IdeS蛋白酶(來自于釀膿鏈球菌)在自身免疫性疾病和移植排斥的治療中的用途的制作方法

專利名稱：：IdeS蛋白酶(來自于釀膿鏈球菌)在自身免疫性疾病和移植排斥的治療中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療或預(yù)防由IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，所述疾病或病癥例如自身免疫性疾病、移植排斥、手術(shù)后治療和后天性血友病。
背景技術(shù)：
：IdeS(釀膿鏈球菌Gy./^oge/7e力免疫球蛋白G降解酶)是人類病原菌釀膿鏈球菌產(chǎn)生的胞外半胱氨酸蛋白酶。IdeS最初是從血清型為Ml的A組鏈球菌菌林中被分離得到，但是現(xiàn)在已經(jīng)在所有的A組鏈球菌菌抹中都識別到了/Ves基因。IdeS具有極高水平的底物特異性，并且確定的底物僅有IgG—種。IdeS催化人IgG的低絞鏈區(qū)中的單溶蛋白性裂解。所述蛋白水解性降解可以啟動調(diào)理吞噬的抑制并且干擾A組鏈球菌的殺滅。IdeS也可以切割多種動物的IgG的某些亞類，并且可以有效地將IgG變成Fc和Fab片段。所述/cfes基因已經(jīng)被克隆并且作為GST融合蛋白在Aco7/中表達(dá)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人證實了IdeS對于由IgG抗體介導(dǎo)的疾病的治療和預(yù)防是有效的。具體地，本發(fā)明人證實了IdeS可以被用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)。對被誘發(fā)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的小鼠給予IdeS沒有觀察到毒性作用，并且該給藥完全阻斷了類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。而且，本發(fā)明人證實IdeS的效力4艮強(qiáng)，并且IdeS具有局部效應(yīng)。因此根據(jù)本發(fā)明，可以提供IdeS多肽或者編碼IdeS多肽的多核苷酸在制備用于治療或預(yù)防由IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了——種對需要治療或預(yù)防的受試者受試者進(jìn)行的治療或預(yù)防由IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，所述方法包括對所述受試者給予治療有效量的IdeS多肽或者編碼IdeS多肽的多核苷酸；和——種處理離體血液的方法，所述血液取自患有由IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的患者，所述方法包括使所述血液與IdeS多肽相接觸。圖1顯示接受IdeS處理的小鼠和對照小鼠的關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率(a)和嚴(yán)重度(b)。在時間0時注射抗-CII抗體。在所述抗體轉(zhuǎn)移的3小時前(n=5)或者3小時之后(n=5)用IdeS(0.950mg/每只小鼠/i.v.)的PBS溶液對小鼠靜脈注射，或者不經(jīng)過任何處理(11=6)。在第5天，用LPS(25Hg/每只小鼠/i.p.)注射所有小鼠。在15天內(nèi)每天檢測小鼠關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。所有小鼠都被用于計算。n表示在實驗中使用的小鼠的數(shù)量。從所述動物取血清和爪樣本。圖2顯示爪的組織病理學(xué)切片，所述爪取自如圖l所述的對照小鼠(a和c)和接受IdeS處理的小鼠(b和d)。在實驗的第15天收集小鼠的爪。在4'C下，后爪用4"/。的磷酸鹽緩沖的多聚曱醛溶液(pH7.4)固定24小時，之后在乙二胺四乙酸溶液中脫釣4周，所述乙二胺四乙酸溶液含聚乙烯吡咯烷酮和0.1M的Tris(pH6.95),之后進(jìn)行脫水并用石蠟包埋。用蘇木精和伊紅染色6一厚的切片。顯示的結(jié)果代表從每組中的三只小鼠獲得的樣品。原始放大倍數(shù)是20倍。圖3顯示接受各種不同劑量IdeS處理的小鼠和對照小鼠中的關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率(a)和嚴(yán)重度(b)。在第O天的O小時，四個月的雄性B10.Rin小鼠組經(jīng)靜脈注射9mg的CII特異性單克隆抗體M2139和CnCl。在同一天的3個小時后，用含有Oyg(n=7)、lOjng(n=5)、lOOpg(n=5)和1000jug(n=5)的IdeS的PBS溶液進(jìn)行靜脈注射。在第5天，所有的小鼠接受LPSU5pg/i.p.)處理。n表示每組中小鼠的數(shù)量。誤差條表示平均值士SEM。所有的小鼠都被用于計算。圖4顯示全身地和局部地接受IdeS處理的小鼠和對照小鼠中的關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率(a)和嚴(yán)重度(b)。在第O天的O小時，BlO.Rin小鼠組經(jīng)靜脈注射9mg的關(guān)節(jié)炎源抗-CIIIgG2a單克隆抗體混合物。用100pg的IdeS全身性地(i.v.)(n=4)或局部地(對左爪或者右爪)處理小鼠。所述接受局部處理的小鼠或者在抗-cn抗體轉(zhuǎn)移(n-6)后的3小時后或者在抗-cn抗體轉(zhuǎn)移后(n-6)的3小時和24小時被給予IdeS。序列表說明SEQIDNO:1為從釀膿鏈球菌API分離的編碼IdeS的氨基酸序列。SEQIDNO:2為從釀膿鏈球菌API分離的編碼IdeS的氨基酸序列，包括一個推定的信號序列。SEQIDNO:3為從釀膿鏈球菌API分離的編碼IdeS的核酸序列(包括一個信號序列)。SEQIDNO:4為PCR引物Idel。SEQIDNO:5為PCR引物Ide2。SEQIDNO:6為PCR引物Ide5x。SEQIDNO:7為PCR引物Ide3x。SEQIDNO:8為IdeS對人IgG進(jìn)行切割的產(chǎn)物的N端氨基酸序列。具體實施方式本發(fā)明提供一種治療或預(yù)防由IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，所述方法包括給予受試者受試者IdeS多肽或者編碼IdeS多肽的多核苷酸。多肽所述IdeS多肽優(yōu)選為釀膿鏈球菌;yoge/ze》的IdeS或者為保持有半胱氨酸蛋白酶活性的釀膿鏈球菌IdeS的變體或片段。所述變體可以是來自其他物種例如另一種細(xì)菌的IdeS多肽。所述細(xì)菌優(yōu)選為鏈球菌C57rep/^coc^Ay)。所述鏈球菌優(yōu)選為A組鏈球菌、C組鏈球菌或者G組鏈球菌。特別地，所述變體可以是來自于例如馬鏈球菌cs:e《"/Z)或獸瘋鏈球菌(i:zooe/72Ve邊/c〃》的C組鏈球菌的IdeS多肽?；蛘?，所述變體可以來自于惡臭假單胞菌C^e"do邁o/7as。所述IdeS多肽可以包括(a)SEQIDNO:l的氨基酸序列；(b)SEQIDNO:1序列的變體，所述變體具有與SEQIDNO:1的氨基酸序列至少50%的同一性并且具有IgG半胱氨酸蛋白酶活性；或者(c)上述任一個序列的片段，所述片段具有半胱氨酸蛋白酶活性。優(yōu)選地，所述多肽包含SEQIDNO:1的序列，或者由SEQIDNO:1的序列組成。所述多肽還可以包含信號序列。因此，所述IdeS多肽可以包含(a)SEQIDNO:2的氨基酸序列；(b)SEQIDNO:2序列的變體，所述變體具有與SEQIDNO:2的氨基酸序列至少50%的同一性并且具有IgG半胱氨酸蛋白酶活性；或者(c)上述任一個序列的片段，所述片段具有半胱氨酸蛋白酶活性。所述IdeS多肽可以由SEQIDNO:2中顯示的序列組成。所述變體多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的序列不同，但是保持了與IdeS相同的本質(zhì)特征或者基本功能。因此所述變體多肽可以表現(xiàn)出IgG半胱氨酸蛋白酶活性。通常，被認(rèn)為是變體的蛋白與SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的氨基酸序列具有大約50%、55%或65%的同一性，優(yōu)選具有至少70%、至少80%、至少90%的同一性，特別優(yōu)選具有至少95%、至少97%或至少99%的同一性。這種變體可以包括等位基因變體和所述蛋白質(zhì)序列的單氨基酸或氨基酸簇的缺失、置換或插入形成的變體，只要所得的肽保持IdeS的基本功能即可。SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的變體的同一性可以在SEQIDNO:1或SEQIDNO:2中顯示的序列的長度的至少50、至少75、至少100、至少150、至少200、至少250、至少275、至少300個或更長的連續(xù)氨基酸上測定，或者更優(yōu)選在SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的全長上測定。SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的氨基酸序列的變體優(yōu)選地包含SEQIDNO:1的Lys-55和/或Cys-65和/或His-233和/或Asp-255和/或Asp-257殘基(所述殘基分別對應(yīng)于SEQIDNO:2的Lys-84、Cys_94、His-262、Asp-284和Asp_286)。最優(yōu)選地，SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的變體包含SEQIDNO:1的Lys-55、Cys-65、His-233、Asp-255和Asp-257殘基中的每一個(所述殘基分別對應(yīng)于SEQIDNO:2的Lys_84、Cys-94、His-262、Asp-284和Asp-286)?？梢杂萌魏魏线m的算法計算氨基酸的同一性。例如UWGCG軟件包提供的BESTFIT程序可以被用于計算同源性(例如使用它的默認(rèn)設(shè)置)(Devereux"a/(1984)腸/e/'c爿c/")esearc/12，387-395)。例如AltschulS.F.(1993)JMolEvol36:290-300;Altschul，S,F""(1990)JMolBiol215:403-10中所述，可以使用PILEUP和BLAST算法計算同源性或者對序列進(jìn)行排隊(例如鑒定等價物或相應(yīng)的序列(通常使用它們的默認(rèn)設(shè)置)。進(jìn)行BLAST分析的軟件可以從美國NationalCenterforBiotechnologyInformation(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)公開獲得。所述算法涉及到首先鑒定高分值序列配對(HSP)，這個步驟是通過在查詢序列中鑒定長度為W的短字長，所述短字長當(dāng)與數(shù)據(jù)庫序列中相同長度的字對齊的時候或者匹配或者滿足某個正值的閾值T。T是指鄰近字值閾值(Altschula/，上文)。將這些初始鄰近字匹配作為種子啟動檢索，所述檢索是為發(fā)現(xiàn)它們中包含的HSP。在每條序列的兩個方向的每個方向進(jìn)行字匹配延伸，到達(dá)累積比對分值能夠增加的極限。在每個方向上的字匹配的延伸停止的條件是所述累積比對分值隨量X從其達(dá)到的最大值回落；由于加上一個或多個負(fù)分值的殘基比對，所述累積分值為0或小于0;或者達(dá)到任何一個序列的端點。所述BLAST算法的參數(shù)W、T和X決定比對的敏感度和速度。所述BLAST算法使用的默認(rèn)字長(W)為ll，BL0SUM62打分矩陣(見HenikoffandHenikoff(1992)/Voc.組/.h&USA89:10915-10919)比對(B)為50,期望(E)為IO,M=5，N=4，并且是進(jìn)行雙鏈比較。所述BLAST算法進(jìn)行兩個序列之間的相似性的統(tǒng)計分析；參見例如KarlinandAltschul(1993)戶roc.Jcad.Sc/.USA90:5873-5787。所述BLAST算法提供的一種相似性的量度是最小和概率(P(N))，所述最小和概率表示兩個多核苷酸之間或者兩個氨基酸序列之間出現(xiàn)隨機(jī)匹配的概率。例如，如果一個序列與另一個序列比較中的最小和概率小于大約1，優(yōu)選小于大約0.1，更優(yōu)選小于大約0.01,并且最優(yōu)選小于大約0.001，那么第一序列被認(rèn)為與第二序列相似。所述變異序列通常具有至少1、2、5、10、20、30、50個或更多突變的差異，所述突變可以是氨基酸的置換、刪除或插入。例如，可以制備1-50、2-30、3-20或5-10個氨基酸的置換、刪除或插入。所述被修飾的多肽通常保持了IgG特異性半胱氨酸蛋白酶的活性。所述置換優(yōu)選是保守置換，例如根據(jù)下表的置換。在第二列的同一格內(nèi)的氨基酸可以置換，優(yōu)選用在第三列的相同行中的氨基酸相互置換<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>也可能提供這樣一種IdeS的突變體，其中的催化區(qū)域被突變使所述蛋白失去半胱氨酸蛋白酶活性。這類突變體可以包含SEQIDN0:1的第65位(SEQIDNO:2的第94位)的催化性半胱氨酸殘基的置換或者缺失。例如，可以用甘氨酸置換半胱氨酸。本發(fā)明也涉及這樣的突變IdeS的片段的變體，但是所述片段的變體保持IdeS表現(xiàn)的半胱氨酸蛋白酶活性的功能。優(yōu)選地，所述多肽包含一個半胱氨酸殘基和一個組氨酸殘基，它們之間的間隔距離是通常存在于半胱氨酸蛋白酶中的典型間隔距離。例如，在SEQIDNO:l中，這兩個殘基的間隔距離約為130個氨基酸，這也是半胱氨酸蛋白酶中的典型間隔距離。在本發(fā)明中使用的IdeS的片段的長度通常至少為10個氨基酸，例如所述長度至少15、20、25、30、40、50或更多個氨基酸，所述長度可以多至IOO、150、200、250或300個氨基酸，只要所述片段保持IdeS的IgG半胱氨酸蛋白酶活性即可。優(yōu)選地，在本發(fā)明中使用的IdeS多肽片段包含SEQIDNO:1的Lys-55和/或Cys-65和/或His-233和/或Asp-255和/或Asp-257殘基(所述殘基分別對應(yīng)于SEQIDNO:2的Lys-84、Cys-94、His-262、Asp-284和Asp-286)。最優(yōu)選地，SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的變體包含SEQIDNO:1的Lys-55、Cys-65、His-233、Asp-255和Asp-257殘基中的每個殘基(所述殘基分別對應(yīng)于SEQIDNO:2的Lys-84、Cys-94、His-262、Asp-284和Asp-286)。本發(fā)明中使用的多肽可以被化學(xué)修飾，例如轉(zhuǎn)錄后修飾。例如，它們可以被糖基化、磷酸化或包含經(jīng)修飾的氨基酸殘基。它們的修飾可以是加入另外的組氨酸殘基以協(xié)助其純化，或者加入另外的信號序列以促進(jìn)其對細(xì)胞膜的插入。這些修飾的多肽也落入本文使用的術(shù)語"多肽"的范圍之內(nèi)。通常，根據(jù)本發(fā)明的多肽表現(xiàn)免疫球蛋白半胱氨酸蛋白酶活性，并且特別是IgG半胱氨酸蛋白酶活性。優(yōu)選地，所述多肽在鉸鏈區(qū)切割I(lǐng)gG,并且更特別地在重鏈的鉸鏈區(qū)切割。優(yōu)選地，切割的結(jié)果是產(chǎn)生IgG的Fc和Fab片段。優(yōu)選地，所述活性是特異針對IgG。所述半胱氨酸蛋白酶活性可以通過合適的測定方法確定。例如，可以在合適的溫度(如37。C)下將待測多肽與IgG—起孵育。然后可以對起始物質(zhì)和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行SDSPAGE分析，以確定是否存在期望的IgG的切割產(chǎn)物。通常，這種切割產(chǎn)物是一個31kDa的片段。通常，在這個第一步切割之后沒有IgG的進(jìn)一步降解?？梢詫λ銮懈町a(chǎn)物進(jìn)行N-末端的測序，以驗證切割是否發(fā)生在IgG的鉸鏈區(qū)。優(yōu)選地，所述N-末端序列包含SEQIDN0:8的序列?？梢酝ㄟ^抑制研究進(jìn)一步地表征所述多肽的半胱氨酸蛋白酶活性。優(yōu)選地，所述活性被肽^f生物Z-LVG-CHN2和/或硤乙酸抑制，這兩種物質(zhì)都是蛋白酶抑制劑。然而，所述活性通常不被E64抑制。所述多肽的半胱氨酸蛋白酶活性通常是IgG特異性的，也就是說所述多肽在能夠切割I(lǐng)gG的條件下與其他類型的免疫球蛋白一起培養(yǎng)時并不降解這些Ig,所述其它類型的Ig為IgM、IgA、IgD和IgE。所述IdeS多肽可以切割受試者待治療的受試者體內(nèi)存在的IgG分子。因此，如果所述受試者受試者是人，則所述IdeS多肽可以切割人IgG。在優(yōu)選的實施方案中，所述多肽能夠切割人、兔、小鼠或山羊的IgG。在本發(fā)明中使用的多肽可以基本上為分離的形式?？梢岳斫獾氖牵龆嚯目梢耘c栽體或稀釋劑混合，所述載體和稀釋劑并不干擾所述多肽的預(yù)期目的，并且所述多肽仍然可以被認(rèn)為基本上是分離的。在本發(fā)明中使用的多肽可以基本上為純化的形式，在這種情況下本發(fā)明的多肽可以構(gòu)成一種制劑中包含的多肽，所述制劑中包含多肽重量的多于50%(如多于80%、90%、95%或99%)為本發(fā)明的多肽。在本發(fā)明中使用的多肽可以從任何表達(dá)IdeS多肽的合適物種中分離。典型地，所述IdeS多肽是從合適的釀膿鏈球菌的IdeS表達(dá)林中分離。大量的技術(shù)可以被應(yīng)用于鑒定合適的物種和菌林。例如，可以首先檢測釀膿鏈球菌菌林是否存在2'&S基因。多核苷酸引物或探針的設(shè)計可以基于例如SEQIDN0:1、2或3。合適的引物的實例示于SEQIDN0:4、5、6和7。然后可以通過使用所述引物的PCR進(jìn)行所述/cfe;y基因的存在的驗證，或者通過使所述探針與釀膿鏈球菌菌林的基因組DNA雜交進(jìn)行驗證。釀膿鏈球菌菌林表達(dá)的活性IdeS可以通過測定培養(yǎng)上清液中的IgG半胱氨酸蛋白酶活性進(jìn)行識別。優(yōu)選地，將抑制劑E64加入到上清液中以抑制任何的SpeB半胱氨酸蛋白酶活性。至少有五個菌株表達(dá)活性IdeS:AP1、AP12、AP55、KTL3和SF370。優(yōu)選地，所述表達(dá)菌林選自AP1、AP12和AP55。從表達(dá)IdeS的釀膿鏈球菌菌抹的培養(yǎng)物或者從表達(dá)IdeS的其他細(xì)胞的培養(yǎng)物分離和純化IdeS的過程通?；贗gG半胱氨酸蛋白酶活性。優(yōu)選地，所述純化方法包括硫酸銨沉淀步驟和離子交換層析步驟。根據(jù)一種方法，通過逐漸加入增加量的硫酸銨使所述培養(yǎng)基分級沉淀。所述硫酸銨的量可以為10-80%。優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基用50。/。的辟u酸銨分級，并將所得的上清液進(jìn)一步用70%的為乾酸銨沉淀。然后可對沉淀的多肽進(jìn)行離子交換層析，例如通過使用MonoQ柱的FPLC進(jìn)行層析。可以對被洗脫的級分進(jìn)行IgG半胱氨酸蛋白酶活性檢測，并且可以合并具有峰值活性的級分。所述級分可以通過SDSPAGE被分析。例如，可以從所述SDSPAGE蛋白帶獲得一個N-末端序列。所述級分可以存儲于-20。C。在本發(fā)明中使用的多肽也可以被制備成這類分離的多肽的片段。而且，所述IdeS多肽也可以通過合成或者通過重組的方法制備。例如，重組IdeS多肽的產(chǎn)生可以通過用一種表達(dá)載體轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞，序列，然后培養(yǎng)所i細(xì)胞，提取并純化所述細(xì)胞產(chǎn):的IdeS多肽:、在本發(fā)明中使用的多肽的氨基酸序列可以被修飾，以使其包含非天然氨基酸或者提高所述化合物的穩(wěn)定性。如果所述多肽是通過合成的方法制備，那么這些氨基酸可以在制備的過程中被引入。也可以在合成產(chǎn)物或者重組產(chǎn)物形成之后修飾所述多肽。在本發(fā)明中使用的多肽也可以使用D-氨基酸制備。在這種情況下，所述氨基酸將會以從C到N的方向進(jìn)行反序列的連接。這在制備這類多肽的領(lǐng)域中是常規(guī)的技術(shù)。在本領(lǐng)域中已知大量的側(cè)鏈修飾方式，它們也可以用于對所述IdeS多肽的側(cè)鏈進(jìn)行修飾，只要所述多肽保持IgG半胱氨酸蛋白酶活性即可。多核苷酸編碼IdeS多肽或其變體的多核苷酸可以被用于治療或預(yù)防IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥。具體而言，所述多核苷酸可以包含下述序列或者由下述序列組成(a)SEQIDNO:3的編碼序列；(b)可以簡并為(a)中限定的序列的遺傳編碼的序列；(c)與(a)或(b)中限定的序列有至少60%的同一性、并且編碼具有IgG半胱氨酸蛋白酶活性的多肽的序列；或者(d)在(a)、(b)或(c)中限定的任何一個序列的片段，所述片段編碼具有IgG半胱氨酸蛋白酶活性的多肽。通常，所述多核苷酸為DNA。然而，所述多核苷酸也可以為RNA多核苷酸。所述多核苷酸可以為單鏈或者雙鏈，并且可以包含合成的或者修飾的核苷酸。本發(fā)明的多核苷酸可以典型地與SEQIDNO:3的編碼序列或者該編碼序列的互補(bǔ)序列雜交，所述雜交的水平顯著地高于背景的雜交水平。例如由于在DNA文庫中存在其他DNA，可能出現(xiàn)背景雜交。與其他多核苷酸和SEQIDNO:3的編碼序列之間相互作用的強(qiáng)度相比，本發(fā)明的多核苷酸與SEQIDNO:3的編碼序列或者SEQIDNO:3的編碼序列的互補(bǔ)序列之間的相互作用產(chǎn)生的信號水平通常要高至少IO倍，優(yōu)選地高至少100倍。所述相互作用的強(qiáng)度的檢測可以通過例如使用32P的放射性標(biāo)記探針進(jìn)行。通常，使用中等嚴(yán)格度到高嚴(yán)格度的條件可以獲得選擇性雜交。然而，這種雜交可以在本領(lǐng)域已知的任何合適的條件下進(jìn)行(見Sambrooks/，MolecularCloning:ALaboratoryManual,1989)。例如，如果需要高嚴(yán)格度，合適的條件包括在60°C-65°C下的0.1-0.2xSSC。如果需要較低的嚴(yán)格度，合適的條件包括在60。C下的2xSSC。可以通過核苷酸置換對SEQIDNO:3的編碼序列進(jìn)行修飾，例如進(jìn)行l(wèi)、2或3-10、25、50或IOO個核苷酸的置換。替代地或附加地，也可以通過一個或多個插入和/或缺失和/或通過在一端或兩端進(jìn)行延伸，而對SEQIDNO:3的多核普酸進(jìn)4亍<奮飾。也可以加入例如信號序列的其他序列。所述經(jīng)修飾的多核苷酸通常編碼具有IgG特異的半胱氨酸蛋白酶活性的多肽?？梢赃M(jìn)行簡并性置換，和/或可以進(jìn)行當(dāng)經(jīng)修飾的序列被翻譯的時候產(chǎn)生如上表所示的保守氨基酸替換的置換。能夠與SEQIDNO:3的DNA編碼序列的互補(bǔ)序列選擇性雜交的核苷酸序列通常在一段區(qū)域內(nèi)與SEQIDNO:3的編碼序列有至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或者至少99%的序列同一性，所述區(qū)域至少為20,優(yōu)選至少30，例如至少40、至少60、更優(yōu)選至少100個的連續(xù)的核苷酸，或者最優(yōu)選為SEQIDNO:3全長或者為編碼具有SEQIDNO:1中顯示的序列的多肽的SEQIDNO:3的長度。序列同一性可以通過任何合適的方法確定，例如上文描述的方法。上述的序列同一性和最小長度的任何組合都可以被用于限定本發(fā)明的多核苷酸，優(yōu)選更加嚴(yán)格的組合(如在更長的序列上具有更高的序列同一性)。因此，例如在20個核苷酸上，優(yōu)選在30個核芬酸上具有至少90%的序列同一性的多核苷酸可以構(gòu)成本發(fā)明的一個技術(shù)方案，在40個核苷酸上具有至少95%的序列同一性的多核苷酸也可以構(gòu)成本發(fā)明的一個技術(shù)方案。多核苷酸片段的長度優(yōu)選為至少10，優(yōu)選為至少15或至少20，例如至少25,至少30或至少40個核苷酸。通常，它們的長度達(dá)到40、50、60、70、100或者150個核苷酸。片段可以長于150個核苷酸，例如其長度可達(dá)到200、300、400、500、600、700、800、900或1000個核普酸，或者甚至其長度比SEQIDNO:3的編碼序列僅少幾個核苷酸，例如少五個、十個或十五個核苦酸。在本發(fā)明中使用的多核苷酸可以通過重組、合成或者本領(lǐng)域技術(shù)人員可獲得的任何方法產(chǎn)生。也可以通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)克隆所述多核苷酸。通常，所述多核香酸以分離的形式和/或純化的形式提供。通常，短的多核苷酸由合成獲得，包括對目標(biāo)核酸序列進(jìn)行一次一個核苷酸的分步合成。使用自動化技術(shù)完成所述過程的技術(shù)在本領(lǐng)域中是容易獲得的。較長的多核苷酸通常使用重組的手段產(chǎn)生，例如使用PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))克隆技術(shù)。這包括設(shè)計針對克隆目標(biāo)2Ves基因區(qū)域的一對引物(如大約15-30個核苷酸)，將所述引物與從細(xì)菌細(xì)胞分離得到的DNA接觸，在產(chǎn)生目標(biāo)區(qū)域擴(kuò)增的條件下進(jìn)行多聚酶鏈反應(yīng)，分離被擴(kuò)增的片說明書第6/26頁和基因組文庫獲得。cDNA文庫的制備方法可參照"MolecularCloning,ALaboratoryManual2nded.，，(ColdSpringHarborPress(1989))。另夕卜，也可以使用市售的cDNA文庫和基因組文庫。上述雜交中，嚴(yán)才各條件例如有l(wèi)xSSC-2xSSC、0.1%-0.5%SDS和42。C-68。C的條件，更具體地說，有在60-68t:下進(jìn)行30分鐘或以上的預(yù)雜交，然后在2xSSC、0.1%SDS中、在室溫下進(jìn)行4-6次5-15分鐘的洗滌的條件。雜交方法的詳細(xì)順序可參照"MolecularCloning,ALaboratoryManual2nded"(ColdSpringHarborPress(1989);特別是Section9.47-9.58)等。也可以使用與SEQIDNo.2或3具有50%或以上、60%或以上、70%或以上、80%或以上、90%或以上、95%或以上、98%或以上或99%或以上的同源性、且具有E1A和E1B的活性的核普酸的堿基序列。IRES(內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點)是小RNA病毒科特異性的蛋白質(zhì)合成起始信號，具有與18S核糖體RNA的3'末端互補(bǔ)的序列，因此可發(fā)揮核糖體結(jié)合位點的作用。來自小RNA病毒科的病毒的mRNA經(jīng)由該序列被翻譯。通過IRES序列進(jìn)行的翻譯效率高，即使從mRNA的中途也可以不依賴帽(cap)結(jié)構(gòu)地進(jìn)行蛋白質(zhì)合成。因此，本病毒可以通過人端粒酶的啟動子獨立地翻譯E1A基因和位于IRES序列下游的E1B基因兩者。使用IRES,則端粒酶的啟動子的表達(dá)調(diào)控獨立地與E1A基因、E1B基因相關(guān)，與通過端粒酶的啟動子控制E1A基因或E1B基因其中一方的情況相比，可以將病毒的增殖更嚴(yán)格地限定在具有端粒酶活性的細(xì)胞中。IRES序列如SEQIDNo.4所示。IRES除SEQIDNo.4所示的堿基序列之外，還包含在嚴(yán)才各條件下與具有同含SEQIDNo.4的DNA互補(bǔ)的堿基序列的DNA雜交、且編碼具有IRES活性的蛋白質(zhì)的堿基序列。上述堿基序列可如下獲得以含有SEQIDNo.4所示堿基序列的多核苷酸或其片段作為探針，通過集落雜交、噬菌斑雜交、DNA印跡等公知的雜交方法，由cDNA文庫和基因組文庫獲得。cDNA文庫的制備方法可參照"MolecularCloning，ALaboratoryManual2nded."(ColdSpringHarborPress(1989》。另夕卜，也可以使用市售的cDNA文庫和基因組文庫。上述雜交中，嚴(yán)才各條件例如有l(wèi)xSSC-2xSSC、0.1%-0.5%SDS和42。C-68。C的條件，更具體地說，有在60-68。C下進(jìn)行30分鐘或以上的預(yù)雜交，然后在2xSSC、0.1%SDS中、在室溫下進(jìn)行4-6次5-15分鐘的洗滌的條件。雜交方法的詳細(xì)順序9動子。特別優(yōu)選組織特異性啟動子。也可以使用病毒啟動子，所述病毒啟動子例如Moloney鼠白血病病毒長末端重復(fù)啟動子(顧LVLTR)、勞斯肉瘤病毒(RSV)LTR啟動子、SV40啟動子、人巨細(xì)胞包含體病毒(CMV)IE啟動子、腺病毒、HSV啟動子(例如HSVIE啟動子)或HPV啟動子，特別是HPV上游調(diào)控區(qū)域(URR)。病毒啟動子在本領(lǐng)域中是容易獲得的。所述載體可以進(jìn)一步在所述多核苷酸兩側(cè)包含多核苷酸序列，使得所述序列包含與真核生物基因組序列特別是哺乳動物基因組序列同源的序列。這使得可以通過同源重組將本發(fā)明的多核苷酸引入到真核細(xì)胞的基因組中。具體而言，可以使用在表達(dá)盒兩側(cè)含有病毒序列的的質(zhì)粒栽體來制備病毒載體，所述病毒載體適于將本發(fā)明的多核苷酸送遞至哺乳動物細(xì)胞。合適的病毒載體的其他實例包括單純性皰滲病毒載體和逆轉(zhuǎn)錄病毒，包括慢病毒、腺病毒、腺伴隨病毒和HPV病毒。使用這些病毒的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。例如，可以用逆轉(zhuǎn)錄病毒栽體多核苷酸穩(wěn)定地整合進(jìn)宿主基因組中。與此相反的是復(fù)制缺陷腺病毒載體仍然保持游離并因此使得可以瞬時表達(dá)。疾病和病癥IdeS肽或多核苷酸可以被應(yīng)用于治療或預(yù)防由IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥。致病的IgG抗體與許多不同疾病和病癥的發(fā)生有關(guān)是本領(lǐng)域熟知的。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)可以使用IdeS多肽或多核苷酸抑制致病的IgG抗體在這些疾病中的作用。所述疾病或病癥可以是自身免疫性疾病。所述自身免疫性疾病包括阿狄森氏病(Addison，sdisease)、斑殼、強(qiáng)直性脊推炎、抗磷脂綜合征、再生障礙性貧血、自身免疫性胃炎、自身免疫性失聰、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性甲狀旁腺機(jī)能減退、自身免疫性垂體炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、自身免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合征、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性睪丸炎、自身免疫性多種內(nèi)分泌病、貝切特氏病(Be^ie1/sdisease)、大皰性類天皰癡、心肌病、慢性炎癥脫髓鞘性多神經(jīng)病、丘-施氏綜合征(Churg-Strausssyndrome)、腹部疾病、克羅恩病(Crohn'sdisease)、CREST綜合征、德戈斯病(Degosdisease)、后天性大皰性表皮松解、原發(fā)性混合冷凝球蛋白血栓、巨細(xì)胞動脈炎、腎小球腎炎、古德帕斯徹綜合征(Goodpasture'ssyndrome)、格雷夫斯病(Graves'disease)、吉-巴氏綜合征(Guillan-Barresyndrome)、橋本曱狀腺炎(Hashimoto'sthyroiditis)、特發(fā)性血小板減少性紫癜、炎性腸病、川崎氏病(Kawasaki'sdisease)、美尼爾綜合征(Meniere'ssyndrome)、混合性結(jié)締組織病、莫倫潰瘍(Mooren"ulcer)、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、落葉性天皰瘡、尋常天皰瘡、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多腺性自身免疫綜合征類型l(PAS-l)、多腺性自身免疫綜合征類型2(PAS-2)、多腺性自身免疫綜合征類型3(PAS-3)、多發(fā)性肌炎/皮肌炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、牛皮癬、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、雷諾綜合征(Raynaud'ssyndrome)、萊特爾綜合征(Reiter'ssyndrome)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肉狀瘤病、膠原沉著病、干燥綜合征(Sj6gren'ssyndrome)、亞急性甲狀腺炎、交感性眼炎、全身性紅斑狼瘡、高安氏動脈炎(Takayasu'sarteritis),1型糖尿病、白癜風(fēng)、伏格特-小柳-原田三氏綜合征(Vogt-Koyanagi-Haradadisease)或韋格納肉芽腫病(Wegener'sgranulomatosis),優(yōu)選地，所述自身免疫疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)。所述疾病或病癥可以是哮喘。所述嗜喘可以是急性哞喘或慢性哮喘。IgG可以激活經(jīng)典的補(bǔ)體系統(tǒng)途徑。因此，IdeS多肽和多核苦酸可以被應(yīng)用于治療補(bǔ)體激活對患者有害的疾病和病癥。例如，所述IdeS多肽和多核苷酸可以被應(yīng)用于治療移植派生的紊亂，所述紊亂例如移植進(jìn)行的組5織或器官的移植可能會導(dǎo)致出現(xiàn)所述移植派生的紊亂。'"IdeS多肽和多核苷酸也可以凈皮應(yīng)用于手術(shù)后治療中，例如4皮應(yīng)用于治療經(jīng)心臟旁路手術(shù)的患者。而且，IdeS多肽和多核苷酸可以凈皮應(yīng)用于后天性血友病的治療，即清除血友病患者體內(nèi)的IgG，所述血友病患者具有抗凝血因子的自身抗體。受試者通常是哺乳動物受試者，所述哺乳動物受試者例如小鼠、大鼠或靈長類動物(如狨猴或猴子)。所述受試者可以是人或者非人動物。如果所述受試者是如小鼠、大鼠或靈長類的實驗動物，所述動物可以被處理以誘發(fā)由致病性IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥。例如，可以使用vwesionNandakumaretal.(Am.J.Pathol.163(5):1827-1837,2003)描述的小鼠抗-CII抗體誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CAIA)模型或者在實施例中描述的所述模型的改進(jìn)模型。治療和預(yù)防本發(fā)明提供了IdeS多肽和多核苷酸用于由致病性IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的治療或預(yù)防的用途。治療可以是治療性的或預(yù)防性的?？梢詫⑺鯥deS多肽或多核苷酸給予一個個體以阻止所述疾病或病癥的一種或多種癥狀的發(fā)生。在這個實施方案中，所述受試者可以沒有癥狀。所述受試者可能是所述疾病的遺傳易感的。將預(yù)防有效量的所述多肽或多核普酸給予這樣一個個體。所述預(yù)防有效量是可以阻止所述疾病或病癥的一種或多種癥狀的發(fā)生的量。所述IdeS多肽或多核苷酸的一種預(yù)防有效量是有效地緩解一種疾病或病癥的一種或多種癥狀發(fā)生的量。優(yōu)選地，所述被治療的個體是人?？梢酝ㄟ^任何合適的途徑將所述IdeS多肽或多核苷酸給予所述受試者。所述多肽或多核苷酸的給藥方法可以通過腸內(nèi)或腸外途徑，例如通過口腔的、面頰的、直腸的、肺的、靜脈內(nèi)的、動#內(nèi)的、肌內(nèi)的、腹腔內(nèi)的、關(guān)節(jié)內(nèi)的、局部的或其他合適的給藥途徑?？梢砸詫μ囟ǖ奈稽c進(jìn)行靶治療的方式將所述IdeS多肽或多核苷酸給予所述受試者。例如，可以將IdeS多肽直接給予移植器官的位點?？梢跃植孔⑸渌鯥deS多肽，例如在一個或多個關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)內(nèi)注射。在所述關(guān)節(jié)進(jìn)行IdeS的局部給藥特別優(yōu)選地被應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的預(yù)防或治療。所述IdeS多肽可以與能特異性結(jié)合軟骨的試劑聯(lián)合使用。對于IdeS多核苷酸而言，編碼所述IdeS多肽的表達(dá)載體可以用于在特定的組織中直接表達(dá)IdeS，例如通過使用組織特異的啟動子或RNAi進(jìn)行。本文提及的任何多肽和多核苷酸的制劑將依賴于例如所述多肽或多核苷酸的性質(zhì)或被治療的病癥的因素?？梢砸愿鞣N劑量形式進(jìn)行所述多肽或多核苷酸的給藥。所述各種給藥途徑可以通過口服(如為片劑、含片、錠劑、水劑或油懸液、可分散粉末或顆粒)、腸胃外、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、胸骨內(nèi)、皮膚或通過輸注技術(shù)。所述多肽或多核苷酸也可以作為栓劑給藥。內(nèi)科醫(yī)師可以為每個特定的患者確定所需要的給藥途徑。通常，所述多肽或多核苷酸與一種可藥用的栽體或稀釋劑配伍使用，并且這可以使用藥學(xué)領(lǐng)域中常規(guī)的方法進(jìn)行。所述可藥用載體或稀釋劑可以是例如一種等滲溶液。例如，固體口服形式除所述活性化合物之外還可以包括稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；潤滑劑，例如硅酸酐、云母、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鉀和/或聚乙二醇；結(jié)合劑；例如淀粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧曱基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；分解劑，例如淀粉、褐藻酸、藻酸鹽或淀粉羥乙酸鈉；沸騰復(fù)合劑；染料；增甜劑；濕潤劑，例如卵磷脂、多山醇酯、月桂硫酸鹽；和通常的藥學(xué)制劑中使用的無毒和無藥理活性的物質(zhì)?？梢砸砸阎姆椒ㄟM(jìn)行這些藥物制劑的加工，所述已知的方法例如通過混合、碾碎、壓片、包糖衣或薄膜包衣等工藝的方式。用于口服給藥的液體分散物可以是糖漿劑、乳劑和懸浮液。所述糖漿劑可以包含例如蔗糖或者與甘油和/或甘露醇和/或山梨醇聯(lián)合使用的蔗糖，并作為載體。懸浮液和乳劑可以包含例如天然樹膠、瓊脂、海藻酸鈉、果膠、曱基纖維素、羧曱基纖維素或聚乙烯醇，并作為載體。用于肌肉注射的所述懸浮液或溶液除了所述活性化合物外還可以包含可藥用的栽體，例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二醇例如丙二醇，并且如果需要可以包含合適量的鹽酸利多卡因。用于靜脈注射或輸注的溶液可以包含例如無菌水并作為載體，或者優(yōu)選地它們可以是無菌水性等滲鹽溶液的形式。對于栓劑，可以包括傳統(tǒng)的結(jié)合劑和栽體，例如聚亞烷基二醇或甘油三酸酯；這種栓劑可以由包含0.5%-10%(優(yōu)選1%-2%)范圍內(nèi)的活性成分的混合物形成。口服制劑中包含那些常用的賦形劑，所述賦形劑例如藥學(xué)級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等等。這些組合物形成溶液、懸浮液、片劑、丸劑、膠嚢、緩釋制劑或粉末的形式并且包含10%-95%(優(yōu)選25%-70%)的活性成分。如果所述藥物組合物為凍干的形式，則在給藥之前可以將所述凍干物質(zhì)重溶，例如重溶為懸浮液。重溶優(yōu)選地在緩沖液中進(jìn)行。用于患者口服給藥的膠嚢、片劑和丸劑可以以腸溶包衣的形式提供，所述腸溶包衣包括例如Eudragit"S"、Eudragit"L"、乙酸纖維素、醋酞纖維素或羥丙基曱基纖維素。也可以使用適合例如經(jīng)皮給藥的無針注射的藥物組合物。可以給予治療有效量的多肽或多核苷酸。可以通過各種參數(shù)確定所述劑量，特別是根據(jù)所使用的多肽或多核苷酸；待治療的患者的年齡、體重和狀況；給藥途徑；和所需的治療方案。而且，內(nèi)科醫(yī)師可以針對任何特定患者確定所需的給藥途徑和劑量。4艮據(jù)特異性抑制劑的活性、待治療的受試者的年齡、體重和狀況、疾病的類型和嚴(yán)重程度和給藥的頻率和途徑，典型的日劑量為按體重約0.1至50mg/kg，優(yōu)選為約0.lmg/kg至10mg/kg。優(yōu)選地，日劑量水平為5mg至2g。上文描述的IdeS核苷酸序列和包含所述序列的表達(dá)載體也可以被用作如上所述的藥物制劑。優(yōu)選地，如RNA或DNA的核酸序列(特別是DM)以表達(dá)載體的形式被提供，所述表達(dá)載體可以在被治療的個體的細(xì)胞中表達(dá)。疫苗(vaccine)可以包含棵露核苷酸序列或者與陽離子脂、聚合物或靶向系統(tǒng)一起使用?？梢酝ㄟ^任何可用的技術(shù)送遞所述疫苗。例如，可以通過針注射送遞所述核酸，優(yōu)選經(jīng)皮內(nèi)注射、皮下注射或者肌肉內(nèi)注射?；蛘撸梢允褂美珙w粒介導(dǎo)的基因送遞的核酸送遞裝置將所述核酸直接經(jīng)皮膚進(jìn)行送遞?？梢詫⑺龊怂峋植拷o予皮膚上或者給予粘膜表面，例如通過鼻內(nèi)、口腔、陰道內(nèi)或直腸內(nèi)給藥。幾種已知的轉(zhuǎn)染技術(shù)可以增強(qiáng)核酸構(gòu)建體的吸收，所述技術(shù)例如包含使用轉(zhuǎn)染劑的技術(shù)。這些轉(zhuǎn)染劑的例子包括陽離子試劑，例如磷酸鈣和DEAE-葡聚糖，以及l(fā)ipofectant，例如1ipofectam和transfectam?？梢愿淖儽唤o予的核酸的劑量。通常，給予的核酸的劑量范圍是lpg至lmg，優(yōu)選地，對于顆粒介導(dǎo)的基因送遞為lpg至10pg核酸，并且對于其他途徑為lOpg至lmg。本發(fā)明也提供一種處理離體血液的方法，所述血液來自于患有有致病性IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的患者，所述方法包括4吏所述血液與IdeS多肽相接觸。因此，IdeS可以4皮用于血液的體外處理。所述IdeS可以被用于處理血液的一個或多個組分，所述組分例如血漿或血清。本文所述的離體方法可以用于已經(jīng)脫離患者身體的血液。在與IdeS多肽接觸以后，所述血液或血液產(chǎn)物可以任選地4皮輸回所述患者體內(nèi)。用下面的實施例舉例說明本發(fā)明實施例l:IdeS對關(guān)節(jié)炎的誘發(fā)和發(fā)展的作用使用針對n型膠原(CII)的小鼠IgG2a抗體特別設(shè)計了類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的動物模型來誘發(fā)RA,該動物模型是從Nandakumarefa入(2003)已知的抗-CII抗體誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CAIA)模型變化而來的動物模型。對幾組雄性B10.RIH小鼠經(jīng)靜脈注射9mg的Cn特異性IgG2a單克隆抗體混合物，所述混合物包含的M287和CnCl分別與J1和C1'表位結(jié)合。在抗-CII抗體轉(zhuǎn)移3小時之前(n-5)或者3小時之后(11=5)對小鼠注射IdeS(0.950mg/每只小鼠/i.v.)的PBS溶液。對照小鼠不作處理(n=6)。在第5天，對所有的小鼠注射LPS(25pg/小鼠/i.p.)。在15天中每天觀察小鼠的關(guān)節(jié)炎發(fā)病情況。關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率(a)和嚴(yán)重程度(b)示于圖1。觀察所述動物的存活率和總體健康情況。在實驗過程中沒有小鼠死亡，并且在接受IdeS處理之后沒有顯現(xiàn)任何副作用。在所述對照組中除了發(fā)生關(guān)節(jié)炎之外，所有小鼠均保持健康。因此，所述結(jié)果表明IdeS處理沒有明顯的毒性效應(yīng)，并且可以完全地阻止關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。對所述小鼠的血清進(jìn)行分析確定抗-cII抗體的水平。對所述小鼠的爪進(jìn)行組織學(xué)分析。所述組織學(xué)分析證實了臨床評分?jǐn)?shù)據(jù)。圖2顯示關(guān)節(jié)區(qū)域和所述關(guān)節(jié)周圍的浸潤組織的組織學(xué)情況。在對照組小鼠(a和c)中，有活性的炎性血管翳組織侵蝕骨頭和軟骨。在所述經(jīng)處理的小鼠(b和d)中，所述關(guān)節(jié)是正常的。實施例2:確定IdeS的有效劑量為了誘導(dǎo)CAIA,使用9mg的兩種單克隆抗體的混合物(i)檢測C11表位的CIICl和CIIC1的IgG2a同種型；(ii)檢測Jl表位的M2139和M2139的IgG2b同種型。因此，所述實驗與實施例1中進(jìn)行的實驗的區(qū)別在于使用了不同的J1特異性抗體。所述M2139抗體與實施例1中使用的M287對Jl表位有相似的親和力。在所述抗體混合物被注射到四個月大的雄性B10.Rm小鼠3個小時之后，用三種不同劑量(IO，100和1000jig)的IdeS處理所述小鼠。未處理的對照組未接受IdeS(0pg)。同實施例1一樣，在注射所述抗體混合物后的第5天，使用LPS以增加關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率。關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率(a)和嚴(yán)重程度(b)在圖3中顯示。下面的表顯示在第IO天關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率。第IO天:未處理(n關(guān)節(jié)炎/n總體)6/75/51/52/5IdeS(1000網(wǎng))IdeS(100|ig):IdeS(10pg):所述實驗進(jìn)行到第19天并且在第19天觀察到實質(zhì)上相同的結(jié)果(見圖2)。從這些結(jié)果可以得出結(jié)論a)所述IdeS處理很可能是高效的，因為最低劑量也有很明顯的效果。所述有效劑量低于100^g。使用10pg的劑量是有效果的，但是使用100jig可以達(dá)到更佳的效果。b)最高劑量沒有效果可能的解釋是由于在所述IdeS制備過程中存在的內(nèi)毒素污染所致。實施例3:使用IdeS對關(guān)節(jié)炎的局部治療用9mg的產(chǎn)生關(guān)節(jié)炎的抗-CnIgG2a單克隆抗體混合物經(jīng)靜脈注射到B10.RIH小鼠組的小鼠。所述小鼠用lOOjig的IdeS進(jìn)行全身的(靜脈注射)(n-4)或局部的(左爪或右爪)處理。所述接受局部處理的小鼠在抗-CII抗體轉(zhuǎn)移后的3小時(n-6)或者在抗-Cn抗體轉(zhuǎn)移的3小時和24小時(n-6)被給予IdeS。關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率(a)和嚴(yán)重程度(b)在圖4中顯示。從這些結(jié)杲可以得出結(jié)論，IdeS具有局部效果并且可能降解已經(jīng)結(jié)合到軟骨上的抗體。權(quán)利要求1.IdeS多肽或者編碼IdeS多肽的多核苷酸在制備用于治療或預(yù)防由IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的藥物中的用途。2.根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述IdeS多肽包括(a)SEQIDNO:l的氨基酸序列；(b)SEQIDNO:1序列的變體，所述變體具有與SEQIDNO:1的氨基酸序列至少50%的同一性并且具有IgG半胱氨酸蛋白酶活性；或者(c)上述任一序列的片段，所述片段具有半胱氨酸蛋白酶活性。3.根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述多肽由SEQIDNO:1中所示的序列組成。4.根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述多核苷酸包括(a)SEQIDNO:3的編碼序列；(b)可以簡并為(a)中限定序列的遺傳密碼的序列；(c)與(a)或(b)中限定的序列有至少60%的同一性的序列，所述序列編碼具有IgG半胱氨酸蛋白酶活性的多肽；或者(d)在(a)、(b)或(c)中限定的任一序列的片段，所述片段編碼具有IgG半胱氨酸蛋白酶活性的多肽。5.根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中所述多核苷酸由SEQIDNO:3中所示的核酸序列組成。6.根據(jù)上述權(quán)利要求任一項的用途，其中所述疾病或病癥是自身免疫性疾病、移植排斥、手術(shù)后治療和后天性血友病。7.根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述自身免疫性疾病為阿狄森氏病(Addison，sdisease)、斑殼、強(qiáng)直性脊推炎、抗磷脂綜合征、再生障礙性貧血、自身免疫性胃炎、自身免疫性失聰、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性曱狀旁腺機(jī)能減退、自身免疫性垂體炎、自身免疫性內(nèi)耳疾病、自身免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合征、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性睪丸炎、自身免疫性多種內(nèi)分泌病、貝赫切特綜合征(Bethel/sdisease)、大皰性類天皰痤、心肌病、慢性炎癥脫髓鞘性多神經(jīng)病、丘-施氏綜合征(Churg-Strausssyndrome)、腹部疾病、克羅恩病(Crohn'sdisease)、CREST綜合征、德戈斯病(Degosdisease)、后天性大皰性表皮松解、原發(fā)性混合冷凝球蛋白血栓、巨細(xì)胞動脈炎、腎小球腎炎、古^l中白斯徹綜合征(Goodpasture'ssyndrome)、格雷夫斯病(Graves'disease)、吉-巴氏綜合征(Gui1lan-Barresyndrome)、橋本曱狀腺炎(Hashimoto'sthyroiditis)、特發(fā)性血小板減少性紫癜、炎性腸病、川崎氏病(Kawasaki'sdisease)、美尼爾綜合征(Meniere'ssyndrome)、混合性結(jié)締組織病、莫倫潰瘍(Mooren'sulcer)、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、落葉性天皰瘡、尋常天皰疳、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多腺性自身免疫綜合征類型l(PAS-l)、多腺性自身免疫綜合征類型2(PAS-2)、多腺性自身免疫綜合征類型3(PAS-3)、多發(fā)性肌炎/皮肌炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、牛皮癉、牛皮褲性關(guān)節(jié)炎、雷i若綜合征(Raynaud'ssyndrome),萊特爾綜合征(Reiter'ssyndrome)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肉狀瘤病、膠原沉著病、干燥綜合征(Sj6gren、syndrome)、亞急性甲狀腺炎、交感性眼炎、全身性紅斑狼瘡、高安氏動脈炎(Takayasu'sarteritis)、1型糖尿病、白癜風(fēng)、伏格特-小柳-原田三氏綜合征(Vogt-Koyanagi-Ha^adadisease)或韋格納肉芽腫病(Wegener'sgranulomatosis)。8.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中所述自身免疫疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。9.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中所述自身免疫疾病是全身性紅斑狼瘡。10.根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述移植排斥是同種異體移植物排斥或異種移植物排斥。11.一種治療或預(yù)防需要的受試者的由IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，所述方法包括給予所述受試者治療有效量的IdeS多肽或者編碼IdeS多肽的多核苷酸。12.—種處理離體血液的方法，所述血液取自于患有由IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的患者，所述方法包括^f吏所述血液與一個IdeS多肽接觸。13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，所述血液在與所述IdeS多肽接觸之后被輸回到所述患者體內(nèi)。全文摘要本發(fā)明提供了IdeS多肽或者編碼IdeS多肽的多核苷酸在制備用于治療或預(yù)防由IgG抗體介導(dǎo)的疾病或病癥的藥物中的用途。文檔編號A61P37/00GK101232900SQ200680028126公開日2008年7月30日申請日期2006年6月8日優(yōu)先權(quán)日2005年6月9日發(fā)明者K·S·南達(dá)庫瑪,L·博喬克,R·霍默達(dá)申請人:漢莎醫(yī)藥有限公司