Kir結(jié)合劑和使用其的方法

專利名稱：：Kir結(jié)合劑和使用其的方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及能夠通過減少抑制性KIR信號轉(zhuǎn)導來增進NK介導的靶細胞殺傷的試劑和方法。此外，本發(fā)明涉及這些試劑用于制備藥物系。
背景技術：
：天然殺傷(NK)細胞是參與免疫和宿主免疫監(jiān)督系統(tǒng)的淋巴細胞的亞群。NK細胞是在骨髓中從淋巴祖細胞發(fā)育而來的單核細胞，且形態(tài)學特征和生物學性質(zhì)一般包括簇決定子(clusterdeterminant)(CDs)CD16、CD56和/或CD57的表達；在細胞表面缺乏oc/P或y/5TCR復合物；結(jié)合和殺死不能表達"自身"主要組織相容性復合物(MHC)/人白細胞抗原(HLA)蛋白的靶細胞的能力；和殺死表達能激活NK受體的配體的腫瘤細胞或其他疾病細胞的能力。NH細胞的特征在于其結(jié)合和殺死幾種類型的腫瘤細胞而無需預先免疫或激活的能力。NK細胞也可釋放對免疫系統(tǒng)產(chǎn)生調(diào)控效應的可溶性蛋白和細胞因子；和可進行多輪細胞分裂和產(chǎn)生子細胞，所述子細胞具有和親本細胞相似的生物學特征。被干擾素和/或細胞因子激活后，NK細胞通過要求NK細胞和耙細胞之間直接的、機械接觸的機制介導腫瘤細胞和和感染有細胞內(nèi)病原體的細胞的裂解。靶細胞的裂解包括細胞毒性顆粒從NK細胞釋放至結(jié)合的靶的表面，和效應蛋白例如穿過靶質(zhì)膜和誘導凋亡或編程性細胞死亡的穿孔蛋白和粒酶B的釋放。正常健康的細胞受到保護而免受NK細胞的裂解?；谄渖飳W特性，在本領域已提出了各種基于NK細胞的調(diào)節(jié)的治療和疫苗接種策略。然而，NK細胞的活性受到包括刺激和抑制信號的復合機制的調(diào)控。簡而言之，NK細胞的裂解活性受各種細胞表面受體調(diào)控，所述受體通過與靶細胞上的配體相互作用轉(zhuǎn)導正或負細胞內(nèi)信號。通過這些受體傳導的正和負信號之間的平衡確定靼細胞是否被NK細胞裂解(殺死)。NK細胞刺激性信號可由天然毒性受體(NCR)例如NKp30、NKp44和NKp46;和CD94/NKG2C受體、NKG2D受體、某些激活殺傷細胞Ig樣受體(KIR)和其他激活M受體介導(Lanier,AnnualReviewofImmunology2005;23:225-74)。NK細胞的抑制性信號可由受體如識別主要組織相容性復合物(MHC)I類分子的Ly49、CD94/NKG2A和某些抑制性KIR介導(Karre等人，Nature1986;319:675-8;Ohl6n等人，Science1989;246:666-8)。這些抑制性受體結(jié)合存在于其他細胞上的MHCI類分子(包括HLAI類)的多態(tài)性決定子并抑制NK細胞介導的裂解。已在人和非人靈長類動物中表征了KIR，其是存在于某些淋巴細胞亞群(包括NK細胞和一些T細胞)上的多態(tài)性1型跨膜分子。KIR與MHCI類分子的oc1和2結(jié)構(gòu)域中的決定子相互作用且，如上所述，不同的KIR對于NK細胞是刺激性的或是抑制性的。KIR的命名法基于細胞外結(jié)構(gòu)域的數(shù)目(分別具有兩個和三個細胞外Ig結(jié)構(gòu)域的KIR2D和KIR3D)和胞質(zhì)尾區(qū)是長的(KIR2DL或KIR3DL)還是短的(KIR2DS或KIR3DS)。在存在于單個個體中的NK群體內(nèi)，給定的KIR的存在或不存在的情況在NK細胞之間是可變化的。在人中，也存在相對高水平的KIR基因的多態(tài)性，某些KIR基因存在于一些但非所有的個體中。NK細胞上的KIR等位基因的表達是受到隨機調(diào)控的，意思是，在給定的個體中，依賴于個體的基因型，給定的淋巴細胞可表達l、2或更多種不同的KIR。單個個體的NK細胞通常表達不同的KIR組合，從而提供了具有不同的對于MHCI類分子的特異性的NK細胞庫(repertoire)。某些KIR基因產(chǎn)物，當與恰當?shù)呐潴w結(jié)合時，引起淋巴細胞活性的刺激。激活性KIR都具有短胞質(zhì)尾區(qū)和帶電荷的跨膜殘基，所述帶正電荷的跨膜殘基與具有基于免疫受體酪氨酸的激活基序(ITAM)的銜接分子結(jié)合，所述銜接分子傳導刺激信號給NK細胞。相反地，抑制性KIR具有包含免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)的長胞質(zhì)尾區(qū)，所述胞質(zhì)尾區(qū)在與其MHCI類配體結(jié)合后將抑制性信號轉(zhuǎn)導至NK細胞。已報導，將NK細胞與表達HLA-C的昆蟲細胞混合足以誘導KIR的群集以及KIR和SHP-1的磷酸化(Faure等人，JImmunol2003;170:6107-6114)。也已才艮導KIR2DL1在Co(2+)存在的情況下的二聚化以及用Ala取代氨基末端His消除了KIR2DL1結(jié)合Co(2+)的能力(Fan等人，J.Biol.Chem.2000.98:1734)。已知的抑制性KIR包括KIR2DL和KIR3DL亞家族的成員。具有兩個Ig結(jié)構(gòu)域的抑制性KIR(KIR2DL)識別HLA-C同種異型(allotype):KIR2DL2(以前稱為p58.2)和緊密相關的等位基因產(chǎn)物KIR2DL3都識別"組1"HLA-C同種異型(包括HLA-Cwl、-3、-7和-8)，然而KIR2DL1(p58.l)識別"組2"HLA-C同種異型(例如HLA-Cw2、-4、-5和-6)。被KIR2DL1識別是由在HLA-C等位基因的位點80上存在Lys殘基決定的。KIR2DL2和KIR2DL3的識別由在HLA-C的位置80上存在Asn殘基決定的。重要的是，絕大部分HLA-C等位基因在位置80上具有Asn或Lys殘基。因此，KIR2DL1、-2和-3—起識別幾乎所有在人中發(fā)現(xiàn)的HLA-C同種異型。一種具有3個Ig結(jié)構(gòu)域的KIR即KIR3DL1(p70)識別由HLA-Bw4等位基因共有的表位。最后，KIR3DL2(pl40)(其作為具有3個Ig結(jié)構(gòu)域的分子的二硫鍵合的同型二聚體組成型地存在)識別HLA-A3和-All。盡管多個抑制性KIR和/或其他MHCI類特異性抑制性受體(Moretta等人，EurJI瞧nogenet.1997;24(6):455-68;Valiante等人，ImmunolRev1997;155:155-64;Lanier,AnnuRevImmunol1998;16:359-93)可由NK細胞共表達，但在任何給定的個體NK庫中，存在只表達單種KIR的細胞，所述細胞從而只被特定的MHCI類等位基因(或?qū)儆谙嗤腗HCI類同種異型的組的等位基因)抑制。人MHCI類分子通常稱為人組織相容性抗原(HLA)I類。與其靶發(fā)生KIR-配體錯配的NK細胞群體或克隆，即表達不識別宿主的任何HLA分子的KIR的那些，已顯示在白血病患者中在同種異體骨髄移植后介導有效的、救命的抗腫瘤反應(Ruggeri等人，Science2002，295:2097-2100)。背后的機制據(jù)認為是HLA錯配的造血移植導致供體來源的NK細胞的擴增，所述NK細胞表達不識別接受者中的任何HLA配體的KIR從而不受通過KIR的抑制。這些同種異型NK克隆產(chǎn)生有效的抗腫瘤活性。該反應在診斷為急性髄性白血病(AML)且用KIR-MHC錯配的單倍同一性(haplo-identical)移植物治療的患者中是非常強烈的。通過患者的藥物治療再產(chǎn)生該效應的一個方法可以是施用阻斷KIR/HLA相互作用的試劑以激活患者的內(nèi)源NK細胞。已顯示某些對于KIR2DL1是特異性的單克隆抗體阻斷KIR2DL1與"組2"的HLA-C同種異型例如HLA-Cw4的相互作用(Moretta等人，JExpMed1993;178:597-604)，且促進NK介導的表達那些HLA-C同種異型的靶細胞的裂解。阻斷KIR2DL2/3與HLA-Cw3或類似的同種異型的抗KIR2DL2/3單克隆抗體也已得到描述(Moretta等人，JExpMed1993;178:597-604)。Watzl等人(TissueAntigens2000;56:240-247)產(chǎn)生了識別KIR的多個同種型的交叉反應性鼠類抗體，但這些抗體不加強M細胞的裂解活性。此外，Spaggiari等人(Blood2002;99:1706-1714和Blood2002;100:4098-4107)進行了使用抗各種KIR的鼠類單克隆抗體的實驗。這些抗體中的一種抗體NKVSF1(也稱作Pan2D)據(jù)報導識別KIR2DL1(CD158a)、KIR2DL2(CD158b)和KIR2DS4(p50.3)的共同表位。Shin等人(Hybridoma1999;18:521-7)也報導了表示為A210和A803g、能夠結(jié)合所有KIR2DL1、KIR2DL2和KIR2DS4的兩種單克隆抗體的產(chǎn)生。A210和A803g都不干擾KIR和HLA-C之間的結(jié)合或能夠阻斷抑制性KIR信號轉(zhuǎn)導。.WO2005003172、WO2005003168和W02005009465描述了KIR2DL1和KIR2DL2/3交叉反應性抗體例如DF200、l-7F9、l-4Fl、1-6F5和1-6F1，以及描述了DF200和l-7F9增強NK細胞的細胞毒性。來使其脫敏的方法，所述化合物抑制與傳感器組分的結(jié)合。WO0002583描述了通過阻止NK-T細胞受體對MHC分子的結(jié)合來治療例如牛皮瓣的方法。W09849292和WO2005060375—般涉及KIR或其他NK細胞受體以及針對其的抗體。然而，以前分離試劑例如能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的抗體的嘗試集中在阻止KIR和其對應的HLA分子例如HLA-C的相互作用上。仍然存在對能夠激活NK細胞的治療性試劑的可選擇的靶的需要。本發(fā)明提供了這樣的新靶，以及結(jié)合這些靶的新試劑和使用其的方法。發(fā)明概述本發(fā)明部分地基于新試劑的發(fā)現(xiàn)，所述試劑結(jié)合一種或多種人抑制性KIR的決定子，且通過不包括阻止KIR和其HLA-C配體之間的結(jié)合的新機制來引起M細胞的加強作用，所述NK細胞表達這些KIR基因產(chǎn)物中的至少一種。在一個實施方案中，所述試劑通過減少或阻止KIR的二聚化來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制，這反過來導致NK細胞活性的加強。因此，在一個方面，本發(fā)明提供了結(jié)合或與抑制性人殺傷IgG樣受體(KIR)的細胞外部分相互作用的試劑，其中所述試劑減少KIR介導的對M細胞的細胞毒性的抑制而無可檢測地減少KIR和該KIR的HLAI類配體之間的結(jié)合。在一個實施方案中，所述試劑通過減少或阻止KIR的群集(cluster)減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制。在另一個實施方案中，所迷試劑也或可選擇地通過減少或阻止KIR的二聚化來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制。在一個實施方案中，所述試劑減少或阻止結(jié)構(gòu)域l相關性相互作用位點之間的相互作用。結(jié)構(gòu)域1相關性相互作用位點可包含至少一個對應于例如SEQIDNO:14的殘基1-92中的一個殘基的氨基酸殘基。例如，結(jié)構(gòu)域1相關性相互作用位點可包含至少一個對應于Hl、E2、H5、R6、D31、V32、M33、F34、E35、H36、H50、D57、G58、V59、V83、T84、H85、S86、Q89、L90、S91或A92的氨基酸殘基。在另一個實施方案中，所述試劑減少或阻斷結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點之間的相互作用。結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點可包含至少一個對應于例如SEQIDNO:14的殘基108-200的一個殘基的氨基酸殘基。例如，結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點可包含至少一個對應于P108、S109、LllO、Slll、A112、Q113、P114、L114、G115、T125、S127、S129、R131、K155、V156、N157、G158、T159、Q161、A162、D163、S192、D193、P194、L195、L196、V197、S198、V199或T200的氨基酸殘基。例如，KIR2DL1的結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點可包含氨基酸殘基LllO、Slll、A112、Q113、P/L114(表示殘基114可以是P或L)和L195。在上述實施方案的任一實施方案中，由本發(fā)明提供的試劑可以例如減少或阻止KIR家族成員的同型二聚化(homodimerization)、異型二聚化(heterodimerization)中的至少一種或同時二種。例如，所述試劑可減少或阻止KIR2DL1的同型二聚化。所述試劑可以是任何合適的化合物例如抗體或其片段。所述抗體片段可選自例如Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab02片段、Fv片段、雙抗體、單鏈抗體片段和多特異性抗體?？贵w可以是例如人抗體、人源化的抗體或嵌合抗體或來源于該抗體的抗體片段。在一個實施方案中，所述試劑是交叉反應性KIR結(jié)合試劑，例如，交叉反應性抗KIR抗體或其片段。所述片段可以例如結(jié)合KIR2DU和KIR2DL3中的每一種。在一個實施方案中，所述試劑可以是例如抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段在對KIR2DL1和KIR2DL3中的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體竟爭。例如，所述試劑可以是包含SEQIDN0:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體或抗體片段。在可選擇的實施方案中，所述試劑可以是在對KIR2DL1和KIR2DL3中的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDN0:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體竟爭的抗體或抗體片段。例如，所述試劑是包含SEQIDN0:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體或抗體片段。在另一個方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的試劑作為藥物的用途。在另一個方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，所述組合物以有效地在患者中可檢測地加強NK細胞的細胞毒性的量包含本發(fā)明的試劑和一種或多種藥物可接受的載體或稀釋劑。在一個實施方案中，藥物制劑還包含選自免疫調(diào)節(jié)劑、激素劑、化學治療劑、抗血管生成劑(anti-angiogenicagent)、凋亡齊J和阻止HLA對抑制性KIR受體的結(jié)合的抗體的治療劑。在另一個方面，本發(fā)明提供了通過將NK細胞與有效量的本發(fā)明的試劑接觸來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的方法。所述試劑可以例如減少或阻止KIR的二聚化。所述試劑也可以是單克隆抗KIR抗體或其片段。在一個實施方案中，所述試劑在對KIR2DL1和KIR2DL3中至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDN0:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體竟爭。在另一個實施方案中，所述試劑在對KIR2DL1和KIR2DL3中至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列竟爭。在另一個方面，本發(fā)明提供了使用本發(fā)明的試劑制備用于癌癥、感染性疾病、病毒感染或免疫病癥的藥物的用途。在一個實施方案中，所述藥物用于治療癌癥。在該實施方案中，所述癌癥可以選自例如急性和慢性髓細胞樣白血病(AML和CML)、急性淋巴細胞性白血病(ALU、骨髄異常增生綜合征、非何杰金淋巴瘤(NHL)、多發(fā)性骨髓瘤、腎細胞癌、惡性黑色素瘤和結(jié)腸直腸癌。在可選擇的實施方案中，所述藥物用于治療由選自人免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)和埃博拉病毒的病毒引起的病毒感染在另一個方面，本發(fā)明提供了用于癌癥的治療的方法，該方法包括給患有癌癥的受試者施用有效量的本發(fā)明的試劑。所述試劑可以是例如人的、人源化的或嵌合的交叉反應性單克隆抗KIR抗體或其片段。在一個實施方案中，所述試劑在對KIR2DL1和KIR2DL3中至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體竟爭。在另一個實施方案中，所述試劑對KIR2DL1和KIR2DL3中至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列竟爭。所述方法還包括施用選自免疫調(diào)節(jié)劑、激素劑、化學治療劑、抗血管生成劑、凋亡劑和阻止HLA對抑制性KIR受體的結(jié)合的抗體的治療劑。在另一個方面，本發(fā)明提供了能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的試劑，所述試劑通過下列方式獲得a)產(chǎn)生候選試劑庫；b)選擇與抑制性KIR的細胞外部分結(jié)合或相互作用的任何候選劑；和c)選擇來自步驟b)的能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制而不減少抑制性KIR和該KIR的HLAI類配體之間的結(jié)合的任何候選試劑；其中步驟b)和c)的順序可顛換。在一個實施方案中，所述方法還包括選擇交叉反應性KIR結(jié)合劑的步驟。所述試劑可以是例如單克隆抗體或其片段。在另一個方面，本發(fā)明提供了產(chǎn)生能夠減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的抗體或抗體片段的方法，其包括步驟a)用包含KIR的至少細胞外部分的免疫原性組合物免疫非人動物；b)從免疫的動物制備抗體，其中所述抗體結(jié)合KIR;c)選擇來自(b)的能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制而不減少抑制性KIR和該KIR的HLAI類配體之間的結(jié)合的任何抗體；和d)任選地制備所述抗體的片段。在另一個方面，本發(fā)明提供了在對KIR2DL1和KIR2DL3中至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體竟爭的分離的抗體或抗體片段。在一個實施方案中，抗體或抗體片段在對KIR2DL1和KIR2DL3中至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體結(jié)合相同的KIR2DL1表位。在另一個實施方案中，抗體或抗體片段包含對應于SEQIDNO:17的殘基31-35的CDRH1區(qū)、對應于SEQIDNO:17的殘基50-66的CDRH2、對應于SEQIDNO:17的殘基99-108的CDRH3;對應于SEQIDNO:18的殘基24-34的CDRL1;對應于SEQIDNO:18的殘基50-56的CDRL2，和對應于SEQIDNO:18的殘基89-97的CDRL3。在另一個實施方案中，權(quán)利要求44至46中任一項的抗體或抗體片段包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一個的結(jié)合中與包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體竟爭的分離的抗體或抗體片段。在一個實施方案中，抗體或抗體片段在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一個的結(jié)合中與包含SBQIDN0:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體結(jié)合相同的KIR2DL1表位。在另一個實施方案中，所述抗體或抗體片段包含對應于SEQIDNO:21的殘基31-35的CDRHI區(qū)、對應于SEQIDNO:21的殘基50-66的CDRH2、對應于SEQIDNO:21的殘基98-103的CDRH3;對應于SEQIDNO:18的殘基24-34的CDRLI;對應于SEQIDNO:18的殘基50-56的CDRL2，和對應于SEQIDNO:18的殘基89-97的CDRL3。在另一個實施方案中，所述抗體或抗體片段包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDN0:18的VL序列。本發(fā)明也提供編碼前述方面的任一方面的抗體或抗體片段的核苷酸序列、包含該核苷酸序列的表達載體、用該載體轉(zhuǎn)染的宿主細胞和產(chǎn)生抗體的方法，該方法包括在適合于所述抗體表達的條件下培養(yǎng)該宿主細月包。本發(fā)明的這些和其他方面描述于下面部分。附圖描述圖1A分別用來自前面(Dl在左側(cè)，D2在右側(cè))、上方(Dl在左側(cè)，02在右側(cè))和后面(D2在左側(cè)，Dl在右側(cè))的視圖來圖解說明結(jié)構(gòu)域1相關性相互作用位點在KIR2DL1(1NKR.pdb)結(jié)構(gòu)上的位置。圖1B分別用來自前方(Dl在左側(cè)，D2在右側(cè))、上方(Dl在左側(cè)，D2在右側(cè))和后方(D2在左側(cè)，Dl在右側(cè))的視圖來圖解說明結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點在KIR2DL1(1NKR.pdb)結(jié)構(gòu)上的位置。圖1C顯示KIR2DLl-HLACw4在NK細胞和乾細胞之間的交界面中的群集模型。不受理論束縛，據(jù)認為在KIR2DL1(深灰色)與HLACw4(淺灰色)結(jié)合后，首先形成了KIR2DLl-HLACw4二聚體。所述二聚體能夠形成圖解說明的D1-D1和D2-D2相互作用，從而在NK細胞和靶細胞之間的界面中產(chǎn)生群集的二聚體。圖2A-2H顯示KIR2DL1(SEQIDNO:1)、2DL2卿IDNO:2)、2DL3(SEQIDNO:3)、2DL4(SEQIDNO:4)、2DS1(SEQIDNO:5)、2DS2(SEQIDNO:6)、2DS3(SEQIDNO:7)、2DS4(SEQIDNO:8)和2DS5(SEQIDN0:9)序列的比對，顯示結(jié)構(gòu)域1和結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點的對應殘基。圖3A至31顯示3DL1(SEQIDNO:10)、3DL2(SEQIDNO:11)、3DL3(SEQIDNO:12)、3DS1(SEQIDN0:13)和2DL1(SEQIDNO:1)的比對，顯示結(jié)構(gòu)域1和結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點的對應殘基。圖4顯示在KIR2DL1/1-7F9Fab，結(jié)構(gòu)的晶體堆積(REF分析)中兩個對稱相關的KIR2DL1分子(分別為X、YZ和Y、X、1/3-Z)。第一KIR2DL1分子以灰色的管狀圖和參與與第二分子相互作用的二聚體的殘基表面圖一起標示。第二KIR2DL1分子以黑色實心帶狀圖案標示。圖5顯示通過流式細胞儀進行的KIR特異性單克隆抗體(mAbs)的初步篩選。用來自雜交瘤(從KIR2DL1免疫的小鼠產(chǎn)生的)的組織培養(yǎng)上清液溫育YTS(A)和YTS-2DL1(B)細胞。用APC綴合的對于小鼠IgG是特異性的第二Ab片段檢測Ab結(jié)合，通過流式細胞儀(FACSarray)顯現(xiàn)所迷結(jié)合。直方圖描述來自1-26F117雜交瘤的抗KIR抗體對表達KIR2DL1的YTS-2DL1細胞的特異性結(jié)合，但不對KIR2DL1陰性YTS細胞結(jié)合。圖6顯示在抗KIRmAbs不存在或存在的情況下LCL721.221-Cw4靶細胞通過YTS-2DL1NK細胞的裂解，如所顯示的。用來自選擇的亞克隆的雜交瘤的組織培養(yǎng)上清液預溫育KIR2DL1特異性YTS-2DL1細胞，所述雜交瘤產(chǎn)生識別至少KIR2DL1和-3的mAbs。然后在51Cr釋放細胞毒性測定法(E:T比例=6:1)中測量這些細胞殺死51Cr標記的LCL721.221-Cw4細胞的能力。在抗KIR抗體不存在的情況下，大約5%的靶細胞被殺死，然而交叉反應性人mAbl-7F9誘導大約25%的特異性殺傷。新鑒定的交叉反應性mAbsl-26F117-A3和-A4特異性地誘導殺傷，顯示這些抗體是KIR抑制性mAbs，其能夠減少KIR介導的對M細胞的細胞毒性的抑制。圖7顯示在各種抗KIRmAbs存在的情況下檢測KIR2DL1對HLA-Cw4結(jié)合的竟爭測定的結(jié)果。在亞克隆的抗KIR雜交瘤存在或不存在的情況下或在對照抗體存在的情況下預溫育KIR2DL1-hFc(20叫/ml的終濃度)。然后使用流式細胞儀(FACSarray)研究KIR2DLl-hFc對LCL721.221-Cw4細胞上的HLA-Cw4的結(jié)合。在干擾KIR-HLA結(jié)合的mAb存在的情況下，與在mAb不存在的情況下KIR2DLl-hFc的結(jié)合相比，較少的KIR2DLl-hFc結(jié)合LCL721.221-Cw4細胞，這導致了向點陣圖中的X軸上的左側(cè)的偏移。(A)當用DF200預溫育時，KIR2DLl-hFc對HLA-Cw4的結(jié)合以DF200劑量依賴性的方式被竟爭，然而KIR2DLl-hFc結(jié)合不與KIR2DL2特異性mAbGL183(對照)竟爭。當用1-26F117-A3(B)或1-26F117-A4(C)預溫育時，KIR2DLl-hFc對HLA-Cw4的結(jié)合不被阻止。相反地，如由點陣圖中LCL721.221-Cw4的雙陽性染色所顯示的，LCL721.221-Cw4細胞被KIR2DLl-hFc/l-26F117-A3或KIR2DLl-hFc/l-26F117-A4復合物結(jié)合，這確認了HLA-Cw4和l-26F117-A3、或HLA-Cw4和1-26F117-A4可同時結(jié)合KIR2DL1。(D)對照(無mAb)。圖8顯示和圖7中的實驗相似的、使用純化的1-26F117的濃度不斷增加的實驗的結(jié)果。所述結(jié)果確認了由克隆1-26F117產(chǎn)生的抗體不影響KIR/HLA-Cw4相互作用。(A)2pg/ml。(BHOjag/ml,(C)2(Vg/ml。(D)5(Vg/ml。(E)在MAb不存在的情況下KIR2DLl-hFc的結(jié)合(對照)。(F)在KIR2DLl-hFc和一抗mAb不存在的情況下二抗的背景結(jié)合。定義本發(fā)明的"試劑"包括小分子、多肽、蛋白、抗體或抗體片段。小分子，在本發(fā)明的說明書中，在一個實施方案中是指具有分子量小于1000道爾頓，特別地小于800道爾頓，更特別地小于500道爾頓的化合物。術語"多肽，，此處不是指特定長度的被編碼的產(chǎn)物，因而包括肽、寡肽和蛋白。所述多肽也可以是多肽的天然發(fā)生的等位基因變體或經(jīng)基因工程改造的變體，以及一般的蛋白。術語"抗體"，如此處所用的，是指具有特異性結(jié)合抗原(例如，KIR)的能力的免疫球蛋白分子。除非另外指出或通過上下文清楚地否認，術語"抗體"包括，但不限于，全長抗體、抗體片段和抗體衍生物；單克隆和多克隆抗體；人和非人抗體以及人源化的和嵌合形式的非人抗體。術語"抗體片段"，如此處所用的，是指包含抗體的一個或多個片段的分子，所述片段保留特異性結(jié)合抗原(例如，KIR)的能力。包含在術語"抗體片段"的范圍內(nèi)的結(jié)合性片段的實例包括(i)Fab片段，即由VL、VH、CL和CHI結(jié)構(gòu)域組成的單價片段;(ii)F(ab)2和F(abO2片段，即包含通過鉸鏈區(qū)上的二疏鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii)由VH和CH1結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)由抗體的單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；(v)dAb片段(Ward等人，(1989)Nature341:544-546)，其由VH結(jié)構(gòu)域組成；和(vi)分離的互補決定區(qū)(CDR)，(vi)單鏈Fv(scFv)(參見例如，Bird等人(1988)Science242:423-426:和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883);(vii)雙抗體(diabodies)，其是二價、雙特異性抗體，其中在單條多肽鏈上表達VH和VL結(jié)構(gòu)域，但使用的連接體太短以致不能使相同鏈上的兩個結(jié)構(gòu)域配對，從而迫使所述結(jié)構(gòu)域與另一條鏈上的互補結(jié)構(gòu)域配對，從而產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點(參見例如.，Holliger，P.，等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448;Poljak，R.J.，等人(1994)Structure2:1121-1123);和(viii)包含重鏈-輕鏈對的一條鏈的單價抗體(一些IgG亞類的抗體例如，IgG4，已知自發(fā)地"分裂"成兩個單價片段)。此處使用的術語"抗體衍生物"，用于稱呼全長抗體或抗體片段的變體，所迷變體保留親本分子特異性結(jié)合抗原(例如，KIR)的能力，其中親本分子的一個或多個氨基酸已被化學修飾，例如，通過烷基化、PEG化、?；?、酯的形成或酰胺的形成等進行化學修飾。這包括，但不限于，PEG化的抗體、半胱氨酸-PEG化抗體和其變體。在本發(fā)明的上下文中，"結(jié)合"或"相互作用"或"反應"是指試劑(例如抗體)對其決定子(例如表位)的解離常數(shù)Kd低于10—4M的任何結(jié)合。術語"結(jié)合"或"相互作用"或"反應"在適當時可與"特異性結(jié)合"、"特異性相互作用"或"特異性反應"互換使用。所述相互作用包括氫鍵、疏水鍵和離子鍵。在本發(fā)明的上下文中，術語"結(jié)合決定子的試劑"指特異性和/或親和性地結(jié)合所述決定子的試劑。結(jié)合所述決定子的抗體指特異性和/或親和性地結(jié)合的抗體。術語"減少或阻止二聚體化"應當理解為在細胞的表面干擾或阻止或消除KIR受體的二聚體的過程。此處使用的KIR的"二聚化"包括異二聚化，表示KIR家族的兩個不同成員之間的二聚化，和同二聚化，表示兩個相同KIR家族成員的二聚體的形成。術語"親和力"，如此處所用的，是指抗體對表位的結(jié)合的強度。抗體的親和力由解離常數(shù)Kd給出，解離常數(shù)定義為[Ab]x[Ag]/[Ab-Ag]，其中[Ab-Ag]是抗體-抗原復合物的摩爾濃度，[Ab]是未結(jié)合的抗體的摩爾濃度，[Ag]是未結(jié)合抗原的摩爾濃度。親和力常數(shù)Ka由1/Kd定義。確定mAb的親和力的優(yōu)選的方法可在Harlow，等人，Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.，1988)，Coligan等人，eds.，CurrentProtocolsinImmunology,GreenePublishingAssoc.andWileyInterscience，N.Y.，(1992，1993)，和Muller，Meth.Enzymol.92:589-601(1983)中查找到，所述參考資料以其全文在此引用作為參考。本領域熟知的用于確定mAb親和力的一個優(yōu)選的和標準的方法是使用Biacore儀器。在本發(fā)明的上下文中，"決定子"指由人KIR基因家族的幾個基因產(chǎn)物共有的相互作用或結(jié)合的位點。術語"表位"定義為抗原決定簇，其為抗原上與抗體結(jié)合的區(qū)域或部位。蛋白表位可包含直接參與結(jié)合的氨基酸殘基和被特異性抗原結(jié)合抗體或肽有效地封閉的氨基酸殘基，即在抗體的"足跡"內(nèi)的氨基酸殘基。其是復合抗原分子上可與抗體或受體(例如，T淋巴細胞受體)結(jié)合的最簡單形式或最小結(jié)構(gòu)區(qū)域。表位可以是線性的或構(gòu)象/結(jié)構(gòu)的。術語"線性表位"定義為由在氨基酸的線性序列(一級結(jié)構(gòu))上是連續(xù)的氨基酸殘基組成的表位。術語"構(gòu)象或結(jié)構(gòu)表位"定義為由氨基酸殘基組成的表位，所迷氨基酸殘基并非全都連續(xù)，因而表現(xiàn)為氨基酸線性序列的分離的部分，所述分離的部分通過分子的折疊(二級、三級和/或四級結(jié)構(gòu))相互靠攏。構(gòu)象表位依賴于三維結(jié)構(gòu)。因此術語"構(gòu)象"通常可與"結(jié)構(gòu)"互換使用。術語"抗體結(jié)合性肽"定義為以充分高的親和力與抗體結(jié)合的肽。術語"免疫原"是能夠誘導體液抗體和/或細胞介導的免疫應答而不誘導免疫耐受性的物質(zhì)。術語"免疫原"有時可和'抗原，互換使用，然而所述術語指刺激免疫應答和與其產(chǎn)物例如抗體反應的能力。相反地，'抗原，表示與抗體起反應的物質(zhì)。主要的免疫原是蛋白或多糖，其游離或附著至微生物。術語"免疫原性"是指誘導體液抗體和/或細胞介導的免疫應答的能力。如此處所用的，"殺傷細胞Ig樣受體"或"1UR"，是指由作為KIR基因家族的成員的基因編碼的或由從該基因制備的cDNA編碼的蛋白或多肽?？稍诜Q為"書架(Bookshelf)"的NCBI網(wǎng)站獲得(通過World-WideWeb(WW)地址ncbi.nlm.nih.gov/books進入)的由M.Carrington和P.Norman編著的"TheKIRGeneCluster"中提供KIR的詳細綜述，包括KIR基因和KIR基因產(chǎn)物的命名法以及示例性KIR的Genbank目錄號?？稍诠矓?shù)據(jù)庫包括GenBank獲得人KIR基因和cDM以及其蛋白產(chǎn)物的序列。屬于人KIR基因家族的人基因的非限定性示例性GenBank條目具有下列目錄號KIR2DL1:Genbank目錄號U24076、NM_014218、AAR16197或L41267;KIR2DL2:Genbank目錄號U24075或L76669;KIR2DL3:Genbank目錄號U24074或L41268;KIR2DL4:Genbank目錄號X97229;KIR2DS1:Genbank目錄號X89892;KIR2DS2:Genbank目錄號L76667;KIR2DS3:Genbank目錄號服-012312或L76670(剪接變體);KIR3DL1:Genbank目錄號L41269;和KIR2DS4:Genbank目錄號AAR26325。KIR可包含1至3個細胞外結(jié)構(gòu)域，且可具有長(即，超過40個氨基酸)或短(即，少于40個氨基酸)胞質(zhì)尾區(qū)。如前面所描述的，這些特征決定了KIR的命名。示例性KIR2DL1、KIR2DL2和KIR2DL3蛋白包含下列各自的表示其細胞外結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列KIR2DL1細胞外結(jié)構(gòu)域TYRCFGSFHDSPYEWSKSSDPLLVSVTGNPSNSWPSPTEPSSKTGNPRHLH(SEQIDNO:14)，其中位置16上"X"是P或R，且其中位置114上"X"是P或L,代表等位基因變體。KIR2DL2細胞外結(jié)構(gòu)域TYRCFGSFRDSPYEWSNSSDPLLVSVIGNPSNSWPSPTEPSSKTGNPRHLH(SEQIDNO:15)KIR2DL3細胞外結(jié)構(gòu)域tyrcfgsfrdspyewsnssdpllvsvtgnpsnswpsptepssetgnprhlh(seqidno:16).術語"kir2dl"是指其為kir2dl1、kir2dl2、kir2dl3或kir2dl4分子的kir分子。術語"kir2dl2/3"是指kir2dl2和kir2dl3受體中的任一受體或兩個受體。這兩個受體具有非常高的同源性，其是相同基因的等位形式，且在本領域被認為在功能上是相似的。除非另外指出，術語"匪c，，包括所有哺乳動物中的mhc分子，而"hla"分子是指人mhc分子。"交叉反應性"kir結(jié)合劑是結(jié)合超過一種kir分子的試劑。例如，"交叉反應性抗kir抗體"是特異性結(jié)合超過一種kir分子的抗體。"特異性結(jié)合"或"特異性"是指抗體或其他試劑可檢測地結(jié)合結(jié)構(gòu)(例如存在于n-二胞或其他細胞類型上Ji二^白T結(jié)合的能;。可使用例如，Biacore儀器通過結(jié)合或竟爭結(jié)合測定法相對地確定特異性。可以例如大約10:1、大約20:1、大約50:1、大約100:1、大約10.000:1或更大的對特異性抗原的結(jié)合的親和性/親和力相對對其他不相關分子的非特異性結(jié)合的親和性/親和力的比率來展示特異性。對于人kir是特異的kir結(jié)合抗體有時可展示對其他物種的相似kir的特異性結(jié)合。第一抗體與第二抗體"顯著地"或"至少部分地"結(jié)合相同的表位的術語是指第一抗體的表位結(jié)合位點包含組成第二抗體的表位結(jié)合位點的抗原的至少10%、20%、30%、40%、50°/。、60°/。、70%、80%、90%或更多的氨基酸殘基?？筴ir抗體"阻止"kir分子對hla分子的結(jié)合的能力是指在使用溶解的或細胞表面結(jié)合的kir和hla分子的測定中，抗體可檢測地以劑量依賴性的方式減少kir分子對hla分子的結(jié)合，其中kir分子在缺少抗體的情況下可檢測地結(jié)合HLA分子。在實施例中提供了用于確定抗KIR抗體是否能夠進行該阻止作用的示例性測定法。試劑"減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制"或"加強NK細胞的細胞毒性"的能力是指，表達KIR的NK細胞，當與抗體接觸時，與對照相比，在所述試劑存在的情況下更能夠裂解在其表面上表達特定MHC或HLAI類(其為所述KIR的配體)的靶細胞。"抑制的減少"或"加強"是指和對照相比，NK細胞的細胞毒性的任何可檢測的增加，包括至少5%、至少10%、至少20°/、至少40°/。、至少70%、至少100%、至少500%、至少1000°/。或更高或例如，大約50-100%、大約100-500%或大約100-2000%更高、或至少大約1.5倍、至少大約2倍、至少大約3倍、至少大約5倍、至少大約10倍、或至少大約20倍更高的增加。這可在合適的測定法例如細胞毒性測定法中進行測量，在所述細胞毒性測定法中，在與所述試劑不存在的情況下(例如對照)相比，在所述試劑存在的情況下更多的靶細胞被NK細胞裂解。例如，可通過例如經(jīng)典的細胞毒性鉻釋放檢測法檢測所述試劑的可檢測地增加特異性裂解的能力，即當將表達給定的KIR的NK細胞群體與表達關聯(lián)MHCI類分子(被在M細胞上表達的KIR識別)的靶細胞接觸時，與在無抗體的情況下所得的特異性裂解的水平進行比較來檢測?？蛇x擇地，術語"減少KIR介導的抑制"是指在使用表達一種或幾種KIR的NK細胞克隆和靶細胞的鉻測定法中(所述靼細胞只表達一種HLA同種異型(所述HLA同種異型被NK克隆的一種KIR識別)且不表達其他HLAI類分子(所述分子被NK克隆上的其他KIR識別))，使用抗體獲得的細胞毒性水平應當為使用對照抗體例如抗KIRmAbGL183或EB6(可從Immunotech，F(xiàn)rance商購獲得)獲得的細胞毒性的至少60%、優(yōu)選地至少70°/。或更多，所述對照抗體阻止KIR和HLA-C之間的相互作用。術語"治療"是指包括預防所述疾病、病癥或病狀或使之減輕至最低。因此，除非另外指出或由上下文清楚地否定，"治療"是指試劑或包含所述試劑的組合物的預防性和治療性施用。然而，試劑或包含所述試劑的組合物的治療性施用以及試劑或包含所述試劑的預防性施用可分別被認為是本發(fā)明的獨特的方面。例如，其中經(jīng)鑒定無疾病或病癥的癥狀或臨床相關性表現(xiàn)的患者的"治療"是預防性治療。術語"有效量"是指，當以合適的劑量遞送且進行適合的時間段時，足以獲得想要的結(jié)果，例如，可檢測的和/或顯著地減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制、或可檢測地和/或顯著地減少KIR二聚化的量。依賴于想要的用途，"有效量"也可以是"治療有效量"、"預防有效量"、"生理有效量"或其組合。"治療有效量"是指當以合適的劑量遞送合適的時間段時，在患者或其他宿主中有效地獲得想要的治療結(jié)果(例如，誘導、促進和/或增強與減少病癥一個或多個方面有關的生理反應，例如減緩癌癥進程、減輕病毒病癥狀、在一段時間內(nèi)(例如在初始治療后18-60個月內(nèi))增加存活的可能性、減少與癌細胞擴散相關的生長和/或減少腫瘤生長的復發(fā)的可能性)的試劑或組合物的量。治療有效量可根據(jù)因素例如個體的疾病狀況、年齡、性別和體重以及組合物在個體中引發(fā)想要的應答的能力而變化。治療有效量也是其中施用的組合物的任何毒性或有害效應被治療有益效應超過的量。"預防有效量"是指在必需的劑量和時間段內(nèi)，有效地獲得想要的預防結(jié)果(例如，與未接受預防性治療方案的相似患者相比，發(fā)生病癥的可能性的減少、病癥的強度或傳播的減少、危重病癥期間存活可能性的增加、疾病狀況的發(fā)病延遲、危重病癥擴散的降低等)的量。一般地，因為在疾病的早期階段之前或之時使用預防性劑量，所以預防有效量將低于治療有效量。"生理有效"量是指足以誘導、促進和/或增強想要的生理效應的量。術語"基本上同一，，，在兩個氨基酸序列的情況下，是指當通過例如程序GAP或BESTFIT，使用缺省缺口權(quán)重進行最佳比對時，序列共有至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%、至少大約98%或至少大約99%的序列同一性。在一個實施方案中，不相同的殘基位置的差異在于保守性氨基酸取代(在本說明書的其他地方進一步描述)。通常使用序列分析軟件測量序列同一性。蛋白分析軟件通過使用分配至各種取代、缺失和其他修飾(包括保守性氨基酸取代)的相似性的取代匹配相似序列。例如，公共可獲得的GCG軟件包含程序例如"Gap"和"BestFit"，使用缺省參數(shù)，所述程序可用于確定密切相關的多肽(例如來自不同物種的生物的同源多肽)之間或野生型蛋白和其突變蛋白之間的序列同源性或序列同一性。參見例如，GCG版本6.1。也可使用FASTA，使用缺省或推薦的參數(shù)比較多肽序列。GCG版本6.1中的程序，F(xiàn)ASTA(例如，F(xiàn)ASTA2和FASTA3)提供了查詢和搜索序列之間的最佳重疊區(qū)域的比對和百分比序列同一性(Pearson,MethodsEnzymol.1990;183:63-98;Pearson,MethodsMol.Biol.2000;132:185-219)。當將序列與包含大量來自各種生物的序列的數(shù)據(jù)庫進行比較時，另一個優(yōu)選的算法是使用缺省參數(shù)的計算機程序BLAST,特別是Mastp。參見例如，Altschul等人，J.Mol.Biol.1990;215:403-410;AUschul等人，NucleicAcidsRes.1997;25:3389-402(1997);將它們各自在此引用作為參考。兩個基本上同一的氨基酸序列中的"對應的"氨基酸位置是通過此處提到的任一種蛋白質(zhì)分析軟件(通常使用缺省參數(shù))進行比對的氨基酸位置。"分離的"試劑通常是指不與顯著量(例如，超過大約1%、超過大約2%、超過大約3%或超過大約5%)的外來和不想要的生物分子(例如，非KIR結(jié)合生物分子，例如，抗體)結(jié)合的試劑，所述生物分子包含在其中產(chǎn)生所述分子的細胞、細胞培養(yǎng)物、化學介質(zhì)或動物中。"分離的"試劑也可指由于人干預(無論自動的、人工的或兩者的)的原因已通過純化階段，進行了有效長度的時間(例如，至少大約IO分鐘、至少大約20分鐘、至少1小時或更長)的純化的試劑。發(fā)明描述本發(fā)明部分地基于抗體的發(fā)現(xiàn)，所述抗體能夠減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制而不阻斷KIR對其HLA配體的結(jié)合，和部分地基于以下發(fā)現(xiàn)，即當KIR與其I類HLA配體結(jié)合時，通過KIR介導的負信號的轉(zhuǎn)導涉及配體結(jié)合誘導的、KIR分子的構(gòu)象再定(reorientation)，這使得相鄰的KIR之間在特定的結(jié)構(gòu)域中形成相互作用，從而導致加速的群集。盡管以前已知配體結(jié)合導致通過KIR介導的信號轉(zhuǎn)導，但未曾描述過可完全解釋配體結(jié)合(發(fā)生在細胞外側(cè)上的KIR的細胞外部分)如何被傳遞至KIR的胞質(zhì)尾區(qū)并導致細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導的機制，所述信號轉(zhuǎn)導只有當配體被結(jié)合時發(fā)生，當沒有配體結(jié)合時不發(fā)生。此外，在文獻中已描述了一些類型的受體的群集，據(jù)認為，在本發(fā)明之前還不知道通過使用加入的試劑可減少或阻止NK細胞抑制性受體例如KIR的二聚化或群集。允許KIR分子的二聚化的KIR上的位點的發(fā)現(xiàn)現(xiàn)在可提供該現(xiàn)象的解釋，從而允許治療性試劑的開發(fā)和鑒定，所述試劑通過靶向與HU結(jié)合無關的這些和其他位點阻止通過KIR介導的抑制性信號轉(zhuǎn)導。如實施例中所描述的，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)通過HR介導的抑制性信號轉(zhuǎn)導的起始和傳遞需要兩個或更多個KIR相互之間緊密靠攏，即，二聚化。不限定于理論，當KIR與靶細胞上的MHCI類配體結(jié)合時，假定開始進行二聚化過程。這可使KIR受體相互緊密靠近，從而允許通過涉及轉(zhuǎn)導。盡管允許配體-結(jié);誘導的KIR二聚化的精確事件^分子細41還不清楚，但已報導KIR的群集(將幾個KIR分子相互拉近靠攏)足以誘導抑制性信號轉(zhuǎn)導(Faure等人，同上)。已發(fā)現(xiàn)通過干擾該二聚化、群集或拉近靠攏過程，可阻止抑制性信號轉(zhuǎn)導的起始和傳遞。以前，只知道可能通過阻止KIR對其匪CI類配體的結(jié)合來減少KIR信號轉(zhuǎn)導。此處描迷的是新的試劑，所述試劑阻止抑制性信號轉(zhuǎn)導的起始而不干擾KIR與HLAI類的相互作用，但相反地通過例如，阻止或減少KIR的二聚化和/或隨后的群集來調(diào)節(jié)配體-結(jié)合下游的KIR信號轉(zhuǎn)導。與阻止配體結(jié)合的試劑相比，這些新試劑的有利方面是其不阻止KIR-I類相互作用促成NK細胞對靶細胞的附著，從而促進NK被靶細胞的正激活。其他有利方面是這些mAb的表位以及KIR二聚化位點在KIR家族的成員中比配體-結(jié)合結(jié)構(gòu)域更保守，從而，可更容易地獲得與KIR家族的不同成員之間交叉反應的mAb。通過多個KIR阻止負信號轉(zhuǎn)導的抗體對于治療目的是有利的，因為其誘導通過更大比例的NK細胞進行的裂解。如實施例中所描述的，已鑒定的一種這樣的試劑是鼠類IgGl單克隆抗體l-26F117-A3。該抗體是交叉反應性的，結(jié)合至少KIR2DL1和KIR2DL3;加強NK細胞的細胞毒性；且不減少KIR2DL1對HLA-C的結(jié)合。l-26F117-A3的VH和VL區(qū)域的氨基酸序列已確定如下VH區(qū)域(SEQIDNO:17):LTVSSVL區(qū)域(SEQIDNO:18):1-26F117-A3的VH和VL區(qū)域的CDR已確定如下CDRHI:GYFMN(SEQIDNO:17的殘基31-35)CDRH2:RINPFNGDAFYNQKFKG(SEQIDNO:17的殘基50-66)CDRH3:LDYRGYFFDY(SEQIDNO:17的殘基99-108).CDRLI:KASQSVGSAVG(SEQIDNO:18的殘基24-34)CDRL2:SASTRYT(SEQIDNO:18的殘基50-56)CDRL3:HQYSRYPLS(SEQIDNO:18的殘基89-97)。l-26F117-A3的VL和VH區(qū)的cDNA序列已確定如下VH區(qū)(SEQIDNO:19):agaUtcctgtaaggaaagagccttgagtgggcaaggccacattgacaggactctgcagtctcaccacgctcacagtctcatca.VL區(qū),IDNO:20):tcagcatcacctgcaatctcctaaactactgatttactcagcatccacteggt汪cactggagtccctgatcgcttcacaggcagtggatctgggacag"ttcactctcaccattaccaatatgcagtctgatgacctggcagattaUtctgtcaccaatatagcagatatcctctctcgttcggctcggggacaaagttggaaatgaaacgg*已鑒定的另一種這樣的試劑是鼠類IgGl單克隆抗體l-26F117-A4。如實施例中描述的，該抗體加強NK細胞的細胞毒性；和不減少KIR2DL1對HLA-C的結(jié)合。1-26F117-A4的VH和VL區(qū)的氨基酸序列已確定如下VH區(qū)(SEQIDNO:21):VL序列與1-26F117-A3的VL序列同一;(SEQIDNO:18)。l-26F117-A4的VH和VL區(qū)的CDR確定如下CDRHI:DYGVS(SEQIDNO:21的殘基31-35)CDRH2:LIWGDGRTNYHSALISR(SEQIDNO:21的殘基50-66)CDRH3:RGAMDY(SEQIDNO:21的殘基98-103)CDRLI:KASQSVGSAVG(SEQIDNO:18的殘基24-34)CDRL2:SASTRYT(SEQIDNO:18的殘基50-56)CDRL3:HQYSRYPLS(SEQIDNO:18的殘基89-97).1-26F117的VL和VH區(qū)的cDM序列已確定如下:VH區(qū)(SEQIDNO:22):ccatcacatgcBctgaaagggtctggagtgagactgagcatcagcacacagccacatactctcctca,VL區(qū)卿IDNO:23):gacattgtgatgacccagtctcaaaaattcatgtccacaacagUggagacagggtcagcatcacctgcaaggccagtcagagtgtgggtagcgctgUggctggUtcaacagaasiccsLggacaatctcctaaactactgatttactcagcatccactcggtacactggagtccctgatcgcttcacaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccattaccaatatgcagtctgatgacctggctgatt"ttctgtcaccaatatagcagatatcctctctcgttcggctcggggacaaagttggaaatgaaacgg*因此，在一個方面，本發(fā)明涉及KIR結(jié)合試劑和藥物組合物，所述試劑包括小分子、多肽和抗體(包括抗體片段或衍生物)，所述試劑能夠減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制而不干擾KIR與HLA的結(jié)合，所述藥物組合物單獨地包含該試劑或和其他活性劑組合。在一個實施方案中，所述試劑是結(jié)合例如KIR2DL1和KIR2DL2和/或KIR2DL3的交叉反應性抗KIR抗體。在另一個實施方案中，所述試劑是能夠減少KIR2DL介導的NK細胞的細胞毒性的抑制的抗體。在另一個方面，本發(fā)明涉及使用這些試劑(包括抗體)增強KIR介導的NK細胞的細胞毒性、增強NK細胞介導的靶細胞的殺傷和治療癌癥或病毒病的方法。在一個實施方案中，所述方法是增強KIR2DL介導的或KIR2DLl-和KIR2DL2/3介導的NK細胞的細胞毒性的方法。在另一個實施方案中，所述方法是在例如人個體中通過表達KIR2DL1受體或KIR2DL2/3受體的M細胞、或表達HR2DL1和KIR2DL2/3中任一個或兩者的NK細胞群體增強細胞毒性的方法。在另一個方面，本發(fā)明涉及產(chǎn)生和/或鑒定這些試劑(包括抗體)的方法，即通過產(chǎn)生和篩選抗KIR結(jié)合抗體或其他試劑的文庫，然后選擇抗體或試劑，所述抗體或試劑(a)減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制，和(b)不減少KIR對HLA的結(jié)合，其中步驟(a)和(b)任選地可顛換。在一個實施方案中，步驟(a)包括選擇減少KIR2DL介導的、或KIR2DL1和KIR2DL2/3介導的NK細胞的細胞毒性的抑制的試劑。此處描述了，特別是在實施例中描述了用于進行這些方法的合適的測定。在本發(fā)明的一個方面，使用相同或相似的方法制備和鑒定產(chǎn)生本發(fā)明的抗體的雜交瘤。在另一個方面，本發(fā)明涉及在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與l-26F117-A3和/或l-26F117-A4竟爭的抗體或其他試劑。在另一個方面，本發(fā)明涉及在對KIR2DL1和KIR2DU的至少一種的結(jié)合中與抗體(所述抗體包含基本上由1-26F117-A3和/或1-26F117-A4的VH和VL序列組成的VH和VL序列)竟爭的抗體或其他試劑。在示例性實施方案中，所述試劑是抗體例如全長鼠類、人、人源化或嵌合抗體；或其片段或衍生物。在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合與l-"Fll結(jié)合的表位相同的表位。在另一個實施方案中，所述抗體結(jié)合與1-26F117結(jié)合的表位基本相同的表位。在另一個實施方案中，所述試劑是結(jié)合KIR2DL1和/或KIR2DL3上的表位的單克隆抗體，所述表位被單克隆抗體1-26F117-A3和/或l-26F117-A4識別，或被包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的單克隆抗體識別，或被包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的單克隆抗體識別。在另一個實施方案中，抗體，包括其片段或衍生物，包含與l-26F117-A3或l-26F117-A4的VH和/或VL相同或基本上同一的VH和/或VL區(qū)域。在另一個實施方案中，所述抗體，包括其片段或衍生物，包含與SEQIDNO:17或SEQIDNO:21具有至少95°/"至少98%或至少99%的序列同一性的VH區(qū)域。在另一個實施方案中，所述抗體，包括其片段或衍生物，包含與SEQIDN0:18具有至少95%、至少98%或至少99。/。的序列同一性的VL區(qū)域。在另一個實施方案中，所述抗體，包括其片段或衍生物，包含與1-26F117-A3或l-26F117-A4的CDRHl、H2、H3、Ll、L2和L3區(qū)相同的或基本上同一的CDRHl、H2、H3、Ll、L2和L3區(qū)。在特定的實施方案中，所述抗體包含SBQIDN0:17的VH序列、SEQIDNO:18的VL序列，以及鼠類IgGl恒定重鏈區(qū)的序列(GenBank目錄號D78344,特此明確以其全文引用作為參考)和鼠類IgGl恒定輕鏈區(qū)的序列(GenBank目錄號V00807，特此明確地以其全文引用作為參考)。在另一個實施方案中，所述抗體包含基本上分別由SEQIDNO:17和SEQIDNO:18的VH和VL序列組成的VH和VL序列。在另一個特定的實施方案中，所述抗體包含SEQIDN0:21的VH序列、SEQIDNO:18的VL序列以及鼠類IgGl恒定重鏈區(qū)的序列(GenBank目錄號D78344，特此以其全文引用作為參考)和鼠類IgGl恒定輕鏈區(qū)的序列(GenBank目錄號V00807,特此以其全文引用作為參考)。在另一個實施方案中，所述抗體包含基本上分別由SEQIDNO:21和SEQIDNO:18的VH和VL序列組成的VH和VL序列。在另一個實施方案中，所述抗體是分離的抗體。制備和鑒定此類抗體的方法也描述于本文中。本發(fā)明也涉及編碼這些抗體的核苷酸序列、包含這些序列的表達載體、包含這些載體的宿主細胞和從這些宿主細胞產(chǎn)生這些抗體的方法。在另一個方面，本發(fā)明涉及結(jié)合或與存在于人KIR基因產(chǎn)物上的決定子相互作用的試劑，其中所述試劑能夠通過減少或阻止KIR的二聚化來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制。在另一個方面，本發(fā)明涉及通過減少或阻止KIR的二聚化來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的方法。在另一個方面，本發(fā)明涉及用作藥物的本發(fā)明的試劑。在另一個方面，本發(fā)明涉及使用本發(fā)明的試劑制備用于治療癌癥、感染性疾病、病毒感染或免疫病癥的藥物的用途。在另一個方面，本發(fā)明涉及包含已融合至永生化細胞的來源于非人哺乳動物宿主的B細胞的雜交瘤，所述非人哺乳動物已用包含存在于人KIR多肽上的決定子的抗原免疫，其中所迷雜交瘤產(chǎn)生結(jié)合存在于人KIR多肽上的決定子的單克隆抗體，且其中所述抗體能夠通過減少或阻止KIR的二聚化在表達所述人KIR多肽產(chǎn)物的NK細胞群體中來中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制。在另一個方面，本發(fā)明涉及通過下列方式分離能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的試劑a)提供試劑；和b)在所述試劑存在情況下在有利于二聚化的條件下(例如表達HLA-C或其他KIR配體的靶細胞存在的情況下)檢測KIR的二聚化；c)從(b)選擇能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的試劑，其中步驟(c)和(d)的順序可任意顛換。在另一個方面，本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生結(jié)合人KIR受體基因產(chǎn)物上的決定子的抗體或抗體片段的方法，其中所述抗體能夠減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制，所述方法包括步驟a)用包含KIR多肽的免疫原免疫非人動物；b)從所述免疫的動物制備抗體，其中所述抗體結(jié)合所述KIR多肽；c)選擇阻止KIR二聚化的抗體；d)從(c)選擇能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的抗體，其中步驟(c)和(d)的順序可任意顛換。在另一個方面，本發(fā)明涉及包含本發(fā)明的試劑和一種或多種藥物可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。在特定的實施方案中，所述試劑是單克隆抗體或其衍生物或片段。在特定的實施方案中，本發(fā)明的試劑是結(jié)合KIR上的一個決定子從而阻止或減少抑制性信號轉(zhuǎn)導的試劑例如單克隆抗體或小分子或肽或蛋白。在特定的實施方案中，所述KIR基因產(chǎn)物是抑制性KIR基因產(chǎn)物。一些KIR基因產(chǎn)物在本質(zhì)上是抑制性的。所有這些確認的抑制性KIR具有長胞質(zhì)尾區(qū)，且在其胞質(zhì)內(nèi)(intracytoplasmic)部分展示一個或多個招募負責抑制性信號轉(zhuǎn)導的磷酸酶的氨基酸基元。不同的KIR和不同亞型的HLAI類抗原相互作用。已知的抑制性KIR受體包括KIR2DL和KIR3DL亞家族的成員。在特定的實施方案中，所述決定子是表位，且更特別地是構(gòu)象表位。在特定的實施方案中，所述試劑是抗體。減少抑制性KIR信號轉(zhuǎn)導本發(fā)明的抗體能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制；特別是由KIR2DL受體介導的抑制，更特別地至少是KIR2DL1和KIMDL2/3兩者的抑制。因此這些抗體在其阻斷，至少部分地阻斷由KIR受體介導的抑制性信號轉(zhuǎn)導途徑的意義上"減少"或"阻斷"二聚化。更重要地，幾種類型的抑制性KIR受體特別是幾種KIR2DL受體基因產(chǎn)物，更特別地至少KIR2DL1、KIR2DL2和KIR2DL3展示該抑制活性，從而這些抗體可高效地用于不同的受試者。可通過各種測定法或抑制的抑制。用于檢測mAb是否滿足本發(fā)明的標準，即具有(l)減少KIR介導的抑制性信號轉(zhuǎn)導的能力，(2)不阻斷KIR-HLAI類相互作用，的示例性方法如下(也參見實施例)(1)可在標準4小時體外細胞毒性測定中使用表達KIR2DL1的NK細胞和表達HLA-Cw4的靶細胞檢測試劑減少KIR介導的信號轉(zhuǎn)導的能力。這些M細胞不殺死表達HLA-Cw4的粑細胞，因為KIR2DL1識別HLA-Cw4,從而導致KIR的二聚化，這反過來導致阻止NK介導的細胞裂解的抑制性信號轉(zhuǎn)導的起始和傳遞。通過本領域內(nèi)熟知的標準方法，如Coligan等人，eds.，CurrentProtocolsinImmunology,GreenePublishingAssoc.andWileyInterscience，N.Y.，(1992，1993)中的例子所描述的方法，進行所述體外細胞毒性測定法。在加入NK細胞之前用51Cr標記耙細胞，然后以從細胞釋放入培養(yǎng)基的"Cr(作為殺死的結(jié)果)的比例來評估殺傷作用。阻止KIR二聚化的試劑或阻止KIR結(jié)合HLA-Cw4的試劑的加入導致通過KIR介導的抑制性信號轉(zhuǎn)導的起始和傳遞的阻止。因此這些試劑的加入導致NK介導的乾細胞的殺傷的增加。因此，該步驟鑒定了試劑，所述試劑通過例如阻止配體結(jié)合或阻止KIR的二聚化或參與將信號從細胞外側(cè)轉(zhuǎn)導至細胞內(nèi)側(cè)的其他分子事件(表明KIR已結(jié)合了配體)來阻止KIR誘導的負信號轉(zhuǎn)導。在特定的"Cr釋放細胞毒性測定中，表達KIR2DL1的YTS效應細胞(YTS-2DL1)可殺死LCL721.221-Cw3把細胞，但不殺死LCL721.221-Cw4細胞。相反地，缺少KIR的YTS效應細胞(YTS)有效地殺傷兩種細胞系。因此YTS-2DL1由于HLA-Cw4i秀導的通過KIR2DLl的抑制性信號轉(zhuǎn)導的原因不能殺死LCL721.221-Cw4細胞。當在該"Cr釋放細胞毒性測定法中用本發(fā)明的阻斷性抗KIRmAb或mAb預溫育YTS-2DL1細胞時，LCL721.221-Cw4細胞以抗KIRmAb濃度依賴性的方式被殺死。(2)為確定試劑是否阻止KIR與HLAI類的相互作用，進行下列檢測在濃度不斷增加的受試抗KIRmAb的情況下或不存在受試抗KIRmAb的情況下，在4"C下用10ug/ml可溶性KIR2DL1-Fc融合蛋白(如Wagtmann等人Immunity.1995.第3巻，pages801-809中描述的產(chǎn)生的和純化的)溫育用HLA-Cw4轉(zhuǎn)染的細胞系721.221(Litwin等人JournalofExperimentalMedicine.1993.第178巻，pages1321-1336)，進行30分鐘。洗滌細胞，然后用識別KIR-Fc融合蛋白的Fc部分的二抗溫育，再洗滌，然后通過標準的方法在流式細胞儀(FACScalibur，BecktonDickinson)上進行分析。在抗KIRmAb不存在的情況下，KIR-Fc蛋白充分地結(jié)合721.221-Cw4細胞。在阻止KIR對HLA-C的結(jié)合的抗KIRmAb存在的情況下，KIR-Fc對所述細胞的結(jié)合減少，該mAb被稱為"阻斷性mAb，，。如果抗KIRmAb不導致KIR-Fc蛋白對細胞的結(jié)合的減少，那么所述抗KIRmAb被稱為"非阻斷性"mAb。如果抗KIRmAb通過表達KIR的NK細胞誘導表達HLA-C的乾細胞的殺死(通過上面的實驗1)并且其不阻止KIR對HLA-C的結(jié)合(上述的實驗2中)，那么所述inAb是本發(fā)明的抗體，其通過例如減少二聚化而不是阻止KIR對HLA-C的結(jié)合來阻斷抑制性KIR信號轉(zhuǎn)導。本發(fā)明的抗體能夠減少例如部分地或完全中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制。例如，本發(fā)明的優(yōu)選的抗體能夠誘導匹配的或HLA相容的或自體的耙細胞群體(即在所述抗體不存在的情況下不能有效地被M細胞裂解的細胞群體)的裂解。因此，本發(fā)明的抗體也可被確定在體外和體內(nèi)具有促進、加強或提高M細胞的細胞毒性的活性。在免疫和抗體產(chǎn)生后，可進行特定的選擇步驟以分離本發(fā)明的抗體。在鑒定為能夠結(jié)合KIR多肽的單克隆抗體后，立即就其減少UR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制而不減少對HLA結(jié)合的能力，和/或其阻止KIR二聚化的能力選擇所迷抗體?？扇绱颂幩枋龅姆椒ㄟM行該選擇o在特定的方面，本發(fā)明也涉及產(chǎn)生結(jié)合人KIR受體基因產(chǎn)物上的決定子的抗體或抗體片段的方法，其中所述抗體能夠減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制，其包括步驟(a)用包含KIR多肽的免疫原免疫非人哺乳動物；(b)從所述免疫的動物制備抗體，其中所述抗體結(jié)合所述KIR多肽，(c)選擇(b)的能夠減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的抗體，和(d)選擇(c)的不減少KIR對HLA-C的結(jié)合的抗體，其中步驟(c)和(d)的順序可任意地顛換。在一個實施方案中，步驟(b)中制備的抗體是單克隆抗體。因此，如此處所用的，術語"從所述免疫的動物制備抗體"包括從免疫的動物獲得B細胞且使用這些B細胞產(chǎn)生表達抗體的雜交瘤，和從免疫的動物的血清直接獲得抗體。在另一個實施方案中，如在針對表達相關HLAI類分子的粑細胞的鉻釋放測定法中所測量的，步驟(c)中選擇的抗體引起至少10%的由NK細胞(所述NK細胞展示至少一種被所述抗體識別的KIR)介導的NK細胞毒性的抑制的增加或減少，優(yōu)選地至少40或50%或更優(yōu)選地至少70%的NK細胞毒性的增加。根據(jù)另一個實施方案，本發(fā)明提供了包含來自非人宿主的B細胞的雜交瘤，其中所述B細胞產(chǎn)生結(jié)合存在于人KIR受體基因產(chǎn)物例如人抑制性KIR受體基因產(chǎn)物上的決定子的抗體，且所述抗體能夠減少所述受體的抑制性活性。如此處所描述的通過將來自免疫的非人哺乳動物的脾細胞與永生化細胞系融合建立本發(fā)明的雜交瘤。就該抗體的存在篩選通過該融合產(chǎn)生的雜交瘤。特別地，所述雜交瘤產(chǎn)生不阻止KIR對HLA-C結(jié)合和/或識別存在于上述的結(jié)構(gòu)域1或結(jié)構(gòu)域2或同源結(jié)構(gòu)域上的決定子且導致NK細胞的細胞毒性的加強的抗體。在分開的方面，本發(fā)明的試劑在對KIR2DL1或KIR2DL3的結(jié)合中與l-2W117-A3和/或1-26F117-A々和/或本發(fā)明的其他抗體竟爭，和/或結(jié)合與KIR2DL1和/或KIR2DL3結(jié)合的表位相同的或基本相同的表位。可使用本領域內(nèi)已知的各種方法鑒定這些試劑。例如，可使用已知的篩選測定法確定與本發(fā)明的抗體例如l-26F117-A3和/或1-26F117-A4竟爭的一種或多種抗體，在所述測定法中，可評估抗體的竟爭。許多這樣的測定法可常規(guī)地實施且在本領域內(nèi)是熟知的(參見例如，美國專利5,660,827，其明確地在此引用作為參考)。例如，當從不同來源的動物獲得要被檢查的受試抗體時，或其甚至是不同的Ig同種型時，可使用簡單的竟爭測定法，在所述測定法中，將對照抗體(例如l-26F117-A3或l-26F117-A4)與受試抗體混合，然后施用于包含KIIUDL1和/或KIR2DL3的任一種或兩者的樣品中。基于例如ELISA、放射免疫測定法、Western印跡法以及BIAC0RE分析的使用的方案適合用于該簡單竟爭研究。在某些實施方案中，可在施用于KIR抗原樣品之前，將對照抗體和不同量的受試抗體(例如以大約1:1、1:2、1:10或大約1:100的比例)預混合一段時間。可選擇地，可筒單地分開地加入對照和不同量的受試抗體并在暴露于KIR抗原樣品期間混合。只要可區(qū)分結(jié)合的和游離的抗體(例如，通過使用分離或洗滌技術以除去未結(jié)合的抗體)以及區(qū)分對照抗體和受試抗體(例如，通過使用物種特異性或同種型特異性二抗或通過用可檢測的標記特異性地標記對照抗體)，就能夠確定受試抗體是否減少對照抗體對不同KIR2DKL抗原的結(jié)合，表明所述受試抗體識別與對照識別的表位基本上相同的表位。在完全無關的抗體(不結(jié)合KIR的抗體)存在的情況下的(標記的)對照抗體的結(jié)合可用作對照高值?？赏ㄟ^將所述標記的對照抗體與相同的但未標記的抗體一起溫育來獲得對照低值，在所述溫育中可發(fā)生竟爭并減少標記的抗體的結(jié)合。在檢測測定法中，在受試抗體存在的情況下標記的抗體的反應的顯著降低表明受試抗體識別基本上相同的表位，即其為與標記的對照抗體竟爭的抗體。例如，在大約1:1或1:10和大約1:100之間的1-26F117對受試抗體的任何比例時減少l-26F117對照抗體對KIR2DL1和KIR2DL3抗原中的一種或兩者的結(jié)合達至少大約50%，例如至少大約60%或更優(yōu)選地至少大約70%(例如，大約65-100%)的受試抗體被認為是與l-26F117對照抗體竟爭的抗體。也可通過例如流式細胞儀估量竟爭。在該檢測中，首先可用對照抗體(例如1-26F117-A3或l-26F117-A4)溫育具有給定的KIR的細胞，然后用標記有熒光色素或生物素的受試抗體進行溫育。如果在和飽和量的對照抗體預溫育后獲得的結(jié)合是在沒有用對照抗體預溫育的情況下通過受試抗體獲得的結(jié)合(如通過焚光方法測量的)的大約80%、優(yōu)選地大約50%、大約40%或更少(例如，大約30°/)，那么所述抗體被認為與對照抗體竟爭?？蛇x擇地，如果用標記的對照抗體(由熒光色素或生物素標記)獲得的對細胞(所述細胞用飽和量的受試抗體預溫育)的結(jié)合是在沒有用所述受試抗體預溫育的情況下獲得的結(jié)合的大約80°/。、優(yōu)選地大約50°/、大約40%或更少(例如，大約30%)，那么抗體被認為與對照抗體竟爭。也可有利地使用簡單竟爭測定法，在所述測定法中以飽和濃度預吸附受試抗體并將所述抗體用于在其上固定了KIR2DL1或KIR2DL2/3中的一種或兩者的表面。簡單竟爭測定法的表面優(yōu)選地是BIACORE芯片(或適合用于表面等離子共振分析的其他介質(zhì))。測量對照抗體(例如l-26F117-A3或l-26F117-A4)對包被有KIR的表面的結(jié)合。將單獨的對照抗體對包含KIR的表面的該結(jié)合與在受試抗體存在的情況下對照抗體的結(jié)合進行比較。在受試抗體存在的情況下，對照抗體對包含KIR2DL1和KIR2DL2/3的表面的結(jié)合的顯著減少表明所述受試抗體識別與對照抗體識別的表位基本相同的表位，這樣受試抗體"竟爭"對照抗體。減少對照抗體對KIR2DL1和KIR2DL2/3抗原兩者的結(jié)合達至少大約20%或更多、至少大約40%、至少大約50%、至少大約70%或更多的任何受試抗體可被當作與所述對照抗體竟爭的抗體。優(yōu)選的，這樣的受試抗體可減少對照抗體對至少KIR2DL1、2和3抗原中的各抗原的結(jié)合達至少大約50%(例如，至少大約60%、至少大約70%或更多)。將認識到，對照和受試抗體的順序可交換；即，在竟爭測定中，可首先將對照抗體結(jié)合至表面，然后再將受試抗體與表面接觸。優(yōu)選地，首先將具有更高的對于KIR2DL1和KIR2DL2/3抗原的親和力的抗體結(jié)合至包含KIR2DL1和KIR2DL2/3的表面，如所預期的，看到的對于二抗(假定所述抗體是竟爭的)結(jié)合的減少更明顯。在此處的實施例中以及例如在Saunal和Rege幽rtel,(1995)J.Immunol.Methods183:33一1中提供了這些測定法的其它實例，所述參考資料的公開內(nèi)容在此引用作為參考?？墒褂帽绢I域技術人員已知的方法確定抗體或其他試劑是否結(jié)合與本發(fā)明的抗體例如l-26F117-A3或l-26F117-A4識別的表位區(qū)域相同或基本相同的表位區(qū)域。在表位作圖/表征方法的實例中，可使用在KIR2DLl或KIR2DL2/3蛋白中暴露的氨基/羧基的化學修飾通過表位"足跡法"確定抗KIR抗體的表位區(qū)域。該足跡法技術的一個特定例子是使用HXMS(通過質(zhì)鐠測定法檢測的氫氖交換)，其中發(fā)生受體和配體蛋白酰胺質(zhì)子的氫/氘交換、結(jié)合和回復交換(backexchange)，其中參與蛋白結(jié)合的主鏈酰胺基團受到保護而免受回復交換，從而仍保持氘化?？赏ㄟ^胃蛋白酶的蛋白水解作用、快速微柱高效液相色鐠分離(fastmicroborehigh-performanceliquidchromatography)和/或電噴霧電離質(zhì)鐠法(electrosprayionizationmassspectrometry)在該點上鑒定相關區(qū)域。參見，例如，EhringH，AnalyticalBiochemistry,第267巻(2)pp.252—259Q999)和/或Engen，J.R.和Smith,D.L.(2001)Anal.Chem.73，256A-265A。合適的表位鑒定技術的另一個例子是核磁共振表位作圖(NMR)，其中一般比較游離抗原和與抗原結(jié)合肽例如抗體復合的抗原的二維核磁共振譜的信號的位置。通常用15N選擇性地對抗原進行同位素標記，以使在醒R譜中只看到對應于抗原的信號而看不到來自抗原結(jié)合肽的信號。和游離的抗原的鐠相比，來源于參與和抗原結(jié)合肽相互作用的氨基酸的抗原信號通常在復合物的鐠中發(fā)生位置偏移，從而可以該方式鑒定參與結(jié)合的氨基酸。參見，例如，ErnstScheringResFoundWorkshop.2004;(44):149-67;Huang等人，JournalofMolecularBiology,第281巻(l)pp.61-67(1998);和Saito和Patterson,Methods.1996Jun;9(3):516-24。也可使用質(zhì)鐠測定法進行表位作圖/表征。參見例如，Downward,JMassSpectrom.2000Apr;35(4):493-503和Kiselar和Downard，AnalChem.1999May1;71(9):1792—801。也可將蛋白酶降解技術用于表位作圖和鑒定中?？赏ㄟ^蛋白酶降解，例如通過以大約1:50的胰蛋白酶對KIR2DL1或KIR2DL2/3的比例在37"C和pH7-8下進行降解，然后就肽的鑒定進行質(zhì)謙(MS)分析來確定抗原決定簇相關區(qū)域/序列。隨后可通過將接受胰蛋白酶降解的樣品與用抗體溫育然后接受例如胰蛋白酶的降解的樣品比較，然后鑒定被抗KIR抗體保護免受胰蛋白酶切割的肽(從而揭示抗體的足跡)。其他酶如胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶也可或可選擇地用于相似的表位表征法。此外，酶促降解可提供用于分析潛在的抗原決定簇序列在KIR結(jié)合劑的背景中是否存在于KIR2DL1的區(qū)域內(nèi)的快速方法。如果所述多肽不被暴露表面，其很可能與免疫原性/抗原性無關。關于相似技術的描述，參見例如，Manca，Ann1stSuperSanita.1991;27(1):15-9。定點誘變是用于闡明結(jié)合表位的另一個技術。例如，在"丙氨酸掃描"中，用丙氨酸殘基置換蛋白片段內(nèi)的各殘基，并測量結(jié)合親和力的結(jié)果。如果突變導致親和力的明顯減小，那么其很可能參與結(jié)合。對于結(jié)構(gòu)表位是特異性的單克隆抗體(即，不結(jié)合未折疊的蛋白的抗體)可用于驗證丙氨酸置換不影響蛋白的總體折疊。參見，例如，Clackson和Wells,Science1995;267:383-386;和Wells，ProcNatlAcadSciUSA1996;93:1-6。也可將電子顯微鏡用于表位"足跡印跡(foot-printing)"。例如，Wang等人，Nature1992;355:275-278協(xié)同使用冷凍電鏡術(cryoelectronmicros-copy)、三維圖像重建和X(射)線衍射晶體分析法確定天然豇豆花葉病毒的衣殼表面上的Fab片段的物理足跡。用于表位估計的"標記-游離(label-free)"測定法的其他形式包括表面等離子共振(SPR，BIAC0RE)和生物膜層反射光鐠分析技術(reflectometricinterferencespectroscopy)(RifS)。參見例如，F(xiàn)2gerstam等人，JournalOfMolecularRecognition1990;3:208-14;Nice等人，J.Chromatogr.1993;646:159-168;Leipert等人，Angew,Chem.Int.Ed.1998;37:3308-3311;Kriiger等人，BiosensorsandBioelectronics2002;17:937-944。也應當指出，可在此處描述的一個或多個示例性竟爭測定法中鑒定抗體，所述抗體結(jié)合與本發(fā)明的抗體結(jié)合的表位相同或基本相同的表位。KIR二聚化的阻止根據(jù)本發(fā)明，在不干擾KIR對HLA-C的結(jié)合的情況下阻止NK細胞的細胞毒性的抑制的一個方法是阻止KIR的二聚化。在一個方面中，不千擾KIR對HLA-C的結(jié)合的情況下阻止NK細胞的細胞毒性的抑制的另一個方法是阻止KIR的群集。如實施例1中所描述的，使用不同的分子建模方法，包括"保守位點方法"、"蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)對接方法"和"晶體堆疊方法"(全部在下面進行描述)，發(fā)現(xiàn)在KIR上存在允許兩個KIR相互作用的位點。一個這樣的位點，此處定義為"結(jié)構(gòu)域1相關性相互作用位點"，位于KIR的結(jié)構(gòu)域1中，對應于KIR2DL1(SEQID冊14)的細胞外部分的殘基1-101。該位點包含折疊的多肽內(nèi)的許多相鄰氨基酸殘基。組成該位點的氨基酸可被本發(fā)明的試劑結(jié)合。一個KIR分子中的相互作用位點中的氨基酸可與相鄰的KIR中的相同位點中的氨基酸相互作用。因此，KIR-KIR二聚化包括一個KIR中的"結(jié)構(gòu)域l相關性相互作用位點"中的氨基酸與另一個KIR中的"結(jié)構(gòu)域l相關性相互作用位點"中的氨基酸之間的相互作用。該另一個KIR可以是相同的類型，例如KIR2DL1-KIR2DL1相互作用。然而，因為"結(jié)構(gòu)域l相關性相互作用位點，，在大多數(shù)或所有其他KIR中是保守的，因此，所述相互作用也可以存在于不同的KIR之間，例如KIR2DL1-KIR2DL2或KIR2DL1-KIR2DS3或是其他相互作用。除了KIR的結(jié)構(gòu)域1中的相互作用位點外，也鑒定了結(jié)構(gòu)域2中的不同的相互作用位點，所述位點稱為"結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點"。KIR的結(jié)構(gòu)域2對應于KIR2DL1(SEQIDN0:14)的細胞外部分的殘基105-200。兩個KIR可通過一個KIR中的"結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點"中的氨基酸與另一個KIR中的"結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點"中的氨基酸之間的相互作用二聚化。"結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點"中的氨基酸在大多數(shù)或所有其他KIR中是保守的；因此二聚化可發(fā)生在相同類型的兩個KIR之間(例如KIR2DL2-KIR2DL2或KIR2DL3-KIR2DL3)或不同類型的KIR之間(例如KIR2DL1-KIR2DL2或KIR2DL1-KIR2DS4)。本發(fā)明因此提供了用于阻止KIR二聚化的試劑和相關方法，其中所述試劑可結(jié)合結(jié)構(gòu)域1或2相關性相互作用位點內(nèi)的KIR決定子，從而通過干擾結(jié)構(gòu)域1或2相關性相互作用位點中包含的氨基酸之間的相互作用來抑制或減少KIR的二聚化。所述決定子可包含在所述結(jié)構(gòu)域1或2相關性相互作用位點中，然而，所述決定子也可與相互作用位點相鄰但仍然影響二聚化。在一個實施方案中，所述決定子是表位，特別是結(jié)構(gòu)表位。特別地，決定子可由至少兩個KIR2DL受體組群的成員所共有。更特別地，決定子可由至少KIR2DL1和KIR2DL2和-3所共有。本發(fā)明的某些抗體，除了識別KIR2DL的多個基因產(chǎn)物外，也可識別存在于其他抑制性KIR例如KIR3DL受體組群的基因產(chǎn)物上的決定子。此外，本發(fā)明的抗體可與激活性KIR交叉反應，所述KIR包括但不限于KIR2DS1、或KIR2DS2或KIR2DS3。決定子或表位可代表由所述KIR家族成員共有的表位片段或構(gòu)象表位。與KIR的結(jié)構(gòu)域1或結(jié)構(gòu)域2相關的本發(fā)明的相互作用位點作為相鄰的氨基酸殘基存在于折疊的多肽中，從而為構(gòu)象相互作用位點。在實施例中給出和在下面產(chǎn)生特定殘基和其位置。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述決定子是與結(jié)構(gòu)域l或2相關性相互作用位點相鄰或包含在其中的構(gòu)象表位。根據(jù)上面，在本發(fā)明的一個方面，通過抑制兩個結(jié)構(gòu)域l相關性相互作用位點之間的相互作用來減少或阻止KIR的二聚化。在另一個方面，通過抑制兩個結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點之間的相互作用來減少或阻止KIR的二聚化。在另一個方面，本發(fā)明提供了產(chǎn)生結(jié)合人KIR受體基因產(chǎn)物上的決定子的抗體或抗體片段的方法，其中所述抗體能夠減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制，其包括步驟(a)用包含KIR多肽的免疫原免疫非人哺乳動物；(b)從所述免疫的動物制備抗體，其中所述抗體結(jié)合所述KIR多肽，(c)選擇(b)的阻止KIR基因產(chǎn)物二聚化的抗體，和(d)選擇(c)的能夠減少KIR介導的對M細胞的細胞毒性的抑制的抗體，其中步驟(c)和(d)的順序可任意顛換。在一個實施方案中，步驟(b)中制備的抗體是單克隆抗體。因此，術語"從所述免疫的動物中制備抗體"，如此處所用的，包括從免疫的動物中獲得B細胞和使用這些B細胞產(chǎn)生表達抗體的雜交瘤，以及直接從免疫的動物的血清獲得抗體。在另一個實施方案中，步驟(c)中選擇的抗體是結(jié)合本發(fā)明的決定子且阻止KIR二聚化的抗體，更特別地結(jié)合本發(fā)明的結(jié)構(gòu)域1或結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點且阻止KIR二聚化的抗體。在另一個實施方案中，如在針對表達相關HLAI類分子的靼細胞的標準鉻釋放測定法中所測量的，步驟(d)中選擇的抗體引起至少10%的由NIC細胞(所述NK細胞展示至少一種被所述抗體識別的KIR)介導的NK細胞毒性的抑制的增加或減少，優(yōu)選地至少40或50%或更優(yōu)選地至少70%的NK細胞毒性的增加。根據(jù)另一個實施方案，本發(fā)明提供了包含來自非人宿主的B細胞的雜交瘤，其中所述B細胞產(chǎn)生結(jié)合存在于人KIR受體基因產(chǎn)物例如人抑制性KIR受體基因產(chǎn)物上的決定子的抗體，且所述抗體能夠減少所述受體的抑制性活性。如此處所描述的通過將來自免疫的非人哺乳動物的脾細胞與永生化細胞系融合建立本發(fā)明的雜交瘤。就該抗體的存在篩選通過該融合產(chǎn)生的雜交瘤。特別地，所述雜交瘤產(chǎn)生識別存在于上述結(jié)構(gòu)域1或結(jié)構(gòu)域2或同源結(jié)構(gòu)域上的決定子且通過減少或阻止KIR的二聚化導致NK細胞的加強的抗體?？墒褂帽绢I域內(nèi)已知的方法(經(jīng)過筒單修改)檢測試劑是否通過阻止KIR二聚化或群集來減少KIR介導的抑制。例如，由Faure等人(JImmunol.2003;170:6107-14)描述的基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的方法可適用于下列檢測本發(fā)明的試劑是否減少或阻止KIR二聚化和/或群集的測定。在該測定法中，將表達KIR2DL1的細胞系YTS-2DL1和表達重組HLA-Cw4分子(其為KIR2DL1的配體)的靶細胞一起溫育。轉(zhuǎn)染的HLA-Cw4分子在其C末端包含當用454nm激光激發(fā)時分別發(fā)射綠色或黃色光的綠色熒光蛋白(GFP)或黃色熒光蛋白(YFP)。將用Cw4-GFP和Cw4-YFP構(gòu)建體共轉(zhuǎn)化的細胞與YTS-2DL1M細胞混合，在37'C下溫育20分鐘，并固定細胞綴合物。然后通過在激光共聚焦掃描顯微鏡上在454nm下進行激發(fā)，同時記錄光譜熒光圖像(spectralfluorescentimages)來進行FRET分析。通過光漂白YFP信號，可獲得來自GFP蛋白的焚光測量值，所述蛋白依賴于其對YFP的接近程度(即當熒光從YFP向GFP轉(zhuǎn)移時)可在不同的波長上發(fā)射光(FRET信號)。當HLA-Cw4分子均勻地分布在處于靜息狀態(tài)的轉(zhuǎn)染的細胞的表面時，非常少量的HLA-Cw4分子形成這樣近的接近(少于100A，這是產(chǎn)生FRET信號所必需的，此時熒光從YFP轉(zhuǎn)移至GFP)。然而，在YTS-2DL1細胞存在的情況下，HLA-Cw4分子形成非常近的靠攏，這可通過從YFP至GFP的熒光轉(zhuǎn)換來檢測(Faure等人JImmunol.2003;170:6107-14)。因為KIR-HLAI類結(jié)合的化學計量學是1:1(Fan等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA.1996;93:7178),所以HLA-Cw4的緊密靠近、或群集或二聚化(如由FRET所顯示的)暗示著KIR的相似地緊密靠近。通過在抗KIRmAb存在或不存在的情況下進行該測定法，獲得抗KIRmAb影響KIR群集或二聚化的能力的測量。通過HLA-Cw—GFP將FRET減少至當在NK細胞不存在的情況下溫育耙細胞時觀察到的水平的抗KIRmAb表明為阻止KIR群集或二聚化的mAb。在相同類型的測定法的可選擇的形式中，使用表達野生型HLA-Cw4或某些KIR(所述KIR在YTS細胞中重組地表達，在C末端上具有GFP或YFP標簽)的另一種HLA-C配體的靼細胞。GFP和YFP標記的KIR被HLA-C結(jié)合導致產(chǎn)生FRET信號的群集或二聚化。阻止KIR的群集或二聚化的抗KIRmAb的加入導致減少的FRET信號轉(zhuǎn)導。在可選擇的測定法中，特定抗KIR結(jié)合試劑例如抗體是否阻止KIR二聚化可通過檢測所迷試劑是否結(jié)合KIR的結(jié)構(gòu)域1或2來確定。經(jīng)鑒定結(jié)合結(jié)構(gòu)域1或2的試劑應當減少或阻止KIR二聚化。在實施例8中提供了用于檢測試劑對結(jié)構(gòu)域1或2的結(jié)合的示例性測定法。通過對KIR家族的特定成員KIR2DKL1建模來鑒定結(jié)構(gòu)域1或結(jié)構(gòu)域2相關性相互結(jié)合位點，所述結(jié)合位點包含如圖1中和實施例1和2中所示的兩個構(gòu)象相互作用位點。關于KIR2DL1(SEQIDNO:14)和KIR2DS2(始于SEQIDNO:6的殘基22,參見圖3)的細胞外部分的氨基酸序列，已如此處和實施例1和2中所解釋的預測了下列相互作用位點。結(jié)構(gòu)域1相關性相互作用位點Hl、E2、H5、R6、D31、V32、M33、F34、E35、H36、H50、D57、G58、V59、V83、T84、H85、S86、Q89、L90、S91、A92。結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點P108、S109、LllO、Slll、A112、Q113、P114(或L114)、G115、T125、S127、S129、R131、K155、V156、N157、G158、T159、(J161、A162、D163、S192、D193、P194、L195、L196、V197、S198、V199和T200。因此在一個實施方案中，結(jié)構(gòu)域l相關性相互作用位點包含氨基酸位點H1、E2、H5、R6、D31、V32、M33、F34、E35、H36、H50、D57、G58、V59、V83、T84、H85、S86、Q89、L90、S91、A92。在另一個實施方案中，結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點包含氨基酸位點P108、S109、LllO、Slll、A112、Q113、P114(或L114)、G115、T125、S127、S129、R131、K155、V156、N157、G158、T159、Q161、A162、D163、S192、D193、P194、L195、L196、V197、S198、V199和T200?？赏ㄟ^KIR2DL、KIR2DS、KIR3DL和KIR3DS序列的序列比對預測對應于KIR2DL1中的結(jié)構(gòu)域1和2的其他KIR中的結(jié)構(gòu)域。代表性例子顯示于圖2和3，其顯示KIR2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4、2DS5的比對，并標明結(jié)構(gòu)域1和結(jié)構(gòu)域2相互作用殘基("1"表示結(jié)構(gòu)域1;"2"表示結(jié)構(gòu)域2)(圖2),以及3DL1、3DL2、3DL3、3DS1、2DL1的比對，并標明結(jié)構(gòu)域1和結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用殘基(圖3)。結(jié)合其他KIR家族成員中的這些同源序列且減少或阻止二聚化的試劑也包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。在本說明書中，"人KIR基因產(chǎn)物"是指由KIR基因編碼的蛋白。建模方法當從X射線實驗或同源性建模獲知蛋白的3維結(jié)構(gòu)時，存在至少3個鑒定具有功能性意義的殘基的不同方法。在保守位點方法中，通過序列比對比較蛋白結(jié)構(gòu)上的位點以鑒定保守位點。在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)分子對接方法中，可將蛋白質(zhì)與其自身或另一個蛋白對接以鑒定功能顯著的殘基。在晶體堆積法中，就蛋白在晶體中堆積在相同或不同組成的其他蛋白上的機制檢查X射線晶體以確定功能性位點。在保守位點法中，潛在的相互作用位點可橫跨這些蛋白的分子表面。通過其在表面上的位置和圍繞該位置的大小界定各位點。當已確定與所述位點相關聯(lián)的原子時，可根據(jù)其殘基的組成說明所述位點。然后將通過其殘基確定的位點與系列相關蛋白(例如同源物、直向同源物、類似物或嵌合體)的序列比對中的相同位置中的殘基比較，可鑒定在幾種相關蛋白中具有相同殘基組成的保守位點。這些保守位點與功能意義相關(delSolMA，PazosF，ValenciaA，2003，J.Mol.Biol.326:1289-1302)。在蛋白-蛋白分子對接法中(所述方法最近已進行了綜述(Schneidman-DuhovnyD，NussinovR，WolfsonHJ，2004，Curr.Med.Chem.11:91-107))，兩個表面由表面上的特征描述。特征包括氫鍵形成能力、電荷和疏水性。在基于網(wǎng)格(grid)的方法中，將空間分成立方體，各立方體根據(jù)其相對于表面的位置(內(nèi)部、表面、外部)被賦予值和分配相關的特征組?，F(xiàn)可通過搜尋完全的3移動和3轉(zhuǎn)動自由度使用通過評分函數(shù)獲得的表面的暴力式匹配(Bruteforcematching)。通過FastFourierTransform操控平移并且在標準的旋轉(zhuǎn)空間離散化內(nèi)按照獨立的計算處理旋轉(zhuǎn)。從最高的評分復合開始，可通過許多方法例如形狀互補、范德瓦爾斯相互作用、疏水性、靜電、去溶劑化、氫鍵、原子接觸能量(atomiccontactenergy)、殘基-殘基配對統(tǒng)計和親水基團配對對結(jié)果進行過濾和評分?？稍敿毜卦u估最高評分復合并鑒定相互作用的殘基。在晶體堆積法中，就蛋白在晶體中堆積在其自身和其他蛋白上的機制(不僅為了對稱減少的配位，而且為了晶胞和其相鄰單元內(nèi)的所有相關堆積)檢查x射線結(jié)晶。在該方法中，就其相互作用分析了在3x3x3的晶胞網(wǎng)格內(nèi)的所有蛋白，將所述蛋白繪制在數(shù)據(jù)透視表中，鏈編號示于列，殘基編號以水平方向顯示，相互作用示于單元格內(nèi)。通過各鏈的總相互作用數(shù)目進行的分選鑒定了具有完全的鄰域組的鏈，且可選擇這些鏈中的一條鏈在只具有蛋白和其所有相互作用鄰域的減少的結(jié)構(gòu)組中進一步分析?？稍敿毜卦u估各相互作用和鑒定相互作用的殘基?，F(xiàn)在可通過突變分析研究功能方面來驗證具有功能意義的殘基，且所述殘基用作抑制功能效應的治療劑的粑。抗體依賴于重鏈中的恒定結(jié)構(gòu)域的類型，將抗體分配至5種主要類型中的一種類型IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。這些類型中的幾種類型進一步分成亞類或同種型，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4等。對應于免疫球蛋白的不同類型的重鏈恒定區(qū)分別稱為"ot"、"5"、"e"、"Y"和"M"。不同類型的免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是熟知的。IgG和/或IgM是用于本發(fā)明的優(yōu)選的抗體種類，因為其是生理狀態(tài)下最普遍的抗體并且因為其在實驗室條件下最容易制備。在一個實施方案中，為了避免在體內(nèi)耗盡NK細胞，本發(fā)明的抗體是IgG4亞類或IgGl或IgG2的單克隆抗體，所述抗體不結(jié)合Fc受體且不固定補體。全長抗體包含4個多肽鏈，即由二石克鍵相互連接的兩個重(H)鏈和兩個輕(L)鏈。各重鏈由重鏈可變區(qū)(此處縮寫為HCVR或VH)和重鏈恒定區(qū)組成。重鏈恒定區(qū)由三個結(jié)構(gòu)域CH1、CH2和CH3組成。各輕鏈包含輕鏈可變區(qū)(此處縮寫為LCVR或VL)和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包含一個結(jié)構(gòu)域CL。VH和VL區(qū)可進一步細分為高變區(qū)，稱為互補決定區(qū)(CDR),其間散布有更保守的區(qū)域，稱為框架區(qū)(FR)。各VH和VL由三個CDR和4個FR組成，按下列順序FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4從氨基末端至羧基末端排列。本發(fā)明的抗體可由本領域已知的許多技術產(chǎn)生。一般地，通過用包含KIR多肽例如抑制性KIR多肽(優(yōu)選地KIR2DL多肽，更優(yōu)選地人KIR2DL多肽)的免疫原免疫非人動物來產(chǎn)生其。KIR多肽可包含人KIR多肽的全長序列或其片段或衍生物，一般地免疫原性片段，即包含在表達抑制性KIR受體的細胞的表面上暴露的表位的多肽的部分。這些片段通常包含成熟多肽序列的至少7個連續(xù)氨基酸，更優(yōu)選地其至少IO個連續(xù)氨基酸。其基本上來源于受體的細胞外結(jié)構(gòu)域。更優(yōu)選的是人KIR2DL多肽，其包含至少一個，更優(yōu)選地兩個全長KIRDL多肽的細胞外Ig結(jié)構(gòu)域，且能夠模擬存在于KIR2DL受體中的至少一個構(gòu)象表位。在其他實施方案中，所述多肽包含KIR2DL1(SEQIDN0:14)的細胞外Ig結(jié)構(gòu)域的至少8個連續(xù)氨基酸。在最特別的實施方案中，免疫原包含脂質(zhì)膜中特別是在細胞表面上的野生型人KIR2DL多肽。在一個特定實施方案中，免疫原包含完整的NK細胞，特別是完整的人M細胞，任選地被處理的或被裂解的NK細胞。在優(yōu)選的實施方案中，非人動物是哺乳動物例如嚙齒目動物(例如，小鼠、大鼠等)、牛、豬、馬、兔、山羊、綿羊等。此外，非人哺乳動物可以通過基因改造或基因工程產(chǎn)生"人"抗體，例如XenomouseTM(Abgenix)或HuMAb-MouseTM(Medarex)?？梢员绢I域熟知的用于在小鼠中刺激抗體產(chǎn)生的任何方式(參見,例如E.Harlow和D.Lane,Antibodies:ALaboratoryManual.，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY(1988))進行用抗原免疫非人哺乳動物的步驟。然后將免疫原懸浮于或溶解在緩沖液(任選地具有佐劑，例如完全弗氏佐劑)。用于確定免疫原的量、緩沖液的類型和佐劑的量的方法對于本領域內(nèi)技術人員來說是熟知的且在本發(fā)明中不以任何方式受到限定。對于不同的免疫原這些參數(shù)可以不同，但其容易被闡明。類似地，足以刺激抗體產(chǎn)生的免疫的位置和頻率在本領域也是熟知的。在一般的免疫方案中，在第一天用抗原腹膜內(nèi)注射非人動物，然后大約一周后再次注射。這之后在大約第20天進行抗原的回收注射，所述抗原任選地具有佐劑例如不完全弗氏佐劑。通過靜脈內(nèi)進行回憶注射(recallinjection)，且回憶注射可重復連續(xù)數(shù)天。之后在第40天靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)進行加強注射，通常不用佐劑。該方案導致在大約40天后產(chǎn)生抗原特異性抗體生產(chǎn)性B細胞。也可使用其他方案，只要其導致表達針對用于免疫的抗原的抗體的B細胞產(chǎn)生。關于多克隆抗體的制備，從免疫的非人動物獲得血清，然后通過熟知的技術分離存在于其中的抗體?？墒褂蒙厦嫠镜倪B接至固體支持物的任一免疫原親和純化血清以獲得與抑制性KIR受體反應的抗體。在可選擇的實施方案中，分離來自未免疫的非人哺乳動物的淋巴細胞，在體外培養(yǎng)所述細胞，然后將其在細胞培養(yǎng)中暴露于免疫原。然后收獲所述淋巴細胞并進行下面描述的融合步驟。對于單克隆抗體，下一步驟是從免疫的非人哺乳動物分離脾細胞，隨后用永生化的細胞融合這些脾細胞以形成抗體生產(chǎn)性雜交瘤。從非人哺乳動物分離脾細胞在本領域是熟知的，其通常包括從麻醉的非人哺乳動物取出脾臟，將其切割成小碎片，從脾被膜擠壓脾細胞并使之通過細胞篩網(wǎng)的尼龍網(wǎng)進入合適的緩沖液中以產(chǎn)生單細胞懸浮液。洗滌、離心這些細胞并將其重懸浮于裂解任何紅細胞的緩沖液中。再次離心該溶液，最終將剩下的沉淀物中的淋巴細胞重懸于新配制的緩沖液中。在分離后且以單細胞懸浮液的形式存在后，將淋巴細胞融合至永生化細胞系。這通常是小鼠骨髓瘤細胞系，盡管用于建立雜交瘤的許多其他永生化細胞系在本領域是已知的。優(yōu)選的鼠類骨髄瘤系包括，但不卩艮于，來源于可從SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego，Calif.U.S.A.獲得的MOPC-21和MPC-ll小鼠腫瘤的細胞系或可從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)，Rockville，MarylandU.S.A獲得的X63Ag8653和SP-2細胞。使用聚乙二醇等進行融合。然后將所得的雜交瘤培養(yǎng)在包含一種或多種抑制未融合的親本骨髓瘤細胞生長或存活的物質(zhì)的選擇性培養(yǎng)基中。例如，如果親本雜交瘤細胞缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT或HPRT)，則用于雜交瘤的培養(yǎng)基通常包含次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT培養(yǎng)基)，所述物質(zhì)阻止HGPRT缺陷型細胞的生長。雜交瘤通常生長在巨噬細胞滋養(yǎng)層上。所述巨噬細胞優(yōu)選地來自用于分離脾細胞的非人哺乳動物的同胞仔且在涂板雜交瘤前幾天一般用不完全弗氏佐劑等進行預處理。融合法描述于(Goding，"MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,"pp.59—103(AcademicPress,1986))。使細胞在選擇培養(yǎng)基上生長足夠的時間以形成集落和產(chǎn)生抗體。這通常在7和14天之間，然后就結(jié)合KIR基因產(chǎn)物的抗體的產(chǎn)量測定雜交瘤集落。該測定法通常是比色ELISA型測定法，盡管可使用幾種其他類型的測定法，包括如在本領域內(nèi)熟知的免疫沉淀法、放射免疫效，定法、Biacore測定法或閃爍迫近分析法(ScintillationProximityassays)(SPA)。檢查對于想要的抗體生產(chǎn)是陽性的小孔以確定一個或多個不同的集落是否存在。如果存在超過一個集落，可再克隆細胞并進行培養(yǎng)以確保只有單個細胞已形成產(chǎn)生想要的抗體的集落。通常將具有單個明顯集落的陽性小孔再克隆和再測定以確保只檢測到和產(chǎn)生一種單克隆抗體。然后在合適的培養(yǎng)基例如DMEM或RPMI-1640中更大規(guī)模地培養(yǎng)被確認產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆抗體的雜交瘤?？蛇x擇地，在動物中以腹水腫瘤的方式在體內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細胞。在充分生長以產(chǎn)生想要的單克隆抗體后，將包含單克隆抗體的培養(yǎng)基(或腹水)與細胞分離并純化存在于其中的單克隆抗體。通常使用A蛋白或蛋白G-Sepharose或連接至固體支持物例如瓊脂糖或Sepharose小珠的抗小鼠Ig(所有都描述于例如AntibodyPurificationHandbook,AmershamBiosciences,publicationNo.18-1037-46，EditionAC，其公開內(nèi)容在此引用作為參考)通過層析進行純化。一般通過使用低pH緩沖液(pH3.0或更低的甘氨酸或醋酸鹽緩沖液)從A蛋白/G蛋白柱洗脫結(jié)合的抗體，立即中和包含抗體的級分。按需要混合、透析和濃縮這些級分。根據(jù)可選擇的實施方案，從雜交瘤分離編碼本發(fā)明的抗體的DNA,將其置于合適的表達載體以轉(zhuǎn)染入合適的宿主。然后將所述宿主用于抗體或其變體的重組生產(chǎn)，所述變體是例如該單克隆抗體的人源化形式、抗體的活性片段或包含所述抗體的抗原識別部分的嵌合抗體。特別地，用于該實施方案中的DNA編碼抗體，所述抗體識別KIR2DL基因產(chǎn)物的包含決定子的結(jié)構(gòu)域1和/或結(jié)構(gòu)域2，且引起表達這些KIR受體中的至少一種受體的M細胞的加強。重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸探針)容易地分離編碼本發(fā)明的單克隆抗體的DNA并對其進行測序。分離后，可將DNA置于表達載體中，然后將所述載體轉(zhuǎn)染入宿主細胞例如大腸桿菌(A細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或不另外產(chǎn)生免疫球蛋白的骨髓瘤細胞，以在重組宿主細胞中獲得單克隆抗體的合成。編碼抗體的DNA在細菌中的重組表達在本領域是熟知的(參見，例如，Skerra等人，Curr.OpinioninImmunol"5,pp.256(1993);和Pluckthun，Immunol.Revs.，130，pp.151(1992)。也可如Ward等人(Nature341(1989)544)中公開的，通過選擇免疫球蛋白的組合文庫產(chǎn)生抗體。抗體片段和衍生物可通過本領域已知的技術產(chǎn)生本發(fā)明的抗體的片段和衍生物。"免疫反應性片段"包含完整的抗體的部分，該部分通常為抗原結(jié)合位點或可變區(qū)?？贵w片段的例子包括Fab、FaV、Fab'-SH、F(ab02和Fv片段；雙抗體；任何抗體片段，所述片段為具有由連續(xù)氨基酸殘基的連續(xù)序列組成的一級結(jié)構(gòu)的多肽(此處稱為"單鏈抗體片段，，或"單鏈多肽")，包括但不限于(l)單鏈Fv(scFv)分子(2)只包含一個輕鏈可變結(jié)構(gòu)域而無相聯(lián)的重鏈部分的單鏈多肽，或包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的3個CDR的其部分和(3)只包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域或其包含所迷重鏈可變區(qū)的三個CDR的片段而無相聯(lián)的輕鏈部分的單鏈多肽；和從抗體片段形成的多特異性抗體。例如，F(xiàn)ab和F(ab，)2片段可按照常規(guī)的方法通過分離的抗體的蛋白酶降解產(chǎn)生?？蛇x擇地，可修飾產(chǎn)生本發(fā)明的抗體的雜交瘤的DNA以編碼本發(fā)明的片段。然后將修飾的DNA插入表達載體并用于轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染合適的細胞，所述細胞然后表達想要的片段。在可選擇的實施方案中，可在插入表達載體之前修飾產(chǎn)生本發(fā)明的抗體的雜交瘤的DNA，通過例如用人重鏈和輕鏈恒定區(qū)的編碼序列置換取代同源非人序列(^余，Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,81，pp.6851(1984))或通過將非人免疫球蛋白多肽的全部或部分編碼序列共價連接至免疫球蛋白編碼序列來進行修飾。這樣，制備了具有原始抗體的結(jié)合特異性的"嵌合"或"雜交"抗體。一般地，用這些非免疫球蛋白多肽替換本發(fā)明的抗體的恒定結(jié)構(gòu)域。因此，也可將本發(fā)明的抗體制造成"嵌合"抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/或輕鏈的部分與原始抗體中的對應的序列相同或同源，而鏈的其余部分與來源于另一物種的抗體或?qū)儆诹硪环N抗體類型或亞類的抗體以及所述抗體的片段的對應序列相同或同源，只要其展示想要的生物學活性(Cabilly等人，/^7J:;Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，81，pp.6851(1984))。來自已知的可變重鏈(VH)和可變輕鏈(VL)鏈和人的恒定區(qū)的抗體的重組產(chǎn)生已由例如下列研究者進行了描述Ruker等人(AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences.1991;646:212-219)，其報導了人單克隆抗HIV-l抗體在CHO細胞中的表達；Bianchi等人(BiotechnologyandBioengineering.2003;84:439-444)，其描述了使用反式互補表達栽體高水平表達全長抗體，NoSooKim等人(Biotechnol.Prog.2001;17:69-75)，其描述了在二氫葉酸還原酶介導的基因擴增期間在CH0細胞的人源化抗體表達中的克隆變異發(fā)生的關鍵決定子；King等人(BiochemicalJournal.1992;281:317-323)，其報導了小鼠-人嵌合抗體和嵌合Fab，片段的表達、純化和表征；WO2003064606，其描述了分離的人單克隆抗體，所述抗體包含人重鏈和人輕鏈可變區(qū)，兩者都包含F(xiàn)R1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4序列；和WO2003040170，其描迷了嵌合或人單克隆抗體以及特異性結(jié)合并激活人CD40的抗原結(jié)合部分。在示例性實施方案中，產(chǎn)生了來自1-26F117-A3或1-26F117-A4VH和VL序列或其衍生物或變體的嵌合重組mAb。為將抗體基因亞克隆入哺乳動物表達載體，基于編碼mAb的重鏈和輕鏈可變區(qū)的cDNA，設計分別用于擴增可變輕鏈(VL)和可變重鏈(VH)基因的引物。通過PCR修飾可變區(qū)以包含Kozak序列、前導序列和單一限制性內(nèi)切酶位點。對于VL，通過i殳計5，PCR引物以引入HindIII位點、Kozak序列和與可變輕鏈區(qū)的前導序列的5，末端同源來獲得其。3，引物與可變區(qū)的3，末端同源且在可變區(qū)的3，邊界引入BsiWI位點。除了在5，和3，末端引入Notl和Nhel位點分別取代HindIII和BsiWI夕卜，以相似的方式產(chǎn)生VH區(qū)。使用標準技術將擴增的基因產(chǎn)物各自克隆入商購可獲得的或其他已知的真核表達載體中，所述載體包含人或非人抗體的輕鏈和重鏈恒定區(qū)。商購可獲得的載體的實例是pASK84,可從ATCC(美國典型培養(yǎng)物保藏中心，目錄號87094)商購獲得。用HindIII和BsiWI降解VLDNA片段并將其連接入真核表達載體，所述載體包含編碼對氨節(jié)青霉素具有抗性的p-內(nèi)酰胺酶基因和大腸桿菌復制起點(pUC);所得的質(zhì)粒稱為VLCL。用Notl和Nhel降解VHDNA片段并將其導入如上所述導入VL片段獲得的VLCL載體。所得的質(zhì)粒包含在相同的質(zhì)粒上編碼抗體的重鏈和輕鏈的功能表達盒。將連接的質(zhì)粒用于轉(zhuǎn)化大腸桿菌。從這些氨芐青霉素抗性細菌群體制備質(zhì)粒DNA并用于轉(zhuǎn)染入CH0細胞或其他哺乳動物細胞系?？伞嚼粲脴藴实姆椒ㄈ缋?MolecularCloning"，Sambrook等人中描述的方法進行轉(zhuǎn)染和細胞培養(yǎng)。所得的結(jié)果是穩(wěn)定地表達和分泌目的抗體分子(例如包含其原始VH和VL區(qū)域和來源于人mAb的恒定區(qū)的1-26F117的嵌合形式)的轉(zhuǎn)染的細胞系?？稍谙铝蠫enBank條目中找到編碼人IgG的恒定區(qū)的完整cDNA序列，其各自以其全文在此引用作為參考人IgGl恒定重鏈區(qū)GenBank目錄號J00228人lgG2恒定重鏈區(qū)GenBank目錄號J00230人lgG3恒定重鏈區(qū)GenBank目錄號X04646人IgG4恒定重鏈區(qū)GenBank目錄號K01316人K輕鏈恒定區(qū)GenBank目錄號J00241。可選擇地，可將l-26F117-A3或l-26F117-A4的VH和VL區(qū)或其如，F(xiàn)ab片段)?？砂凑障嗨频脑懋a(chǎn)生抗體的同種型轉(zhuǎn)換。例如，可通過將編碼VL和VH序列的cDNA亞克隆入質(zhì)粒獲得具有和l-26F117-A3或-A4的特異性完全相同的特異性但卻是不同同種型的抗體，所述質(zhì)粒包含編碼K輕鏈恒定區(qū)和選自IgGl或IgG2或IgG3或IgG4的恒定重鏈區(qū)的重鏈恒定區(qū)的cDNA。因此，所產(chǎn)生的抗體可具有任何同種型，因此可使用本領域內(nèi)的常規(guī)技術對抗體進行同種型轉(zhuǎn)換。這些技術包括使用直接的重組技術(參見，例如，美國專利4,816,397)、細胞-細胞融合技術(參見例如，美國專利5，916，771)和本領域已知的其他合適方法。因此，由本發(fā)明提供的抗體的效應作用可隨親本抗體的同種型通過同種型轉(zhuǎn)換變成例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE或IgM抗體而被"改變"，以用于各種治療或其他用途。根據(jù)另一個實施方案，本發(fā)明的抗體是人源化的。本發(fā)明的抗體的"人源化"形式是包含最少的來源于鼠類免疫球蛋白的序列的特殊嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(例如Fv、Fab、FaV、F(abO2或抗體的其他抗原結(jié)合子序列)。人源化抗體的大部分是人免疫球蛋白(接受者抗體)，其中來自接受者的互補決定區(qū)(CDR)的殘基可被原始抗體(供體抗體)的CDR的殘基取代，同時保持想要的原始抗體的特異性、親和力和能力。在一些情況下，人免疫球蛋白的Fv框架殘基可被對應的非人殘基取代。此外，人源化抗體可包含未在接受者抗體或引入的CDR或框架序列中發(fā)現(xiàn)的殘基。可進行這些修飾以進一步改善和最優(yōu)化抗體性能。一般地，人源化抗體基本上包含至少一個，通常兩個可變結(jié)構(gòu)域的所有殘基，其中所有或基本上所有CDR區(qū)對應于原始抗體的CDR區(qū)并且所有或基本上所有FR區(qū)都是人免疫球蛋白共有序列。最適宜地，人源化抗體也包含免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)(通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū))的至少部分。關于其他詳細內(nèi)容參見Jones等人，Nature,321，pp.522(1986);Reichmaim等人，Nature,332，pp.323(1988);和Presta，Curr.Op.Struct.Biol"2，pp.593(1992)。因此，可使用此處描述的本領域已知的恒定區(qū)和框架區(qū)人見Ab序列和已建立的技術產(chǎn)生包含l-26F117-A3或l-26F117-A4的VH和VLCDR區(qū)和來自人mAb的恒定區(qū)和框架區(qū)的l-26F117-A3或l-26F117-A4的人源化形式。用于人源化本發(fā)明的抗體的方法在本領域內(nèi)是熟知的。一般地，本發(fā)明的人源化抗體具有從原始抗體導入其中的一個或多個氨基酸。這些鼠類或其他非人氨基酸殘基通常稱作"引入(import)"殘基，其通常取自"引入的"可變結(jié)構(gòu)域?？苫旧习凑障旅鎃inter和合作者(Jones等人，Nature,321，pp.522(1986);Riechmann等人，Nature,332，pp.323(1988);Verhoeyen等人，Science,239，pp.1534(1988))的方法進行人源化。因此，這些"人源化"抗體是嵌合抗體(Cabilly等人，美國專利4,816,567)，其中顯著少于完整的人可變結(jié)構(gòu)域被來自原始抗體的對應序列替代。實際上，本發(fā)明的人源化抗體通常是人抗體，其中一些CDR殘基和可能地一些FR殘基被來自原始抗體中的類似位置的殘基置換。用于產(chǎn)生人源化抗體的人可變結(jié)構(gòu)域(輕鏈和重鏈)的選擇對于減少抗原性非常重要。根據(jù)所謂的"最佳匹配(best-fit)，，法，對已知的人可變結(jié)構(gòu)域序列的整個文庫篩選本發(fā)明的抗體的可變結(jié)構(gòu)域的序列。然后接受最接近小鼠的序列的人序列作為人源化抗體的人框架(FR)(Sims等人，J.Immunol"151，pp.2296(1993);Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.，196，pp.901(1987))。另一個方法寸吏用來自特定輕鏈或重鏈亞組的所有人抗體的共有序列的特定框架?？蓪⑾嗤目蚣苡糜趲追N不同的人源化抗體(Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,89，pp.4285(1992);Presta等人，J.Immunol.,51，pp.1993))。更重要的是，對抗體進行人源化，同時保留對于多種抑制性KIR受體的高親和力和其他有利的生物學特性。為實現(xiàn)該目的，根據(jù)優(yōu)選的方法，使用親本和人源化序列的三維模型通過分析親本序列和各種概念上的人源化產(chǎn)物的方法制備人源化抗體。三維免疫球蛋白模型通常是可獲得的且對于本領域技術人員來說是熟悉的?？色@得舉例說明和展示選擇的候選免疫球蛋白序列的可能的三維構(gòu)象結(jié)構(gòu)的計算機程序。這些展示的檢查允許分析殘基在候選免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影響所述候選免疫球蛋白結(jié)合其抗原的能力的殘基。這樣，可從共有序列和引入序列中選擇和組合FR殘基以獲得想要的抗體特征例如增加的對于耙抗原的親和力。一般地，CDR殘基直接地且最明顯地參與影響抗原結(jié)合。制造"人源化"單克隆抗體的另一個方法是使用XenoMouse(Abgenix，F(xiàn)remont,CA)作為用于免疫的小鼠。XenoMouse是本發(fā)明的鼠類宿主，其免疫球蛋白基因已被功能性人免疫球蛋白基因置換。因此，由該小鼠產(chǎn)生的或在來自該小鼠的B細胞的雜交瘤中產(chǎn)生的抗體已是人的抗體。XenoMouse描述于美國專利6,162,963?？墒褂肏uMAb-MouseTM(Medarex)進行類似的方法。也可按照各種其他技術產(chǎn)生人抗體，例如通過使用其他轉(zhuǎn)基因動物(所述動物已通過基因工程改造而表達人抗體庫(Jakobovitz等人，Nature362(1993)255))進行免疫或通過使用噬菌體展示方法選擇抗體庫來產(chǎn)生人抗體。這些技術對于本領域技術人員來說是熟知的且可如本申請中所公開的從單克隆抗體開始進行。本發(fā)明范圍內(nèi)的其他衍生物包括官能化的抗體，即綴合至或共價地結(jié)合至毒素(例如蓖麻毒素、白喉毒素、相思豆毒素和假單胞菌外毒素)、可檢測的部分(例如熒光部分、放射性同位素或顯像劑)、PEG分子或固體支持物(例如瓊脂糖小珠)等的抗體。用于將這些其他試劑綴合或共價地連接至抗體的方法在本領域內(nèi)是熟知的。當本發(fā)明的抗體用于診斷目的時對可檢測的部分的綴合是有用的。這些目的包括，但不限于，就其細胞表面具有KIR的NK細胞的存在測定生物樣品和在活生物體中檢測具有KIR的NK細胞的存在。這些測定和檢測方法也是本發(fā)明的可選擇的實施方案。本發(fā)明的抗體至固體支持物的綴合用作從來源例如生物液體親和純化NK細胞(所述細胞在其細胞表面具有KIR)的工具。該純化方法是本發(fā)明的另一個可選擇的實施方案，所得的NK細胞的純化群體也是本發(fā)明的另一個可選擇的實施方案。在可選擇的實施方案中，可將本發(fā)明的抗體單獨地或與用于靶向遞送至動物的另一種物質(zhì)一起整合入脂質(zhì)體("免疫脂質(zhì)體")。這些其他物質(zhì)包括用于遞送基因以進行基因治療或用于遞送反義RNA、RNAi或siRNA以抑制NK細胞中的基因的核酸、或用于NK細胞的乾向殺傷的毒素或藥物。用于產(chǎn)生結(jié)合人KIR受體基因產(chǎn)物上的決定子的抗體或抗體片段的上述方法也可用于分離其他試劑，其中所述抗體能夠減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制。在一個特定的實施方案中，本發(fā)明涉及用于通過下列步驟分離能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的試劑的方法a)提供受試試劑庫；和b)選擇在有助于二聚化的條件下(例如在表達HLA-C或其他KIR配體的靶細胞存在的情況下)減少或阻止KIR的二聚化的受試試劑；c)選擇來自(b)的能夠中和KIR介導的對M細胞的細胞毒性的抑制的試劑，其中步驟(b)和(c)的順序可任意顛換。在另一個特定的實施方案中，本發(fā)明涉及用于通過下列步驟分離能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的方法a)提供受試試劑庫；和b)選擇在有助于KIR對HLA-C結(jié)合的條件下(例如在表達HLA-C或其他KIR配體的靶細胞存在的情況下)不可檢測地和/或不顯著地減少或阻止KIR對HU的結(jié)合的受試試劑；c)選擇來自(b)的能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的試劑，其中步驟(b)和(c)的順序可任意顛換。組合物和施用本發(fā)明也提供了組合物，所述組合物在任何合適的媒介物中以在患者或包含NK細胞的生物樣品中有效地可檢測地增強M細胞的細胞毒性的量包含上面定義的試劑例如抗體，包括其片段和衍生物。所述組合物還包含藥物可接受的載體。此處所用的術語"生物樣品"包括但不限于生物流體(例如血清、淋巴或血液)、細胞樣品或組織樣品(例如骨髓)?？捎糜谶@些組合物的藥物可接受的栽體包括，但不限于，離子交換劑、鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白例如人血清白蛋白、緩沖物質(zhì)例如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、硅膠、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、基于纖維素的物質(zhì)、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸鹽、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。本發(fā)明的組合物可用于在患者或生物樣品中增強NK細胞活性的方法。該方法包括將所述組合物與所述患者或生物樣品接觸的步驟。該方法可用于診斷和治療目的。在特定的實施方案中，本發(fā)明涉及通過例如減少或阻止KIR的二聚化但不減少KIR對其HLA配體的結(jié)合來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的方法。在其他實施方案中，通過試劑對決定子或所有KIR以及潛在的其他KIR中的同源相互作用位點的結(jié)合來阻止二聚化，所述決定子影響KIR2DL1、-2或-3的結(jié)構(gòu)域1或2相關性相互作用位點之間的相互作用。在其他實施方案中，本發(fā)明涉及使用試劑例如抗體來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的方法，所述試劑在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一個的結(jié)合中與包含抗體l-26F117-A3或-A4的VH和VL序列的抗體竟爭。在其他實施方案中，本發(fā)明涉及使用試劑例如抗體來減少KIR介導的對M細胞的細胞毒性的抑制的方法，所述試劑結(jié)合被包含抗體l-26F117-A3或-A4的VH和VL序列的抗體識別的KIR2DL1和/或KIR2DL3的表位。對于與生物樣品的一起使用，依賴于樣品的性質(zhì)(液體或固體)，可通過簡單地與樣品混合或直接用于樣品施用抗體組合物?？稍谌魏魏线m的裝置(板、藥袋(pouch)、燒瓶等)中直接將生物樣品與抗體接觸。對于患者的使用，必需配制用于給患者施用的組合物。本發(fā)明的另一個目的是提供藥物制劑，所述藥物制劑包含以lmg/ml至500mg/ml的濃度存在的抗KIR結(jié)合試劑，其中所述制劑具有2.0至10.0的pH。所述制劑還可包含緩沖系統(tǒng)、防腐劑、等滲劑(tonicityagent)、螯合劑、穩(wěn)定劑和表面活性劑。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述藥物制劑是水性制劑，即包含水的制劑。該制劑通常為溶液或懸浮液。在本發(fā)明的其他實施方案中，所迷藥物制劑是水溶液。術語"水性制劑"被定義為包含至少5(^w/w的水的制劑。術語"水溶液"定義為包含至少504w/w的水的溶液，而術語"水性懸浮液"定義為包含至少50W/w的水的懸浮液。在另一個實施方案中，藥物制劑是冷凍干燥制劑，在使用前醫(yī)生或患者向其中加入溶劑和/或稀釋劑。在另一個實施方案中，藥物制劑是即時可用無需任何預先溶解的千燥制劑(例如凍干或噴霧千燥的)。在其他方面，本發(fā)明涉及包含試劑的水溶液和緩沖劑的藥物制劑，其中所述試劑以lmg/ml或以上的濃度存在，其中所述制劑具有大約2.0至10.0的pH。在本發(fā)明的另一個實施方案中，制劑的pH選自2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6,5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9和10.0。在本發(fā)明的其他實施方案中，所述緩沖劑選自醋酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸鹽、甘氨酰甘氨酸、組氨酸、甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉和三(羥曱基)-氨基甲烷、N-二(羥乙基)甘氨酸、曲辛、蘋果酸、琥珀酸鹽、馬來酸、富馬酸、酒石酸、天冬氨酸或其混合物。這些特定緩沖劑中的各緩沖劑構(gòu)成了本發(fā)明的可選擇的實施方案。在本發(fā)明的其他實施方案中，所述制劑還包含藥物可接受的防腐劑。在本發(fā)明的其他實施方案中，所述防腐劑選自苯酚、鄰甲酚、間曱酚、對甲酚、對羥苯酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、2-苯氧乙醇、對羥基苯甲酸丁酯、2-苯基乙醇、苯甲醇、三氯叔丁醇和硫柳汞、溴硝丙二醇、苯甲酸、咪脲、氯己啶、脫氫醋酸鈉、氯甲酚、對羥苯曱酸乙酯、芐索氯銨、氯苯甘醚(3對-氯苯氧基丙烷-l，2-二醇)或其混合物。在本發(fā)明的其他實施方案中，防腐劑以0.lmg/ml至20mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的其他實施方案中，防腐劑以0.lmg/ml至5mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的其他實施方案中，防腐劑以5mg/ml至10mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的其他實施方案中，防腐劑以10mg/ml至20mg/ml的濃度存在。這些特定的防腐劑中的各防腐劑構(gòu)成了本發(fā)明的可選擇的實施方案。防腐劑在藥物組合物中的用途對于本領域技術人員來說是熟知的。為了方便，參考Remington:r力eSc/e/zcea/f/尸rac〃ceo尸？力sr邁"/，第19版，1995。在本發(fā)明的其他實施方案中，所述制劑還包含等滲劑。在本發(fā)明的其他實施方案中，等滲劑選自鹽(例如氯化鈉)、糖或糖醇、氨基酸(例如L-甘氨酸、L-組氨酸、精氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、蘇氨酸)、糖醛(例如甘油(丙三醇)、1，2-丙二醇(丙二醇)、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)或其混合物?？墒褂萌魏翁抢鐔巍㈦p或多糖、或水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、支鏈淀粉、糊精、環(huán)糊精、可溶性淀粉、羥乙基淀粉和羧甲基纖維素鈉。在一個實施方案中，所述糖添加劑是蔗糖。糖醇定義為具有至少一個-OH基的C4-C8碳氫化合物，其包括例如甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、衛(wèi)矛醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。在一個實施方案中，所述糖醇添加劑是甘露醇。上面提到的糖或糖醇可單獨地使用或組合地使用。對使用的量沒有固定的限制，只要所述糖或糖醇在液體制劑中是可溶的且不會不利地影響使用本發(fā)明的方法獲得的穩(wěn)定性效果。在一個實施方案中，糖或糖醇濃度在大約lmg/ml和大約150mg/ml之間。在本發(fā)明的其他實施方案中，等滲劑以lmg/ml至50mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的其他實施方案中，等滲劑以lmg/ml至7mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的其他實施方案中，等滲劑以8mg/ml至24fflg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的其他實施方案中，等滲劑以25mg/ml至50mg/ml的濃度存在。這些特定的等滲劑中的各等滲劑構(gòu)成了本發(fā)明的可選擇的實施方案。等滲劑在藥物組合物中的用途對于本領域技術人員來說是熟知的。為了方便，參考Remington:7力eSc/e/zcea/zdPra"/ce0〃力fl細c7，第19版，1995。在本發(fā)明的其他實施方案中，制劑還包含螯合劑。在本發(fā)明的其他實施方案中，螯合劑選自乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸和天冬氨酸的鹽和其混合物。在本發(fā)明的其他實施方案中，螯合劑以0.lmg/ml至5mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的其他實施方案中，螯合劑以0.lmg/ml至2mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的其他實施方案中，螯合劑以2mg/ml至5mg/ml的濃度存在。這些特定的螯合劑中的各螯合劑構(gòu)成了本發(fā)明的可選擇的實施方案。螯合劑在藥物組合物中的用途對于本領域技術人員來說是熟知的。為了方便，參考Remington:T^eSc/e/7cea/2i//Va"/ceC戶力am3C/，第19版，1995。在本發(fā)明的其他實施方案中，制劑還包含穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑在藥物組合物中的用途對于本領域技術人員來說是熟知的。為了方便，參考Remington:7Xe5We/2cea/cf戶r"〃ceo"力ar邁ac/，第19版，1995。更特別地，本發(fā)明的組合物是穩(wěn)定的液體藥物組合物，其治療活性組分包括多肽，所述多肽可能在液體藥物制劑的貯藏期間展現(xiàn)聚集體形成。"聚集體形成"是指多肽分子之間導致寡聚物的形成的物理相互作用，所述寡聚物可保持可溶性，或為從溶液中沉淀的大的可見的聚集物。"在貯藏期間"意指液體藥物組合物或制劑在制備后不立即給受試者施用。相反地，在制備后，將其以液體形式、以冷凍狀態(tài)或以無水形式(以在以后重新形成液體形式或適合于給受試者施用的其他形式)包裝貯藏。"無水形式"意指通過冷凍干燥(即，凍干；參見例如，WilliamsandPolli(1984)J.ParenteralSci.Technol.38:48-59)、噴霧干燥(參見，Masters(1991)inSpray-DryingHandbook(第5版'，LongmanScienUHcandTechnical,Essez，U.K.),pp.491-676;Broadhead等人(1992)DrugDevel.Ind.Pharm.18:1169-1206;和Mumenthaler等人(1994)Pharm.Res.11:12-20)、風干(Carpenter和Crowe(1988)Cryobiology25:459-470;和Roser(1991)Biopharm.4:47-53)干燥液體藥物組合物或制劑。在液體藥物組合物的貯藏期由多肽產(chǎn)生的聚集體形成可不利地影響該多肽的生物學活性，導致所述藥物組合物的治療功效的喪失。此外，當使用輸注系統(tǒng)施用包含所述多肽的藥物組合物時，聚集體形成可產(chǎn)生其他問題例如管、膜或泵的阻塞。本發(fā)明的藥物組合物還可包含足以減少在組合物貯藏期間由多肽產(chǎn)生的聚集體形成的量的氨基酸堿。"氨基酸堿"是指氨基酸或氨基酸的組合，其中任何給定的氨基酸以其游離的堿形式或以其鹽形式存在。當使用氨基酸的組合時，所有氨基酸可以其游離堿的形式存在，或一些可以其游離的堿形式存在而其他以其鹽形式存在。在一個實施方案中，用于制備本發(fā)明的組合物的氨基酸是具有帶電荷側(cè)鏈的氛基酸，例如精氨酸、賴氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。特定氨基酸(例如，甲硫氨酸、組氨酸、咪唑、精氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、蘇氨酸和其混合物)的任何立體異構(gòu)體或這些立體異構(gòu)體的組合可存在于本發(fā)明的藥物組合物中，只要所述特定的氨基酸以其游離的堿形式或其鹽形式存在。在一個實施方案中，使用L-立體異構(gòu)體。本發(fā)明的組合物也可用這些氨基酸的類似物進行配制。"氨基酸類似物"是指天然發(fā)生的氨基酸的衍生物，所述衍生物產(chǎn)生想要的作用，即減少在本發(fā)明的液體藥物組合物貯藏期間由多肽產(chǎn)生的聚集體形成。合適的精氨基酸類似物包括，例如，氨基胍、鳥氨酸和N-單乙基L-精氨酸，合適的甲硫氨酸類似物包括乙硫氨酸和buthionine，合適的半胱氨酸類似物包括S-甲基-L半胱氨酸。對于其他氨基酸也是這樣，即將氨基酸類似物以其游離的堿形式或其鹽形式整合入組合物。在本發(fā)明的其他實施方案中，以足以防止或延遲蛋白聚集的濃度使用氨基酸或氨基酸類似物。在本發(fā)明的其他實施方案中，當用作治療劑的多肽是包含至少一個易于這樣氧化(即甲硫氨酸殘基至曱硫氨酸亞砜的氧化)的甲硫氨酸殘基時，可加入甲疏氨酸(或其他含硫氨基酸或氨基酸類似物)以抑制甲硫氨酸殘基至曱硫氨酸亞砜的氧化。"抑制"是指一段時間內(nèi)甲硫氨酸被氧化的最小積累。抑制曱硫氨酸氧化導致多肽更多地以其恰當?shù)姆肿有问奖Ａ?。可使用甲硫氨酸的任一立體異構(gòu)體(L或D)或其組合。加入的量應當是足以抑制甲硫氨酸殘基的氧化從而使甲硫氨酸亞砜的量可為管理機構(gòu)接受的量。一般地，這意味著組合物包含不超過大約10%至大約30%的甲硫氨酸亞砜。一般地，這可通過加入甲硫氨酸以使加入的曱硫氨酸對甲硫氨酸殘基的比率在大約1:1至大約1000:1例如10:1至大約100:1的范圍內(nèi)來實現(xiàn)。在本發(fā)明的其他實施方案中，制劑還包含選自高分子量聚合物或低分子量化合物的穩(wěn)定劑。在本發(fā)明的其他實施方案中，所述穩(wěn)定劑選自聚乙二醇(例如PEG3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、羧基/羥基纖維素或其衍生物(例如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)、環(huán)糊精、包含硫的物質(zhì)如單硫代甘油、巰基乙酸和2-甲基硫乙醇和不同的鹽(例如氯化鈉)。這些特定的穩(wěn)定劑中的各穩(wěn)定劑構(gòu)成了本發(fā)明的可選擇的實施方案。藥物組合物也可包含額外的穩(wěn)定劑，所述穩(wěn)定劑進一步增強此處的治療活性多肽的穩(wěn)定性。對本發(fā)明特別有益的穩(wěn)定劑包括，但不限于，甲硫氨酸和EDTA以及非離子型表面活性劑，所述曱硫氨酸和BDTA保護多肽免受甲疏氨酸氧化，所述非離子型表面活性劑保護多肽免受與凍融或機械剪切相關的聚集。在本發(fā)明的其他實施方案中，所述制劑還包含表面活性劑。在本發(fā)明的其他實施方案中，表面活性劑選自去垢劑、乙氧基化荒麻油、聚乙醇酸訐匕甘油(polyglycolyzedglycerides)、乙酰甘油單酯、山梨醇脂肪酸酯、聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物(例如泊洛沙姆例如PluronicF68、泊洛沙姆188和407、TritonX-IOO)、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯和聚乙烯衍生物例如烷基化和烷氧基化衍生物(吐溫，例如Tween-20、Tween-40、Tween-80和Brij-35)、甘油單酯或其乙氧基化衍生物、甘油二酯或其聚氧乙烯衍生物、醇、甘油、凝集素和磷脂(例如磷脂酰絲氨酸、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、二磷脂酰甘油和鞘磷脂)、磷脂的衍生物(例如二棕櫚酰磷脂酸)和溶血磷脂質(zhì)(例如棕櫚酰溶血磷脂酰-L-絲氨酸和乙醇胺、膽堿、絲氨酸或蘇氨酸的l-酰基-sn-甘油-3-磷酸酯)和溶血磷脂膽堿磷脂酰膽堿的烷基、烷氧基(烷基酯)、烷氧基(烷基醚)衍生物，例如溶血磷脂膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿的十二烷基和十四烷基衍生物、和極性首基的修飾，即膽堿、乙醇胺、磷脂酸、絲氨酸、蘇氨酸、甘油、肌醇、和帶正電荷的D0DAC、D0TMA、DCP、BISH0P、溶血磷脂酰絲氨酸和溶血磷脂酰蘇氨酸、和甘油磷脂(例如腦磷脂)、甘油糖脂(例:&口galactopyransoide)、！^糖月旨(侈寸^口4申經(jīng)醜胺、4申經(jīng)節(jié)普月旨)、十二烷基磷酸膽堿、雞蛋溶血卵磷脂、夫西地酸衍生物-(例如?；嵌浞蛭鞯厮徕c等)、長鏈脂肪酸和其鹽C6-C12(例如油酸和辛酸)、酰基肉毒堿和衍生物、賴氨酸、精氨酸或組氨酸的Na?；苌铩⒒蛸嚢彼峄蚓彼岬膫?cè)鏈?；苌?、包含賴氨酸、精氨酸或組氨酸和中性或酸性氨基酸的任一組合的二肽的N"?；苌?、包含中性氨基酸和兩個帶電荷氨基酸的任一組合的三肽的N"?；苌?、DSS(多庫酯鈉，CAS注冊號[577-11-7])、多庫酯鉀，CAS注冊號[128-49-4])、多庫酯鉀，CAS注冊號[7491-09-0])、SDS(十二烷基硫酸鈉或月桂基硫酸鈉)、辛酸鈉、膽酸或其衍生物、膽汁酸或其鹽和甘氨酸或?；撬峋Y合物、熊脫氧膽酸、膽酸鈉、去氧膽酸鈉、?；悄懰徕c、甘膽酸鈉、N-十六烷基-N，N-二曱基-3-銨基-l-丙磺酸、陰離子(烷基-芳基-磺酸)單價表面活性劑、兩性離子表面活性劑(例如N-烷基-N，N-二甲基氨基-l-丙磺酸、3-膽胺(cholamido)-l-丙基二甲基氨基-l-丙磺酸、陽離子表面活性劑(季銨堿)(例如溴化十六烷基三曱銨、氯化十六烷基吡啶銀)、非離子型表面活性劑(例如十二烷基p-D-吡喃葡萄糖普)、poloxamine(例如Tetronic,s)，其為向乙二胺的連續(xù)加入環(huán)氧丙烷和環(huán)氧乙烷衍生的四官能嵌段共聚物，或表面活性劑可選自咪唑啉衍生物或其混合物。這些特定的表面活性劑中的各表面活性劑構(gòu)成了本發(fā)明的可選擇的實施方案。藥物組合物中表面活性劑的用途對于本領域技術人員來說是熟知的。為了方便,參考Remington:r力e5We/2cea/cf戶rac〃ce戶/wr軀7，第19版，1995。在本發(fā)明的其他實施方案中，制劑還包含蛋白酶抑制劑例如EDTA(乙二胺四乙酸)和鹽酸千脒(benzamidineHCl)，但也可4吏用其他商購可獲得的蛋白酶抑制劑。為了抑制自身催化，蛋白酶抑制劑的使用在包含蛋白酶的酶原的藥物組合物中特別有用。其他成分可能存在于本發(fā)明的藥物組合物中。這些額外的組分可包括濕潤劑、乳化劑、抗氧化劑、填充劑、滲透壓改性劑(tonicitymodifiers)、整合劑、金屬離子、油質(zhì)媒介物(oleaginousvehicle)、蛋白(例如，人血清白蛋白、明膠或蛋白)和兩性離子(例如，氨基酸例如甜菜堿、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、賴氨酸和組氨酸)。當然，這些額外的組分不應當不利地影響本發(fā)明的藥物制劑的總體穩(wěn)定性。可將包含本發(fā)明的試劑的藥物組合物在幾個部位例如在局部位置例如皮膚和粘膜位置給需要該治療的患者施用，在不經(jīng)吸收的位置例如，動脈內(nèi)、靜脈內(nèi)、心臟內(nèi)施用和在涉及吸收的位置例如皮膚內(nèi)、皮膚下、肌內(nèi)或腹內(nèi)給患者施用。本發(fā)明的藥物組合物的施用可通過幾個施用途徑，例如，舌、舌下、頰、口內(nèi)、經(jīng)口、胃和腸、鼻、肺，例如通過細支氣管和肺泡或其組合、表皮、皮膚、透皮、陰道、直腸、目艮，例如通過結(jié)膜、輸尿管和胃腸外給需要該治療的患者施用。本發(fā)明的組合物可以幾種劑型施用，例如，作為溶液、懸浮液、乳劑、微乳劑、多層乳劑、泡沫劑、軟骨、糊劑、骨劑、軟奮劑、片劑、包衣片劑、沖洗劑、膠嚢劑，例如硬明膠膠嚢劑和軟明膠膠嚢劑、栓劑、直腸用膠嚢劑、滴劑、凝膠劑、噴霧劑、粉劑、氣霧劑、吸入劑、滴眼劑、眼骨、眼沖洗劑(ophthalmicrinse)、陰道栓劑、陰道環(huán)、陰道軟骨劑、注射液、原位轉(zhuǎn)化液例如原位膠凝作用、原位裝置(insitusetting)、原位沉淀、原位結(jié)晶、輸注液和埋植劑施用?？赏ㄟ^例如共價、疏水和靜電相互作用進一步將本發(fā)明的組合物混合于或附著至藥物載體、藥物遞藥系統(tǒng)和先進的藥物遞藥系統(tǒng)以進一步增強復合物的穩(wěn)定性、增加生物利用度、增加可溶性、減少不利作用、完成本領域技術人員熟知的定時治療和增加患者的順應性或其任何組合。載體、藥物遞藥系統(tǒng)和先進的藥物遞藥系統(tǒng)包括，但不限于，聚合物例如纖維素和衍生物、多糖，例如葡聚糖和衍生物、淀粉和衍生物、聚(乙烯醇)、丙烯酸酯和異丁烯酸酯聚合物、聚乳酸和聚乙醇酸和其嵌段共聚物、聚乙二醇、載體蛋白例如白蛋白、凝膠，例:ft口，熱凝股系統(tǒng)(thermogellingsystems)，食寸:ft口本4頁域4支術人員熟知的嵌段共聚物系統(tǒng)、微團(micelle)、脂質(zhì)體、微球、納米顆粒、液晶和其分散體、L2相和其分散體，其對于脂-水系統(tǒng)中的相位行為領域內(nèi)的技術人員來說熟知的、多聚體微團、多層乳劑、自身乳化、自身微乳化環(huán)糊精和其衍生物以及樹枝狀聚合物(dendrimer)。通過使用例如定量吸入器、干粉吸入裝置和噴霧器(所有裝置對于本領域技術人員來說是熟知的)將本發(fā)明的組合物以固體、半固體、粉劑和溶液的制劑用于試劑的肺部施用。本發(fā)明的組合物特別適合用于控制釋放、持續(xù)釋放、延長釋放、阻釋和緩釋藥物遞藥系統(tǒng)的配制。更特別地，但不限于，組合物用于胃腸外控制釋放和持續(xù)釋放系統(tǒng)(兩個系統(tǒng)都導致施用次數(shù)的多倍減少)的配制，這對本領域技術人員來說是熟知的。更優(yōu)選地的是用于皮下施用的控制釋放和持續(xù)釋放系統(tǒng)。不限制本發(fā)明的范圍，有用的控制釋放系統(tǒng)和組合物的例子是水凝膠、油質(zhì)凝膠、液晶、聚合物微團、微球、納米顆粒。用于產(chǎn)生用于本發(fā)明的組合物的控制釋放系統(tǒng)的方法包括，但不限于，結(jié)晶、濃縮、共結(jié)晶、沉淀、共沉淀、乳化、分散、高壓勻漿、膠嚢化、噴霧干燥、微膠嚢化、凝聚、相分離、溶劑蒸發(fā)以產(chǎn)生微球、擠出和超臨界流體方法。一般參考HandbookofPharmaceuticalControlledRelease(Wise,D.L.，ed.MarcelDekker，NewYork,2000)和DrugandthePharmaceuticalSciences第99巻ProteinFormulationandDelivery(MacNally，E.J.，ed.MarcelDekker，NewYork,2000)?？赏ㄟ^注射器(任選地筆樣注射器)經(jīng)皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)注射來進行胃腸外給藥?？蛇x擇地，可通過輸注泵進行胃腸外給藥。其他選擇是組合物，所述組合物可以是用于以鼻或肺噴霧劑的形式施用藥劑的溶液或懸浮液。作為其他選擇，也可使包含本發(fā)明的試劑的藥物組合物適合于經(jīng)皮膚施用，例如通過無針注射或從貼劑，任選地離子電滲療法貼劑或透粘膜例如經(jīng)口腔施用來進行施用?？墒褂眠m合于肺部藥物遞藥的任何已知類型的裝置以溶液、懸浮液或無水粉劑的形式將試劑在媒介物中通過肺部途徑施用。這些裝置的例子包括，但不限于，三種常見類型的用于肺部藥物遞藥的氣霧劑發(fā)生器，可包括噴射器或超聲噴霧器、定量吸入器或干粉吸入裝置(cf.YuJ，ChienYW.Pulmonarydrugdelivery:Physiologicandmechanisticaspects.CritRevTherDrugCarrSys14(4)(1997)395-453)?；跇藴实臋z測方法學，顆粒的空氣動力學直徑(da)定義為單位密度(lg/cmO的參照標準球狀顆粒的幾何等效直徑。在最簡單的情況下，對于球狀顆粒，如下列公式所描述的，l作為密度比率的平方根的函數(shù)與參照直徑(d)成比例對于非球狀顆粒，對該關系作出改變(參考EdwardsDA,Ben-JebriaA，LangerR.Recentadvancesinpulmonarydrugdeliveryusinglarge,porousinhaledparticles.JApplPhysiol84(2)(1998)379-385)。術語"醒AD"和"醒EAD"已進行了詳盡描述且在本領域是已知的(參考EdwardsDA，Ben-JebriaA，LangerR)，其表示空氣動力學顆粒大小分布的中值的測度。Recentadvancesinpulmonarydrugdeliveryusinglarge,porousinhaledparticles.JApplPhysiol84(2)(1998)379-385)。質(zhì)量中值直徑(醒AD)和有效質(zhì)量中值直徑(massmedianeffectiveaerodynamicdiameter)(醒EAD)可互換使用，其為統(tǒng)計參數(shù)，經(jīng)驗性地描述氣溶膠顆粒的大小與其沉積在肺部的潛能相關而不依賴實際的形狀、大小或密度(參考EdwardsDA，Ben-JebriaA，LangerR.Recentadvancesinpulmonarydrugdeliveryusinglarge,porousinhaledparticles.JApplPhysiol84(2)(1998)379-385)。通常根據(jù)用壓緊器(impactor)獲得的測量值計算醒AD，所述壓緊器是測量空氣中顆粒惰性行為的儀器。在其他實施方案中，可通過任何已知的霧化技術例如噴霧法霧化制劑，從而獲得小于10pm、更優(yōu)選地在l-5jam之間和最優(yōu)選地在1-3pm之間的氣溶膠顆粒的醒AD。優(yōu)選的顆粒大小基于用于將藥物遞送入深肺處的最有效大小，在所述深肺處蛋白被最佳地吸收(參考EdwardsDA:Ben-JebriaA，LangerA，Recentadvancesinpulmonarydrugdeliveryusinglarge,porousinhaledparticles.JApplPhysiol84(2)(1998)379-385)。包含試劑的肺制劑的深肺沉積可任選地通過使用吸入技術的改變(例如，但不限于緩慢的吸收流動(例如30L/min)、憋氣和定進沖動)來進一步最佳化。術語"穩(wěn)定的制劑"是指具有增加的物理穩(wěn)定性、增加的化學穩(wěn)定性或增加的物化穩(wěn)定性的制劑。此處使用的術語蛋白(例如抗體)制劑的"物理穩(wěn)定性"是指蛋白形成生物學失活和/或蛋白的不溶性聚集體的趨勢，所述蛋白的生物學失活和/或不溶性聚集是由于蛋白暴露于熱-機械應激和/或與失穩(wěn)的界面和表面例如疏水性表面和界面相互作用的結(jié)果。在將裝于合適的容器(例如筒或瓶)中的制劑在不同的溫度下暴露于機械/物理應激(例如攪拌)進行不同時間后，通過目檢和濁度測量估計蛋白水溶液制劑的物理穩(wěn)定性。在黑暗的背景下在聚焦的光中進行制劑的目檢。通過目檢評分劃分濁度的等級來表征制劑的濁度，所述目檢評分將濁度按等級分為例如0至3級(顯示無濁度的制劑對應于目檢評分0，在日光中顯示目檢濁度的制劑對應于目檢評分3)。當制劑在日光中顯示可見濁度時，在蛋白聚集上其被分類為物理不穩(wěn)定的。可選擇地，可通過本領域技術人員熟知的簡單濁度測量法估計制劑的濁度。也可通過使用蛋白的構(gòu)象狀態(tài)的波語試劑(spectroscopicagent)或探針估計蛋白水溶液制劑的物理穩(wěn)定性。所述探針優(yōu)選地是優(yōu)先結(jié)合蛋白的非天然構(gòu)象的小分子。蛋白結(jié)構(gòu)的小分子波鐠探針的一個例子是硫磺素T。硫磺素T是已被廣泛用于淀粉狀蛋白纖維(amyloidfibril)的檢測的熒光染料。在纖維和可能的其他蛋白構(gòu)型也存在的情況下，當硫磺素T結(jié)合至纖維蛋白形式時，其在大約450nm處產(chǎn)生新的激發(fā)最大值和在大約482nm處產(chǎn)生增強的發(fā)射值。未結(jié)合的硫磺素T在所述波長上基本上無熒光。其他小分子可用作蛋白結(jié)構(gòu)從天然至非天然狀態(tài)的改變的探針。例如優(yōu)先結(jié)合蛋白的暴露的疏水斑的"疏水斑"探針。疏水斑通常在其天然狀態(tài)下埋藏在蛋白的三級結(jié)構(gòu)內(nèi)，但當?shù)鞍组_始去折疊或變性時開始顯露。這些小分子波鐠探針的例子是芳香族染料、疏水染料，例如antrhacene、吖啶、菲咯啉等。其他光傳探針是金屬-氨基酸復合物，例如疏水氨基酸例如苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸和纈氨酸等的鈷金屬復合物。此處使用的術語蛋白制劑的"化學穩(wěn)定性"是指導致化學降解產(chǎn)物的形成的蛋白結(jié)構(gòu)的化學共價改變，所述化學降解產(chǎn)物，和天然的蛋白結(jié)構(gòu)相比，具有潛在更低的生物學功效和/或潛在增加的免疫原性.依賴于天然蛋白的類型和性質(zhì)以及蛋白暴露的環(huán)境，可形成不同的化學降解產(chǎn)物。化學降解的消除最不可能完全避免，如本領域技術人員所熟知的，通常在蛋白制劑的貯藏和使用期間觀察到不斷增加的量的化學降解產(chǎn)物。大部分蛋白易于脫酰胺，所述脫酰胺是其中谷氨酰胺或天冬酰胺殘基的側(cè)鏈酰胺基被水解形成游離羧酸的過程。其他降解途徑包括高分子量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的形成，其中兩個或更多個蛋白分子通過轉(zhuǎn)酰胺基作用和/或二硫化物相互作用共價地相互結(jié)合，從而形成共價連接的二聚體、寡聚體和多聚體降解產(chǎn)物Cf"627/0^尸尸i^e/i3尸o"2夕夕力。氧化(例如甲硫氨酸殘基的)可被認為是化學降解的另一種變型?？赏ㄟ^在暴露于不同的環(huán)境條件(降解產(chǎn)物的形成通常可通過例如增加溫度加速)后，在不同的時間點上測量化學降解產(chǎn)物的量來估計蛋白制劑的化學穩(wěn)定性。通常通過依賴于分子大小和/或電荷使用各種層析技術(例如SEC-HPLC和/或RP-HPLC)分離降解產(chǎn)物來確定各單個降解產(chǎn)物的量。因此，如上面所概述的，"穩(wěn)定的制劑"是指具有增加的物理穩(wěn)定性、增加的化學穩(wěn)定性或增加的物化穩(wěn)定性的制劑。一般地，制劑在達到有效期前必須在使用和貯藏期間(符合推薦的使用和貯藏條件)保持穩(wěn)定。在本發(fā)明的一個實施方案中，包含本發(fā)明的試劑的藥物制劑在超過6周的使用和超過3年的貯藏中是穩(wěn)定的。在本發(fā)明的另一個實施方案中，包含本發(fā)明的試劑的藥物制劑在超過4周的使用和超過3年的貯藏中是穩(wěn)定的。在本發(fā)明的另一個實施方案中，包含本發(fā)明的試劑的藥物制劑在超過4周的使用中和超過2年的貯藏中是穩(wěn)定的。在本發(fā)明的另一個實施方案中，包含本發(fā)明的試劑的藥物制劑在超過2周的使用中和超過2年的貯藏中是穩(wěn)定的。如上所述，本發(fā)明的組合物可通過例如口服、胃腸外施用、通過吸入噴霧、局部、直腸、鼻、頰、陰道或通過植入型藥盒施用。此處使用的術語"胃腸外"包括皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、肝內(nèi)、病灶內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸注技術。優(yōu)選地，口服、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)施用組合物。本發(fā)明的組合物的無菌可注射形式可以是水性懸浮液或油性懸浮液。可按照本領域內(nèi)已知的技術使用合適的分散劑或濕潤劑以及懸浮劑配制這些懸浮液。所述無菌注射制劑也可以是無毒胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射液或懸浮液例如1，3-丁二醇中的溶液。在可使用的可接受的媒介物和溶劑中，有水、林格氏溶液(Ringer，ssolution)和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌的、不揮發(fā)油常規(guī)地用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為了該目的，可使用任何溫和的不揮發(fā)油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。脂肪酸例如油酸和其甘油酯衍生物可用于可注射物的制備，對于天然的藥物可接受的油例如橄欖油或荒麻油特別是以其聚氧乙烯化形式存在的油也是這樣。這些油溶液或懸浮液也可包含長鏈醇稀釋劑或分散劑，例如通常用于配制藥物可接受的劑型(包括乳劑和混懸液)的羧甲基纖維素或類似的分散劑。常用于生產(chǎn)藥物可接受的固體、液體或其他劑型的其他常用的表面活性劑，例如Tweens、Spans和其他乳化劑或生物利用度增強劑也可用于配制目的?？梢匀魏慰诜山邮艿膭┬?包括，但不限于，膠嚢劑、片劑、水懸浮液或溶液)口服施用本發(fā)明的組合物。在用于口服使用的片劑情況下，通常使用的栽體包括乳糖和玉米淀粉。通常也加入潤滑劑例如硬脂酸鎂。對于以膠嚢形式的口服施用，有用的稀釋劑包括乳糖和無水玉米淀粉。當需要用于口服使用的水懸浮液時，將活性成分和乳化劑和懸浮劑混合。如果想要，也可加入某些甜味劑、調(diào)味劑或著色劑?？蛇x擇地，本發(fā)明的組合物可以用于直腸施用的栓劑形式施用。可通過將所述試劑和合適的非刺激性賦形劑混合來制備這些劑型，所述賦形劑在室溫下是固體但在直腸溫度下是液體，從而可在直腸中熔化以釋放藥物。這些材料包括可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。也可局部施用本發(fā)明的組合物，特別是當治療的乾包括容易進行局部施用的區(qū)域或器官(包括眼病、皮膚病或下腸道病)時。容易制備用于這些區(qū)域或器官的各區(qū)域或器官的合適的局部制劑。可以直腸栓劑(參見上面)或合適的灌腸劑進行下腸道的局部施用。也可使用局部透皮貼劑。對于局部施用，可以合適的軟骨配制組合物，所述軟骨包含懸浮在或溶解在一種或多種載體中的活性組分。用于本發(fā)明的化合物的局部施用的載體包括，但不限于，礦物油、液體石蠟、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水?？蛇x擇地，可在合適的洗劑或乳骨劑中配制包含懸浮或溶解在一種或多種藥物可接受的載體中的活性組分的組合物。合適的載體包括，但不限于，礦物油、山梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蠟、十六醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。對于眼用途，可將組合物配制為等滲的經(jīng)pH調(diào)整的無菌鹽水中的微?；鞈覄騼?yōu)選地配制為等滲的經(jīng)pH調(diào)整的無菌鹽水中的溶液，具有或不具有防腐劑例如苯扎氯銨。可選擇地，對于眼用途，可在軟骨例如凡士林中配制組合物。也可通過鼻用氣霧劑或吸入劑施用本發(fā)明的組合物。按照藥物配制領域內(nèi)熟知的技術制備這些組合物，所述組合物可配制為鹽水、苯甲醇或其他合適的防腐劑、增加生物利用度的吸收促進劑、碳氟化合物和/或其他常規(guī)穩(wěn)定劑或分散劑中的溶液。已顯示幾種單克隆抗體在臨床表現(xiàn)中是有效的，例如Rituxan(Rituximab)、Herceptin(Trastuzumab)或Xolair(0malizumab)，且可對本發(fā)明的抗體使用相似的施用方案(即，配制和/或劑量和/或施用方案)?？筛鶕?jù)用于這些產(chǎn)品的已知的方法，例如使用廠商說明書，確定用于施用的方案和劑量。例如，可在100mg(10mL)或500mg(50mL)一次性使用小瓶中以10mg/mL的濃度提供單克隆抗體。在用于注射的9.Omg/mL氯化鈉、7.35mg/mL檸檬酸鈉二水合物、0.7mg/mL聚山梨醇酯80和無菌水中配制用于靜脈內(nèi)施用的產(chǎn)品。將pH調(diào)整為6.5。本發(fā)明的交叉反應性KIR抗體的示例性合適劑量范圍可在大約10mg/W和500mg/i^之間。然而，要認識到這些方案是示例性的，考慮到抗體的親和力和必須要在臨床試驗中確定的抗KIR抗體的耐受性，要對最佳的日程安排和方案進行改變?？紤]抗體的親和力和其藥物動力學參數(shù)，確定飽和NK細胞24小時、48小時、72小時或一周或一月的抗KIR的注射量和日程安排。根據(jù)另一個實施方案，本發(fā)明的抗體組合物還可包含另一種治療劑，包括通常用于特定治療目的(為了該治療目的施用所述抗體)的試劑。額外的治療劑通常以該試劑在被治療的特定疾病或病癥的單一療法中通常使用的量存在于組合物中。所述治療劑包括，但不限于，用于癌癥治療的治療劑、用于治療感染性疾病的治療劑、用于其他免疫治療的治療劑、細胞因子(例如IL-2或IL-15)、其他抗體或其他抗體的片段。例如，可獲得許多用于治療癌癥的治療劑。本發(fā)明的抗體組合物和方法可與任何其他方法一起使用，所述其他方法通常用于治療特定的疾病，特別是腫瘤、癌癥疾病或患者表現(xiàn)的其他疾病或病癥。只要不知道特定的治療方法在本質(zhì)上對患者有損害，且不顯著地抵消基于抑制性KIR抗體的治療，可考慮其與本發(fā)明的組合。對于實體瘤治療，本發(fā)明可和經(jīng)典的方法例如手術、放射療法、化學療法等一起使用。因此本發(fā)明提供了組合療法，在所述療法中，本發(fā)明的KIR抗體在手術或放射治療的同時、之前或之后使用；或和200680001919.6說明書第68/87頁常規(guī)化學治療劑、放射治療劑或抗血管生成劑、或靶向的免疫毒素或凝血配體(coaguligand)—起、在之前或之后4吏用。當治療方案中的一種或多種試劑和本發(fā)明的組合物一起使用時，不要求組合的結(jié)果是當各治療獨立進行時觀察到的效果的累加。盡管至少累加效應通常是想要的，但高于單一治療的任何增加的抗癌效果將是有益的。同樣，沒有對組合治療要展示協(xié)同效應的特殊要求，盡管這是可能且是有利的。為了實施組合抗癌治療，可簡單地以在動物中有效地導致其組合抗癌作用的方式給患者施用本發(fā)明的組合物和另一種抗癌劑。因此以有效地導致其在胂瘤脈管內(nèi)組合存在和其在腫瘤環(huán)境中的組合作用的量和時間提供所述試劑。為實現(xiàn)該目的，可以單一組合物的方式或作組合物和抗癌劑?？蛇x擇地，本發(fā)明的組合物可以例如從數(shù)分鐘至數(shù)周和數(shù)月的間隔在抗癌劑治療之前或之后施用。將確?？拱﹦┖捅景l(fā)明的組合物中的活性劑對癌癥產(chǎn)生有利的組合效應。作為例子，可給患有非何杰金氏淋巴瘤(NHL)的患者施用本發(fā)明的抗體。通常用Rituximab的組合和稱為CHOP的化學治療劑的組合治療這些患者。因此，本發(fā)明的抗KIR抗體可用于治療使用Rituximab和CHOP進行治療的患者，通過在治療方案中組合所有所述藥劑的施用來進行使用，在所述治療方案中在同一天或不同的天施用藥劑，具有更長的治療周期?？稍谑┯帽景l(fā)明的組合物之前、同時或之后施用其他抗癌劑。然而，當將抗體的免疫綴合物用于本發(fā)明的抗體組合物時，可同時或順次施用各種抗癌劑。在一些情況下，顯著地延長治療時間期限甚至可以是想要的，其中抗癌劑或抗癌治療的施用和本發(fā)明的組合物的施用之間相隔數(shù)天(2、3、4、5、6或7)、數(shù)周(l、2、3、4、5、6、7或8)或甚至數(shù)月(1、2、3、4、5、6、7或8)。這在使用抗癌治療顯著破壞腫瘤例如使用手術或化學療法并且施用本發(fā)明的組合物以預防微小轉(zhuǎn)移或胂瘤再生的情況下可能是有利的。也可想象，可使用超過一次的本發(fā)明的基于抗KIR劑的組合物或抗癌劑的施用。這些藥劑可在交替的天或周互換施用；或在使用本發(fā)明的抗KIR劑組合物的治療的周期之后進行抗癌劑治療的周期。無論如何，為了獲得腫瘤的消退，使用組合療法，所需要的是無論施用的次數(shù)多少，以有效地產(chǎn)生抗腫瘤效果的組合量遞送兩種藥劑。關于手術，任何手術干預可與本發(fā)明一起實施。關于放射療法，可涉及在癌細胞內(nèi)局部地誘導DNA破壞的任何機制，例如Y輻照、X射線、UV輻照、微波和甚至電子發(fā)射等。也可涉及》文射性同位素至癌細胞的定向遞送，且可將這和靶向抗體或其他靶向手段一起使用。在其他方面，可將免疫調(diào)節(jié)化合物或方案和本發(fā)明一起施用或作為本發(fā)明的組合物的部分施用。優(yōu)選的免疫調(diào)節(jié)化合物的實例包括細胞因子。在這些組合的方法中可使用各種細胞因子。用于本發(fā)明涉及的組合物的細胞因子的實例包括IL-laIL-1P、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-IO、IL-ll、IL-12、IL-13、IL-15、IL-21、TGF-P、GM-CSF、M-CSF、G-CSF、TNF-a、TNF-P、LAF、TCGF、BCGF、TRF、BAF、BDG、MP、LIF、0SM、TMF、PDGF、IFN-a、IFN-P、IFN-y。按照標準的方案，根據(jù)臨床指征例如患者的狀況和細胞因子的相對毒性，施用用于本發(fā)明的組合治療或組合物的細胞因子。其他免疫調(diào)節(jié)化合物(所述化合物可和本發(fā)明的組合物或作為本發(fā)明的組合物的部分一起施用)包括特異性結(jié)合淋巴細胞上的其他抑制性受體的抗體，包括但不限于抗體例如抗CTLA4抗體或抗CD94/NKG2A抗體(參見，例如，美國出版的專利申請20030095965)。本領域已知的這些分子的變體和衍生物也可或可選擇地用于這些方法，和如果合適，整合入本發(fā)明的組合物。在某些實施方案中，本發(fā)明的包含非HLA阻斷性、抑制性、任選地阻斷性抗KIR抗體的治療性組合物可和化學治療劑或激素治療劑一起使用或還可包含所述治療劑。許多激素治療劑和化學治療劑可用于此處公開的組合療法。作為示例的所述化學治療劑包括，但不限于，烷化劑、抗代謝物、細胞毒性抗生素、長春花堿，例如阿霉素、更生霉素、絲裂霉素c、去甲柔紅霉素、柔紅霉素、多柔比星、他莫昔芬、紫杉酚、紫杉特爾、長春新堿、長春堿、長春瑞濱、依托泊苷(VP-16)、5-氟尿嘧啶(5FU)、阿糖胞苷、環(huán)磷酰胺、塞替派、甲氨蝶呤、喜樹堿、放線菌素D、絲裂霉素C、順鉑(CDDP)、氨蝶呤、考布他汀和其衍生物和前藥。激素試劑包括，但不限于，例如LHRH激動劑例如亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林和布舍瑞林；抗雌激素例如它莫西芬和托瑞米芬；抗雄激素例如氟他米特、尼魯米特、環(huán)丙孕酮和比卡魯胺；芳香酶抑制劑例如阿納曲哇、依西美坦、來曲唑和法倔唑；和progestagen例如medroxy、氯地孕酮和甲地孕酮。如將被本領域技術人員所理解的，化學治療劑的合適劑量接近在其中單獨地施用或和其他化學治療劑一起施用所述化學治療劑的臨床治療中使用的劑量。僅作為例子，可使用試劑例如順鉑和其他DNA烷化劑。順鉑已被廣泛用于治療癌癥，用于臨床應用的有效劑量為每三周5天20mg/m2，總共三個療程。順鉑不能被口服吸收，因而必需通過靜脈內(nèi)、皮下、瘤內(nèi)或腹膜內(nèi)注射給藥。其他有用的化學治療劑包括干擾DNA復制、有絲分裂和染色體分離的化合物和破壞多核苷酸前體的合成和保真度的試劑。用于組合治療的許多示例性化學治療劑列于美國專利6，524，583的表C中，所述試劑和適應癥的公開內(nèi)容明確地在此引用作為參考。所列的各試劑是示例性的而不是限定性的。本領域技術人員參考"Remington'sPharmaceuticalSciences"第15版，第33章，特另'J是第624-652頁。依賴于被治療的狀況可能發(fā)生劑量的改變。實施治療的醫(yī)生能夠確定個體受試者的合適劑量。本發(fā)明的組合物可和任何一種或多種抗血管生成治療劑一起使用或還可包含抗血管生成劑。這些藥劑的實例包括各自針對VEGF或VEGF受體的中和抗體、反義RM、siRNA、RMi、RM適體和核酶(美國專利6，524，583，其公開內(nèi)容在此引用作為參考)。如W098/16551中所描述的也可使用具有抗血管生成特性的VEGF的變體，所述申請明確地在此引用作為參考。和組合療法一起使用的其他示例性抗血管生成劑列于美國專利6，524，583的表D中，所述試劑和適應癥的公開內(nèi)容明確地在此引用作為參考。也可有利地將本發(fā)明的組合物和誘導凋亡的方法一起使用或所迷組合物可包含凋亡劑。例如，已鑒定了許多抑制凋亡或編程性細胞死亡的癌基因。該類型中的示例性癌基因包括，但不限于，bcr-aM、bcl-2(和bc卜l、細胞周期蛋白Dl不同；GenBank目錄號M14745,X06487;美國專利5，650，491和5，539，094;各自在此引用作為參考)和家族成員，包括Bcl-xl、Mcl-l、Bak、Al和A20。首先在T細胞淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)bcl-2的過量表達。癌基因bcl-2通過結(jié)合Bax并使Bax失活發(fā)揮作用，所述Bax是凋亡途徑中的蛋白。bcl-2功能的抑制阻止了Bax的失活，從而使凋亡途徑繼續(xù)進行。該種類的癌基因的抑制，例如使用反義核苷酸序列、RMi、siRNA或小分子化合物進行抑制，可用于本發(fā)明以促進編程性細胞死亡(美國專利5,650,491、5,539，094和5,583,034;各自在此引用作為參考)。本發(fā)明的抗KIR試劑也可包含分子或和分子一起使用，所述分子包含靶向部分例如針對靶細胞例如耙腫瘤細胞上的特定標記的抗體、配體或其綴合物("靶向試劑")。一般說來，用于本發(fā)明的這些額外方面的靶向試劑優(yōu)選地識別可接近的腫瘤抗原，所述腫瘤抗原優(yōu)選地、或特異性地在腫瘤位置表達。靶向試劑通常結(jié)合肺瘤細胞的表面表達的、表面可接近的或表面定位的組分。把向試劑也優(yōu)選地展示高親和力的特性；和在體內(nèi)不產(chǎn)生顯著的對維持生命的正常組織的副作用，所述正常組織是例如選自心臟、腎、大腦、肝臟、骨髓、結(jié)腸、乳房、前列腺、甲狀腺、膽嚢、肺、腎上腺、肌肉、神經(jīng)纖維、胰腺、皮膚或人體內(nèi)的其他維持生命的器官或組織中的一種或多種組織。如此處所用的，術語"不產(chǎn)生顯著副作用"是指靶向試劑，當在體內(nèi)施用時，只產(chǎn)生可忽略的或臨床上可控制的副作用，例如在化學治療期間通常遇到的副作用。在腫瘤的治療中，本發(fā)明的組合物可額外的包含輔助化合物或可和輔助化合物一起使用。輔助化合物可包括例如抗嘔吐藥例如5-羥色胺拮抗劑和治療劑例如酚噻嗓系、取代的苯酰胺類、抗組胺劑、丁酰苯類、皮質(zhì)激素、苯二氮雜萆類和大麻素類；二膦酸鹽例如唑來膦酸和帕米膦酸；和造血生長因子例如促紅細胞生成素和G-CSF,例如非格司亭、來格司亭和darbepoietin。在另一個實施方案中，識別不同的表位或決定子的本發(fā)明的兩種或更多種抗體或其他試劑可以單一組合物的方式混合以減少或中和盡可能多的KIR基因產(chǎn)物的抑制性效應。包含本發(fā)明的交叉反應性抑制性KIR抗體或其片段或衍生物的組合的組合物甚至能夠具有更廣泛的用途，因為很可能存在小百分比的缺乏被單一交叉反應性抗體識別的各抑制性KIR基因產(chǎn)物的人群。類似地，本發(fā)明的抗體組合物還可包含阻止KIR對HLA的結(jié)合的一種或多種交叉反應性或非交叉反應性抗體。這些組合可在治療中再次提供更廣泛的用途。因此，本發(fā)明的抗體可和阻止一種或多種例如KIR2DL1、KIR2DLK2、KIR2DL3、KIR3DL1、KIR3DL2和KIR3DL3的HLA結(jié)合的另一種抗KIR抗體混合。本發(fā)明也提供了在需要其的患者中增加M細胞活性的方法，其包括給所述患者施用本發(fā)明的組合物。所述方法更明確地用于在具有疾病的患者中增加NK細胞活性，在所述疾病中，增加的NK細胞活性是有益的，所述疾病涉及、影響或由易被NK細胞裂解的細胞引起，或其由不充足的NK細胞活性引起或特征在于不充足的NK細胞活性，例如癌癥、感染性疾病或免疫病癥。更特別地，本發(fā)明的方法和組合物用于治療各種癌癥和其他增殖疾病包括，但不限癌，包括膀胱、乳腺、結(jié)腸、腎、肝臟、肺、卵巢、前列腺、胰腺、胃、子宮頸、甲狀腺和皮膚的癌，包括鱗狀細胞癌；淋巴鐠系的造血系統(tǒng)腫瘤，包括白血病、急性淋巴細胞性白血病、急性成淋巴細胞性白血病、B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、非4可杰金淋巴瘤、毛細胞、淋巴瘤(hairycelllymphoma)和Burketts淋巴瘤；骨髓鐠系的造血腫瘤(hematopoietictumor)，包括急性和慢性髓細胞性白血病、前髓細胞性白血病和骨髓增生異常綜合征；間充質(zhì)來源的胂瘤，包括纖維肉瘤和模紋肌肉瘤；其他腫瘤，包括黑色素瘤、精原細胞瘤、畸胎癌、成神經(jīng)細胞瘤和神經(jīng)膠質(zhì)瘤；中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)肺瘤，包括星形細胞瘤、成神經(jīng)細胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤；間充質(zhì)細胞來源的腫瘤，包括纖維肉瘤、模紋肌肉瘤和骨肉瘤；和其他腫瘤，包括黑色素瘤、著色性干皮病(xerodermapigmentosum)、角化棘皮瘤、精原細胞瘤、曱狀腺濾泡癌和畸胎癌?？筛鶕?jù)本發(fā)明治療的優(yōu)選的病癥包括淋巴傳系的造血系統(tǒng)腫瘤，例如T細胞和B細胞腫瘤，包括但不限于T細胞病癥例如T幼淋巴細胞白血病(T-PLL),包括小細胞和腦回狀細胞類型；大顆粒淋巴細胞白血病(LGL)，優(yōu)選地T細胞類型的；塞扎里氏綜合征(SS);成人T細胞性白血病淋巴瘤(ATLL);a/dT-NHL肝脾淋巴瘤；peripheral/post-thymicTcelllymphoma(多形和免疫母細胞亞型)；血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤(AngioimmunoblasticT-celllymphoma);血管中心(鼻)T細胞淋巴瘤(Angiocentric(nasal)T-celllymphoma);間變性(Kil+)大細胞'淋巴瘤(Anaplastic(Ki1+)largecelllymphoma);腸T-細胞淋巴瘤；T淋巴母細胞；淋巴瘤/白血病(T-Lbly/T-ALL)。也可根據(jù)本發(fā)明治療其他增殖病癥，包括例如超常增生、纖維變性(特別是與肺有關的，但也有其他類型的纖維變性，例如腎臟纖維變性)、血管發(fā)生、牛皮辨、動脈粥樣硬化和血管中的平滑肌增生例如狹窄或血管成形術后的再狹窄。基于KIR抗體的治療可用于治療或預防感染性疾病，包括優(yōu)選地由病毒、細菌、原生動物、霉菌或真菌感染引起的任何感染。這些病毒感染生物包括，但不限于，甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、流行性感冒、水痘、腺病毒、I型單純皰滲病毒(HSV-l)、2型單純皰疹病毒(HSV-2)、牛疫、鼻病毒、?？刹《救?、輪狀病毒、呼吸道合胞病毒、乳頭狀瘤病毒、乳頭狀瘤病毒、細胞巨化病毒、棘狀病毒(echinovirus)、蟲媒病毒、漢坦病毒、柯薩奇病毒、腮腺炎病毒、麻滲病毒、風滲病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒和人免疫缺陷癥病毒1型或2型(HIV-1，HIV-2)。細菌組成另一優(yōu)選的種類的傳染性生物，包括但不限于下列葡萄球菌(Staphylococcus);鏈球菌，包括化膿性鏈球菌，ge膨)；腸球菌(Enterococcl);桿菌屬(Bacillus),包括炭疽桿菌(Sac/7/f/"/7^rac/s)，和，乳桿菌(Lactobacillus);李斯特菌屬(Listeria);白喉桿菌(Cc*r//7e6acter/w!7fZ/p/^Aer/ae);加德納菌屬(Gardnerella)包括陰道加特納菌(f.Mg//7a//s);諾卡氏菌屬(Nocardia);鏈霉菌屬(Streptomyces);普通高溫放線菌(r力er邁oac〃/20邁ycesFi//gar/s);梅毒螺旋體(Treponema);空腸彎曲菌(Camplyobacter);假單胞菌屬(Pseudomonas)包括綠膿桿菌(戶.fl0i7/g/膨a);軍團桿菌屬(Legionella);奈瑟氏菌屬(Neisseria)包括淋病奈瑟菌(Ago/7orr力oeae)和腦膜炎奈瑟氏菌/e/7//^/7/Ves);黃桿菌屬(Flavobacterium)包括腦膜膿毒性金黃桿菌(/ze/7//z^e/7〃n//Z7)和尸.odor"wi77;布魯氏桿菌屬(Brucella);博代菌屬(Bordetella)包括百日咳鮑特氏菌(Aper^/w/s)和犬支氣管敗血波氏桿菌(A6i"O"c力"e;7〃ca);大腸桿菌屬包括大腸桿菌、克雷白桿菌屬(Klebsiella);腸道細菌屬(Enterobacter)、粘質(zhì)沙雷菌(Serratia)包括粘質(zhì)沙雷氏菌(&邁arce"e/zs)和液化沙雷桿菌(&//^/e,ac/e/s);愛德華菌屬(Edwardsiella);變形菌(Proteus)包括奇異變形桿菌(Z7.邊/ra6/Z")和尸.7u&ar";鏈桿菌(Streptobacillus);立克次氏體科(Rickettsiaceae)包括A尸化i:e^"/7、衣原體屬(Chlamydia)包括鷚鵡熱衣原體(/^/〃ae/)和沙眼衣原體(C.""Mr""/";分枝桿菌(Mycobacterium)包括人型結(jié)核桿菌&6erci//oi")、胞內(nèi)分枝桿菌(脫i./7"ace//w/"e)、#/o//f/27i/i77、麻風分枝桿菌(/aprae)、禽分枝桿菌ay/咖J、牛型結(jié)核桿菌f脫6ow's)、非洲分枝桿菌(脫"Wca/7"邁)、堪薩斯分枝桿菌h/zMWi)、胞內(nèi)分枝桿菌(妃//^rflce//u/are)和M.7e/raei77wr/.i/邁；和諾卡氏菌屬(Nocardia)。原生動物可包括但不限于，利什曼原蟲、kokzidioa和錐蟲屬。寄生蟲包括但不限于，衣原體和立克次體。感染性疾病的完全目錄可在疾病控制中心(CDC)下的國家感染性疾病中心(NCID)的網(wǎng)站(World-WideWeb(www)地址cdc.gov/ncidod/diseases/)上找到，其目錄在此引用作為參考。所有所述疾病是使用本發(fā)明的抑制性，任選地交叉反應性KIR抗體治療的候選疾病。這些方法可單獨地或和其他醫(yī)療和/或治療劑(例如放射治療、化學治療或基因治療)一起使用本發(fā)明的試劑，例如抗體、其片段和衍生物。當這些方法包括使用治療劑的額外治療時，可將這些治療劑和本發(fā)明的抗體一起以單劑型或分開地、多劑型施用。當以分開的劑型施用時，可在本發(fā)明的抗體施用前、施用的同時或施用后施用所述額外的試劑。本發(fā)明的其他方面和有利方面公開于下列實施例部分，所述實施例應當被認為是說明性的而不限定本申請的范圍。實施例實施例1:KIR的結(jié)構(gòu)域1和2相關性相互作用位點的鑒定。使用上述一般方法發(fā)現(xiàn)參與KIR2DL1的二聚化的可能的結(jié)構(gòu)域。本實施例顯示通過KIR介導的負信號轉(zhuǎn)導(在KIR結(jié)合其HLAI類配體后)包括配體結(jié)合誘導的KIR的構(gòu)象再定位，這允許相鄰的KIR之間形成結(jié)構(gòu)域l-結(jié)構(gòu)域1和結(jié)構(gòu)域2-結(jié)構(gòu)域2相互作用，從而導致加速的群集。盡管以前已知配體結(jié)合導致通過KIR介導的信號轉(zhuǎn)導，但還未曾描述過機制，所述機制能夠完全解釋配體結(jié)合(對細胞外側(cè)上的KIR的細胞外部分的結(jié)合)是如何被傳遞至KIR的胞質(zhì)尾區(qū)并且只有當配體結(jié)合時才導致信號轉(zhuǎn)導，但當無配體結(jié)合時不產(chǎn)生信號轉(zhuǎn)導。允許KIR分子二聚化的KIR上的位點的發(fā)現(xiàn)現(xiàn)在可提供該現(xiàn)象的解釋，且允許發(fā)展可通過耙向這些位點以阻止通過KIR介導的抑制性信號轉(zhuǎn)導的治療劑。分析本實施例根據(jù)Fan等人，1997，Nature第389巻96-100:Domain1comprisesresidues6-101ofKIRandDomain2comprisesaminoacidsresidues105-200使用KIR的殘基和結(jié)構(gòu)域的命名法。通過對KIR2DL1(1NKR.pdb)使用保守位點方法和HR2DL1(人)、KIR2DL2(人)、KIR2DL3(人)、KIR2DS1(人)、KIR2DS2(人)、KIR2DS3(人)、KIR2DS4(人)、KIR(Q8MK11，獼猴)、KIR(Q8MK12,獼猴)的比對，鑒定了下列保守位點P108、S109、LllO、Slll、A112、Q113、P114、G115、T125、S127、S129、T159、Q161、A162、D163、S192、L195,通過使用蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)分子對接法(其中來自1IM9.pdb的2個KIR2DL1-HLACW4復合物已置于H2K二聚體的上部，如Mitra等人2004(CurrentBiology第14巻718-724)提出的)，鑒定了該KIR-HLA二聚體允許通過結(jié)構(gòu)域l-結(jié)構(gòu)域1:R6、D31、V32、M33、F34、E35、D57、G58、V59、V83、T84、H85、S86、Q89和結(jié)構(gòu)域2-結(jié)構(gòu)域2:S109、L110、Slll、A112、Q113、T125、S127、S129、R131、K155、V156、N157、G158、T159、Q161、D163、L195相互作用群集的機制。通過使用晶體堆積法，KIR2DS2(1M4K.pdb)的X射線結(jié)構(gòu)中的各蛋白被鑒定為具有6個相互作用的鄰域，這些鄰域中的一個是對稱的結(jié)構(gòu)域l-結(jié)構(gòu)域l相互作用，其中V32、M33、F34、V83、T84、Q89、L90、S91、A92與另一個蛋白上的相同殘基相互作用。C末端面對符合膜結(jié)合蛋白的相同側(cè)。因為在相互作用區(qū)域，2DS2的序列和2DL2相同，因而殘基與對接結(jié)果相同。此外，在所有KIRX射線衍射結(jié)構(gòu)中未確定N末端的位置，這可通過2個鋅位點交聯(lián)結(jié)構(gòu)域l-結(jié)構(gòu)域1相互作用來解釋2個Zn位點是E2(A)、H5(A)、D31(A)、H85(B)和H1(A)、E35(B)、H36(B)、H50(B)。因此我們確定，結(jié)構(gòu)域1相關性相互作用位點Hl、E2、H5、R6、D31、V32、M33、F34、E35、H36、H50、D57、G58、V59、V83、T84、H85、S86、Q89、L90、S91、A92和結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點P108、S109、LllO、Slll、A112、Q113、P114、G115、T125、S127、S129、R131、K155、V156、N157、G158、T159、(J161、A162、D163、S192、L195并聲稱和一個或多個這些殘基相互作用的任何治療劑將減少或阻止KIR受體的信號轉(zhuǎn)導。關于舉例說明，參見圖1A至1C。此處涉及的蛋白數(shù)據(jù)庫(PDB;蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫)描迷于H.M.Berman,J.Westbrook，Z.Feng,G.Gilliland，T.N.Bhat，H.Weissig，I.N.Shindyalov，P.E.Bourne:TheProteinDataBank-NucleicAcidsResearch,28pp.235-242(2000)。PDB標識符總是4個文字數(shù)字式字符例如1NKR&10M3，有時稱為l亂pdb&10M3.pdb。實施例2:與HuKIRl-7F9-Fab，復合的KIR2DL1的晶體結(jié)構(gòu)揭示KIR2DL1/KIR2DL1同型二聚體用X射線衍射晶體分析法解析了與交叉反應性抗KIR抗體1-7F9的Fab，片段復合的KIR2DL1的晶體結(jié)構(gòu)并將其提高至2.35A的分辨率。該結(jié)果確證了在該晶體結(jié)構(gòu)中存在KIR2DL1-KIR2DL1二聚體界面。材料和方法將細胞外KIR2DL1(SEQIDNO:14的氨基酸1-223,殘基16為精氨酸(R)，殘基114為亮氨酸(L),且包含額外的N-末端甲硫氨酸(M)殘基)和l-7F9的人抗KIRFab，(具有SEQIDNO:24的輕鏈序列和SBQIDN0:25的殘基1-221的重鏈序列)混合，KIR2DL1稍微過量，在凝膠過濾柱上純化復合物。然后濃縮復合物至大約13.5mg/ml。在10%的PEG6000和500mM檸檬酸鹽緩沖液(pH為4.2)中使用懸滴法生長晶體。將晶體在液N2中快速冷凍并在IOOK下使用beam-lineBL7111,MAX-lab，Lund，Sweden收集2.35A分辨率的晶體學數(shù)據(jù)。通過XDS程序(Kabsch，J.Appl.Crystallogr.1993;26:795-800)整合數(shù)據(jù)。關于結(jié)構(gòu)測定分子置換，使用CCP4套件的MOLREP程序(Bailey,ActaCrystallogr.Sect.D-Biol.Crystallogr.1994;50:760-763)和PDB存儲的結(jié)構(gòu)1RZJ(Fab部分l)和1NKR(KIR)。使用ARP/WARP程序(Lamzin和Wilson，ActaCrystallogr.Sect.D-Biol.Crystallogr.1993;49:129-147)進行相位改善，使用QUANTA程序(可從AccelrysInc.,SanDiego，CA，USA商購獲得)進行對X射線衍生的結(jié)構(gòu)模型的人工修改。在CCP4套件的REFMAC5計算機程序中進行精細加工。通過ARP/WARP程序加上水分子。所述模型包含KIR2DL1的殘基6-114和124-200、l-7F9輕鏈的1-212和l-7F9重鏈的1-136和143-224。此外，放置了330個水分子。模型的R-和R-free分別是0.191和0.253。結(jié)果通過CCP4套件的CONTACT計算機程序使用4.OA的截斷距離(cut-offdistance)鑒定具有對稱的"X，Y，Z"和"Y，X，1/3-Z"的KIR2DL1之間的接觸殘基。發(fā)現(xiàn)所得的KIR的結(jié)構(gòu)域2中的二聚體界面包含下列KIR2DL1(SEQIDN0:14)的殘基:L110、Slll、A112、Q113、L114、D193、P194、L195、L196、V197、S198、V199和T200)。KIR2DL1二聚體界面和參與氫鍵結(jié)合的殘基也標示在圖4中的UR2DL1的氨基酸序列中。通過CCP4程序AREAIMAOL計算，二聚體界面的面積為665A2。在晶體堆積中，包含殘基115-123的KIR2DL1的環(huán)沒有定制(order)。因此生物學重要的界面殘基也可包含該范圍內(nèi)的殘基。表1顯示與l-了F9Fab，VL鏈復合的KIR2DL1的晶體結(jié)構(gòu)中的KIR2DL1-KIR2DL1相互作用。使用4.0A的截斷值。通過CCP4的CONTACT計算機程序使用對稱卡(X，Y，Z)和(Y，X，1/3-Z)鑒定接觸。在最后一欄中表示由CONTACT計算的，該接觸(距離<3.3A)上存在氬鍵的強可能性，"*"表示弱可能性(距離>3.3A)?？瞻妆硎境绦蛘J為沒有氫鍵形成的可能性。在計算中忽略水分子。表1.KIR2DL1-KIR2DL1相互作用<table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage87</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table>實施例3:鼠類抗KIR抗體的產(chǎn)生本實施例描述了抗KIR抗體的產(chǎn)生和鑒定，所述抗體(l)不千擾HLA-C的結(jié)合和(2)能夠增強NK細胞的細胞毒性。免疫和融合通過標準的方法用20jig可溶性KIR2DL1蛋白免疫正常的RBF小鼠3次，所述可溶性KIR2DL1蛋白對應于在大腸桿菌中產(chǎn)生并在體外重折疊的KIR2DL1(SEQIDNO:14)的完整的細胞外結(jié)構(gòu)域。通過靜脈內(nèi)注射用2(Vg可溶性KIR2DLl加強免疫小鼠，并在三天后將其殺死。在無菌條件下取出脾臟并分散成單細胞懸浮液。通過電融合方法進行脾細胞和FOX-NY骨髄瘤細胞的融合。將細胞播種在微量滴定板中并在371C、5%0)2下培養(yǎng)。在兩周的時期內(nèi)更換含有用于選擇的AAT的組織培養(yǎng)基3次。為了產(chǎn)生單克隆和穩(wěn)定的雜交瘤，使用極限稀釋法亞克隆細胞。以1個細胞/孔的密度將細胞播種在96孔板中。兩周后，在間接ELISA中篩選來自各孔的上清液并就與l-7F9(參見下面)的竟爭對其進行檢測。然后將來自陽性小孔的細胞轉(zhuǎn)移至更大的培養(yǎng)體積，再次擴增和亞克隆直至獲得穩(wěn)定和單克隆的細胞系(通過向親本克隆的名稱中加上-Al、-A2、-A3、-A4來標識亞克隆)。然后對亞克隆進行相似的或額外的檢測，此外還對通過選擇的亞克隆產(chǎn)生的單克隆抗體進行測序。雜交瘤的初步篩選通過檢測通過流式細胞儀識別為KIR2DL1陽性的細胞的上清液，就KIR2DL1特異性mAb的產(chǎn)生篩選來源于KIR2DL1免疫的RBF小鼠的雜交瘤。以1:2的稀釋度將組織培養(yǎng)上清和YTS(KIR2DL1陰性)和YTS-2DL1(KIR2DL1陽性)一起溫育。在水上溫育1小時后，用DMEM/2%FCS洗滌細胞，然后用APC綴合的驢抗小鼠二抗Ab片段在水上溫育30分鐘。在用PBS充分洗滌后，使用FACSarray(BDBiosciences)分析Ab對活細胞的結(jié)合。當雜交瘤組織培養(yǎng)上清液中的小鼠mAb結(jié)合YTS-2DL1但不結(jié)合YTS細胞(參見圖5)時，MAb被稱為'KIR2DL1陽'性'。此外，在間接ELISA測定中，通過檢測KIR2DL1和-3的細胞外結(jié)構(gòu)域的識別，就KIR2DL1和-3交叉反應性(或"panKIR")mAb檢測組織培養(yǎng)上清液。為進行該檢測，用0.5jig/mlPBS中的山羊抗小鼠IgG特異性Ab(Caltech，Ca)包被Nunc免疫板并在4"C下過夜。用含有0.05%Tween-20的PBS封閉板15分鐘，然后用PBS/0.05%Tween-20洗滌。加入來自雜交瘤細胞的培養(yǎng)上清液并將板在室溫下溫育1小時。在再一次洗滌后，以lpg/ml的濃度加入可溶性的生物素化的KIR2DL1或KIR2DL3,然后溫育1小時。洗滌后，加入lOOjil的Streptavidin-HRPO溶液。在進行另1小時的溫育后，洗滌板，然后按照廠商所描述的用TMB底物(Kem-EN-Tec)進行顯影。在直接偶聯(lián)至96孔板的ELISA讀數(shù)計上測量450nm處的吸光率。根據(jù)初步篩選，克隆被鑒定為產(chǎn)生交叉反應性mAb，包括命名為1-26F117的克隆。在BiaCore測定法、NK細胞毒性測定法和KIR配體結(jié)合測定法(參見下面)中進一步檢測這些克隆。實施例4:與l-7F9竟爭對KIR2DL1和-3的結(jié)合為確定選擇的小鼠交叉反應性mAb是否在不同于人mAbl-7F9結(jié)合的表位上結(jié)合KIR2DL1和-3，通過表面等離子共振分析測量其竟爭1-7F9對KIR2DL1和/或-3的結(jié)合的能力。在Biacore3000儀(BiacoreAB，Uppsala,Sweden)上進行該測量。使用標準的胺偶聯(lián)試劑盒(BiacoreAB)將相同量的純化的l-7F9固定在CM5傳感芯片(BiacoreAB，Uppsala,Sweden)上的所有4個流體室(flow-eel1)中。以lO^ig/ml的濃度將HBS-EP緩沖液(10mMHEPES、150mMNaCl、3mMEDTA、0.005%聚山梨酯20(v/v))中的純化的重組KIR2DL3注射入流體室1和3,以10jil/分鐘的流速進行1分鐘。隨后，以10jig/ml的濃度將HBS-EP緩沖液中的純化的重組KIR2DL1注射入流體室2和4,以10^1/分鐘的流速進行1分鐘。在注射KIR2DL1和KIR2DL3后，將在HBS-EP中以1:1.5稀釋的雜交瘤組織培養(yǎng)上清液的第一樣品注射入流體室1和2，以10pl/分鐘的流速進行1分鐘。隨后，在相似的條件下將第二樣品注射入流體室3和4。當RU反應〉20時將樣品評定為陽性結(jié)合。最后，通過注射10mM甘氨酸-HClpH1.8，在30^1/分鐘的流速下進行15秒，進行傳感芯片的再生。在測定中，發(fā)現(xiàn)1-26F117不與1-7F9竟爭對KIR2DL1和-3的結(jié)合，表明該抗體在與l-7F9的結(jié)合表位不同的表位上結(jié)合KIR分子。實施例5:NK細胞毒性測定法在NK細胞毒性測定法中檢測選擇的交叉反應性mAb抑制KIR功能的能力。用來自產(chǎn)生選擇的mAb的雜交瘤的組織培養(yǎng)上清液預溫育YTS-2DL1細胞，以1:2的稀釋度進行30分鐘。然后，以6:1的E:T比例加入表達KIR2DLl-配體HLA-Cw4的51Cr標記的LCL721.221-Cw4細胞。在37C下在潮濕的C02培養(yǎng)箱中溫育4小時后，在y輻射計數(shù)器中測量釋放入組織培養(yǎng)基中的51Cr。通過計算組織培養(yǎng)基中測量的51Cr的百分比(與從TritonX-100裂解的細胞中釋放的最大51Cr相比)確定樣品中靶細胞的特異性殺傷。以三次重復分析樣品。和在任何抗KIRmAb不存在的條件下大約5%的殺傷率相比，在參照mAb即l-7F9(2(Vg/ml)存在的情況下，YTS-2DL1在該測定中殺死大約24%的LCL721.221-Cw4細胞。當鼠類受試mAb能誘導為在mAb不存在的情況下的殺傷的至少1.5倍的靶細胞的殺傷時，即當將mAb不存在的情況下的殺傷規(guī)范為1，在KIR阻斷性mAb的存在的情況下的殺傷至少為1.5時，鼠類受試mAb被認定為KIR阻斷性的。如圖6中所示，對于l-26F117-A3和l-26F117-A4，抗體1-26F117誘導的YTS-2DL1對LCL721.221-Cw4細胞的殺傷分別為在mAb不存在的情況下的殺傷的3.7倍和接近2倍。實施例6:KIR2DL1-Fc配體結(jié)合竟爭測定法為確定阻斷KIR信號轉(zhuǎn)導(如實施例5中所確定的)的抗KIRmAb，例如1-26F117-A3和l-26F117-A4是否能夠通過阻止KIR對其HLA配體的結(jié)合誘導NK裂解，測量這些mAb阻止KIR2DL1和HLA-Cw4之間的相互作用的能力。為進行該測量，除了用鼠類IgGlFc替代人Fc夕卜，如(Wagtmann等人，Immunity1995;3(6):801-9)中所述產(chǎn)生可溶性KIR2DL1-Fc蛋白。可溶性KIR-Fc結(jié)合表達被KIR2DL1識別的特定HLA-C同種異型的細胞，通過流式細胞儀，使用對于KIR-Fc蛋白的鼠類Fc部分是特異性的熒光色素綴合的二抗Ab顯現(xiàn)該結(jié)合。例如，KIR2DL1-Fc結(jié)合用HLA-Cw*0402(LCL721.221-Cw4轉(zhuǎn)染子)(Litwin等人，JExpMed.1993;178:1321-36)轉(zhuǎn)染的細胞但不結(jié)合未轉(zhuǎn)染的LCL721.221細胞。以與用于誘導NK裂解的量相似的量使用1-26F117-A3或l-26F117-A4雜交瘤上清液在水上預溫育KIR2DL1-Fc30分鐘。然后，向DMEM/2%FCS中的溫育混合物加入0.5xl04LCL721.221-Cw4細胞，再將所述混合物在冰上溫育60分鐘。在DMEM/2%FCS中洗滌后，用1:1的抗小鼠IgG的二抗Ab片段(PE綴合的)和抗人IgG的二抗Ab片段(APC綴合的)的混合物溫育反應混合物。在水上溫育30分鐘后，用PBS洗滌細胞數(shù)次，通過流式細胞儀(FACSarray)分析KIR2DLl-hFc和抗KIRmAb的結(jié)合。在本測定法中，mAbl-26F117-A3和l-26F117-A4不阻止KIR2DLl-hFc和LCL721.221-Cw4細胞之間的相互作用，表明l-26F117-A3和-A4阻斷KIR信號轉(zhuǎn)導而不阻止KIR對HLA配體的結(jié)合。下述事實強調(diào)了這點，所述事實是，1-26F117-A3和1-26F117-A4通過KIR2DLl-hFc與LCL721.221-Cw4細胞結(jié)合，導致FACS點圖中雙陽性染色的細胞(參見圖7B)。作為對照，在用不同濃度的已知的mAbDF200進行的相同類型的測定中，以DF200劑量依賴性的方式阻止了KIR2DLl-hFc對LCL721.221-Cw4細胞的結(jié)合，但當用已知的KIR2DL2特異性mAbGL183預溫育KIR2DLl-hFc時,其不阻止KIR2DLl-hFc對LCL721.221-Cw4細胞的結(jié)合(圖7A)。在其中用不同濃度(2-5(Vg/ml)的純化的1-26F117預溫育KIR2DLl-hFc的相似的測定中，確認了該克隆不產(chǎn)生阻止KIR2DL1對HLA-Cw4的結(jié)合(參見圖8)的抗體。因此，l-26F117克隆產(chǎn)生阻斷KIR信號轉(zhuǎn)導而不影響KIR-配體相互作用的抗體。實施例7:KIR2DL1-Fc配體結(jié)合竟爭測定法通過竟爭可溶性重組KIR-Fc融合蛋白對表達HLA-C的細胞的結(jié)合評價抗KIRmAbsl-7F9、1-4F1和DF200阻止HLA-C和KIR分子之間的相互作用的能力。為檢測抗KIRmAb是否可阻止KIR2DL1-Fc和HLA-Cw4之間的相互作用，用不斷增加的濃度的抗KIRmAb預溫育KIR2DL1-Fc蛋白，然后加入至LCL721.221-Cw4細胞，在4T下進行溫育，洗滌，用APC綴合的抗鼠類IgGlFc溫育，洗滌，并用標準的方法，通過流式細胞儀在FACScalibur或FACScanto(BecktonDickinson)上進行分析。DF200、1-7F9和1-4F1阻止KIR2DLl-Fc對表達HLA-Cw4的細胞的結(jié)合，表明這些mAb阻止KIR2DL1和HLA-Cw4之間的相互作用。實施例8:結(jié)構(gòu)域1或2結(jié)合的檢測本實施例描迷了如何確定選擇的抗體或其他試劑是否結(jié)合KIR的結(jié)構(gòu)域1或結(jié)構(gòu)域2。測量抗KIR抗體或其他試劑對重組的截短的KIR形式(由連接至Fc片段的細胞外結(jié)構(gòu)域2組成)的結(jié)合。通過從編碼KIR2DL1-Fc的構(gòu)建體刪除編碼結(jié)構(gòu)域1的核苷酸制備該構(gòu)建體，將所得的構(gòu)建體(稱為KIR2DL1-D2-Fc)轉(zhuǎn)染入COS細胞或HEK293，然后如對于完整的KIR2DL1-Fc所描述的(參見實施例6和7，和Wagtmann等人1995，同上)那樣，在A蛋白上純化KIR2DL1-D2-Fc蛋白。通過表面等離子共振分析測量抗KIR試劑對純化的KIR2DL1-D2-Fc的結(jié)合。在Biacore3000儀(BiacoreAB，Uppsala，Sweden)上進行該測定。使用標準的胺偶聯(lián)試劑盒(BiacoreAB)將相同量的純化的KIR2DL1-D2-Fc固定在CM5傳感芯片(BiacoreAB，Uppsala,Sweden)上的所有4個流體室中。以lO^ig/ml的濃度將HBS-EP緩沖液(10mMHEPES、150mMNaCl、3mMEDTA、0.005°/。聚山梨酯20(v/v))中的純化的重組KIR2DLl-D2-Fc注射入流體室，以10^1/分鐘的流速進行l(wèi)分鐘。在注射KIR2DL1-D2-Fc后，將在HBS-EP緩沖液中以1:1.5稀釋的雜交瘤組織培養(yǎng)上清液注射入分開的流體室中，以10fil/分鐘的流速進行l(wèi)分鐘。當RU反應〉20時，將樣品評定為陽性結(jié)合。最后，通過注射10mM甘氨酸-HClpH1.8，以30^1/分鐘的流速進行15秒來進行傳感芯片的再生。因此顯示結(jié)合KIR2DL1-D2-Fc的雜交瘤上清液包含結(jié)合KIR的結(jié)構(gòu)域2的mAb，然而不結(jié)合KIR2DL1-D2-Fc的雜交瘤上清液被認定包含結(jié)合結(jié)構(gòu)域1或結(jié)合橫跨結(jié)構(gòu)域1和結(jié)構(gòu)域2的復合表位的mAb?？墒褂肒IR2DLl-Dl-Fc構(gòu)建體進行相似的測定以確定抗KIR抗體或其他KIR結(jié)合試劑是否結(jié)合結(jié)構(gòu)域1。此處引用的所有參考資料，包括出版物、專利申請和專利此處以相同的程度引用作為參考，就好象各參考資料個別地和明確地在此被引用作為參考和以其全文在此列出一樣。所有標題和小標題此處只為了方便而使用，不應當被解釋為以任何方式限定本發(fā)明。除非在說明書中另外指出或通過上下文清楚地反對，在其所有可能的變化中上述元素的任何組合包含在本發(fā)明范圍之內(nèi)。除非此處另外指出或通過上下文清楚地反對，用于描述本發(fā)明的上下文中的術語"a""an""the"和相似的術語被解釋為涵蓋單數(shù)和復數(shù)。除非此處另外指出，此處引述的值的范圍只是用于單個地提及落在所述范圍內(nèi)的各分開的值的縮寫方法，且各分開的值被整合入本發(fā)說明書中就好象其單獨地在此引述一樣。除非另外指出，此處提供的所有精確值表示對應的近似值(例如，對于特定的系數(shù)或測量值提供的所有精確示例值可被認為也提供了由"大約，，修飾(合適時)的對應的近似測量值)。除非另外指出或通過上下文清楚地否定，可以任何合適的順序進行此處描述的所有方法。除非另外指出，此處提供的任何或所有例子、或示例性語言(例如，"例如")只用于更好地舉例說明本發(fā)明但不對本發(fā)明的范圍施以限制。除非明確說明，本說明書中術語不應當解釋為指定實踐本發(fā)明所必需的任何要件。此處的專利文件的引用和整合只是為了方便而進行，但并不反映這些專利文件的有效性、專利性和/或可實施性的任何觀點。除非另外指出或由上下文明確地反對，此處使用關于元素的術語例如"包含"、"包括"或"含有"描述本發(fā)明的實施方案的任何方面是指為本發(fā)明的相似方面或?qū)嵤┓桨柑峁┲С?，所述方案或?qū)嵤┓桨?由……組成"、"基本上由……組成"或"基本上包含"該特定的元素(除非另外指出或通過上下文明確地反對，例如此處描述的包含特定組分的組合物應當同樣理解為描述由該組分組成的組合物)。本發(fā)明包括在此處提供的方面或權(quán)利要求中引用的主題的所有變化和等同物以使適用法律允許的范圍最大化。權(quán)利要求1.與抑制性人殺傷IgG樣受體(KIR)的細胞外部分結(jié)合或相互作用的試劑，其中所述試劑減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制而沒有可檢測地減少所述KIR和KIR的HLAI類配體之間的結(jié)合。2.權(quán)利要求1的試劑，其中所述試劑通過減少或阻止KIR的群集來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制。3.權(quán)利要求l和2中任一項的試劑，其中所述試劑通過減少或阻止KIR的二聚化來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制。4.權(quán)利要求1至3中任一項的試劑，其中所述試劑減弱或阻止結(jié)構(gòu)域1相關性相互作用位點之間的相互作用。5.權(quán)利要求4的試劑，其中結(jié)構(gòu)域1相關性相互作用位點包含至少一個對應于SEQIDNO:14的殘基1-92中的一個殘基的氨基酸殘基。6.權(quán)利要求5的試劑，其中所述結(jié)構(gòu)域1相關性相互作用位點包含至少一個對應于Hl、E2、H5、R6、D31、V32、M33、F34、E35、H36、H50、D57、G58、V59、V83、T84、H85、S86、Q89、L90、S91或A92的氨基酸殘基。7.權(quán)利要求1至3中任一項的試劑，其中所述試劑減弱或阻止結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點之間的相互作用。8.權(quán)利要求7的試劑，其中所述結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點包含至少一個對應于SEQIDNO:14的殘基108-200中的一個殘基的氨基酸殘基。9.權(quán)利要求8的試劑，其中所述結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點包含至少一個對應于P108、S109、LllO、Slll、A112、Q113、P114、L114、G115、T125、S127、S129、R131、K155、V156、N157、G158、T159、(J161、A162、D163、S192、D193、P194、L195、L196、V197、S198、V199或T200的氨基酸殘基。10.權(quán)利要求9的試劑，其中KIR2DL1的結(jié)構(gòu)域2相關性相互作用位點包含氨基酸殘基LllO、Slll、A112、Q113、P/L114和L195。11.前面的權(quán)利要求中任一項的試劑，其中所述試劑減少或阻止KIR家族成員中的同型二聚化、異型二聚化中的至少一種或二者。12.權(quán)利要求11的試劑，其中所述試劑減少或阻止KIR2DL1的同型二聚化。13.前面權(quán)利要求中任一項的試劑，其中所述試劑是抗體或其片段。14.權(quán)利要求13的試劑，其中所述片段選自Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab02片段、Fv片段、雙抗體、單鏈抗體片段和多特異性抗體。15.權(quán)利要求13和14中任一項的試劑，其中所述抗體是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。16.前面權(quán)利要求中任一項的試劑，其中所述試劑是交叉反應性KIR結(jié)合試劑。17.權(quán)利要求16的試劑，其中所述試劑是交叉反應性抗KIR抗體或其片段。18.權(quán)利要求16和17中任一項的試劑，其中所述試劑結(jié)合KIR2DL1和KIR2DL3中的每一個。19.權(quán)利要求16至18中任一項的試劑，其中所述試劑是在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體竟爭的抗體或抗體片段。20.權(quán)利要求19的試劑，其中所述試劑是包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體或抗體片段。21.權(quán)利要求16至18中任一項的試劑，其中所述試劑是在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體竟爭的抗體或抗體片段。22.權(quán)利要求21的試劑，其中所述試劑是包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體或抗體片段。23.前面權(quán)利要求中任一項的試劑，用作藥物。24.—種藥物組合物，其以有效地在患者中可檢測地增強NK細胞的細胞毒性的量包含權(quán)利要求1-23所述的試劑和一種或多種藥物可接受的載體或稀釋劑。25.權(quán)利要求24的藥物制劑，其還包含選自免疫調(diào)節(jié)劑、激素劑、化學治療劑、抗血管生成劑、凋亡劑和阻止HLA結(jié)合抑制性KIR受體的抗體的治療劑。26.通過將NK細胞和有效量的權(quán)利要求1-23中任一項的試劑接觸來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的方法。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述試劑減少或阻止KIR的二聚化。28.權(quán)利要求26和27中任一項的方法，其中所述試劑是單克隆抗KIR抗體或其片段。29.權(quán)利要求26至28中任一項的方法，其中所述試劑在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體發(fā)生竟爭。30.權(quán)利要求26至28中任一項的方法，其中所述試劑在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體發(fā)生竟爭。31.權(quán)利要求1-22中任一項的試劑在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療癌癥、感染性疾病、病毒感染或免疫病癥。32.權(quán)利要求31的用途，其中所述藥物用于治療癌癥。33.權(quán)利要求32的用途，其中所述癌癥選自急性和慢性髓細胞性白血病(AML和CML)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、骨髓異常增生綜合征、非何杰金淋巴瘤(NHL)、多發(fā)性骨髓瘤、腎細胞癌、惡性黑色素瘤和結(jié)腸直腸癌。34.權(quán)利要求31的用途，其中所述病毒感染由選自人免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)和埃博拉病毒的病毒引起。35.用于治療癌癥的方法，所述方法包括給患有癌癥的受試者施用有效量的權(quán)利要求1-22中任一項的試劑。36.權(quán)利要求35的方法，其中所述試劑是人的、人源化的或嵌合的交叉反應性單克隆抗KIR抗體或其片段。37.權(quán)利要求35和36中任一項的方法，其中所述試劑在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體發(fā)生竟爭。38.權(quán)利要求35和36中任一項的方法，其中所述試劑在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體發(fā)生竟爭。39.權(quán)利要求35至38中任一項的方法，其還包括施用選自免疫調(diào)節(jié)劑、激素劑、化學治療劑、抗血管生成劑、凋亡劑和阻止HLA結(jié)合抑制性KIR受體的抗體的治療劑。40.產(chǎn)生能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的試劑的方法，其包括步驟a)產(chǎn)生候選試劑庫；b)選擇與抑制性KIR的細胞外部分結(jié)合或相互作用的任何候選試劑；和c)從步驟b)選擇能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制而不減少所述抑制性KIR和該KIR的HLAI類配體之間的結(jié)合的任何候選試劑；其中步驟b)和c)的順序可調(diào)換。41.權(quán)利要求40的方法，其還包括選擇交叉反應性KIR結(jié)合試劑的步驟。42.權(quán)利要求40和41中任一項的方法，其中所述試劑是單克隆抗體或其片段。43.用于產(chǎn)生能夠減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的抗體或抗體片段的方法，其包括步驟a)用包含至少KIR的細胞外部分的免疫原性組合物免疫非人動物；b)從所述免疫的動物制備抗體，其中所述抗體結(jié)合所述KIR;c)從步驟b)選擇能夠中和KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制而不減少所述抑制性KIR和該KIR的HLAI類配體之間的結(jié)合的任何抗體j和d)任選地制備所述抗體的片段。44.分離的抗體或抗體片段，所述抗體或片段在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體發(fā)生竟爭。45.權(quán)利要求44的抗體或抗體片段，其在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:17的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體結(jié)合相同的KIR2DL1表位。46.權(quán)利要求44和45中任一項的抗體或抗體片段，其包含對應于SEQIDNO:17的殘基31-35的CDRHI區(qū)域；對應于SEQIDNO:17的殘基50-66的CDRH2;對應于SEQIDNO:17的殘基99-108的CDRH3;對應于SEQIDNO:18的殘基24-34的CDRLI;對應于SEQIDNO:18的殘基50-56的CDRL2和對應于SEQIDNO:18的殘基89-97的CDRL3。47.權(quán)利要求44至46中任一項的抗體或抗體片段，其包含SEQIDN0:17的VH序列和SEQIDN0:18的VL序列。48.在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDN0:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體竟爭的分離的抗體或抗體片段。49.權(quán)利要求48的抗體或抗體片段，其在對KIR2DL1和KIR2DL3的至少一種的結(jié)合中與包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列的抗體結(jié)合相同的KIR2DL1表位。50.權(quán)利要求48和49中任一項的抗體或抗體片段，其包含對應于SEQIDNO:21的殘基31-35的CDRHI區(qū)域；對應于SEQIDNO:21的殘基50-66的CDRH2;對應于SEQIDNO:21的殘基98-103的CDRH3;對應于SEQIDNO:18的殘基24-34的CDRLI;對應于SEQIDNO:18的殘基50-56的CDRL2和對應于SEQIDNO:18的殘基89-97的CDRL3。51.權(quán)利要求48至50中任一項的抗體或抗體片段，其包含SEQIDNO:21的VH序列和SEQIDNO:18的VL序列。52.編碼權(quán)利要求44至51中任一項的抗體或抗體片段的核苷酸序列。53.包含權(quán)利要求52的核苷酸序列的表達載體。54.用權(quán)利要求53的載體轉(zhuǎn)染的宿主細胞。55.產(chǎn)生抗體的方法，其包括在適合于所述抗體表達的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求54的宿主細胞。全文摘要本發(fā)明涉及能夠通過減少抑制性KIR信號轉(zhuǎn)導而不減少KIR對HLA-C的結(jié)合來促進NK細胞介導的靶細胞的殺傷的試劑和方法。如此處所描述的，在KIR結(jié)合其HLAI類配體后，通過KIR的負信號的轉(zhuǎn)導可包括配體結(jié)合誘導的KIR分子的構(gòu)象再定向(reorientation)，該構(gòu)象再定向允許相鄰的KIR之間在特定的結(jié)構(gòu)域中形成相互作用，從而導致加速的群集。提供了通過例如減少或阻止KIR的二聚化而不減少或阻止HLA結(jié)合來減少KIR介導的對NK細胞的細胞毒性的抑制的方法和試劑例如單克隆抗體。文檔編號A61K39/395GK101103043SQ200680001919公開日2008年1月9日申請日期2006年1月6日優(yōu)先權(quán)日2005年1月6日發(fā)明者K·克扎爾加德,P·A·N·R·瓦格特曼,P·斯比,S·B·帕德克,S·扎恩申請人:諾和諾德公司;伊納特醫(yī)藥兩合公司