專利名稱：一種夏天無(wú)提取物的制備工藝及其新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種一種夏天無(wú)提取物的制備工藝及其新用途。
背景技術(shù)：
夏天無(wú)系罌粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens(Thunb.)Pers.的干燥塊莖。上世紀(jì)六十年代，江西天施康中藥股份有限公司(原江西余江制藥廠)從民間發(fā)掘出夏天無(wú)，對(duì)其生物學(xué)特性、栽培技術(shù)、化學(xué)成分、藥理作用、毒性反應(yīng)、臨床應(yīng)用進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，并相繼研制出夏天無(wú)系列制劑。隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展和現(xiàn)代分析技術(shù)的應(yīng)用，對(duì)夏天無(wú)的研究得以進(jìn)一步深入，從夏天無(wú)植物中分離出原阿片堿、紫堇米定堿、延胡索乙素、畢扣扣靈、巴馬汀、小檗堿等20多種生物堿。
傳統(tǒng)的夏天無(wú)總生物堿提取工藝以稀鹽酸提取，通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附純化，用氨水的乙醇溶液回流洗脫，回收乙醇，得夏天無(wú)提取物。該工藝提取的夏天無(wú)總生物堿純度較低，較多的雜質(zhì)使制劑的穩(wěn)定性差，通常多用于制備口服固體制劑。
2003年該公司用大孔吸附樹(shù)脂提取夏天無(wú)總生物堿，并將其用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)退化性疾病的治療進(jìn)行了深入研究和二次開(kāi)發(fā)，申報(bào)了夏天無(wú)總生物堿的提取方法及其新用途專利并獲專利證書(shū)。為進(jìn)一步保護(hù)新工藝提取的夏天無(wú)總生物堿及其應(yīng)用，公司通過(guò)多項(xiàng)試驗(yàn)摸索出幾種夏天無(wú)提取物的制備工藝，并證實(shí)了在其他領(lǐng)域中的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種夏天無(wú)提取物的制備工藝及其新用途。該工藝提取的夏天無(wú)總生物含量達(dá)到80％以上，其中原阿片堿占總生物堿的50％以上。該夏天無(wú)中間體及其制劑可應(yīng)用于中風(fēng)偏癱、跌撲損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、小兒麻痹后遺癥、降血壓、抗心律失常、腦血管痙攣、心肌梗死、防治青少年近視眼、鎮(zhèn)痛、戒毒脫癮。
本發(fā)明是這樣來(lái)實(shí)現(xiàn)的，將夏天無(wú)藥材打成粗粉，過(guò)10目篩，以0.05％-5.5％的稀鹽酸為溶媒提取，收集提取液，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至7，以每分鐘5ml的速度過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，至流出液生物堿呈陽(yáng)性即飽和；水洗大孔吸附樹(shù)脂柱，再用30％-60％的中濃度乙醇洗至顏色變淺后再用60％-98％高濃度乙醇洗脫，至洗脫液生物堿反應(yīng)呈陰性后，收集高濃度乙醇洗脫液，然后以每分鐘5ml的流速過(guò)氧化鋁層析柱吸附除去雜質(zhì)。經(jīng)氧化鋁層析柱除雜后，減壓回收乙醇，濃縮物在PH1-5的酸性條件下溶解過(guò)濾，濾液在PH8-10的堿性條件下析出沉淀，干噪，得夏天無(wú)提取物。
本發(fā)明用0.05％-5.5％鹽酸為溶媒提取的方法可以是滲漉、回流、浸漬工藝，調(diào)節(jié)PH1-5酸性時(shí)用鹽酸，調(diào)節(jié)PH8-10堿性用氫氧化鈉。
本發(fā)明的夏天無(wú)提取物為夏天無(wú)的有效部位總生物堿，其總生物堿含量達(dá)到80％以上，其中原阿片堿含量可達(dá)到50％以上。
本發(fā)明的夏天無(wú)提取物可作為各類制劑的中間體，加上適當(dāng)?shù)妮o料制成口服固體制劑的硬膠囊劑、顆粒劑、片劑、滴丸、丸劑、軟膠囊劑，口服液體制劑、注射劑、滴眼劑、經(jīng)皮吸收制劑的貼劑、巴布膏劑、膜劑。
本發(fā)明的夏天無(wú)提取物及其制劑可用于中風(fēng)偏癱、跌打損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、小兒麻痹后遺癥、降血壓、抗心律失常、腦血管痙攣、心肌梗塞、防治青少年近視眼、鎮(zhèn)痛、戒毒脫癮。
具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1取夏天無(wú)藥材1000g，打碎，過(guò)10目篩，加1.0％(v/v)稀鹽酸浸漬48小時(shí)后以每分鐘1-3ml的速度滲漉，收集滲漉液，至滲漉液生物堿反應(yīng)呈陰性為止。加10％(g/v)氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至7，過(guò)AB-8型大孔吸附樹(shù)脂柱，至流出液呈生物堿反應(yīng)呈陽(yáng)性止。依次用水、40％(v/v)乙醇洗至顏色變淡，再用95％(v/v)乙醇洗脫，直到洗出液呈生物堿陰性反應(yīng)為止，收集95％乙醇洗脫液，過(guò)氧化鋁層析柱，收集流出液并減壓回收乙醇，在浸膏中加1.0％(v/v)稀鹽酸調(diào)節(jié)PH至2-3條件下溶解，然后再次用10％氫氧化鈉溶液調(diào)PH至9.0析出生物堿，過(guò)濾，沉淀物減壓低溫干燥，即得夏天無(wú)提取物。
實(shí)施例2取夏天無(wú)藥材1000g，打成粗粉，加0.5％(v/v)稀鹽酸回流提取二次，第一次加12倍量稀鹽酸，第二次加10倍量稀鹽酸，每次1小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，加10％(g/v)氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至7，過(guò)AB-8型大孔吸附樹(shù)脂柱，至大孔吸附樹(shù)脂飽和為止，先用水洗柱，再用30％-40％(v/v)乙醇洗脫，流出液顏色變淡后用95％(v/v)乙醇洗脫，直至洗脫液生物堿呈陰性反應(yīng)。合并95％乙醇洗脫液，過(guò)氧化鋁層析柱除雜，流出液減壓回收乙醇后，加0.5％稀鹽酸調(diào)節(jié)PH2-3溶解浸膏，再用10％氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至9.0，析出提取物，過(guò)濾，沉淀物在80℃以下干燥，得夏天無(wú)提取物。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果研究 實(shí)驗(yàn)一夏天無(wú)提取物對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性腦血栓形成的影響 取SD大鼠50只，雄性，體重350±30g，隨機(jī)分成5組，將夏天無(wú)總堿配成溶液劑，灌胃給藥，1ml/100g，每天一次，連續(xù)7天。模型組灌生理鹽水，對(duì)照組灌尼莫地平懸濁液16mg/kg/d，觀察組用高、中、低夏天無(wú)提取物，劑量分別為1.0、0.5、0.25mg/kg/d。
1、夏天無(wú)提取物對(duì)大鼠腦梗塞區(qū)伊文思藍(lán)含量的影響 腦血栓模型制造后，肉眼可明顯看出右側(cè)腦半球藍(lán)染，以顱底藍(lán)染程度為甚，左半球看不到藍(lán)染，說(shuō)明右側(cè)腦半球血栓模型制造成功。研究表明，夏天無(wú)提取物大、中劑量(1.0、0.5mg/kg/d)可減少梗塞半球的伊文思藍(lán)含量，說(shuō)明其能減輕大鼠腦梗塞的嚴(yán)重程度。尼莫地平作為臨床常用藥對(duì)大鼠血栓模型有明顯的治療作用。
表1夏天無(wú)提取物對(duì)大鼠腦血栓伊文思藍(lán)含量的影響(
±S) 2、夏天無(wú)提取物對(duì)大鼠腦血栓左右半球濕重的影響 與模型組比較表明，腦血栓模型形成后，右腦濕重/左腦濕重的比例有所增加，夏天無(wú)提取物可減輕腦栓塞引起的腦組織水腫。
表2夏天無(wú)提取物對(duì)大鼠腦梗塞側(cè)腦組織水腫程度的影響(
±S) 實(shí)驗(yàn)二夏天無(wú)提取物戒毒脫癮作用實(shí)驗(yàn) 夏天無(wú)提取物對(duì)小鼠具有減少自主活動(dòng)、抑制扭體反應(yīng)及延長(zhǎng)戊巴比妥鈉閾上劑量睡眠時(shí)間的作用，提示該藥對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有抑制作用。實(shí)驗(yàn)對(duì)戊巴比妥鈉閾下、閾上劑量催眠作用的影響。
1、對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠作用的影響 取小鼠40只，隨機(jī)分成4組，即空白對(duì)照組，夏天無(wú)提取物3個(gè)劑量組(0.5、1.0、1.50mg/kg)。實(shí)驗(yàn)時(shí)各組小鼠灌胃給藥，于給藥后30min各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(25mg/kg)，翻正反射消失達(dá)1min以上者為發(fā)生睡眠。結(jié)果夏天無(wú)提取物對(duì)戊巴比妥鈉在閾下催眠的劑量下高劑量組(1.50mg/kg)可使少量動(dòng)物(3只)產(chǎn)生催眠作用，其它各組無(wú)明顯影響，長(zhǎng)方檢驗(yàn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2、對(duì)戊巴比妥鈉閾上劑量催眠作用的影響 取小鼠40只，實(shí)驗(yàn)分組給藥同上，于給藥后30min各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(40mg/kg)，以翻正反射為指標(biāo)，觀察各組小鼠催眠潛伏期的縮短以及睡眠時(shí)間的延長(zhǎng)(以小鼠翻正反射消失為睡眠指標(biāo))，詳見(jiàn)表3，結(jié)果表明，夏天無(wú)提取物具有一定的催眠作用。
表3夏天無(wú)提取物對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠作用的影響 (
±S，n＝10，t/min) *P＜0.05，與空白組對(duì)照 3、對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 取小鼠50只，雌雄兼用，隨機(jī)分成5組，即空白對(duì)照組(生理鹽水組)，陽(yáng)性藥腹腔注射戊巴比妥鈉(25mg/kg)、夏天無(wú)提取物3個(gè)劑量組(0.5、1.0、1.5mg/kg)。灌胃給藥，分別測(cè)定各組小鼠給藥前及給藥后30min、60min的自主活動(dòng)，方法是將小鼠置于小鼠自主活動(dòng)儀中穩(wěn)定5min，測(cè)定10min內(nèi)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)，給藥后30min、60min與對(duì)照組比較差異有顯著意義(P＜0.01，P＜0.001＝，見(jiàn)表4。結(jié)果表明夏天無(wú)提取物具有一定的鎮(zhèn)靜作用。
表4夏天無(wú)提取物對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響(
±S，n＝10) *P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，與空白組比較 實(shí)驗(yàn)三夏天無(wú)提取物對(duì)大鼠體內(nèi)血小板聚集的影響 將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、阿司匹林組、夏天無(wú)提取物低、中、高3個(gè)劑量組、夏天無(wú)提取物按每天(0.25、0.5、1.0mg/kg)給藥，阿司匹林組按50mg/kg給藥，給藥體積為每100g體重每天1ml灌胃。連續(xù)7天，第8天給藥后用20％烏來(lái)糖麻醉。常規(guī)法制備血小板懸液，用Born’s比濁法測(cè)定血小板聚集性。
人體外給藥，抽取健康人靜脈血液以3.8％的枸櫞酸鈉溶液抗凝，血與抗凝劑之比為9∶1，取出富血小板血漿(PRP)，分別加入不同濃度的夏天無(wú)提取物溶液，37℃溫育5min，操作方法同上。測(cè)定結(jié)果并計(jì)算血小板最大聚集率。血小板聚集抑制率(％)＝(對(duì)照管最大聚集率—給藥管最大聚集率)/對(duì)照管最大聚集率。
SIPA的檢測(cè)方法。家兔心臟取血，以3.8％的枸櫞酸鈉溶液1∶9抗凝，取血后離心制備PRP和PPP，將受試藥品分為三個(gè)劑量加入血小板樣品中，37℃溫育5min，然后取出加入到粘質(zhì)儀錐板中，剪切應(yīng)力為8000達(dá)因/cm2，剪切時(shí)間為5min，吸取20μl錐板中的PRP，計(jì)數(shù)游離血小板數(shù)目，按CA610血細(xì)胞方析儀說(shuō)明書(shū)介紹的單通道檢測(cè)血小板數(shù)目的方法進(jìn)行檢測(cè)，按原始通用公式計(jì)算出SIPA值。
1、夏天無(wú)提取物對(duì)大鼠體內(nèi)血小板聚集的影響 夏天無(wú)提取物對(duì)ADP誘導(dǎo)血小板聚集影響見(jiàn)表5。不同濃度的夏天無(wú)提取物對(duì)花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集的影響見(jiàn)表6。中、高劑量對(duì)血小板聚集有明顯的抑制作用。
表5夏天無(wú)提取物對(duì)ADP誘導(dǎo)血小板聚集的影響(
±S) 與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
表6夏天無(wú)提取物對(duì)花生四烯酸誘導(dǎo)血小板聚集的影響(
±S) 與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
2、夏天無(wú)提取物對(duì)人血小板聚集的影響 夏天無(wú)提取物對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的影響見(jiàn)表7，對(duì)花生四烯酸誘導(dǎo)血小板聚集的影響見(jiàn)表8。表7、表8結(jié)果表明，中、高劑量對(duì)血小板聚集有明顯的抑制作用。
表7夏天無(wú)提取物對(duì)ADP誘導(dǎo)人血小板聚集的影響(
±S) 與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
表8夏天無(wú)提取物對(duì)花生四烯酸誘導(dǎo)人血小板聚集的影響 與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
3、夏天無(wú)提取物對(duì)SIPA的影響 夏天無(wú)提取物對(duì)剪切力誘導(dǎo)的血小板聚集的影響見(jiàn)表9，中、高劑量對(duì)SIPA有明顯的抑制作用。
表9夏天無(wú)提取物對(duì)剪切力誘導(dǎo)的血小板聚集的影響(
±S) 與模型組比較，**P＜0.01。
權(quán)利要求
1、一種夏天無(wú)提取物的制備工藝及其新用途，其特征在于將夏天無(wú)藥材打成粗粉，用0.05-5.5％的稀鹽酸提取，提取液經(jīng)堿化后過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，水洗后依次用30％-60％中濃度的乙醇和60％-95％高濃度的乙醇洗脫，收集高濃度乙醇洗脫液合并，過(guò)氧化鋁層析柱，回收乙醇后在酸性條件溶出，在堿性條件下析出所需要的夏天無(wú)提取物。
2、如權(quán)利要求1所述的一種夏天無(wú)提取物的制備方法，其特征在于用0.05％-5.5％的稀鹽酸提取夏天無(wú)，其提取方法選自滲漉、回流、浸漬，其堿化用氫氧化鈉調(diào)PH至中性。
3、如權(quán)利要求1所述的一種夏天無(wú)提取物的制備方法，其特征在于在酸性條件下溶出，其酸性條件是PH1-5，在堿性條件下析出，其堿性條件是PH8-10。
4、一種夏天無(wú)提取物的新用途，其特征在于夏天無(wú)提取物具有活血通絡(luò)，行氣止痛的功效，有止痛、興奮平滑肌、解除肌肉痙攣的作用；具有抑制血栓形成和血小板粘附，減輕腦梗塞引起的伊文思藍(lán)藍(lán)染和腦水腫；能擴(kuò)張腦血骨和下肢血管的作用；能顯著對(duì)抗缺血性和復(fù)灌性心律失常的反應(yīng)。
5、如權(quán)利要求5所述的夏天無(wú)提取物的新用途，其特征在于夏天無(wú)提取物在中風(fēng)偏癱、跌撲損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、坐骨神經(jīng)痛、小兒麻痹后遺癥、降血壓、抗心律失常、腦血管痙攣、心肌梗死、防治青少年近視眼、鎮(zhèn)痛、戒毒脫癮中的應(yīng)用。
6、如權(quán)利要求5所述的夏天無(wú)提取物的應(yīng)用，其特征在于夏天無(wú)提取物可制成口服固體制劑、口服液體制劑、注射劑、滴眼劑、經(jīng)皮吸收制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種夏天無(wú)提取物的制備工藝及其新用途。本發(fā)明的夏天無(wú)提取工藝采用0.05－5.5％的鹽酸作溶媒提取堿化后，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂吸附再用水和30％－98％的乙醇依次洗脫，高濃度乙醇洗脫液過(guò)氧化鋁層析柱吸附除雜，回收乙醇后在pH1－5條件下溶出，再在pH8－10的條件析出，得夏天無(wú)總生物堿提取物，該提取物及其制劑可用于中風(fēng)偏癱、跌撲損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、小兒麻痹后遺癥、降血壓、抗心律失常、腦血管痙攣、心肌梗死、防治青少年近視眼、鎮(zhèn)痛、戒毒脫癮。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1951429SQ200610124689
公開(kāi)日2007年4月25日 申請(qǐng)日期2006年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月29日
發(fā)明者吳朝陽(yáng), 徐發(fā)紅, 陳科茂, 黃經(jīng)球 申請(qǐng)人:江西天施康中藥股份有限公司