從栓塞劑送遞藥物的制作方法

專利名稱：：從栓塞劑送遞藥物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明的范圍是用于腫瘤化療栓塞的栓塞形成用微球的制備和用途，其中所述微球包含水不溶性聚合物和治療量的喜樹堿，優(yōu)選鹽酸伊立替康。
背景技術：
：喜樹堿(camptothecin，CPT)及其類似物是過去幾年里已被鑒定的新一類抗癌劑。喜樹堿依賴于pH會以兩種形式存在pH低于5時的活性內(nèi)酯形式以及堿性pH或生理的中性pH時的無活性羧酸酯形式。喜樹堿的A環(huán)是下述結(jié)構的核心部分中的左邊的環(huán)。伊立替康(irinotecan)是喜樹堿的改良形式，已被開發(fā)用以提高藥物的溶解性和特異性。它被公開于US4,604,463中。喜樹堿與酶拓撲異構酶I特異性相互作用，所述拓撲異構酶I通過引起可逆轉(zhuǎn)的單鏈斷裂而消除DNA中的扭轉(zhuǎn)鏈。伊立替康及其活性代謝物SN-38結(jié)合至拓撲異構酶I-DNA復合物，并阻止這些單鏈斷裂的重新連接。目前的研究認為伊立替康的細胞毒性是由于在DNA合成期間所產(chǎn)生的雙鏈DNA損害，此時復制酶與由拓撲異構酶I、DNA和伊立替康或SN-38形成的三元復合物相互作用。哺乳動物細胞不能有效修復這些雙鏈斷裂。酸加成鹽形式的伊立替康如鹽酸伊立替康某種程度上可作為親脂代謝物SN-38的水溶性前體。SN-38是由伊立替康通過羧酸酯酶介導的喜樹堿部分和雙哌啶基側(cè)鏈之間氨基甲酸酯鍵的裂解而形成。作為從人和嚙齒類腫瘤細胞系純化得到的拓撲異構酶I的抑制劑，SN-38的效力約為伊立替康的1000倍。體外細胞毒性分析表明SN-38相對于伊立替康的效力在2倍至2000倍之間變化。但是，濃度對時間曲線(AUC)下SN-38的血漿面積值為伊立替康的2％至8％，而與約50％伊立替康與血漿蛋白結(jié)合相比，有95％的SN-38與血漿蛋白結(jié)合。伊立替康注射可誘導似乎由不同機制介導的早期形式和晚期形式的腹瀉。早期腹瀉(輸注伊立替康時出現(xiàn)或緊隨其后出現(xiàn))本質(zhì)上是膽堿能的。它通常是暫時的，偶爾比較嚴重。它可能伴隨如下癥狀鼻炎、唾液分泌增加、瞳孔縮小、流淚、發(fā)汗、潮紅和可引起腹部痛性痙攣的腸蠕動亢進。該藥物是用于治療結(jié)直腸癌和肝轉(zhuǎn)移(CRM)的選用藥物之一。該藥物通常與其它治療劑一起通過靜脈內(nèi)給藥。其它藥物將微粒用作靜脈內(nèi)送遞藥物的工具；在這些情況下，微粒需要足夠小以避免阻塞血管(Evaluationofcamptothecinmicrospheresincancertherapy.Tong，Wenkai.Avail.UMI，OrderNo.DA3061801.(2002)，214pp.FromDiss.Abstr.Int.，B2003，63(8)，3730；Injectablepharmaceuticalcompositioncomprisingmicroparticlesormicrodropletsofcamptothecin.Sands，Howard；Mishra，Awadhesh.(Supergen，Inc.，USA；RtpPharma，Inc.).PCTInt.Appl.(2002)，103pp.)。由于聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)降解所形成的酸性微環(huán)境，PLGA微球被認為是良好的CPT送遞載體(EvaluationofPLGAMicrospheresasDeliverySystemforAntitumorAgent-Camptothecin.Tong，Wenkai；Wang，Lejun；D′Souza，MartinJ.DrugDevelopmentandIndustrialPharmacy(2003)，29(7)，745-756)和Poly(D，L-lactic-co-glycolicacid)microspheresforsustaineddeliveryandstabilizationofcamptothecin，Ertl，B.，eta/.，J.Contr.ReI.1999，61，305-317。喜樹堿或其衍生物被包封于聚合物中，得到平均直徑為2-70μm的抗癌控釋微球。(Controlled-releasemicrospherescontainingantitumoragents.Machida，Masaaki；Onishi，Hiroshi；Morikawa，Akinobu；Machida，Ryoji；Kurita，Akinari.Jpn.KokaiTokkyoKoho(2002)，7pp.)。這個尺寸的顆粒通常用于靜脈內(nèi)送遞，但是也可例如在手術期間用作植入物或者直接注射至腫瘤位點。(CamptothecinDeliveryMethodsHatefi，A.etal.，Pharm.Res.2002，19(10)1389-1399)。其它研究人員研究了聚合物-藥物相互作用對聚合物微球的表面形態(tài)學和體外釋放特征的影響。包封鹽酸伊立替康(CPT)的聚丙交酯微球通過O/O乳化系統(tǒng)的溶劑蒸發(fā)法制備，以便控制活體內(nèi)藥物的濃度。聚丙交酯微球的平均直徑保持在約50μm，而CPT含量有所變化(Surfacemorphologychangeofpolylactidemicrospheresenclosinglrinotecanhydrochlorideanditseffectonreleaseproperties.Yoshizawa，Hidekazu；Nishino，Satoru；Natsugoe，Shoji；Aiko，Takashi；Kitamura，Yoshiro.JournalofChemicalEngineeringofJapan(2003)，36(10)，1206-1211)。由可降解聚(丙交酯-共-乙交酯)送遞喜樹堿衍生物(10-羥基喜樹堿)的另一個研究使用乳劑二氯甲烷-聚合物的水溶液。該藥物以溶于DMF中的溶液形式加入乳劑中。微球的平均顆粒大小介于27-82μm之間。目的在于微球在幾周的時間內(nèi)循環(huán)并釋放藥物。盡管建議膠囊化喜樹堿可用于使肝腫瘤形成栓塞，但是沒有指示表明這如何實現(xiàn)。(Stabilizationof10-hydroxycamptothecininPoly(lactide-co-glycolide)microspheredeliveryvehiclesShenderova，A.etal.，Pharm.Res.1997，14(10)1406-1414)?？缮锝到獾奈⑶蛞驯挥糜谕ㄟ^直接注射至腫瘤塊將藥物直接送遞至該腫瘤中(Useofbiodegradablemicrospheresforthedeliveryofananticanceragentinthetreatmentofglioblastoma.Faisant，Nathalie；Benoit，Jean-Pierre；Meinei，Philippe.WO-A-0069413。微球由聚乙交酯形成，平均直徑為48μm。已表明藥物摻入微球延長了循環(huán)中藥物的壽命(Pharmacokineticsofprolonged-releaseCPT-11-loadedmicrospheresinrats.Machida，Y.；Onishi，H.；Kurita，A.；Hata，H.；Morikawa，A.；Machida，Y.JournalofControlledRelease(2000)，66(2-3)，159-175)。由聚(DL-乳酸)或聚(DL-乳酸-共-羥乙酸)共聚物組成的、包含CPT-11的微球通過水包油蒸發(fā)法制備得到。測量微球的大小和形狀，并由體外釋放曲線分析藥物釋放速率。CPT-11水溶液以10mg/kgi.v.或i.p.注射入大鼠，微球以50mg當量CPT-11/kgi.p.給藥至大鼠。微球平均直徑約為10μm，且形狀為球形。其它研究試圖通過外加磁場的使用來靶向微球(Invivoevaluationofcamptothecinmicrospheresfortargeteddrugdelivery.Sonavaria，VandanaJ.；Jambhekar，Sunil；Maher，Timothy.ProceedingsoftheInternationalSymposiumonControlledReleaseofBioactiveMaterials(1994)，21ST194-5.)。含有喜樹堿的磁場響應清蛋白微球可以可靠地靶向大鼠模型中的所需位點。此外，除去磁場后靶向微球在該位置保留數(shù)小時，這表明微球被吞入細胞，并且藥物在該位點釋放。推測該微球非常小，可能約1μm。姑息治療結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的一種方法是化療栓塞。在一種操作中，通過導管將活性藥物直接導入為腫瘤提供營養(yǎng)的動脈中，然后導入栓塞劑以阻止或減緩血流進入患病區(qū)段，由此減少藥物沖出。沒有采用過金標法，并且所使用治療劑有所不同，包括但不限于5-FU、絲裂霉素C或順鉑、多柔比星和絲裂霉素的混合物(CAM)等。異乎尋常的是，雖然伊立替康是全身治療的一種選擇，但是還未被廣泛使用的化療栓塞所采用。僅有一個最近在大鼠中的研究特別通過一種方法將伊立替康和栓塞形成結(jié)合起來，所述方法中藥物溶液和栓塞淀粉微球懸液被導入肝動脈(Chemoembolizationofratlivermetastasiswithirinotecanandquantificationoftumourcellreduction.SaengerJan；LeibleMaike；SeeligMatthiasH；BergerMartinR.Journalofcancerresearchandclinicaloncology(Germany)Apr2004，130(4)p203-10)。所使用方法并未涉及到藥物和栓塞材料的聚合物之間的聯(lián)系，因此不能控制藥物釋放。淀粉微球僅僅減緩血流流過血管，并且在不到約1小時的時間內(nèi)降解。WU，S.J.，AnExperimentalstudyofthebasicpropertiesofdrugmicrosphereandtargettreatmentofratswithlivertumour，Zhonghua-WaikeZaZhiApr199028(4)241-243描述了用喜樹堿-清蛋白微球進行肝動脈栓塞。采用該微球使腫瘤壞死并且由腫瘤引起的組織損害得到逆轉(zhuǎn)。有一個關于在膀胱癌的髂內(nèi)動脈用超選擇喜樹堿微球栓塞形成的臨床研究(XuA；WangX；YuM.DepartmentofUrology，GeneralHospitalofPLA，Beijing100853，China.Zhonghuayixuezazhi(China)May2000，80(5)p358-9)。微球的性質(zhì)并未具體說明。大小為直徑約200μm。作者評估了膀胱癌髂內(nèi)動脈的喜樹堿微球栓塞形成的效力。對十八名不能手術的和晚期的膀胱癌患者用髂內(nèi)動脈的喜樹堿微球超選擇栓塞形成進行治療。腫瘤大小顯著縮小，并且17名患者中腫瘤細胞受到不同程度損害。未發(fā)現(xiàn)不良反應。他們得出的結(jié)論認為髂內(nèi)動脈的喜樹堿微球栓塞形成是對不能手術的和晚期的膀胱癌的安全有效的療法。
發(fā)明內(nèi)容根據(jù)本發(fā)明，提供了一種微球在制備用于治療方法中的組合物的新用途，所述微球含有在pH7時帶負電的、水不溶性、水溶漲性聚合物，以及與該聚合物以可釋放形式通過靜電結(jié)合的、帶正電的喜樹堿化合物，在所述治療方法中，所述組合物被引入血管中，所述微球在血管中形成栓塞，栓塞中的顆粒在37℃于水中平衡時具有介于范圍為100至1500μm之間的尺寸，并且所述方法中，所述喜樹堿化合物從栓塞中釋放。所述治療方法通常用于治療實體瘤。在本發(fā)明中，微球于室溫下與水平衡時直徑超過100μm。因此，優(yōu)選基本所有微球的尺寸不小于100μm。該大小可最高達200μm，優(yōu)選最高達1500μm。優(yōu)選地，在負載喜樹堿化合物之前，測量微球大小而確定微球的直徑。盡管微球優(yōu)選基本為球形，但是它們也可為類似球形或者甚至為不太規(guī)則的形狀。在下面的說明書中，我們所指代的微球和顆粒可互換。非球形顆粒的直徑為其最大直徑。喜樹堿化合物優(yōu)選至少略微溶于水，例如在室溫下以至少0.001g/l、優(yōu)選大于0.002g/l、更優(yōu)選大于0.01g/l的濃度溶于水中。優(yōu)選喜樹堿化合物在pH7時帶正電。陽離子基團可為伯胺基團，但是優(yōu)選為仲胺、叔胺或季胺基團。合適的化合物的一個家族具有通式I其中，R1為H、任選由羥基、胺、烷氧基、鹵素、?；蝓Ｑ趸鶊F取代的低級(C1-6)烷基或鹵素；并且R為氯或NR2R3，其中R2和R3相同或相異，并且每個代表氫原子、取代或未取代的C1-4烷基基團或者取代或未取代的碳環(huán)或雜環(huán)基團，或者R2和R3以及與它們相連接的氮原子一起形成環(huán)上可帶有-O-、-S-或＞NR4的任選取代的雜環(huán)，其中R4為氫原子、取代或未取代的C1-4烷基基團或者取代或未取代的苯基基團；并且其中-O-CO-R基團鍵合至位于包括喜樹堿化合物的鹽在內(nèi)的喜樹堿化合物A環(huán)中的9、10或11位任意一個的碳原子。優(yōu)選-O-CO-R基團連接于10位。R1優(yōu)選為C1-4烷基，最優(yōu)選為乙基，并且m優(yōu)選為1。鹵素原子R為例如F、Cl、Br或I，優(yōu)選為F或Cl。R1至R4可為甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基和叔丁基，優(yōu)選為甲基。R和R1中的取代基優(yōu)選地選自鹵素原子、羥基、C1-4烷氧基、苯氧基、COOR6、SO3R6和PO3(R6)2、芳基、NR8R9和CONR8R9、QAOR5、QANR8R9和QAQR5，其中R5為C1-4烷基或芳基；R6為氫、鹵素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；R7為氫、鹵素或C1-4烷基；R8和R9相同或相異，并且每個為H或C1-4烷基或者R8和R9一起代表C3-6鏈烷二基(alkanediyl)；Q為OCO或-COO-，A為C2-4鏈烷二基。優(yōu)選地，R為NR3R3，其中R2和R3以及所述氮原子一起形成具有任選取代基的5元環(huán)或6元環(huán)，優(yōu)選為飽和環(huán)。取代基優(yōu)選為-NR8R9。在這樣一個取代基中，R8和R9優(yōu)選一起為C4-5鏈烷二基。該基團為堿性的，并且在pH7時傾向于帶正電。最優(yōu)選的R為合適化合物的另一個家族具有通式II包括其鹽以及四級衍生物；其中R20和R23每個為羥基或氫或者一起為CH2OCH2；R21和R22中有一個為H，另一個為CH2NR24R25，其中R23和R24相同或相異，并且每個代表氫原子、取代或未取代的C1-4烷基基團或者取代或未取代的碳環(huán)基團或雜環(huán)基團，或者R23和R24和與它們相連接的氮原子一起形成環(huán)上可帶有-O-、-S-或＞NR4的任選取代雜環(huán)，其中R4為氫原子、取代或未取代的C1-4烷基基團或取代或未取代的苯基基團。要求保護的合適化合物的一個實例是拓泊替康(topotecan)，其中R20為羥基，R22和R23為氫，R21為CH2NR24R25，R24和R25均為甲基。聚合物為水不溶性材料。盡管它可被生物降解，以使所述藥物基本可通過聚合物基質(zhì)的蝕解從表面釋放藥物得以釋放，但是優(yōu)選地，所述聚合物基本是生物穩(wěn)定的(即非可生物降解的)。聚合物是水溶漲性的?？捎糜诒景l(fā)明的水溶漲性聚合物優(yōu)選地在37℃溶漲于水中時具有平衡水含量，所述平衡水含量由重量分析測量，范圍在40至99wt％、優(yōu)選地在75至95％之間。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，給予需要栓塞治療的患者的組合物為液體載體中水溶漲性水不溶性聚合物的顆粒懸浮液形式。優(yōu)選地，所述顆粒被分級為經(jīng)校準的大小范圍，以便正確地在血管中形成栓塞。優(yōu)選地，所述顆粒于37℃在水中平衡時具有的大小范圍在100至1500μm之間，更優(yōu)選介于100至1200μm之間。經(jīng)校準的范圍可包括具有帶寬約100至300μm的直徑的顆粒。該大小范圍可為例如100至300μm、300至500μm、500至700μm、700至900μm以及900至1200μm。優(yōu)選地所述顆粒形狀基本為球形。這類顆粒在本文中被稱為微球。一般而言，盡管對所述聚合物而言離子交聯(lián)可以適用，但是所述聚合物至少部分地共價交聯(lián)。盡管使用來源于天然來源的聚合物如清蛋白、藻酸鹽、明膠、淀粉、殼多糖或膠原(每一種均已被用作栓塞劑)可以適用，但是所述聚合物優(yōu)選基本不含天然存在的聚合物或衍生物。它優(yōu)選地在雙官能或多官能交聯(lián)單體存在下通過烯式不飽和單體的聚合而形成。所述烯式不飽和單體包括離子(包括兩性離子)單體?？墒褂眉谆┧崃u乙酯、丙烯酸和交聯(lián)單體如二甲基丙烯酸乙二酯或亞甲基雙丙烯酰胺的共聚物，如用于以etafilconA為基礎的接觸鏡片。還可使用N-丙烯酰-2-氨基-2-羥甲基-丙-1，3-二醇和N，N-二丙烯酰胺的共聚物。其他聚合物為用作分離介質(zhì)或離子交換介質(zhì)類的、例如具有離子取代基的交聯(lián)苯乙烯聚合物。另一類可用于形成水溶漲性、水不溶性基質(zhì)的聚合物為使用醛類交聯(lián)劑如戊二醛交聯(lián)的聚乙烯醇。對這類產(chǎn)物而言，通過含有功能性離子基團的化合物與羥基基團進行反應來提供離子側(cè)基，可使聚乙烯醇(PVA)離子化。與羥基基團反應的合適功能基團的實例是酰化劑如羧酸或其衍生物，或其它可形成酯的酸性基團。本發(fā)明特別的價值在于所述聚合物基質(zhì)是由每個分子具有多于一個烯式不飽和側(cè)基的聚乙烯醇大分子單體通過烯式基團的自由基聚合形成。優(yōu)選地，PVA大分子單體與烯式不飽和單體共聚化，所述烯式不飽和單體例如包括非離子和/或離子單體，包括陰離子單體。例如通過提供PVA聚合物，可形成PVA大分子單體，所述PVA大分子單體具有合適分子量如范圍在1000至500,000D、優(yōu)選10,000至100,000D之間，并具有乙烯側(cè)基或丙烯側(cè)基。丙烯側(cè)基可例如通過丙烯酸或甲基丙烯酸與PVA反應，通過一些羥基基團形成酯鍵提供。其他將可聚合的乙烯基團連接至聚乙烯醇上的方法描述于例如US4,978,713和優(yōu)選US5,508,317和5,583,163。因此，優(yōu)選的大分子單體包括聚乙烯醇主鏈，(烷基)丙烯酰胺烷基((alk)acrylaminoalkyl)部分通過環(huán)狀縮醛鍵連接到主鏈上。實施例1描述了這么一種大分子單體的實例(被批準稱為nelfilconB)的合成。優(yōu)選地，所述PVA大分子單體每分子具有約2至20個烯式側(cè)基，例如5至10個。PVA大分子單體與包括離子單體在內(nèi)的烯式不飽和單體共聚時，所述離子單體優(yōu)選具有通式IIY1BQ1II其中Y1選自CH2＝C(R10)-CH2-O-，CH2＝C(R10)-CH2OC(O)-，CH2＝C(R10)OC(O)-，CH2＝C(R10)-O-，CH2＝C(R10)CH2OC(O)N(R11)-，R12OOCCR10＝CR10C(O)-O-，R10CH＝CHC(O)O-，R10CH＝C(COOR12)CH2-C(O)-O-，其中R10為氫或C1-C4烷基基團；R11為氫或C1-C4烷基基團；R12為氫或C1-4烷基基團或BQ1，其中B和Q1定義如下；A1為-O-或-NR11-；K1為基團-(CH2)rOC(O)-、-(CH2)rC(O)O-、-(CH2)rOC(O)O-，-(CH2)rNR13-、-(CH2)rNR13C(O)-、-(CH2)rC(O)NR13-、-(CH2)rNR13C(O)O-、-(CH2)rOC(O)NR13-、-(CH2)rNR13C(O)NR13-(其中基團R13相同或相異)、-(CH2)rO-、-(CH2)rSO3-，或者一個價鍵，該價鍵任選地與B結(jié)合，并且r為1至12，R13為氫或C1-C4烷基基團；B為直鏈或支鏈鏈烷二基、氧雜亞烷基(oxaalkylene)、鏈烷二基氧雜鏈烷二基(alkanediyloxaalkanediyl)或鏈烷二基低聚(氧雜鏈烷二基)鏈(alkanediyloligo(oxaalkanediyl)chain)，所述鏈任選地包含一個或多個氟原子，最高并包括全氟鏈，或者，若Q1或Y1含有與B鍵接的末端碳原子，則B為一個價鍵；并且Q1為離子基團。優(yōu)選包括包含陰離子基團Q1的這樣一種化合物。陰離子基團Q1可為例如羧酸酯、碳酸酯、磺酸酯、硫酸酯、硝酸酯、膦酸酯或磷酸酯基團。單體可以游離酸或鹽的形式聚合。優(yōu)選共軛酸的pKa小于5。合適的陽離子基團Q1優(yōu)選為基團N+R143、P+R153或S+R152，其中基團R14相同或相異，并且每個為氫、C1-4烷基或芳基(優(yōu)選苯基)或其中的兩個R14以及與它們相連接的雜原子一起形成一個含有5至7個原子的飽和或不飽和的雜環(huán)，基團R15每個為OR14或R14。優(yōu)選地，陽離子基團一直都是陽離子性的，也即每個R14均不為氫。優(yōu)選地陽離子基團Q為N+R143，其中每個R14均為C1-4烷基，優(yōu)選為甲基。兩性離子基團Q1例如可通過具有一個二價陰離子電荷中心和一個一價陽離子電荷中心總體上具有電荷，反之亦然；或者通過具有兩個陽離子電荷中心和一個陰離子電荷中心總體上具有電荷，反之亦然。但是，優(yōu)選兩性離子基團總體上不帶電，最優(yōu)選地具有一個單價陽離子電荷中心和一個單價陰離子電荷中心。本發(fā)明中可用作Q的兩性離子基團的實例公開于WO-A-0029481。例如，若烯式不飽和單體包括兩性離子單體，則這會提高所述顆粒的親水性、潤滑性、生物相容性和/或血相容性。合適的兩性離子單體描述于我們早期的公布文本W(wǎng)O-A-9207885、WO-A-9416748、WO-A-9416749和WO-A-9520407。優(yōu)選地，兩性離子單體為2-甲基丙烯酰氧基-2’-磷酸三甲銨乙酯內(nèi)鹽(2-methacryloyloxy-2’-trimethylammoniumethylphosphateinnersalt，MPC)。通式I的單體中，優(yōu)選Y1為基團CH2＝CR10COA-，其中R10為H或甲基、優(yōu)選甲基，并且其中A1優(yōu)選為NH。B優(yōu)選為1至12、優(yōu)選2至6個碳原子的鏈烷二基基團。該單體為丙烯酸單體。烯式不飽和單體中可包括稀釋單體例如非離子單體。這樣一種單體可用于控制酸基團的pKa、控制產(chǎn)物的親水性或疏水性、在聚合物中提供疏水區(qū)域或僅僅用作惰性稀釋劑。非離子稀釋單體的實例為例如(烷)丙烯酸烷酯和(烷)丙烯酰胺，特別是具有1至12個碳原子的烷基基團、羥基的這類化合物；以及二羥基取代的(烷)丙烯酸烷酯和(烷)丙烯酰胺；乙烯基內(nèi)酰胺；苯乙烯和其它芳香族單體。在聚合物基質(zhì)中，優(yōu)選地，陰離子的水平范圍在0.1至10meqg-1，優(yōu)選地至少1.0meqg-1。優(yōu)選的陰離子來源于強酸，例如硫酸、磺酸、磷酸和膦酸。當PVA大分子單體與其它烯式不飽和單體共聚時，則PVA大分子單體與其它單體的重量比優(yōu)選地介于50∶1至1∶5，更優(yōu)選地介于20∶1至1∶2。烯式不飽和單體中，陰離子單體優(yōu)選以范圍在10至100mole％、優(yōu)選至少25mole％的量存在。交聯(lián)聚合物例如可以顆粒形式形成，例如通過在連續(xù)不互溶載體中的分散相中聚合小滴形式的單體而形成。溶漲時，生產(chǎn)具有所需大小的顆粒的合適的油包水聚合的實例是已知的。例如，US4,224,427描述了形成直徑最高達5mm的均一球形小球(微球)的方法，所述方法通過在助懸劑存在下將水溶性單體分散至連續(xù)溶劑相中進行?？纱嬖诜€(wěn)定劑和表面活性劑以對分散相顆粒的大小進行控制。聚合后，交聯(lián)的微球通過已知手段回收、并洗滌和任選地滅菌。優(yōu)選地，顆粒如微球在水性液體中是溶漲的，并根據(jù)其大小被分類。優(yōu)選的，喜樹堿化合物與聚合物聯(lián)合，以便在一段時間內(nèi)控釋藥劑。這段時間可為幾分鐘至幾周，優(yōu)選地至少最高達幾天，優(yōu)選地最高達72小時。所述藥劑與聚合物靜電鍵合。聚合物中陰離子基團的存在使得可以控制帶正電的喜樹堿活性成分的釋放。通過多種技術可將藥物活性成分摻入聚合物基質(zhì)中。在一種方法中，聚合或交聯(lián)之前，活性成分可與聚合物的前體例如單體或大分子單體混合物或可交聯(lián)聚合物和交聯(lián)物混合物相混合。或者，活性成分可在聚合物交聯(lián)之后負載入聚合物中。例如，干燥的顆粒聚合物可溶漲于優(yōu)選溶于水或醇如乙醇的活性成分溶液中，任選地隨后除去非吸收藥劑和/或?qū)⑷軇┱舭l(fā)。溶于有機溶劑如醇或更為優(yōu)選地溶于水的活性成分溶液可被噴霧于顆粒移動床上，藉此藥物被吸收入顆粒內(nèi)部，同時除去溶劑。更方便地，我們發(fā)現(xiàn)僅僅將懸浮于連續(xù)液體載體如水中的溶漲顆粒與藥物的水性醇溶液接觸一段時間，就可以使得藥物被吸收至顆粒內(nèi)部。將藥物固定在顆粒內(nèi)的技術可提高負載水平，例如通過將負載懸液的pH改變?yōu)榛钚猿煞譃橄鄬Σ蝗苄问綍r的值的沉淀法就可提高負載水平。溶漲載體隨后可被除去，或者方便地，可保留在顆粒中作為產(chǎn)品的一部分，隨后用作栓塞劑，或者，溶漲顆?？梢匀軡q形式或以漿液形式使用，即在溶漲顆粒外沒有液體或液體量很少。或者，顆粒懸液可從任何殘留的藥物負載溶液中除去，并且將通過任何一種常規(guī)技術干燥得到的顆粒用于基于藥物的干燥產(chǎn)品。這可包括但不限于在室溫或較高溫度下或者在減壓或真空條件下風干；常規(guī)的冷凍干燥；大氣壓冷凍干燥、超臨界流體增強溶液分散(SEDS)?；蛘撸幬镓撦d微球可通過如下步驟進行脫水在一系列步驟中用有機溶劑代替水，然后將更易揮發(fā)的有機溶劑蒸發(fā)。溶劑應選為并非藥物的溶劑。簡而言之，通常常規(guī)的冷凍干燥方法可按照如下方法進行樣本被等分裝入部分塞住的玻璃小瓶中，所述玻璃小瓶被置于冷凍干燥器中被冷卻的溫控架上。降低架溫度，使樣本被冷凍至均一的規(guī)定溫度。完全冷凍后，干燥器中的壓力被降低至規(guī)定壓力，由此開始第一次干燥。第一次干燥期間，通過升華將水蒸氣從冷凍物質(zhì)中逐漸除去，同時將架溫度控制為恒定低溫。升高架溫度并進一步減少容器壓力以開始第二次干燥，這樣被吸收至半干物質(zhì)中的水可被除去，直至殘留水含量降低至所需水平。如若需要，可在保護性氛圍下在原處封閉小瓶。大氣壓冷凍干燥可通過在冷凍產(chǎn)物上快速循環(huán)非常干燥的空氣完成。與常規(guī)冷凍干燥方法相比較，非真空的冷凍干燥有很多優(yōu)點。循環(huán)干燥氣體使熱量和質(zhì)量從冷凍樣本的轉(zhuǎn)移過程加快，這與在有風天氣里衣物干得更快相同。這一領域的大部分工作與食品的生產(chǎn)有關，并且已觀察到揮發(fā)性芳香族化合物的滯留有所增加，這種方法對生物制品的干燥可能的益處有待確定。特別值得關注的是，通過使用大氣噴霧干燥方法，可獲得微小的、自由流動的粉末而非團塊?？色@得亞微米直徑的顆粒，這比通常通過碾磨獲得的微粒要小十倍。較高表面積的顆粒性質(zhì)可獲得可易于再水合的產(chǎn)物，目前還不能對吸入應用和經(jīng)皮應用所需顆粒大小的進行精細控制，但是在該領域還是有應用潛力的。盡管所述組合物可在即用前用聚合物和喜樹堿化合物制備，但還是優(yōu)選預先將所述組合物制備好。干的聚合物-喜樹堿顆粒可在即用前進行水合?；蛘呖商峁┏浞只系慕M合物，所述組合物優(yōu)選地包含具有吸收有喜樹堿化合物的聚合物顆粒和已吸收的水(如生理鹽水)和顆粒外的液體(例如鹽水)。優(yōu)選地，給藥組合物中喜樹堿化合物的水平范圍在0.1至500mg/ml組合物，優(yōu)選10至100mg/ml。優(yōu)選地，化療栓塞法重復一至五次，對每一劑量而言，喜樹堿化合物的給藥量范圍在0.1至100mg/ml，優(yōu)選10至100mg/ml。正常栓塞形成中組合物的給藥量范圍為1至6ml。每一劑量的喜樹堿化合物的給藥總量優(yōu)選范圍在10至1000mg，更優(yōu)選50至250mg?；谙挛膶嵤├惺境龅尼尫艛?shù)據(jù)，發(fā)明人相信這將會在腫瘤處的血管中獲得治療有效濃度，并且能產(chǎn)生顯著的胞內(nèi)送遞水平，藉此可獲得治療效果。還能夠避免全身性喜樹堿給藥的不良副作用。用于使腫瘤形成栓塞的栓塞組合物可以常規(guī)方式混合。因此，所述組合物可由介入放射學醫(yī)師在立即給藥前給予，同時給予顯像劑例如不透射線劑?；蛘?，除了喜樹堿化合物以外，所述顆粒還可預先負載不透射線的物質(zhì)。因此，預先形成混合物形式的聚合物和藥物活性成分可與不透射線的顯像劑在用作送遞裝置的儲存器的注射器中預先混合。組合物可例如由微導管裝置給藥至合適的動脈中。根據(jù)栓塞形成的最終位點，合適的顆粒大小范圍的選擇可由介入放射學醫(yī)師以常規(guī)方式進行。本發(fā)明有望幫助治療血管過多而可進行栓塞的原發(fā)性腫瘤和繼發(fā)性腫瘤，例如原發(fā)性肝癌(肝細胞癌，HCC)、(結(jié)直腸腫瘤、乳腺腫瘤、內(nèi)分泌腺腫瘤的)肝轉(zhuǎn)移和腎臟腫瘤、骨瘤、乳腺腫瘤、膀胱腫瘤、前列腺腫瘤、結(jié)腸腫瘤和肺腫瘤。本發(fā)明在如下實施例中進一步闡明。其中的一些結(jié)果在附圖中示出，在實施例中更為詳細地描述，但是簡述如下圖1示出如實施例1所述由幾種不同的小球負載伊立替康；圖2示出實施例1中由所負載的小球洗脫至磷酸鹽緩沖鹽溶液中；圖3示出來自實施例1中所負載的小球的伊立替康洗脫至水中的洗脫曲線圖；圖4示出實施例2中示例的負載容量；圖5示出如實施例3中所測定的小球大小的變化；圖6示出如實施例4所示小球大小和離子基團含量對藥物負載的影響；圖7示出如實施例6所述從凝膠球(gelsphere)洗脫伊立替康；圖8示出實施例7的結(jié)果；圖9示出實施例9的化學發(fā)光結(jié)果；圖10示出實施例9的試驗后肝臟中腫瘤細胞的數(shù)目；圖11示出實施例9的試驗后對照大鼠和測試大鼠的肝臟的照片。具體實施例方式參照實施例制備微球的方法概述NelfilconB大分子單體合成微球合成的第一步包括由廣泛使用的水溶性聚合物PVA制備nelficonB-可聚合的大分子單體。將Mowiol8-88聚乙烯醇(PVA)粉末(88％水解，乙酸鹽含量12％，平均分子量約67,000D)(150g)(Clariant，Charlotte，NCUSA)加入2升玻璃反應器中。溫和攪拌的同時加入1000ml水，并且攪拌加速至400rpm。為確保PVA完全溶出，溫度升高至99±9℃，并維持2-3小時。冷卻至室溫時，將N-丙烯酰胺乙醛(N-acryloylaminoacetaldehyde，NAAADA)(CibaVision，Germany)(2.49g或0.104mmol/gPVA)混至PVA溶液中，然后加入濃鹽酸(100ml)，所述濃鹽酸可通過酯交換催化將NAAADA加成至PVA。反應在室溫下進行6-7小時，然后使用2.5M氫氧化鈉溶液中和至pH7.4終止反應。所產(chǎn)生的氯化鈉以及任何未反應的NAAADA通過滲濾除去(步驟2)。大分子單體的滲濾通過沿膜表面連續(xù)循環(huán)待純化的供給溶液(在此情況下為nelfilconB溶液)進行滲濾(正切流動過濾)，所述膜可透過將成為廢物的不需要的物質(zhì)(NaCl，NAAADA)，同時具有足夠小的孔徑以阻止循環(huán)中保留的滲余物通過。NelfilconB滲濾可使用裝有0.1m2纖維素膜(Millipore公司，Bedford，MAUSA)的不銹鋼Pellicon2Mini固定器進行，所述纖維素膜具有截留分子量為3000的孔徑。Mowiol8-88重均分子量為67000，因此從膜透過的能力受到限制。裝有大分子單體的燒瓶配有磁力攪拌棒，并被置于攪拌盤上。通過配有EasyLoadII泵壓頭的MasterflexLS蠕動泵并使用LS24VI類配管將溶液裝入滲濾組件。Nelfilcon在約50psi下在膜上循環(huán)以加速透過。當溶液被濃縮至約1000ml時，通過以與濾液被收集為廢物的速率相同的速率加入水使得體積保持不變，直到加入另外6000ml。滲濾完成時，在25℃下以粘度1700-3400cP將溶液濃縮至含20-23％固體的溶液。通過GFC、NMR和粘度表征Nelfilcon。微球合成球體通過懸浮聚合法合成，其中，若各相之間不能相互混合，那么將水相(NelfilconB)加入有機相(乙酸丁酯)。通過采用快速混合，水相可被分散形成小滴，其大小和穩(wěn)定性可通過如下因素控制，例如攪拌速率、粘度、水相/有機相的比率和影響各相之間界面能的穩(wěn)定劑和表面活性劑的使用。制備了兩個系列的微球低AMPS系列和高AMPS系列，其配方如下所示。A高AMPS水相約21％w/wNelfilconB溶液(約400±50g)約50％w/w2-丙烯酰胺-2-甲丙磺酸鈉鹽(140±10g)純水(137±30g)過硫酸鉀(5.22±0.1g)四甲基乙二胺TMEDA(6.4±0.1ml)有機相乙酸正丁酯(2.7±0.3L)10％w/w溶于乙酸乙酯中的醋酸丁酸纖維素(46±0.5g)純水(19.0±0.5ml)B低AMPS水相約21％w/wNelfilconB溶液(約900±100g)約50％w/w2-丙烯酰胺-2-甲丙磺酸鈉鹽(30.6±6g)純水(426±80g)過硫酸鉀(20.88±0.2g)TMEDA(25.6±0.5ml)有機相乙酸正丁酯(2.2±0.3L)10％w/w溶于乙酸乙酯中的醋酸丁酸纖維素(CAB)(92±1.0g)純水(16.7±0.5ml)使用計算機控制水浴(JulaboPN9-300-650)加熱4000ml套層反應容器，所述水浴具有連續(xù)監(jiān)控反應溫度的反饋感受器。25℃下將醋酸丁酯加入反應器中，然后加入CAB溶液和水。加入PVA大分子單體前將系統(tǒng)用氮氣清洗15分鐘。通過在氮氣下加入TMEDA并將溫度升至55℃并維持3小時引發(fā)分散PVA溶液的交聯(lián)。通過氧化還原引發(fā)的聚合而出現(xiàn)交聯(lián)，此時TMEDA的氨基基團與過硫酸鉀的過氧基團反應產(chǎn)生自由基類物質(zhì)。然后這些自由基引發(fā)AMPS和PVA上的雙鍵的聚合和交聯(lián)，這使得分散的PVA-AMPS小滴轉(zhuǎn)變成不溶聚合物微球。冷卻至25℃后，將所述產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至純化用過濾反應器，在此乙酸丁酯通過過濾除去，然后●用2×300ml乙酸乙酯洗滌，除去醋酸丁酯和CAB●乙酸乙酯中平衡30min，然后過濾●真空過濾條件下用2×300ml乙酸乙酯洗滌●丙酮中平衡30min，并過濾除去乙酸乙酯、CAB和水●真空過濾條件下用2×300ml丙酮洗滌●丙酮中平衡過夜●真空下用2×300ml丙酮洗滌●55℃下真空干燥兩小時，除去殘留溶劑。染色該步驟是任選的。藥物與有色活性物質(zhì)一起負載時，通常不需要染色(因為有色活性物質(zhì)提供了顏色)，但是在本文中所述的染色具有從下面的實施例8中顯而易見的優(yōu)點。水合時，微球含有約90％(w/w)水，難于顯色。為有助于在臨床裝置中顯色，使用活性藍#4染料(RB4)將球體染成藍色。RB4是水溶性氯三嗪(chlorotriazine)染料，堿性條件下它將與PVA主鏈上的羥基側(cè)基反應，形成共價醚鍵。反應在pH12(NaOH)下進行，由此所形成的HCl被中和，生成NaCl。染色前，球體被完全再水合，并被分為35g等份(分別處理)。染料溶液制備如下將0.8gRB4溶于2.5MNaOH溶液(25ml)和水(15ml)中，然后將其加入已加入上述球體的2升80g/L-1鹽水中?；旌?0分鐘后，將所述產(chǎn)物收集于32μm濾網(wǎng)上，并沖洗以除去沒有反應的染料。提取粗提法用于除去任何未結(jié)合或非特異性吸附的RB4。方案如下所示●2升水中平衡5min。收集于濾網(wǎng)上并沖洗。重復5次●在2升溶于0.29％(w/w)鹽水中的80mM磷酸氫二鈉溶液中平衡。加熱至沸騰，維持30min。冷卻，濾網(wǎng)上收集并用1升鹽水洗滌。再重復兩次?！駷V網(wǎng)上收集、洗滌，并在2升水中平衡10min?！袷占⒃?升丙酮中脫水30min。●合并所有等份，并在2升丙酮中平衡過夜。篩析制備得到的微球產(chǎn)物尺寸為100至1200微米，必須通過使用某個范圍內(nèi)的篩目尺寸的篩析法進行分級分離，獲得下列標稱分布。1.100-300μm2.300-500μm3.500-700μm4.700-900μm5.900-1200μm篩析前，真空干燥球體以除去任何溶劑，然后于60℃在水中平衡直至完全再水合。使用316L不銹鋼渦旋濾網(wǎng)裝置(MMIndustries，SalemOhio)篩析球體，所述不銹鋼渦旋濾網(wǎng)裝置具有38cm(15in)不銹鋼濾網(wǎng)支架，篩目尺寸介于32至1000μm之間。過濾得到的鹽水通過所述裝置再循環(huán)，幫助分級分離。棄去32微米濾網(wǎng)上收集得到的球體。實施例實施例1負載伊立替康以及從栓塞形成小球上洗脫伊立替康測試了下列微球(“小球”)產(chǎn)物1.高AMPS微球(“GelsphereGS”)(以與實施例1中相同的方法制備)，顆粒大小級分為100至300μm、500-700μm和900-1200μm，平衡水含量94％。(本發(fā)明)2.商購栓塞產(chǎn)品ContourSE，含有顆粒大小級分為500-700μm的非離子性聚乙烯醇微球，平衡水含量40％。(參照)3.上述低AMPS微球(“BeadBlock-BB”)(以與實施例1中相同的方法制備)，顆粒大小介于100至300μm之間，平衡水含量90％。(本發(fā)明)4.商購栓塞劑Embosphere，所述栓塞劑含有與明膠和戊二醛交聯(lián)的N-丙烯酰-2-氨基-2-羥甲基-丙-1，3-二醇-共-N，N-雙丙烯酰胺共聚物顆粒，顆粒大小介于100-300μm和500至700μm之間。該聚合物在中性pH時具有來自于明膠成分的凈正電荷。(FR-A-7723223)。平衡水含量為91％。(參照)5.Amberliteira400(強堿性凝膠型樹脂，季胺鹽功能性，平均大?。?10μm，WC＝52.44％)。(參照)6.Amberlyst(濕性)，極強酸性，磺酸功能性，氫形式，平均大?。?67μm，WC＝57.25)。(本發(fā)明)7.Ultra-drivalon250-4000μm(PVA顆粒)。(參照)使用濃度為20mg/ml的鹽酸伊立替康三水合物(Campto，fromAventis)。該制劑內(nèi)其它成分包括山梨醇和乳酸。使用UV分光光度計在369nm測定喜樹堿化合物的濃度。1ml的每一種小球漿液與1ml計算量的伊立替康溶液(20mg/ml)混合，室溫下旋轉(zhuǎn)混合2小時。殘留溶液濃度用UV分光光度計于369nm測量，以確定伊立替康的濃度。負載至小球中的藥物量通過耗竭法計算。圖1示出所研究微球的負載特征。很清楚的是，具有離子組分的所述小球能負載可觀的藥物量(特別是GelSphere和Amberlyst)。GelSphere的負載特別迅速(5-10min)，而Amberlyst的負載需要～60min。上述小球主動地從溶液中負載全部20mg濃度的藥物。其它栓塞劑僅能從溶液中負載5-7mg藥物，這本質(zhì)上是平衡分配效應，表明小球和藥物之間沒有特異性相互作用。室溫下用2小時將伊立替康從上述1ml負載小球洗脫至200mlPBS緩沖液。結(jié)果(圖2)表明所有小球洗脫速率幾乎相同，并且在前10分鐘里洗脫了全部被洗脫藥物的90％。2小時內(nèi)完成，但Amberlyst36濕性小球除外，該Amberlyst表現(xiàn)出較慢的洗脫曲線，在前2小時洗脫40％。這歸因于較高水平的強酸性磺酸組分。但是，圖3示出對不同的負載伊立替康的小球洗脫至水中的洗脫曲線的比較。在30分鐘里將1ml負載小球洗脫至100ml水(HPLC級)中。ContourSE和Embosphere小球在前10分鐘內(nèi)表現(xiàn)出100％洗脫，而GelSphere小球僅洗脫不到全部負載的1％。這表明洗脫由離子交換機制所驅(qū)動，并表明在純水中制備水合形式的本發(fā)明球體是可能的，無需擔心在儲存過程中藥物隨著時間被洗脫至介質(zhì)中而損失。目前市售微球型栓塞劑不可能具有該特征。實施例2GelSphere負載能力的研究使用GelSphere，500-700μm測定伊立替康負載含量和負載效力。小球漿液與計算量伊立替康溶液(20mg/ml)混合，旋轉(zhuǎn)混合至少4小時。用UV分光光度計在369nm測量溶液，以測定伊立替康濃度和小球中的藥物負載(通過耗竭法)。圖4中的直線表明，較低濃度(低于50mg/ml)下小球中的伊立替康含量隨設定負載量線性增加。超過該濃度，負載效力顯著下降，指示小球的飽和。實施例3隨伊立替康負載的大小變化隨伊立替康負載的GelSphere大小變化通過使用具有光學圖像顯微鏡的Image-ProPlus4.5測量。負載條件是GelSphere大小500-700μm；伊立替康負載溶液濃度為20mg/ml(Campto)，在滾筒混合器上常溫過夜。圖5示出隨著小球內(nèi)相關藥物濃度的增加小球大小減少。這與水凝膠結(jié)構的水替換為與離子基團相互作用的藥物相關。實施例4小球大小和離子基團含量對藥物負載的影響對負載至不同大小的高AMPSGelSphere和低AMPSBeadBlock的伊立替康負載速率進行比較。負載條件為1ml每一種小球漿液(100-300μmGelSphere和BeadBlock)與2.5ml伊立替康溶液(20mg/ml)混合；1ml小球漿液(300-500μmGelSphere)與1ml伊立替康溶液(20mg/ml)混合。將混合物旋轉(zhuǎn)混合，用UV分光光度計在369nm測量溶液濃度。圖6示出不同大小的GelSphere以相似且非常快速的速率負載；低AMPS球體負載較少藥物，這是由于微球中離子組分濃度較低。實施例5伊立替康負載GelSphere的冷凍干燥1mlGelSphere小球與Campto(20mg/ml)溶液混合并滾筒混合3小時。使用吸管將殘留溶液除去獲得小球漿液，該小球漿液被冷凍干燥成干燥產(chǎn)物?？赏ㄟ^改變藥物溶液的量獲得不同負載水平。實施例6從冷凍干燥GelSphere中洗脫伊立替康將伊立替康從按照實施例5所制備的、具有不同喜樹堿負載物的冷凍干燥GelSphere洗脫至PBS緩沖液中。結(jié)果示于圖7。與未冷凍干燥樣本相比較，冷凍干燥后洗脫速率下降。同樣，與較低藥物負載相比，較高藥物負載表現(xiàn)的洗脫較慢。實施例7制劑形式和非制劑形式的鹽酸伊立替康的洗脫比較1ml小球漿液與Campto制劑混合，并滾筒混合3-4小時。在一個單獨的負載研究中，通過將小球漿液與粉劑藥物和2ml水混合，1ml小球負載上固體鹽酸伊立替康純藥(neatdrug)，并滾筒混合3-4小時，在此期間所述藥物緩慢溶解，并主動被吸收至小球中。將伊立替康從各個900-1200μmGelSphere洗脫至200mlPBS緩沖液中。圖8中示出的洗脫曲線表明由制劑負載的小球之間或使用純藥負載的小球之間沒有顯著差異。實施例8藥物負載指示GelSphere微球用活性藍4染料染成淡藍色，目的在于使用期間它們?nèi)菀妆唤槿敕派鋵W醫(yī)師觀察到。一旦將伊立替康負載至小球中，所述微球具有的藍色染色轉(zhuǎn)變成為翠藍色。這可用作區(qū)分負載小球和未負載小球的目測指示劑。顏色變化在冷凍干燥的伊立替康負載小球中更為明顯。實施例9CC531-lacZ大鼠肝臟轉(zhuǎn)移模型中伊立替康-和多柔比星負載GelSphere的臨床前試驗性研究的總結(jié)本試驗性研究的目的在于，使用伊立替康負載小球或多柔比星負載小球，評估在大鼠肝臟轉(zhuǎn)移模型中化療栓塞用藥物洗脫性小球的有效性。該研究的目的在于評估可行性，測定用化療栓塞治療的大鼠體內(nèi)腫瘤負擔的減少，和測定在主要研究中待使用藥物的劑量。在本研究中該大鼠模型被選作合適的化療栓塞模型，是因為之前使用該模型已證實了伊立替康有顯著活性，這是根據(jù)有44％的大鼠體內(nèi)腫瘤完全消除以及平均腫瘤細胞負載減少了66％。(Saengeretal.，前文已引用)。在該模型中，將CC531-lacZ細胞通過門靜脈注射移植至雄性WAG/Rij大鼠中，腫瘤細胞的檢測通過其β-半乳糖苷酶活性完成。這使得可以使用化學發(fā)光分析法測定細胞數(shù)目。由于大鼠中血管的尺寸較小，并且為了與早期研究相一致，還可使用大小為75μm±25μm的微球產(chǎn)物。通過前面的實施例1詳細描述的方法專門制備用于本研究的微球，并對其染色并按照常規(guī)方法滅菌。藥物與微球混合后立即進行栓塞。藥物和微球靜置30至60分鐘以便負載，并每5至10分鐘攪拌以便負載，或者將它們置于有助于負載的旋轉(zhuǎn)混合器上。在第0天將腫瘤細胞注射至大鼠模型的門靜脈。在第8天進行腹腔再切開術(relaparatomy)，它為直觀控制肝臟中腫瘤細胞是否存在提供了可能。腫瘤陽性動物在第8天接受通過肝動脈的栓塞治療。第21天結(jié)束實驗。測定動物的肝臟重量，并將肝臟低溫冷凍，直至通過冷光光譜儀(luminometry)測定腫瘤細胞數(shù)目。下列伊立替康劑量用于試驗性研究中60mg/kg、30mg/kg和15mg/kg。圖9示出的結(jié)果示出對照(n＝9)、60mg/kg和15mg/kg(n＝3)伊立替康負載小球組的肝臟中活腫瘤細胞的平均數(shù)和中數(shù)。使用化學發(fā)光分析法，測量了對照動物和測試動物的肝臟中活腫瘤細胞數(shù)目。圖9示出經(jīng)歷了伊立替康劑量為60mg/kg的化療栓塞的大鼠中活腫瘤細胞數(shù)目降低了兩倍以上。盡管15mg/kg組顯得具有較高的腫瘤細胞數(shù)目，應該注意的是，對照組中腫瘤細胞數(shù)目會壞死，而在15mg/kg組中，腫瘤的生長速率減緩，因此壞死降低，這使得在該時間點活腫瘤細胞數(shù)目增加。30mg/kg伊立替康的另外的實驗表明大鼠肝臟中腫瘤細胞完全消失(圖10)。圖10示出對照組和30mg/kg伊立替康組的肝臟中腫瘤細胞的平均數(shù)和中數(shù)。圖11示出處死時肝臟的外觀。對照肝臟(A)示出整個肝臟中腫瘤擴散的外觀以及肝臟體積的增大。用60mg/kg(B)或30mg/kg(C)伊立替康化療栓塞后動物的肝臟表明肝臟具有表面上健康的外觀，沒有可檢測到的腫瘤，而且肝臟體積也沒有增大。權利要求1.一種微球在制備用于治療方法中的組合物的用途，所述微球含有在pH7時帶負電的、水不溶性、水溶漲性聚合物，以及與該聚合物以可釋放形式通過靜電結(jié)合的、帶正電的喜樹堿化合物，在所述治療方法中所述組合物被引入血管中，微球在血管中形成栓塞，栓塞中的顆粒在37℃于水中平衡時具有介于范圍在100至1500μm之間的尺寸，并且所述方法中，所述喜樹堿化合物從所述栓塞中釋放。2.根據(jù)權利要求1的用途，其中所述治療針對實體瘤。3.根據(jù)權利要求1或權利要求2的用途，其中所述喜樹堿化合物優(yōu)選具有通式1其中，R1為H、任選由羥基、胺、烷氧基、鹵素、酰基或酰氧基基團取代的低級(C1-6)烷基或鹵素；并且R為氯或NR2R3，其中R2和R3相同或相異，并且每個代表氫原子、取代或未取代的C1-4烷基基團或者取代或未取代的碳環(huán)或雜環(huán)基團，或者R2和R3以及與它們相連接的氮原子一起形成環(huán)上可帶有-O-、-S-或＞NR4的任選取代的雜環(huán)，其中R4為氫原子、取代或未取代的C1-4烷基基團或者取代或未取代的苯基基團；并且其中-O-CO-R基團鍵合至位于包括喜樹堿化合物的鹽在內(nèi)的喜樹堿化合物A環(huán)中的9、10或11位任意一個的碳原子。4.根據(jù)權利要求3的用途，其中R為NR2R3，其中R2和R3以及所述氮原子一起形成任選取代的雜環(huán)。5.根據(jù)權利要求4的用途，其中R為6.根據(jù)權利要求3至5任一項的用途，其中RCOO在10位被取代。7.根據(jù)權利要求3至6任一項的用途，其中R1為乙基并且m為1。8.根據(jù)前述權利要求任一項的用途，其中所述顆粒的大小范圍介于200至1200μm之間。9.根據(jù)前述權利要求任一項的用途，其中所述聚合物為交聯(lián)的聚乙烯醇。10.根據(jù)權利要求9的用途，其中所述聚合物由聚乙烯醇大分子單體通過烯式基團的自由基聚合形成，每個所述大分子單體具有多于一個的烯式不飽和側(cè)基團。11.根據(jù)權利要求10的用途，其中所述PVA大分子單體與烯式不飽和單體共聚。12.根據(jù)權利要求11的用途，其中所述單體包括具有如下通式II的離子單體Y1BQ1II其中Y1選自CH2＝C(R10)-CH2-O-，CH2＝C(R10)-CH2OC(O)-，CH2＝C(R10)OC(O)-，CH2＝C(R10)-O-，CH2＝C(R10)CH2OC(O)N(R11)-，R12OOCCR10＝CR10C(O)-O-，R10CH＝CHC(O)O-，R10CH＝C(COOR12)CH2-C(O)-O-，其中R10為氫或C1-C4烷基基團；R11為氫或C1-C4烷基基團；R12為氫或C1-4烷基基團或BQ1，其中B和Q1定義如下；A1為-O-或-NR11-；K1為基團-(CH2)rOC(O)-、-(CH2)rC(O)O-、-(CH2)rOC(O)O-，-(CH2)rNR13-、-(CH2)rNR13C(O)-、-(CH2)rC(O)NR13-、-(CH2)rNR13C(O)O-、-(CH2)rOC(O)NR13-、-(CH2)rNR13C(O)NR13-(其中基團R13相同或相異)、-(CH2)rO-、-(CH2)rSO3-，或者一個價鍵，該價鍵任選地與B結(jié)合，并且r為1至12，R13為氫或C1-C4烷基基團；B為直鏈或支鏈鏈烷二基、氧雜亞烷基、鏈烷二基氧雜鏈烷二基或鏈烷二基低聚(氧雜鏈烷二基)鏈，所述鏈烷二基低聚(氧雜鏈烷二基)鏈任選地包含一個或多個氟原子，最高可包括全氟鏈，或者，若Q1或Y1含有與B鍵接的末端碳原子，則B為一個價鍵；并且Q1為陰離子基團。13.根據(jù)權利要求12的用途，其中Q1為羧酸酯、碳酸酯、磺酸酯、硫酸酯、硝酸酯、膦酸酯或磷酸酯基團。14.根據(jù)權利要求12或13的用途，其中Y1為基團CH2＝CR10COA1-，其中R10為H或甲基，優(yōu)選為甲基，并且其中A1優(yōu)選為NH，并且B為2至6個碳原子的鏈烷二基基團。15.根據(jù)前述權利要求任一項的用途，其中所給藥組合物包括顯像劑，優(yōu)選不透射線劑。16.一種包含微球的組合物，所述微球含有在pH7時帶負電、水不溶性、水溶漲性聚合物，以及與該聚合物以可釋放形式通過靜電結(jié)合的、帶正電的喜樹堿化合物，其中所述微球在室溫下于水中平衡時具有超過100μm的直徑。17.根據(jù)權利要求16的組合物，其中所述喜樹堿組合物具有通式I其中R1為H、任選由羥基、胺、烷氧基、鹵素、?；蝓Ｑ趸鶊F取代的低級(C1-6)烷基或鹵素；并且R為氯或NR2R3，其中R2和R3相同或相異，并且每個代表氫原子、取代或未取代的C1-4烷基基團或者取代或未取代的碳環(huán)或雜環(huán)基團，或者R2和R3以及與它們相連接的氮原子一起形成環(huán)上可帶有-O-、-S-或＞NR4的任選取代的雜環(huán)，其中R4為氫原子、取代或未取代的C1-4烷基基團或者取代或未取代的苯基基團；并且其中-O-CO-R基團鍵合至位于包括喜樹堿化合物的鹽在內(nèi)的喜樹堿化合物A環(huán)中的9、10或11位任意一個的碳原子。18.根據(jù)權利要求17的組合物，其中R是NR2R3，其中R2和R3以及所述氮原子一起形成任選取代的雜環(huán)。19.根據(jù)權利要求18的組合物，其中R是20.根據(jù)權利要求17至19任一項的組合物，其中RCOO-在10位被取代。21.根據(jù)權利要求17至20任一項的組合物，其中R1是乙基并且m為1。22.根據(jù)權利要求17至21任一項的組合物，其中所述聚合物是交聯(lián)的聚乙烯醇。23.根據(jù)權利要求22的組合物，其中所述聚合物于37℃在水中平衡時大小為100至1500μm，更優(yōu)選地為200至1200μm。24.根據(jù)權利要求23的組合物，其中所述PVA大分子單體與烯式不飽和單體共聚。25.根據(jù)權利要求24的組合物，其中所述單體包括具有通式II的離子單體Y1BQ1II其中Y1選自CH2＝C(R10)-CH2-O-，CH2＝C(R10)-CH2OC(O)-，CH2＝C(R10)OC(O)-，CH2＝C(R10)-O-，CH2＝C(R10)CH2OC(O)N(R11)-，R12OOCCR10＝CR10C(O)-O-，R10CH＝CHC(O)O-，R10CH＝C(COOR12)CH2-C(O)-O-，其中R10為氫或C1-C4烷基基團；R11為氫或C1-C4烷基基團；R12為氫或C1-4烷基基團或BQ1，其中B和Q1定義如下；A1為-O-或-NR11-；K1為基團-(CH2)rOC(O)-、-(CH2)rC(O)O-、-(CH2)rOC(O)O-，-(CH2)rNR13-、-(CH2)rNR13C(O)-、-(CH2)rC(O)NR13-、-(CH2)rNR13C(O)O-、-(CH2)rOC(O)NR13-、-(CH2)rNR13C(O)NR13-(其中基團R13相同或相異)、-(CH2)rO-、-(CH2)rSO3-，或者一個價鍵，該價鍵任選地與B結(jié)合，并且r為1至12，R13為氫或C1-C4烷基基團；B為直鏈或支鏈鏈烷二基、氧雜亞烷基、鏈烷二基氧雜鏈烷二基或鏈烷二基低聚(氧雜鏈烷二基)鏈，所述鏈任選包含一個或多個氟原子，最高可包括全氟鏈，或者，若Q1或Y1含有與B鍵接的末端碳原子，則B為一個價鍵；并且Q1為陰離子基團。26.根據(jù)權利要求25的組合物，其中Q1為羧酸酯、碳酸酯、磺酸酯、硫酸酯、硝酸酯、膦酸酯或磷酸酯基團。27.根據(jù)權利要求25或26的組合物，其中Y1為基團CH2＝CR10COA-，其中R10為H或甲基，優(yōu)選為甲基，并且其中A1優(yōu)選為NH，并且B為2至6個碳原子的鏈烷二基基團。28.根據(jù)權利要求17至27任一項的組合物，所述組合物另外包含液體助懸劑，優(yōu)選可藥用液體，更優(yōu)選水性液體，最優(yōu)選水。29.根據(jù)權利要求17至28任一項的組合物，所述組合物包含顯像劑，優(yōu)選不透射線的顯像劑。30.根據(jù)權利要求17至27任一項的組合物，所述組合物基本為干的顆粒形式，優(yōu)選經(jīng)冷凍干燥的形式。全文摘要一種包含微球的栓塞組合物，所述微球由水不溶性、水溶漲性陰離子聚合物和陽離子喜樹堿化合物優(yōu)選伊立替康形成，所述陰離子聚合物具有的溶漲直徑超過100μm。微球優(yōu)選由與陰離子烯式不飽和陰離子共聚單體交聯(lián)的交聯(lián)聚乙烯醇，優(yōu)選烯式不飽和聚乙烯醇大分子單體形成。該組合物用于治療血管過多腫瘤例如結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移。文檔編號A61K31/4745GK101052378SQ200580037469公開日2007年10月10日申請日期2005年9月6日優(yōu)先權日2004年9月7日發(fā)明者A·L·劉易斯,P·W·斯拉特福德,M·V·岡薩雷斯－費賈多,Y·唐申請人:生物相容英國有限公司