專利名稱：斑蝥在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及斑蝥、斑蝥合劑的用途，尤其涉及它們在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
斑蝥早在十三世紀(jì)的《仁齋直指方》中就有記載，可用治于乳癌及腹部癌。古人還常用“斑蝥煮雞蛋，棄斑蝥食蛋”的偏方治療肝癌及其它消化系統(tǒng)癌癥，至今仍在民間沿用。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為斑蝥性寒味辛，有毒。據(jù)《神農(nóng)本草經(jīng)》記載，斑蝥可以治療癰疽、潰瘍、癬瘡等病癥，具有攻毒蝕疽、破血散結(jié)的作用。臨床發(fā)現(xiàn)其還有多種新用途，治療一些疑難雜癥具有獨(dú)特的療效，如治療風(fēng)濕痛、神經(jīng)痛、梅核氣、斑禿、乳腺增生、鼻炎、傳染疣、肝炎、癌腫等。
原發(fā)性肝癌(PHC，以下簡稱肝癌)為常見的消化道惡性腫瘤，東亞地區(qū)是世界肝癌高發(fā)區(qū)，其發(fā)病率在惡性腫瘤中居第三位，男性肝癌發(fā)病率約是女性的3倍，新病例中73％是男性。肝癌病死率高(死亡率/發(fā)病率＝0.95)，2000年死亡病例39.6萬，在惡性腫瘤死因中排列第二。如何有效地防治本病是醫(yī)藥界面臨的一個(gè)重要課題，免疫學(xué)和分子生物學(xué)的不斷發(fā)展為腫瘤學(xué)的基礎(chǔ)研究開辟了廣闊的前景。中醫(yī)認(rèn)為感受邪毒是肝癌的主要病因之一，祛除邪毒是治療肝癌的重要方法?，F(xiàn)代研究又證實(shí)，免疫系統(tǒng)能影響腫瘤生長，而荷瘤的宿主往往有免疫功能低下的改變。因此，增強(qiáng)和調(diào)整腫瘤患者免疫功能，將有利于對腫瘤的控制。目前，中醫(yī)藥在抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移、提高患者生存質(zhì)量和延長患者生命等方面都取得了可喜的進(jìn)展。中晚期肝癌患者免疫功能常嚴(yán)重受損，尤以細(xì)胞免疫功能下降為主，提高細(xì)胞免疫功能對于肝癌患者病情的緩解有積極作用。
系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種較常見的累及多系統(tǒng)多器官的自身免疫性疾病，由于細(xì)胞和體液免疫功能障礙，產(chǎn)生多種自身抗體。發(fā)病機(jī)理主要是由于免疫復(fù)合物形成。病情呈反復(fù)發(fā)作與緩解交替過程。
白癜風(fēng)是一種常見的色素脫失性皮膚黏膜疾病，主要由神經(jīng)精神異?；蛘呙庖吖δ苁д{(diào)等因素導(dǎo)致皮膚黑素細(xì)胞缺失或黑素生成障礙而引起，在我國發(fā)病率約為0.1-2％。除局部皮膚色素脫失形成的白斑外，患者通常無其它任何自覺癥狀，但由于多見于年輕人，且影響容貌美觀，往往給患者造成一種無形的心理壓力，乃至影響正常的生活和工作。
目前對H22肝癌、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白癜風(fēng)還沒有效果好的藥物。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于以下幾方面斑蝥在制備治療或預(yù)防免疫失調(diào)引起的疾病的藥中的應(yīng)用。
斑蝥在制備治療或預(yù)防H22肝癌的藥中的應(yīng)用。
斑蝥在制備治療或預(yù)防系統(tǒng)性紅斑狼瘡的藥中的應(yīng)用。
斑蝥在制備治療或預(yù)防白癜風(fēng)的藥中的應(yīng)用。
斑蝥合劑在制備治療或預(yù)防免疫失調(diào)引起的疾病的藥中的應(yīng)用。
斑蝥合劑在制備治療或預(yù)防H22肝癌的藥中的應(yīng)用。
斑蝥合劑在制備治療或預(yù)防系統(tǒng)性紅斑狼瘡的藥中的應(yīng)用。
斑蝥合劑在制備治療或預(yù)防白癜風(fēng)的藥中的應(yīng)用。
其中所述斑蝥合劑選自斑蝥素、羥基斑蝥胺、斑蝥酸鈉、去甲斑蝥素一種或幾種。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方法來實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明以肝癌(H22)小鼠為模型，進(jìn)行斑蝥、斑蝥合劑對荷瘤小鼠的小鼠體重、瘤重及抑瘤率、T淋巴細(xì)胞增殖功能、NK殺傷功能、T淋巴細(xì)胞表型、細(xì)胞因子實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示了斑蝥、斑蝥合劑具有抑制腫瘤組織生長的作用，并且對荷瘤小鼠的免疫功能有一定調(diào)節(jié)作用。
本發(fā)明所公開斑蝥在制藥中的應(yīng)用，其優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在(1)本發(fā)明對斑蝥、斑蝥合劑發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域。
(2)本發(fā)明的斑蝥、斑蝥合劑安全低毒，藥理作用強(qiáng)，預(yù)示著很好的藥用前景。
(3)斑蝥、斑蝥合劑具有抑制腫瘤生長和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的雙重效應(yīng)，為臨床治療腫瘤提供了依據(jù)。我們認(rèn)為斑蝥合劑抗腫瘤的作用機(jī)理是通過提高荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞中CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞功能以及改變CD4+/CD8+比值，增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷功能，誘導(dǎo)IFN-γ和IL-4分泌，改善荷瘤小鼠的細(xì)胞及體液免疫而實(shí)現(xiàn)的。
圖1顯示斑蝥對荷瘤小鼠體重及瘤重的影響圖2顯示斑蝥對荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞增殖的影響注1.正常組T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化刺激指數(shù)為42.01；注2.與生理鹽水組比較，*P＜0.01。
圖3顯示斑蝥對荷瘤小鼠NK細(xì)胞殺傷功能的影響注與生理鹽水組比較，*P＜0.01。
圖4顯示斑蝥對荷瘤小鼠T細(xì)胞亞群變化的影響。
圖5顯示斑蝥對荷瘤小鼠分泌IFN-γ能力的影響注與生理鹽水組比較，*P＜0.01。
圖6顯示斑蝥對荷瘤小鼠分泌IL-4能力的影響注與生理鹽水組比較，*P＜0.01。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
實(shí)施例1斑蝥在制備治療或預(yù)防H22肝癌的藥中的應(yīng)用1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1斑蝥的制備取中藥斑蝥飲片置煎煮容器內(nèi)，加相當(dāng)于藥材量5-7倍的冷水浸泡1-2h，煮沸30min，過濾。藥渣加3-5倍量水繼續(xù)煎煮，煮沸20min，過濾。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當(dāng)于原生藥材0.01g/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4℃冰箱備用。
1.1.2動物C57BL/6小鼠，雄性，10周齡，購自上海中科院動物中心。
1.1.3瘤株肝癌H22瘤株，由上海市免疫學(xué)研究所提供。
1.1.4試劑ConA(Sigma公司)，CD3、CD4、CD8單抗(eBioScience公司)，NK細(xì)胞殺傷試劑(上海市免疫研究所自配)，3H-TdR(上海原子能研究所)，IFN-γ和IL-4檢測試劑盒(晶美公司)。
1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1造模方法無菌條件下取生長7-9d傳代接種的H22細(xì)胞株，將細(xì)胞5×106接種于每只小鼠右側(cè)腋窩皮下。
1.2.3動物分組及給藥方法小鼠30只，10只作為正常組，其余均按上法造模。小鼠接種腫瘤5天后，隨機(jī)分成生理鹽水組和實(shí)驗(yàn)組，每組10只，生理鹽水組予以生理鹽水處理，實(shí)驗(yàn)組給予斑蝥水煎液0.01g/ml，均灌胃0.2ml/只，連續(xù)給藥15天。
1.2.4標(biāo)本采集停藥次日，斷頸處死小鼠，剝離腫瘤組織并無菌取脾。
1.3檢測指標(biāo)1.3.1小鼠體重、瘤重及抑瘤率胃飼15天后，稱取兩組小鼠體重；處死小鼠后完整剝離腫瘤，用電子天平稱取瘤重，計(jì)算抑瘤率。
1.3.2T淋巴細(xì)胞增殖功能采用3H-TdR摻入法。在96孔平底培養(yǎng)板中，每孔加入小鼠脾細(xì)胞懸液100μl，濃度為5×106/ml，三復(fù)孔培養(yǎng)。同時(shí)，分別加入ConA 10μl。于37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)72h。終止培養(yǎng)前16h，每孔加入3H-TdR 1μCi。用細(xì)胞收集儀將細(xì)胞收集于玻璃纖維濾紙上，β-液閃儀測定cpm值，并計(jì)算刺激指數(shù)。
1.3.3NK殺傷功能用1640培養(yǎng)液分別調(diào)整小鼠脾細(xì)胞(效應(yīng)細(xì)胞)和體外培養(yǎng)的K562細(xì)胞(靶細(xì)胞)濃度為5×106/ml和1×105/ml。按效∶靶＝50∶1比例，各取100μl加入96孔平底培養(yǎng)板，37℃、5％CO2條件下共同培養(yǎng)4h。并設(shè)自然釋放和最大釋放組作為實(shí)驗(yàn)陰陽性對照。然后1000rpm，離心5min。吸取上清100μl，加入底物液100μl，靜置3min顯色。再加入1N HCL終止反應(yīng)，490nm波長讀取OD值。計(jì)算NK細(xì)胞的殺傷百分率。
1.3.4T淋巴細(xì)胞表型采用直接免疫熒光及流式細(xì)胞儀分析。取小鼠脾細(xì)胞1×106，加入適量PE-Cy5-CD3、FITC-CD4和PE-CD8混合單抗，室溫避光孵育20min。1000rpm，離心5min，洗滌2次后，加入300μl固定液，上機(jī)檢測。
1.3.5細(xì)胞因子采用ELISA法。收集小鼠脾細(xì)胞經(jīng)ConA刺激24h后的培養(yǎng)上清，按照細(xì)胞因子檢測試劑盒操作說明分別測定IFN-γ和IL-4的含量。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用Statpal團(tuán)體T檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析各組別數(shù)據(jù)的差異顯著性。
2結(jié)果2.1斑蝥對荷瘤小鼠體重、瘤重及抑瘤率的影響結(jié)果如圖1所示。與正常組比較，兩組發(fā)生腫瘤的小鼠體重均減輕，而實(shí)驗(yàn)組小鼠體重下降明顯(P＝0.001)，但實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤重量顯著小于生理鹽水組小鼠瘤重(P＝0.0015)，抑瘤率達(dá)65.76％。表明斑蝥能有效抑制小鼠肝癌細(xì)胞的生長。
2.2斑蝥對荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞增殖的影響兩組T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能均較正常小鼠有顯著降低。實(shí)驗(yàn)組小鼠T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化刺激指數(shù)增加顯著(SI＝4.34＞3，P＝0.00129)，具有較強(qiáng)的增殖能力，結(jié)果見圖2。說明斑蝥能顯著上調(diào)小鼠的T淋巴細(xì)胞增殖功能。
2.3斑蝥對荷瘤小鼠NK細(xì)胞殺傷功能的影響與正常組比較，單純胃飼生理鹽水組NK細(xì)胞殺傷活性無顯著性差異，說明罹患肝癌后，并不能有效地刺激小鼠NK細(xì)胞產(chǎn)生針對腫瘤的免疫應(yīng)答。實(shí)驗(yàn)組小鼠NK細(xì)胞殺傷活性顯著增高，為生理鹽水組的5倍(P＜0.005)，結(jié)果見圖3。說明斑蝥能增強(qiáng)患瘤小鼠NK細(xì)胞的殺傷功能。
2.4斑蝥對荷瘤小鼠T細(xì)胞亞群變化的影響如圖4所示，與正常組比較，兩腫瘤小鼠組T細(xì)胞數(shù)量均有明顯下降(P＜0.05)，說明其免疫功能低下。同時(shí)，兩組小鼠外周T細(xì)胞亞群比例發(fā)生明顯變化CD4+/CD8+比例倒置，這可能是因?yàn)榘l(fā)生腫瘤后，小鼠體內(nèi)腫瘤特異性CD8+T細(xì)胞克隆增殖的結(jié)果。而生理鹽水組與實(shí)驗(yàn)組相比，后者更能改變T淋巴細(xì)胞亞群比例。
2.5斑蝥對荷瘤小鼠分泌細(xì)胞因子能力的影響IFN-γ測定顯示見圖5，實(shí)驗(yàn)組小鼠T細(xì)胞分泌IFN-γ能力有顯著升高(P＜0.05)，說明斑蝥能顯著上調(diào)CD4+Th1細(xì)胞的分泌能力，并進(jìn)而上調(diào)小鼠細(xì)胞免疫功能，促進(jìn)CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞的抗腫瘤作用。IL-4檢測結(jié)果顯示見圖6，實(shí)驗(yàn)組小鼠T細(xì)胞分泌IL-4的能力有顯著升高(P＜0.001)，說明斑蝥能顯著上調(diào)CD4+Th2細(xì)胞的分泌能力，并進(jìn)而上調(diào)小鼠體液免疫功能。綜合以上兩種情況，實(shí)驗(yàn)組既能上調(diào)小鼠細(xì)胞免疫功能，又能有效刺激小鼠的體液免疫功能，因此能有效抑制小鼠腫瘤的生長。
3討論中醫(yī)在古代沒有“肝癌”的病名，但類似于肝癌的記載卻十分豐富，如“黃疸”、“臌脹”、“積聚”、“徵瘕”等。中醫(yī)認(rèn)為，這類疾病的發(fā)病機(jī)理主要是感受邪毒，機(jī)體正不抗邪，致陰陽失調(diào)，臟腑功能障礙，經(jīng)絡(luò)阻塞，氣血運(yùn)行失常，氣滯血瘀，濕聚痰凝，郁久化火，終致氣、血、濕、熱、痰、瘀、毒互結(jié)而成肝癌?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，機(jī)體的免疫功能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。當(dāng)宿主免疫功能低下或受抑制時(shí)，腫瘤發(fā)生率增高，而在腫瘤進(jìn)行性生長時(shí)腫瘤患者的免疫功能受抑制，二者互為因果。如何增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，更好地發(fā)揮機(jī)體的抗腫瘤免疫機(jī)制，歷來是腫瘤免疫學(xué)研究的重要課題。我們針對肝癌“痰”、“瘀”、“毒”的病機(jī)特點(diǎn)，結(jié)合腫瘤免疫學(xué)初步探討了斑蝥對荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)的影響。
本實(shí)驗(yàn)表明斑蝥可以明顯的抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長，抑瘤率達(dá)65.76％，P＝0.0015，并使小鼠體重降低，發(fā)生脫毛現(xiàn)象，說明其能有效的殺死腫瘤細(xì)胞，具有一定的毒副作用。
機(jī)體的抗腫瘤免疫主要依靠T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫。成熟的T淋巴細(xì)胞分為CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞兩個(gè)亞群。一般認(rèn)為CD4+T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子，CD8+T淋巴細(xì)胞在CD4+淋巴細(xì)胞的輔助及細(xì)胞因子的作用下可以殺傷腫瘤細(xì)胞，初次的抗腫瘤免疫反應(yīng)主要依賴CD8+T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的參與。腫瘤特異性的CD8+T淋巴細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞也具有直接的殺傷作用。缺乏CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞，以及CD4+/CD8+比值的降低是導(dǎo)致抗腫瘤免疫效應(yīng)低下的原因之一。研究發(fā)現(xiàn)枸杞多糖能促進(jìn)CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖與活化。有報(bào)道三氧化二砷及巴戟天能令CD3+、CD4+細(xì)胞比例及CD4+/CD8+的比值明顯上升。本實(shí)驗(yàn)通過3H-TdR摻入法及流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)斑蝥能極明顯促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖(P＝0.00129)，并改變T淋巴細(xì)胞亞群比例，說明其具有增強(qiáng)細(xì)胞免疫作用。
自然殺傷(nature killer，NK)細(xì)胞在機(jī)體腫瘤的監(jiān)護(hù)、抵御感染、及在免疫功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，它是細(xì)胞免疫中的非特異部分，它不需要預(yù)先致敏就能殺傷腫瘤細(xì)胞，其殺傷作用無腫瘤特異性和MHC限制性，因此其非特異性殺傷能力降低往往是腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移的重要原因之一。既往研究發(fā)現(xiàn)荷瘤機(jī)體NK細(xì)胞活性明顯降低，本實(shí)驗(yàn)也取得了同樣結(jié)果，即荷瘤(H22)模型組小鼠的NK細(xì)胞活性顯著低于正常組，說明荷瘤機(jī)體NK細(xì)胞活性處于嚴(yán)重低下狀態(tài)，而藥物組的NK細(xì)胞活性明顯高于模型組(P＜0.005)，從而表明斑蝥可以增強(qiáng)荷肝癌小鼠NK細(xì)胞活性，提高其免疫力。
IFN-γ是參與細(xì)胞免疫應(yīng)答的重要細(xì)胞因子之一，能促進(jìn)Th0細(xì)胞分化為Th1細(xì)胞，影響Th1/Th2比率；Th2細(xì)胞是B細(xì)胞最有效的輔助者，對體液免疫最為重要，IL-4能促進(jìn)Th0細(xì)胞分化為Th2細(xì)胞，并抑制Th1細(xì)胞，分泌其系列因子，促進(jìn)體液免疫應(yīng)答。機(jī)體要處于良好的免疫狀態(tài)，必須保持Th1/Th2平衡，一旦Th1/Th2比例失調(diào)，向Th2方向漂移，造成免疫抑制狀態(tài)，機(jī)體的抗腫瘤免疫將受到嚴(yán)重干擾。本實(shí)驗(yàn)檢測到藥物組小鼠T細(xì)胞分泌IFN-γ及IL-4含量較模型組均有顯著升高(P＜0.05，P＜0.001)，說明斑蝥能顯著上調(diào)CD4+Th1及Th2細(xì)胞的分泌能力，同時(shí)增強(qiáng)小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫功能，因此能有效抑制小鼠腫瘤的生長。
綜上所述，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了斑蝥具有抑制腫瘤生長和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的雙重效應(yīng)，為臨床治療腫瘤提供了依據(jù)。我們認(rèn)為斑蝥抗腫瘤的作用機(jī)理可能是通過提高荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞中CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞功能以及改變CD4+/CD8+比值，增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷功能，誘導(dǎo)IFN-γ和IL-4分泌，改善荷瘤小鼠的細(xì)胞及體液免疫而實(shí)現(xiàn)的。
實(shí)施例2含有羥基斑蝥胺的斑蝥合劑在制備治療或預(yù)防H22肝癌的藥中的應(yīng)用1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1斑蝥合劑斑蝥合劑中斑蝥含量為0.02g/ml。
1.1.2動物C57BL/6小鼠，雄性，10周齡，購自上海中科院動物中心。
1.1.3瘤株肝癌H22瘤株，由上海市免疫學(xué)研究所提供。
1.1.4試劑ConA(Sigma公司)，CD3、CD4、CD8單抗(eBioScience公司)，NK細(xì)胞殺傷試劑(上海市免疫研究所自配)，3H-TdR(上海原子能研究所)，IFN-γ和IL-4檢測試劑盒(晶美公司)。
1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1造模方法無菌條件下取生長7-9d傳代接種的H22細(xì)胞株，將細(xì)胞5×106接種于每只小鼠右側(cè)腋窩皮下。
1.2.3動物分組及給藥方法小鼠30只，10只作為正常組，其余均按上法造模。小鼠接種腫瘤5天后，隨機(jī)分成生理鹽水組和實(shí)驗(yàn)組，每組10只，生理鹽水組予以生理鹽水處理，實(shí)驗(yàn)組給予斑蝥合劑0.02g/ml，均灌胃0.2ml/只，連續(xù)給藥15天。
1.2.4標(biāo)本采集停藥次日，斷頸處死小鼠，剝離腫瘤組織并無菌取脾。
1.3檢測指標(biāo)1.3.1小鼠體重、瘤重及抑瘤率胃飼15天后，稱取兩組小鼠體重；處死小鼠后完整剝離腫瘤，用電子天平稱取瘤重，計(jì)算抑瘤率。
1.3.2T淋巴細(xì)胞增殖功能采用3H-TdR摻入法。在96孔平底培養(yǎng)板中，每孔加入小鼠脾細(xì)胞懸液100μl，濃度為5×106/ml，三復(fù)孔培養(yǎng)。同時(shí)，分別加入ConA 10μl。于37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)72h。終止培養(yǎng)前16h，每孔加入3H-TdR 1μCi。用細(xì)胞收集儀將細(xì)胞收集于玻璃纖維濾紙上，β-液閃儀測定cpm值，并計(jì)算刺激指數(shù)。
1.3.3NK殺傷功能用1640培養(yǎng)液分別調(diào)整小鼠脾細(xì)胞(效應(yīng)細(xì)胞)和體外培養(yǎng)的K562細(xì)胞(靶細(xì)胞)濃度為5×106/ml和1×105/ml。按效∶靶＝50∶1比例，各取100μl加入96孔平底培養(yǎng)板，37℃、5％CO2條件下共同培養(yǎng)4h。并設(shè)自然釋放和最大釋放組作為實(shí)驗(yàn)陰陽性對照。然后1000rpm，離心5min。吸取上清100μl，加入底物液100μl，靜置3min顯色。再加入1N HCL終止反應(yīng)，490nm波長讀取OD值。計(jì)算NK細(xì)胞的殺傷百分率。
1.3.4T淋巴細(xì)胞表型采用直接免疫熒光及流式細(xì)胞儀分析。取小鼠脾細(xì)胞1×106，加入適量PE-Cy5-CD3、FITC-CD4和PE-CD8混合單抗，室溫避光孵育20min。1000rpm，離心5min，洗滌2次后，加入300μl固定液，上機(jī)檢測。
1.3.5細(xì)胞因子采用ELISA法。收集小鼠脾細(xì)胞經(jīng)ConA刺激24h后的培養(yǎng)上清，按照細(xì)胞因子檢測試劑盒操作說明分別測定IFN-γ和IL-4的含量。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用Statpal團(tuán)體T檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析各組別數(shù)據(jù)的差異顯著性。
2結(jié)果1.斑蝥合劑對荷瘤小鼠腫瘤有顯著的抑制作用。
2.實(shí)驗(yàn)組小鼠T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化刺激指數(shù)和NK細(xì)胞殺傷百分?jǐn)?shù)均比生理鹽水組顯著增加。
3.與生理鹽水組相比，實(shí)驗(yàn)組更能改變T淋巴細(xì)胞亞群比例。
4.實(shí)驗(yàn)組小鼠T細(xì)胞分泌IFN-γ及IL-4能力均有顯著升高。
實(shí)施例3斑蝥在制備治療或預(yù)防系統(tǒng)性紅斑狼瘡的藥中的應(yīng)用1.動物和材料實(shí)驗(yàn)動物系統(tǒng)性紅斑狼瘡實(shí)驗(yàn)大鼠60只，體重200±10g，鼠齡160天，每4只一籠，室溫23±2℃，濕度30-50％，精制顆粒飼料，2.分組我們將上述60只系統(tǒng)性紅斑狼瘡實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為兩組皮質(zhì)類固醇激素治療組30例該組注射皮質(zhì)類固醇激素，每日注射量為0.01g，連續(xù)給藥15天。
斑蝥治療組30例該組給予斑蝥水煎液0.01g/ml，均灌胃0.2ml/只，連續(xù)給藥15天。
3.觀察斑蝥治療組主要臨床癥狀發(fā)熱、關(guān)節(jié)腫痛、皮膚蝶形紅斑、尿蛋白、血沉的改善所需要天數(shù)分別為4.0、19.2、27.9天和22.8天。
皮質(zhì)類固醇激素治療組主要臨床癥狀發(fā)熱、關(guān)節(jié)腫痛、皮膚蝶形紅斑、尿蛋白、血沉的改善所需要天數(shù)分別為9.0、23.8、47.9天和52天。
其中皮質(zhì)類固醇激素治療組中4例于1年內(nèi)死亡。
4.結(jié)果斑蝥治療組療效優(yōu)于皮質(zhì)類固醇激素治療組，斑蝥可以在制備治療或預(yù)防系統(tǒng)性紅斑狼瘡的藥中的應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.斑蝥在制備治療或預(yù)防免疫失調(diào)引起的疾病的藥中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述疾病為H22肝癌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述疾病為系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述疾病為白癜風(fēng)。
5.斑蝥合劑在制備治療或預(yù)防免疫失調(diào)引起的疾病的藥中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述斑蝥合劑選自斑蝥素、羥基斑蝥胺、斑蝥酸鈉、去甲斑蝥素一種或幾種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述疾病為H22肝癌。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述疾病為系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述疾病為白癜風(fēng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及斑蝥、斑蝥合劑的用途，尤其涉及它們在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。本發(fā)明所公開斑蝥在制藥中的應(yīng)用，其優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在(1)本發(fā)明對斑蝥、斑蝥合劑發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域。(2)本發(fā)明的斑蝥、斑蝥合劑安全低毒，藥理作用強(qiáng)，預(yù)示著很好的藥用前景。(3)斑蝥、斑蝥合劑具有抑制腫瘤生長和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的雙重效應(yīng)，為臨床治療腫瘤提供了依據(jù)。
文檔編號A61P37/00GK1879658SQ20061002627
公開日2006年12月20日 申請日期2006年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月29日
發(fā)明者周阿高, 張勇, 孔德云, 葛海良, 任秋華 申請人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院