藥 0. 001 mg到100 mg的量給藥。
21.促進(jìn)皮膚再生的方法，包括對(duì)需要皮膚再生的哺乳動(dòng)物給予作上相同生理活性的肽、或其可藥用鹽。
22. 權(quán)利要求21的方法，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥 用鹽(i)具有如SEQ ID N0: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽， (ii)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端 到第四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l)和 (2)的肽，其中C末端被酰胺化。
23. 權(quán)利要求22的方法，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1 表示的氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
24. 權(quán)利要求22的方法，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1 表示的氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或 其可藥用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
25. 權(quán)利要求21到24中任一項(xiàng)的方法，其中活性成分以每次給藥 0. 001 mg到100 mg的量給藥。
26. 去酰基生長素釋放肽或具有與去?；L素釋放肽實(shí)質(zhì)上相 同的生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活性成分用于生產(chǎn)皮膚損傷治療 劑的用途。
27. 權(quán)利要求26的應(yīng)用，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥 用鹽(i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽，(ii)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端 到第四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l)和(2)的肽，其中C末端被酰胺化。
28. 權(quán)利要求27的應(yīng)用，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1 表示的氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
29. 權(quán)利要求27的應(yīng)用，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1 表示的氨基酸序列的N末端到第15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或 其可藥用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
30. 權(quán)利要求26到29中任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中皮膚損傷治療劑包含 每個(gè)單位制劑0. 001 mg到100 mg的量的活性成分。
31. 去酰基生長素釋放肽或具有與去?；L素釋放肽實(shí)質(zhì)上相 同生理活性的肽、或其可藥用鹽作為活性成分用于生產(chǎn)皮膚再生促進(jìn)劑 的用途。
32. 權(quán)利要求31的應(yīng)用，其中活性成分為選自以下的肽或其可藥 用鹽(i)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的肽，(ii)具有如SEQ ID NO: 1到SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列的N末端 到第四個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列并且從第五氨基酸殘基到C末端的氨 基酸序列中缺失、置換和/或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的肽，(iii)(l)和(2)的肽，其中C末端被酰胺化。
33. 權(quán)利要求32的應(yīng)用，其中活性成分為具有由SEQ ID NO : 1 表示的氨基酸序列的肽或其可藥用鹽。
34. 權(quán)利要求32的應(yīng)用，其中活性成分是具有由SEQ ID NO : 1 表示的氨基酸序列的N末端到笫15個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或 其可藥用鹽，其中第15個(gè)氨基酸被酰胺化。
35.權(quán)利要求31到34中任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中皮膚再生促進(jìn)劑包含 每個(gè)單位制劑0. 001 mg到100 mg的量的活性成分。
全文摘要
本發(fā)明提供新穎的皮膚損傷治療劑和皮膚再生促進(jìn)劑。所述皮膚損傷治療劑和皮膚再生促進(jìn)劑包含去?；L素釋放肽或其可藥用鹽作為活性成分。
文檔編號(hào)A61P17/00GK101312739SQ20068004343
公開日2008年11月26日 申請(qǐng)日期2006年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月21日
發(fā)明者中原桂子, 寒川賢治, 村上昇, 林友二郎 申請(qǐng)人:國立大學(xué)法人宮崎大學(xué);國立循環(huán)器病中心總長代表的日本國;阿斯比奧制藥株式會(huì)社