包含多肽和糖的基于丙交酯/乙交酯共聚物的緩釋微膠囊的制作方法

專利名稱：包含多肽和糖的基于丙交酯/乙交酯共聚物的緩釋微膠囊的制作方法
相關(guān)申請本申請要求于2004年4月15日提出申請的美國專利臨時申請第60/563,245號和于2005年4月提出申請的USSN＿＿(快件郵件編號EV 57190029 US)的權(quán)益，后者題目為“基于聚合物的緩釋裝置”，指定律師代理申請案編號為1733.2056 US1，列出的發(fā)明人為Steven G.Wright、Troy Christensen、Thean Yeoh、Michael Rickey、Joyce Hotz、Rajesh Kumar和Henry R.Costantino。上述申請的整體教導在此引入作為參考。
背景技術(shù)：
許多蛋白質(zhì)和肽(本文中統(tǒng)稱為多肽)在體內(nèi)表現(xiàn)出生物學活性，可用作藥物。很多疾病或病癥需要給予持續(xù)水平的藥物以提供最有效的預防和/或治療作用。通常通過頻繁皮下注射給予生物活性多肽可達到持續(xù)水平，而頻繁皮下注射經(jīng)常導致藥物水平波動和患者依從性差。
作為選擇，可采用使用生物降解性材料(例如聚合物)封裝所述藥物來作為持續(xù)遞藥系統(tǒng)。例如，呈微?；蛭⑤d體形式的生物降解性聚合物的使用，可通過利用聚合物固有的生物降解性控制藥物釋放，提供緩釋藥物，藉此提供更為一致、持續(xù)的藥物水平，并改進患者的依從性。
然而，這些緩釋裝置通?？杀憩F(xiàn)出很高的藥物初始爆發(fā)釋放，此后釋放極微，導致血藥水平處于治療窗口之外和/或藥物生物利用度差。另外，聚合物的存在、生理溫度和機體對緩釋組合物的反應可使藥物發(fā)生改變(例如降解、聚合)，由此干擾所期需的藥物釋放曲線。
此外，由于藥物的不穩(wěn)定性和處理步驟的降解作用，形成緩釋組合物所用的方法可引起藥物活性損失。當藥物為多肽時降解作用尤其是個問題。
因此，需要有一種以持續(xù)方式給予生物活性多肽的手段，其中遞送的多肽的量處于治療水平，且在所期需的釋放時間內(nèi)保持活性和效力。盡管為致力于解決這些問題一直在進行大量的研發(fā)工作，但仍需要新的解決方案。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及如下發(fā)現(xiàn)通過在制作過程中控制凝聚劑與聚合物溶劑的比率(例如硅油與聚合物溶劑的比率)由此達到低孔容積，用含有少量組分的制劑可得到優(yōu)異的釋放曲線(例如特征為Cmax與Cave比率為約3以下的曲線)。此外，已發(fā)現(xiàn)這種所期需的優(yōu)異釋放曲線可通過控制凝聚過程來得到，例如控制加入凝聚劑(例如硅油)的時間長度、加入后保持時間長度和轉(zhuǎn)移到猝滅劑的時間長度。也已發(fā)現(xiàn)通過控制內(nèi)部乳滴粒徑可得到優(yōu)異的低孔容積緩釋組合物(例如微粒)。此外，業(yè)已發(fā)現(xiàn)控制粒徑和粒徑分布可進一步提供和有助于優(yōu)異的期需釋放曲線(例如特征為Cmax與Cave比率為約3以下)和批與批之間更一致的曲線。本發(fā)明涉及用于藥劑(例如生物活性多肽)緩釋的組合物和形成與使用此等生物活性多肽緩釋用組合物的方法。本發(fā)明緩釋組合物包含生物相容性聚合物、藥劑(例如生物活性多肽)和糖。優(yōu)選多肽和糖分散于聚合物中。多肽和糖可分別分散或優(yōu)選共同分散。緩釋組合物提供期需的一致性釋放曲線。在一具體實施方案中，該曲線特征為Cmax與Cave的比率為約3以下。在一優(yōu)選實施方案中，該生物活性多肽為抗糖尿病多肽或葡糖調(diào)節(jié)性(glucorgulatory)多肽，例如GLP-1、GLP-2、毒蜥外泌肽-3、毒蜥外泌肽-4或其類似物、衍生物或激動劑，優(yōu)選毒蜥外泌肽-4。糖類優(yōu)選蔗糖、甘露醇或其組合。優(yōu)選的組合包括毒蜥外泌肽-4和蔗糖和/或甘露醇。
另外或作為選擇，緩釋組合物包含生物相容性聚合物、藥劑(例如生物活性多肽)和糖，其中該組合物的總孔容積為約0.1ml/g以下。在具體實施方案中，總孔容積用壓汞孔隙率測定法來測定。
另外或作為選擇，緩釋組合物基本上由或作為選擇由生物相容性聚合物、濃度約3％w/w的毒蜥外泌肽-4和濃度約2％w/w的蔗糖組成。生物相容性聚合物優(yōu)選聚丙交酯乙交酯共聚物。
本發(fā)明也包括形成生物活性藥劑(例如多肽)緩釋用組合物的方法，其包括通過將包含水、藥劑(例如水溶性多肽)和糖的水相與包含生物相容性聚合物和該聚合物的溶劑的油相混合來形成混合物；通過例如超聲處理或均化該混合物形成油包水乳劑；將硅油加入到該混合物形成初期微粒(embryonic microparticle)；將該初期微粒轉(zhuǎn)移到淬滅溶劑中使該微粒硬化；收集硬化的微粒；干燥硬化微粒。在一具體實施方案中，硅油以足夠量加入以達到硅油與聚合物溶劑比率約1.5∶1。另外或作為選擇，聚合物以約10％w/v以下存在于油相中。
藥劑或多肽(例如毒蜥外泌肽毒蜥外泌肽4)可以最終組合物總重量的約0.01％到約10％w/w的濃度存在于本文所述組合物中。另外，糖(例如蔗糖)可以組合物最終重量的約0.01％到約5％w/w的濃度存在。
本發(fā)明組合物可通過注射、植入(例如皮下、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、顱內(nèi)和皮內(nèi))、粘膜給藥(例如鼻內(nèi)、陰道內(nèi)、肺內(nèi)或借助于栓劑)或原位遞送(例如通過灌腸劑或氣霧劑)來給予人類或其它動物。
當緩釋組合物中摻入激素(特別是抗糖尿病肽或葡糖調(diào)節(jié)性肽，例如GLP-1、GLP-2、毒蜥外泌肽3、毒蜥外泌肽4或其激動劑、類似物或衍生物)時，以有效治療量來給予該組合物以治療患有糖尿病、糖耐量受損(IGT)、肥胖、心血管(CV)疾病或其它可由上述多肽或其衍生物、類似物或激動劑中一種治療的任何疾病的患者。
在本發(fā)明緩釋組合物中應用糖，可改善所摻入的生物活性多肽(例如抗糖尿病肽或葡糖調(diào)節(jié)性肽)的生物利用度，并將由于不穩(wěn)定性和/或多肽與配制該緩釋組合物中所含或所用的其它組分之間的化學相互作用而引起的活性損失減到最少，同時還保持優(yōu)異的釋放曲線。
在一實施方案中，該組合物含有約5％的活性藥劑毒蜥外泌肽4、約2％的糖和生物聚合物。在另一實施方案中，該組合物含有約3％的活性藥劑毒蜥外泌肽4、約2％的糖和生物聚合物。在另一此類實施方案中，該組合物含有PLGA聚合物。在又一實施方案中，該組合物含有PLG 4A聚合物，其包含約50摩爾％DL丙交酯對50摩爾％乙交酯比率，具有未封端的游離羧酸端基(命名為“4A”)。在又一實施方案中，該組合物形成具有如本文所述粒徑、粒徑分布和總孔容積的微粒。在更進一步的實施方案中，該總孔容積小于約0.1ml/g，中值粒徑DV50可為約50微米，其分布下限D(zhuǎn)V10為約30微米，分布上限D(zhuǎn)V90為約90微米。在又一實施方案中，該微粒通過本文所述方法形成、獲得，或通過本文所述過程可獲得。在一種此類實施方案中，該方法為水/油/油(“W/O/O”)法，其中內(nèi)部乳滴粒徑如本文所述。另外，該方法可包括硅油凝聚物，其與聚合物溶劑之比可為約1.5比1。此外，該方法可包括如本文所述控制凝聚步驟，甚至進一步包括將凝聚物轉(zhuǎn)移到內(nèi)部乳劑發(fā)生在約3分鐘以下、保留約1分鐘以下的步驟和在不足約3分鐘的時間內(nèi)快速轉(zhuǎn)移到淬滅/硬化溶劑中的步驟。在另一實施方案中，該溶劑為雙溶劑，優(yōu)選庚烷/乙醇混合物。
在另一實施方案中，本發(fā)明組合物可進一步調(diào)配為適于通過針注射入宿主內(nèi)的形式。注射用組合物包含可如本文所述存于合適粘度水性注射載體中的微粒組合物。該水性注射用載體在20℃時粘度可至少為20cp，而進一步在20℃時粘度可大于50cp和小于60cp。微粒可以大于約30mg/ml的濃度懸浮于注射用載體中形成混懸劑，混懸劑的流動相在20℃時的粘度至少為20cp。該組合物也可包含粘度增強劑、密度增強劑、張力增強劑(tonicity enhancing agent)和/或濕潤劑。注射用載體粘度提供組合物通過直徑約18-23號針之間的注射針的注射能力，更優(yōu)選約18-25號針，甚至更優(yōu)選約25號針。
在一適于通過23號針通道的實施方案中，該注射用載體包含存于水中的3.0％(w/v)的羧甲基纖維素鈉、0.9％(w/v)的氯化鈉和0.1％(v/v)或任選0.5％的聚山梨醇酯20，NF(Tween 20)。該溶液任選地經(jīng)過緩沖。在另一實施方案中，如上所述含依森泰德(exenatide)的微粒懸浮于注射用載體中，該載體為存于水中的3.0％(w/v)羧甲基纖維素鈉、0.9％(w/v)氯化鈉和0.1％(v/v)或任選0.5％聚山梨醇酯20，NF(Tween 20)。在另一實施方案中，懸浮的依森泰德-微粒濃度高于約30mg/ml。通常每毫升載體中懸浮約100-200mg干微粒。如本文所述的緩釋制劑的優(yōu)點包括通過減少重復給藥的需求增加患者依從性和可接受性，通過提供期需的釋放曲線減少活性藥劑于血液中的濃度波動來增加治療效益，通過減少這些波動來潛在降低提供治療效益所必需的生物活性多肽的總量。在其它實施方案、包括本文所述的組合物和方法中，該藥劑為具有氨基酸取代的毒蜥外泌肽4，其中14位的甲硫氨酸被亮氨酸取代毒蜥外泌肽。舉例而言，一個實施方案為適于通過18-23號針(更優(yōu)選25號針)的、包含緩釋組合物的注射用組合物，其中緩釋組合物包含50∶50DL PLG 4A聚合物、約3-5％(w/w)具有氨基酸取代的毒蜥外泌肽4(其中14位的甲硫氨酸被亮氨酸取代)毒蜥外泌肽和約2％(w/w)蔗糖，其中Cmax與Cave的比率為約3以下，該組合物的總孔容積為約0.1ml/g以下，所述緩釋組合物懸浮于包含存于水中的3.0％(w/v)羧甲基纖維素鈉、0.9％(w/v)氯化鈉和0.1％(v/v)聚山梨醇酯20，NF(Tween 20)的注射用載體中。
附圖簡述

圖1為顯示平均孔徑與本文所述緩釋組合物體外釋放之間相互關(guān)系的圖(A.S.＝硫酸銨)。
圖2為顯示孔隙率對體外從微粒釋放毒蜥外泌肽4的影響和處理條件也即硅油與亞甲基氯比率對所形成的微粒的孔隙率影響的圖。
圖3A-3B為所選擇的本文所述微粒制劑的低溫SEM掃描。
圖4A-4D為所選擇的本文所述微粒制劑的低溫SEM掃描。
圖5為殘留乙醇和二氯甲烷百分率對本文所述微粒制劑Tg所作的圖。
圖6為制劑2-1(3％毒蜥外泌肽4和2％蔗糖)、制劑1(單用3％毒蜥外泌肽4)和制劑4(3％毒蜥外泌肽4和0.5％硫酸銨)的代表性藥代動力學曲線(濃度(pg/ml)對時間(天數(shù))，插圖顯示第一天的濃度)。
圖7為三種微粒制劑2、2-1和2-2的體內(nèi)釋放曲線圖。
圖8為微粒制劑5-1、5-2和5-3的藥代動力學數(shù)據(jù)圖。
圖9圖解工藝參數(shù)與用該工藝得到的內(nèi)部乳滴粒徑之間相互關(guān)系。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及生物活性多肽緩釋用的組合物和形成及使用所述生物活性多肽緩釋用的組合物的方法。本發(fā)明緩釋組合物包含生物相容性聚合物、藥劑(例如生物活性多肽)和糖。藥劑和糖分別分散或優(yōu)選共同分散于生物相容性聚合物中。在一具體實施方案中，該緩釋組合物的特征為最大血清濃度(Cmax)與平均血清濃度(Cave)比率為約3以下的釋放曲線。本文所用術(shù)語“a”或“an”指一個(種)或多個(種)。
藥劑在優(yōu)選實施方案中，藥劑為生物活性多肽，例如抗糖尿病多肽或葡糖調(diào)節(jié)性多肽，包括GLP-1、GLP-2、毒蜥外泌肽3、毒蜥外泌肽4或其類似物、衍生物或激動劑。最具體地說，該多肽為毒蜥外泌肽4。然而，其它藥劑可利用此中所作出的發(fā)現(xiàn)。
本文所用術(shù)語生物活性多肽統(tǒng)一指代生物活性蛋白質(zhì)和肽及其藥物上可接受鹽，它們在體內(nèi)釋放時為其分子生物活性形式，由此在體內(nèi)具有所需治療、預防和/或診斷特性。通常該多肽分子量介于500與200,000道爾頓之間。
適合的生物活性多肽包括但不限于胰高血糖素、胰高血糖素樣肽(例如GLP-1、GLP-2或其它GLP類似物)、胰高血糖素樣肽的衍生物或激動劑、毒蜥外泌肽(例如毒蜥外泌肽3和毒蜥外泌肽4)和其衍生物、激動劑和類似物、血管活性腸肽(VIP)、免疫球蛋白、抗體、細胞因子(例如淋巴因子、單核因子、趨化因子)、白細胞介素、巨噬細胞激活因子、干擾素、促紅細胞生成素、核酸酶、腫瘤壞死因子、集落刺激因子(例如G-CSF)、胰島素、酶(例如過氧化物歧化酶、纖溶酶原激活物等等)、腫瘤抑制劑、血液蛋白、激素和激素類似物和激動劑(例如促卵泡激素、生長激素、促腎上腺皮質(zhì)激素和促黃體激素釋放激素(LHRH))、疫苗(例如腫瘤抗原、細菌抗原和病毒抗原)、抗原、血凝因子、生長因子(NGF和EGF)、胃泌素、GRH、抗細菌肽例如防御素、腦啡肽、緩激肽、降鈣素和所有前述物質(zhì)的突變蛋白、類似物、截短、缺失和取代變體及藥物上可接受鹽。
毒蜥外泌肽4為39個氨基酸的多肽。于1995年6月13日授予Eng的美國專利第5,424,286號(其整體內(nèi)容在此引入作為參考)中可發(fā)現(xiàn)毒蜥外泌肽4的氨基酸序列。AC2993和依森泰德與術(shù)語毒蜥外泌肽4同義。業(yè)已表明毒蜥外泌肽4在人類和動物中存在濃度升高的高血糖時刺激胰島素分泌，但在低血糖濃度(低血糖癥)期間不刺激分泌。也已證明其抑制胰高血糖素分泌，減慢胃排空，影響食物攝入和體重以及其它作用。如此，毒蜥外泌肽4及其類似物和激動劑可用于治療糖尿病、IGT、肥胖等等。
含于緩釋組合物聚合物基質(zhì)中的生物活性多肽的量為有效治療、診斷或預防的量，其可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員考慮到諸如體重、待治療的病癥、所用聚合物類型和自聚合物釋放速率等因素來確定。
緩釋組合物通常含有約0.01％(w/w)-約50％(w/w)的藥劑，例如生物活性多肽(例如毒蜥外泌肽4)(占組合物總重量)。舉例而言，生物活性多肽(例如毒蜥外泌肽4)的量可為組合物總重量的約0.1％(w/w)-約30％(w/w)。多肽的量將視所期需效果、該藥劑的效力、計劃釋放的水平和該多肽釋放的時間間隔而定。優(yōu)選負荷范圍介于約0.1％(w/w)到約10％(w/w)之間，例如0.5％(w/w)到約5％(w/w)之間。當藥劑(例如毒蜥外泌肽4)以約3％w/w裝載時和進一步當以約4％或約5％裝載時可得到優(yōu)異的釋放曲線。
糖如本文所定義，糖為單糖、二糖或寡糖(約3到約10個單糖)或其衍生物。舉例而言，單糖的糖醇為包括于本發(fā)明糖定義中的適合的衍生物。如此，舉例而言，由單糖甘露糖衍生的糖醇甘露醇包括于本文所用糖定義中。
適合的單糖包括但不限于葡萄糖、果糖和甘露糖。如本文進一步定義，二糖為通過水解產(chǎn)生兩個單糖分子的化合物。適合的二糖包括但不限于蔗糖、乳糖和海藻糖。適合的寡糖包括但不限于棉子糖和阿卡波糖。
緩釋組合物中的糖含量可介于緩釋組合物總重量的約0.01％(w/w)到約50％(w/w)范圍內(nèi)，例如約0.01％(w/w)到約10％(w/w)，例如約0.1％(w/w)到約5％(w/w)。摻入約2％(w/w)蔗糖可得到優(yōu)異的釋放曲線。
或者，緩釋組合物中的糖含量可用與藥劑或生物活性多肽的重量比來表示。舉例而言，多肽和糖可以約10∶1到約1∶10的重量∶重量比率存在。在尤其優(yōu)選的實施方案中，多肽(例如毒蜥外泌肽4)與糖(例如蔗糖)的比率為約3∶2(w/w)、4∶2(w/w)和5∶2(w/w)。
也可用兩種或多種糖的組合。當采用組合時，糖量與上面所述范圍相同。
當多肽為毒蜥外泌肽4時，糖優(yōu)選蔗糖、甘露醇或其組合。
聚合物適合形成本發(fā)明緩釋組合物的聚合物為生物相容性聚合物，其可為生物降解性聚合物或非生物降解性聚合物或其摻合物或共聚物。若聚合物和該聚合物的任何降解產(chǎn)物對接受者無毒性，且對接受者機體無明顯有害或不利的作用(例如注射位點有顯著免疫反應)，則該聚合物為生物相容性的。
如本文所定義，生物降解性意指組合物將在體內(nèi)降解或逐漸銷蝕形成較小單位或化學物質(zhì)。例如，降解可通過酶促法、化學法和物理法產(chǎn)生。適合的生物相容的生物降解性聚合物包括例如聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯/乙交酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸、聚碳酸酯、聚酰胺酯、聚酐、聚氨基酸、聚原酸酯、聚二氧雜環(huán)己酮、聚乙二酸烷二酯、共聚物或聚乙二醇和聚原酸酯、生物降解性聚氨酯、其摻合物和其共聚物。
適合的生物相容的非生物降解性聚合物包括選自以下的非生物降解聚合物聚丙烯酸酯、乙烯/醋酸乙烯共聚物和其它酰基取代的醋酸纖維素、非降解性聚氨酯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚氟乙烯、聚乙烯基咪唑、聚烯烴氯磺酸酯、聚環(huán)氧乙烷、其摻合物和其共聚物。
本發(fā)明所用聚合物的可接受的分子量可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員考慮到諸如所需聚合物的降解率、物理特性(例如機械強度)、端基化學和聚合物于溶劑中溶出率等因素來確定。通常可接受分子量范圍為約2,000道爾頓到約2,000,000道爾頓。在優(yōu)選實施方案中，該聚合物為生物降解性聚合物或共聚物。在更優(yōu)選實施方案中，該聚合物為(丙交酯-乙交酯)共聚物(在下文中為“PLG”)，丙交酯∶乙交酯比率為約1∶1，而分子量為約10,000道爾頓到約90,000道爾頓。在甚至更優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明所用PLG分子量為約30,000道爾頓到約70,000道爾頓的分子量，例如約50,000到約60,000道爾頓。
PLG可具酸性端基或封閉端基，例如可通過酯化該酸來得到封閉端基。用具酸性端基的PLG可得到優(yōu)異的結(jié)果。
也可根據(jù)聚合物的比濃對數(shù)粘度來選擇聚合物。適合的比濃對數(shù)粘度包括約0.06-1.0dL/g，例如約0.2-0.6dL/g，更優(yōu)選介于約0.3到0.5dL/g之間。選擇將在3到4周內(nèi)降解的優(yōu)選聚合物。適合的聚合物可購自Alkermes，Inc.，商標名為Medisorb，例如以5050DL3A或5050DL 4A出售的聚合物。也可用Boehringer IngelheimResomerPLG，例如ResomerRG503和503H。
本發(fā)明的緩釋組合物可形成很多形狀，例如薄膜、丸狀、圓柱狀、盤狀或微粒。如本文所定義，微粒包含直徑小于約一毫米且生物活性多肽分散或溶于其間的聚合物組分。微?？蔀榍蛐?、非球形或不規(guī)則形狀。通常微粒大小適于注射。典型的微粒大小范圍為1000微米以下。在一具體實施方案中，微粒直徑介于約1到約180微米范圍內(nèi)。在更進一步的實施方案中，當微粒介于約1-100微米、從約30到90微米、從約50到70微米范圍內(nèi)時，甚至進一步中值粒徑可從約50到60微米時，可獲得優(yōu)異的釋放曲線。在一實施方案中，中值粒徑不小于或等于約50、60或70微米，優(yōu)選小于約80、90或100微米。在粒徑較大時，優(yōu)選顆?；旧喜痪奂员憧赏ㄟ^23號針，甚至更優(yōu)選25號針。在又一實施方案中，通過控制粒徑分布得到一致的優(yōu)異釋放曲線。在一實施方案中，中值粒徑為約50微米，粒徑的下限和上限分別為約30和90微米?？捎弥兄盗?meandiameter of the volume)來描述微粒分布。中值粒徑分布(mean diameterofthe volume distribution)代表分布重心，是一種類型的“平均粒徑”。在一實施方案中，組合物的中值粒徑分布為約50-70微米，約50-60微米或約50、60或70微米，在30微米時容積分布(DV)小于或約5％、10％或15％，而在90微米時DV大于或約80％、85％、90％或95％。在一實施方案中，組合物的中值粒徑分布為約60微米，在30微米時體積分布(DV)小于或約10％，而在90微米時DV大于或約90％。
額外的賦形劑盡管很可能如本領(lǐng)域所熟知的，可將額外賦形劑加入到本發(fā)明制劑中，但本發(fā)明令人驚奇的發(fā)現(xiàn)為，用本文所述的簡單制劑可得到優(yōu)異的釋放曲線。此種額外的賦形劑可提高或降低藥劑的釋放速率，和/或促進藥劑穩(wěn)定性或藥劑另外的所需特性?？娠@著提高釋放速率的成分包括成孔劑和促進聚合物降解的賦形劑。舉例而言，在非中性pH下聚合物水解速率提高。因此，可將酸性或堿性賦形劑例如無機酸或無機堿加入到用于形成微粒的聚合物溶液中，以改變聚合物的銷蝕速率?？娠@著降低釋放速率的成分包括降低藥劑水溶性的賦形劑。
所述緩釋制劑的優(yōu)選實施方案基本上由生物相容性聚合物、藥劑和糖組成?！盎旧嫌?..組成”意即不存在顯著提高從制劑釋放活性藥劑速率的成分。預計不顯著提高或降低藥劑釋放速率的額外賦形劑實例包括額外的活性藥劑和惰性成分。
在又一實施方案中，制劑由生物相容性聚合物、藥劑和糖組成?！坝?..組成”意即不存在除已列出的組分或成分和來自所述工藝的殘留水平的原料、溶劑等等之外的組分或成分。
為得到具良好以致優(yōu)異生物利用度的含藥劑(例如毒蜥外泌肽4)的緩釋制劑，在水相中不需要諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其它生物相容性緩沖劑等的緩沖劑，這一直是個令人驚異的發(fā)現(xiàn)。無需析出鹽來控制藥劑(例如毒蜥外泌肽4)的爆發(fā)釋放也是個出乎意料的發(fā)現(xiàn)。如此，如本文所述，本發(fā)明組合物也包括基本上(或完全)不存在緩沖劑和/或析出鹽的組合物。
作為選擇或另外地，本發(fā)明緩釋組合物具低孔隙率。在此等實施方案中，緩釋組合物包含生物相容性聚合物、生物活性多肽和糖，其中該組合物總孔容積為約0.1ml/g以下。另外，總孔容積可從0.0到0.1ml/g和從0.01到小于0.1ml/g。已發(fā)現(xiàn)這種極小的總孔容積引起藥劑的小量初始爆發(fā)釋出(釋放)，且進一步促進比常規(guī)制劑更慢和/或更長的緩釋曲線，使得可以在曲線中將Cmax時間后移。在特定實施方案中，總孔容積用例如下文所詳述的壓汞孔隙率測定法來測定。
在另一實施方案中，當緩釋組合物具如本文所述的低孔隙率時(其既起降低初始釋放的作用，又起提供具有所希望的Cmax與Cave比率的較長時間緩釋的作用)，可存在額外賦形劑。此等賦形劑優(yōu)選對釋放速率具很小影響或基本上無影響。此等賦形劑可包括在制備、貯存或釋放期間提供或增強藥劑穩(wěn)定性的賦形劑。適合的穩(wěn)定劑包括例如碳水化合物、氨基酸、脂肪酸和表面活性劑，這些是本領(lǐng)域技術(shù)人員所知曉的。此外，穩(wěn)定劑包括“抗氧化劑”，例如甲硫氨酸、維生素C、維生素E和馬來酸。抗氧化劑可作為穩(wěn)定水性制劑的部分存在或加入到聚合物相中。此外，可加入pH緩沖液。緩沖液為含有弱酸和該酸有關(guān)鹽或者弱堿和該堿有關(guān)鹽的溶液。在制備、貯存或釋放的任一階段，緩沖液可維持所需pH以穩(wěn)定制劑。舉例而言，緩沖液可為一堿價磷酸鹽或二堿價磷酸鹽或其組合或者揮發(fā)性緩沖液例如碳酸氫銨。其它緩沖液包括但不限于乙酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽和氨基酸，例如甘氨酸、精氨酸和組氨酸。緩沖液可以總重量的約0％到約10％存在于制劑中，優(yōu)選低于約10、15、20、25或30mM。鑒于本文所述的本發(fā)明微粒的令人驚奇的新物理方面和新制備方法，相信即使在存在影響釋放速率的賦形劑時，本發(fā)明也可提供新的微粒和方法。微粒的新特性可抵消或降低必需賦形劑(例如穩(wěn)定鹽)的不想要的釋放作用。在另一實施方案中，賦形劑以顯著影響釋放速率的水平存在，以進一步增強所需釋放曲線。
給藥本發(fā)明組合物通?？砂凑毡绢I(lǐng)域通常所知方法給藥。可通過注射、植入(例如皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、顱內(nèi)和皮內(nèi))、粘膜給藥(例如鼻內(nèi)、陰道內(nèi)、肺內(nèi)或借助栓劑)、口服、通過無針注射(例如參見美國專利第5312335號和第5630796號，其在此引入作為參考)或原位遞送(例如通過灌腸劑或氣霧劑)將本發(fā)明組合物給予患者(例如需要該藥劑的人類)或其它動物。
可用在所需時間內(nèi)達到所需治療水平的任何給藥時間表給予該緩釋組合物。舉例而言，可給予緩釋組合物，監(jiān)測患者直到所遞送的藥物水平回到基線?；氐交€后，可再次給予緩釋組合物?；蛘?，可在患者體內(nèi)達到基線水平前序慣給予緩釋組合物。
舉例而言，當緩釋組合物其中摻入激素、特別是抗糖尿病肽或葡糖調(diào)節(jié)性肽，例如GLP-1、GLP-2、毒蜥外泌肽3、毒蜥外泌肽4或其激動劑、類似物或衍生物時，以有效治療量來給予該組合物以治療患有糖尿病、IGT、肥胖、心血管(CV)疾病或可由上述多肽或其衍生物、類似物或激動劑之一治療的其它任何疾病的患者。
可通過給予本發(fā)明緩釋組合物治療的其它病癥包括I型和II型糖尿病，其可用其中摻入胰島素的緩釋組合物治療。另外，當摻入的多肽為FSH或其類似物時，該緩釋組合物可用于治療不育癥。在其它實例中，當所摻入多肽為β干擾素或其突變蛋白時，緩釋組合物可用于治療多發(fā)性硬化癥。正如可認識到的，緩釋組合物可用于治療對給予特定多肽有反應的疾病。
在另一實施方案中，本發(fā)明緩釋組合物可與皮質(zhì)類固醇一起給予。本發(fā)明緩釋組合物與皮質(zhì)類固醇一起給予可進一步提高緩釋組合物中生物活性多肽的生物利用度。皮質(zhì)類固醇與緩釋組合物的聯(lián)合給藥詳述于Dasch等的美國專利申請第60/419,430號中，其題目為“Method of Modifying the Release Profile of Sustained ReleaseCompositions”，其整體內(nèi)容在此引入作為參考。
本文所定義的皮質(zhì)類固醇指類固醇類抗炎性劑，也稱為糖皮質(zhì)激素。
適合的皮質(zhì)類固醇包括但不限于21-乙酰氧孕烯諾龍、阿氯米松(Alclometasone)、阿爾孕酮(Algestone)、安西奈德(Amcinonide)、倍氯米松(Beclomethasone)、倍他米松(Betamethasone)、布地奈德(Budesonide)、氯潑尼松(Chloroprednisone)、氯倍他索(Clobetasol)、氯倍他松(Clobetasone)、氯可托龍(Clocortolone)、氯潑尼醇(Cloprednol)、皮質(zhì)酮(Corticosterone)、可的松(Cortisone)、可的伐唑(Cortivazol)、地夫可特(Deflazacort)、地奈德(Desonide)、去羥米松(Desoximetasone)、地塞米松(Dexamethasone)、二氟拉松(Disflorasone)、二氟可龍(Diflucortolone)、二氟潑尼酯(Difluprednate)、甘草次酸(Enoxolone)、氟扎可特(Fluazacort)、氟氯奈德(Flucloronide)、氟米松(Flumethasone)、氟尼縮松(Flunisolide)、氟輕松(FlucinoloneAcetonide)、醋酸氟輕松(Fluocinonide)、氟可丁丁酯(Fluocortin Butyl)、氟可龍(Flucortolone)、氟米龍(Fluorometholone)、醋酸氟培龍(Fluperolone Acetate)、醋酸氟潑尼定(Fluprednidene Acetate)、氟潑尼龍(Fluprednisolone)、氟氫縮松(Flurandrenolide)、丙酸氟替卡松(Fluticasone Propionate)、福莫可他(Formocortal)、哈西奈德(Halcinonide)、丙酯鹵倍他素(Halobetasol Propionate)、鹵米松(Halometasone)、醋酸鹵潑尼松(Halopredone Acetate)、氫可他酯(Hydrocortamate)、氫化可的松(Hydrocortisone)、氯替潑諾碳酸乙酯(Loteprednol Etabonate)、馬潑尼酮(Mazipredone)、甲羥松(Medrysone)、甲潑尼松(Meprednisone)、甲潑尼龍(Methylprednisolone)、糠酸莫米松(Mometasone Furoate)、帕拉米松(Paramethasone)、潑尼卡酯(Prednicarbate)、潑尼松龍(Prednisolone)、潑尼松龍25-二乙氨基-醋酸酯(Prednisolone 25-Diethylamino-acetate)、潑尼松龍磷酸鈉(Prednisolone Sodium Phosphate)、潑尼松(Prednisone)、強的松龍戊酸酯(Prednival)、潑尼立定(Prednylidene)、利美索龍(Rimexolone)、替可的松(Tixocortol)、曲安西龍(Triamcinolone)(所有形式)，舉例而言，曲安奈德(Triamcinolone Acetonide)、曲安奈德21-oic acid甲酯(Triamcinolone Acetonide 21-oic acid methyl ester)、苯曲安奈德(Triamcinolone Benetonide)、己曲安奈德(TriamcinoloneHexacetonide)、雙醋曲安西龍(Triamcinolone Diacetate)、其藥學上可接受混合物和其鹽及其任何其它衍生物和類似物。
在一實施方案中，皮質(zhì)類固醇可共同摻入到包含生物相容性聚合物和摻入其中的生物活性多肽藥劑的緩釋組合物中。
在另一實施方案中，皮質(zhì)類固醇可單獨摻入到第二生物相容性聚合物中。該第二生物相容性聚合物可與其中已摻入生物活性多肽藥劑的第一生物相容性聚合物相同或不同。
在又一實施方案中，皮質(zhì)類固醇可以非封裝狀態(tài)而是與緩釋組合物混合存在。舉例而言，皮質(zhì)類固醇可溶于用于遞送緩釋組合物的載體中?；蛘撸べ|(zhì)類固醇可以懸浮于合適載體中的固態(tài)存在。此外，皮質(zhì)類固醇可以與緩釋組合物混合的粉末存在。
應該理解，皮質(zhì)類固醇以足夠提高來自緩釋組合物的生物活性多肽的生物利用度的量存在。生物利用度提高是指，與給藥時不存在皮質(zhì)類固醇的情況相比，當與皮質(zhì)類固醇共同給藥時，在從給藥后2天開始和并于所述具體制劑釋放周期結(jié)束時結(jié)束的期間，來自緩釋組合物的生物活性多肽的生物利用度的提高。
本文所用術(shù)語患者是指人類，例如需要該藥劑或治療方法、預防方法或診斷方法的人類。
如本文所定義，生物活性多肽的緩釋是從本發(fā)明緩釋組合物釋放該多肽，釋放發(fā)生的時間比直接給予該多肽溶液后存在可利用的生物學顯著量的時間長。優(yōu)選緩釋為釋放發(fā)生時間至少約1周，例如至少約2周，至少約3周或至少約4周。緩釋可為連續(xù)釋放或不連續(xù)釋放，釋放速率相對恒定或有變化。所用聚合物組成的類型(例如單體比率、分子量、嵌段組合物和聚合物的不同組合)、多肽負荷和/或為產(chǎn)生所需效果的賦形劑選擇可影響釋放的連續(xù)性和釋放水平。
本文所用術(shù)語治療量有效、預防有效量或診斷有效量為給藥后引起所需生物學反應所需要的緩釋組合物的量。
本文所用術(shù)語Cmax為在所監(jiān)測的釋放期間所出現(xiàn)的最大血清藥物濃度。
本文所用術(shù)語Cave為通過釋放曲線的曲線下面積(AUC)除以釋放時間得到的平均血清藥物濃度。
優(yōu)選Cmax與Cave的比率為約3以下。例如，這種曲線對于諸如上述的抗糖尿病多肽或葡糖調(diào)節(jié)性多肽尤其需要。約3以下比率可在治療窗內(nèi)提供Cave，同時避免由較高比率可能產(chǎn)生的不利藥物副作用。此外，如本文所述，業(yè)已發(fā)現(xiàn)通過控制緩釋組合物的物理外觀，可得到和控制所需的優(yōu)異釋放曲線的其它所需特性。該方法可提供并且本發(fā)明組合物可具有優(yōu)異的降低的爆發(fā)釋放(即初始釋放；例如0-1天時的Cmax。在一實施方案中，初始爆發(fā)釋放小于總藥劑的約1％。在另一實施方案中，初始釋放小于約0.75％，進一步小于約0.5％。在這方面Cmax與Cave比率小于約3，另外可為約1到3，進一步可為約2到3。此外，若存在Cmax，則Cmax可移到在爆發(fā)釋放或初始釋放期外的緩釋期的某個時間，移到釋放“緩釋期(sustained phase)”。在一實施方案中，Cmax可在給藥后至少7、14、21、28、35或42天出現(xiàn)，且可出現(xiàn)在其間的任何整數(shù)天。在進一步的實施方案中，Cmax為給藥后約21-35天，在另一進一步實施方案中為給藥后約28到31天，進一步為約28天。在另一實施方案中，最大藥物濃度(例如血漿濃度)出現(xiàn)在給藥后至少7、14、21、28、35或42天，且可出現(xiàn)在其間的任何整數(shù)天。在又一實施方案中，最大藥物濃度出現(xiàn)在給藥后約21到35天，尤其是在葡糖調(diào)節(jié)性藥劑例如毒蜥外泌肽4、GLP-1、GIP或其類似物情況下。
本發(fā)明組合物的優(yōu)異緩釋曲線使得可用這樣一種方法給藥通過降低不想要的高初始爆發(fā)釋放，以避免不想要的(副)作用(例如惡心)的劑量給予一種或多種活性藥劑。此外，該優(yōu)異的緩釋曲線使得可用以一定劑量給予一種或多種活性藥劑的方法，其中所述劑量低于有效治療量，但在多次緩釋給藥后，可達到患者中的有效治療濃度。然后通過進一步持續(xù)給藥可容易地保持該濃度。由本發(fā)明實現(xiàn)的這種治療方法的一個優(yōu)點是，通過降低不想要的藥物高爆發(fā)釋放，進一步通過讓患者適應濃度逐漸增加的所述藥劑，可降低或消除不想要的(副)作用，例如惡心。因此，在一實施方案中，提供多次緩釋給藥以使每一次連續(xù)給藥增加患者中所述藥劑的濃度，其中該患者體內(nèi)可得到有效治療濃度的所述藥劑。在另一實施方案中，施行各劑量連續(xù)緩釋給藥，以便該劑量的緩釋期與前一劑量的緩釋期重疊。此外，某一劑量的Cmax或其最大藥劑濃度可與前一劑量的藥劑Cmax或最大濃度重疊。
本文所用術(shù)語生物利用度是指到達循環(huán)系統(tǒng)的治療藥的量。生物利用度可定義為計算出的特定多肽在給藥后開始和于預定時間點結(jié)束期間釋放曲線的曲線下面積(AUC)。如本領(lǐng)域所理解，通過用預定時間點(X-軸)時受試者生物活性藥劑的血清水平(Y軸)作圖可產(chǎn)生釋放曲線。通常生物利用度以％生物利用度來表示，其為給予緩釋組合物后得到的特定多肽的生物利用度，除以靜脈給予同樣劑量藥物后得到的特定多肽的生物利用度，再乘以100。
通過適當藥代動力學監(jiān)測患者血清中生物活性多肽藥劑的存在情況，可確證對該釋放曲線的修正。舉例而言，如本領(lǐng)域所熟知的基于特異性抗體的測定(例如，ELISA和IRMA)，可用于測定患者血清中某些生物活性多肽的濃度。此測試的實例如本文所述為毒蜥外泌肽4。
為監(jiān)測藥劑對患者的治療作用對患者進行藥效學監(jiān)測可用于確證所釋放藥劑生物活性的保留?？筛鶕?jù)待給予的生物活性多肽藥劑，使用廣泛可用的技術(shù)，來選擇監(jiān)測藥效學效果的方法。
制備已知有大量方法可形成本發(fā)明緩釋組合物(聚合物/生物活性多肽基質(zhì))，尤其是本文所述具低孔隙率的組合物。工作實施例中闡明了形成微粒的某些方法的詳細步驟。在優(yōu)選實施方案中，形成生物活性多肽緩釋用組合物的本發(fā)明方法包括通過將包含水、藥劑(例如水溶性多肽)和糖的水相與包含生物相容性聚合物和該聚合物的溶劑的油相混合來形成混合物；形成油包水乳劑；將凝聚劑(如硅油、植物油或礦物油)加入到該混合物形成初期微粒；將該初期微粒轉(zhuǎn)移到淬滅溶劑中以使該微粒硬化；收集硬化的微粒；干燥硬化的微粒。該方法在本文中通常稱為油包油包水法(W/O/O)。
優(yōu)選聚合物可以約3％w/w到約25％w/w的濃度范圍存在于油相中，優(yōu)選該范圍為約4％w/w到約15％w/w，例如約5％w/w到約10％w/w。本文用油相中6％w/w濃度的PLG得到優(yōu)異的結(jié)果。
聚合物通常與聚合物溶劑混合。若聚合物為PLG(例如本文優(yōu)選的那些實例)，則將該聚合物加入到PLG溶劑中。此等溶劑在本領(lǐng)域中眾所周知。優(yōu)選溶劑為二氯甲烷。
將藥劑和糖加入到水相中，優(yōu)選加入到同一水相。優(yōu)選藥劑濃度為10-100mg/g，優(yōu)選介于50到100mg/g之間。優(yōu)選糖濃度為10-50mg/g和30-50mg/g。
然后將這兩相混合形成乳劑。優(yōu)選該乳劑的形成使內(nèi)部乳滴粒徑小于約1微米，優(yōu)選小于約0.7微米，更優(yōu)選小于約0.5微米，例如約0.4微米。此外，內(nèi)部乳滴粒徑可為約0.1到1.2微米，甚至進一步可為約0.1-1.0微米，再進一步可為約0.2-0.4微米。下限很大部分是根據(jù)將聚合物降解(例如由于剪切)或藥劑降解(例如由于乳劑形成期間產(chǎn)生的熱)減少到最小的需要來決定。因此，在一實施方案中，間歇和/或相對短時間內(nèi)施用形成乳劑的方法(例如通過均化、通過高剪切或通過超聲處理)，以便例如使乳劑中形成的熱最少和/或讓其消散。舉例而言，通過使整體乳劑多次不連續(xù)通過(discrete passes)可實施均化?？捎贸暡ㄆ扑閮x和均化器形成這種乳劑。
本文所用術(shù)語凝聚劑是指聚合物溶液(聚合物和溶劑)不易溶解于其中因此與聚合物溶液形成不同相的任何油。用于本發(fā)明的適合的凝聚劑包括但不限于硅油、植物油和礦物油。在具體實施方案中，凝聚劑為硅油，將其以足夠達到硅油與聚合物溶劑比率為約0.75∶1到約2∶1的量加入。在具體實施方案中，硅油與聚合物比率為約1∶1到約1.5∶1。在優(yōu)選實施方案中，硅油與聚合物比率為約1.5∶1。其它凝聚劑比率預期相似，或可用上述比率作為起始點進一步詳細地確定。
在一實施方案中，凝聚步驟包括將凝聚劑加入(或轉(zhuǎn)移)到乳劑約1-5分鐘時間，或相反，將乳劑加入(或轉(zhuǎn)移)到凝聚劑中，進一步加入或轉(zhuǎn)移步驟可為約2-4分鐘，甚至進一步可為約3分鐘。在又一實施方案中，加入或轉(zhuǎn)移步驟為不足或等于約1、約2、約3或約3.5分鐘。在另一實施方案中，當加入或轉(zhuǎn)移步驟如本文所述控制時，凝聚劑如本文所述為硅油。在又一實施方案中，凝聚劑體積與聚合物溶劑體積比如本文所述，例如約1.5比1(例如硅油比二氯甲烷)。在更進一步的實施方案中，內(nèi)部乳劑可的滴徑小于約1微米，又可進一步為如本文所述的滴徑。在一實施方案中，藥劑為葡糖調(diào)節(jié)性肽，例如毒蜥外泌肽4、GLP1、GIP或其類似物，甚至進一步可以本文所述濃度裝量。在又一實施方案中，聚合物為本文所述的PLGA，優(yōu)選約50∶50丙交酯比乙交酯形式。在一實施方案中，聚合物溶液或在凝聚前包含乳劑的水溶液中的任一種或兩者都可含有所需的賦形劑。
凝聚步驟可進一步包括保持期，其中在進行硬化步驟之前，將凝聚劑和乳劑的混合物保持較短時間，如約1分鐘到約5分鐘。另外，保持期可為約30-90秒，甚至進一步可為約1分鐘。此外在其它實施方案中，保持期可以是任選的，可以小于1分鐘，進一步可為小于30秒。在另一實施方案中，處理凝聚混合物以預防水/油/油組分分離或?qū)⑺?油/油組分分離減少到最小。此處理可借助任何手段，包括例如攪拌、均化、攪動、超聲處理、混合、振搖和加壓。無論其為微粒還是其它形狀，選擇條件以便將組合物組分的降解(包括初期聚合物/藥劑組合物的破壞)減少到最小。
凝聚步驟進一步包括將凝聚混合物轉(zhuǎn)移到淬滅或硬化溶液中。淬滅可包含聚合物非溶劑。聚合物非溶劑一般為本領(lǐng)域所熟知。特別優(yōu)選的淬滅包含硬化溶劑和洗滌溶劑的溶劑混合物，例如庚烷/乙醇溶劑系統(tǒng)，舉例而言如美國專利第6,824,822號所述，其在此引入作為參考。該轉(zhuǎn)移步驟可盡可能快地立即發(fā)生，在進一步的實施方案中可短于約0.5、1、2、3或4分鐘。
使用上述方法的改良形式也可將固態(tài)藥物包膠。該改良形式可稱為固體/油/油(S/O/O)。
舉例而言，將固態(tài)毒蜥外泌肽4懸浮于含有6％PLG的二氯甲烷中，在冰上超聲約4分鐘。隨后以類似于W/O/O方法的方式來進行處理。
在一實施方案中，組合物含有約5％活性藥劑毒蜥外泌肽4、約2％糖和生物聚合物。在另一實施方案中，組合物含有約3％活性藥劑毒蜥外泌肽4、約2％糖和生物聚合物。在另一此類實施方案中，組合物含有PLGA聚合物。在又一實施方案中，組合物含有PLG 4A聚合物，其包含約50摩爾百分比DL丙交酯與50摩爾百分比乙交酯比率，且具有未封端的游離羧酸端基(用“4A”表示)。在又一實施方案中，組合物形成具如本文所述粒徑、粒徑分布和總孔容積的微粒。在更進一步的實施方案中，總孔容積小于約0.1ml/g，中值粒徑可為約50微米，分布下限為約為30微米，而上限為約為90微米。在又一實施方案中，可通過本文所述方法形成、得到微粒，或通過本文所述方法可得到所述微粒。在一此類實施方案中，該方法為水/油/油(“W/O/O”)方法，其中內(nèi)部乳滴粒徑如本文所述。另外，該方法可包括硅油凝聚層，其與聚合物溶劑比率可為約1.5比1。此外，該方法可包括如本文所述控制凝聚步驟，再進一步，其中凝聚層轉(zhuǎn)移到內(nèi)部乳劑發(fā)生在約3分鐘以下，保留步驟為約1分鐘以下，經(jīng)不足約3分鐘的快速轉(zhuǎn)移步驟轉(zhuǎn)移到淬滅/硬化溶劑中。在另一實施方案中，溶劑為雙溶劑，優(yōu)選庚烷/乙醇混合物。
在另一實施方案中，本發(fā)明組合物可進一步調(diào)配為適于通過針注射入宿主內(nèi)的形式。注射用組合物可包含存于粘性水性注射用載體中的本文所述的微粒組合物，舉例而言，如美國專利第6,495,164號所述，該文獻在此引入作為參考。該水性注射用載體在20℃時粘度可至少為20cp，進一步在20℃時粘度可大于50cp和小于60cp。微粒可以大于約30mg/ml的濃度懸浮于注射用載體中形成混懸劑，混懸劑的流動相在20℃時的粘度至少為20cp。在其它實施方案中，混懸劑的流動相在20℃時粘度至少為約30cp、40cp、50cp和60cp。該組合物也可包含粘度增強劑、密度增強劑、張力增強劑和/或濕潤劑。注射用載體的粘度提供組合物通過直徑介于18-23號針范圍內(nèi)的注射針的注射能力，更優(yōu)選通過25號針。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，18號常規(guī)壁(RW)針的額定內(nèi)徑(ID)為0.033英寸，而22號正規(guī)壁針的額定內(nèi)徑為0.016英寸。注射用載體可含有粘度增強劑。在一實施方案中，粘度增強劑為羧甲基纖維素鈉，盡管也可使用其它適合的粘度增強劑。注射用載體也可包含增加注射用載體密度的密度增強劑。在另一實施方案中，密度增強劑為山梨醇，盡管也可使用其它適合的密度增強劑。注射用載體也可含有調(diào)整張力以排除毒性問題和改善生物相容性的張力調(diào)節(jié)劑。盡管也可使用其它適合的張力調(diào)節(jié)劑，但優(yōu)選的張力調(diào)節(jié)劑為氯化鈉。注射用載體也可包含確保注射用載體完全濕潤微粒的濕潤劑。濕潤劑包括聚山梨醇酯20(Tween20)、聚山梨醇酯40(Tween 40)和聚山梨醇酯80(Tween 80)。
微?？梢源笥诩s30mg/ml的濃度懸浮于注射用載體中。在一實施方案中，微粒以約150mg/ml-約300mg/ml的濃度懸浮。在另一實施方案中，微粒以約100mg/ml-約400mg/ml的濃度懸浮。然而，應該理解本發(fā)明并不限于具體濃度。
在一適于通過23號針的實施方案中，注射用載體包含存于水中的3.0％(w/v)的羧甲基纖維素鈉、0.9％(w/v)的氯化鈉和0.1％(v/v)或任選0.5％的聚山梨醇酯20，NF(Tween 20)。該溶液任選地可經(jīng)過緩沖。在另一實施方案中，如上所述含依森泰德的微粒懸浮于注射用載體中，該載體為存于水中的3.0％(w/v)的羧甲基纖維素鈉、0.9％(w/v)的氯化鈉和0.1％(v/v)或任選0.5％的聚山梨醇酯20，NF(Tween 20)。在另一實施方案中，懸浮的依森泰德-微粒濃度大于約30mg/ml。通常每毫升載體中懸浮約100-200mg干微粒。
在本發(fā)明的其它實施方案中，將發(fā)現(xiàn)于公開說明書WO2004036186(2004年4月29日公開)中的特定微粒排除在外。更具體地說，排除那些不含顯著影響釋放的量的硫酸銨的微粒。此等特定微粒包括那些稱為IF-1、IF-2、IF-3、IF-4、M1到M4、M7-M14、M18、M19的微粒。
本發(fā)明現(xiàn)在將通過下列實施例進一步具體闡述。
實施例微粒制劑I通過相分離法來制備本文所述緩釋組合物。以下描述制備1公斤批次規(guī)模的含有毒蜥外泌肽4和蔗糖的微粒的通用方法。
A.內(nèi)部油包水乳劑的形成借助于均化器制造油包水乳劑。適合的均化器包括在線(in-line)Megatron均化器MT-V 3-65 F/FF/FF，Kinematica AG，Switzerland。通過將毒蜥外泌肽4和賦形劑例如蔗糖溶于水來制備乳劑水相。所得溶液中的藥物濃度可為約50mg/g-約100mg/g。舉例而言，當藥物為毒蜥外泌肽4時，溶液中的藥物濃度可為每600g水約30g-約60g。在一具體實施方案中，50g毒蜥外泌肽4和20g蔗糖溶于600g沖洗用水(WFI)中。上列指定量表示額定負荷，不進行為針對所用毒蜥外泌肽4批次補充肽含量濃度的調(diào)整。通過將PLGA聚合物(例如930g純化50∶50 DL4A PLGA(klkermes，Inc.)溶于二氯甲烷(14.6kg或6％w/w)來制備乳劑油相。
然后將該水相加入到該油相中，用懸掛式混合器(overhead mixer)處理約3分鐘形成粗制乳劑。然后在環(huán)境溫度下以大約21300rpm將粗制乳劑均化3個不連續(xù)的時期。這導致內(nèi)部乳滴粒徑小于1微米。不言而喻，可用任何適合的手段完成內(nèi)部乳劑的形成。乳劑形成的適合手段包括但不限于上述均化和超聲處理。
B.凝聚層形成然后通過在約5分鐘時間內(nèi)將硅油(21.8kg二甲硅油，NF，350cs)加入到內(nèi)部乳劑中來實施凝聚步驟。這相當于1.5∶1的硅油與二氯甲烷比率。來自聚合物溶液的二氯甲烷分配到硅油中，開始在含毒蜥外泌肽4的水相周圍沉淀該聚合物，引起微囊化。如此形成的初期微球體是軟的，需要硬化。通常讓初期微球體在進行微球體硬化步驟之前靜置一段短時間，例如從約1分鐘到約5分鐘。
C.微球體硬化和漂洗然后將初期微球體立即轉(zhuǎn)移到庚烷/乙醇溶劑混合物中。所需的庚烷/乙醇混合物體積可基于微球體批料規(guī)模來確定，通常以16∶1的二氯甲烷與庚烷/乙醇溶劑比率。在本實施例中，在3℃的冷卻攪拌槽中使用約210kg庚烷和23kg乙醇。該溶劑混合物通過從微球體萃取額外的二氯甲烷來硬化微球體。此硬化步驟也可稱為淬滅。在3℃淬滅1小時后，在3℃輕輕倒出該溶劑混合物，并加入新鮮庚烷(13kg)，且保持1小時以沖洗掉微球體表面的殘留硅油、乙醇和二氯甲烷，或直接跳到收集步驟。
D.微球體干燥和收集在淬滅或傾倒/洗滌步驟結(jié)束時，轉(zhuǎn)移微球體，在12”SwecoPharmasep過濾器/干燥器PH12Y6型上收集。該過濾器/干燥器使用20微米的多層收集篩，并連接到在收集和干燥期間振蕩該篩的電動機上。用庚烷(3℃6公斤)實施最后漂洗，以確保最大限度的在線轉(zhuǎn)移并除去任何多余的硅油。然后其按下列方案在真空下受控速率用恒定氮氣吹掃干燥微球體3℃6小時；6小時慢慢上升到41℃；41℃84小時。
在完成干燥后，將微球體排放到收集容器中，通過150微米篩來篩分，貯存于約-20℃直至填充使用。
對于此中所制備的所有微粒制劑而言，所制備的制劑中多肽(例如毒蜥外泌肽4)和賦形劑的含量以占該緩釋組合物最終重量的％(w/w)來表示。除非指出，否則％(w/w)為額定百分數(shù)。
微粒制劑IIA.內(nèi)部油包水乳劑形成借助于超聲破碎儀制造油包水乳劑。適合的超聲破碎儀包括Vibracell VCX 750，帶CV33型探頭，Sonics and Materials Inc.，Newtown，CT。通過將毒蜥外泌肽4和賦形劑例如蔗糖溶于水來制備乳劑水相。所得溶液中的藥物濃度可為約50mg/ml-約100mg/ml。舉例而言，當藥物為毒蜥外泌肽4時，溶液中的藥物濃度可為每65.5g水約3.28g-約6.55g。在一具體實施方案中，5.46g毒蜥外泌肽4和2.18g蔗糖溶于65.5g沖洗用水或WFI中。為了補償組分通過過濾除菌時的損失，上列指定量表示超過目標負荷的4％。通過將PLGA聚合物(例如97.7g純化50∶50 DL4A PLGA(Alkermes，Inc.)溶于二氯甲烷(1539g或6％w/w)來制備乳劑油相。
然后經(jīng)約3分鐘將水相加入到油相中，同時在環(huán)境溫度下以100％振幅超聲處理。以5psig下通過具有1”HPLC管端(ID＝20/1000”)的1/4”不銹鋼管泵入水相，將其加入到超聲探頭下的超聲區(qū)內(nèi)。然后以1400-1600rpm攪拌反應器，另外以100％振幅超聲超聲處理2分鐘，接著停30秒，然后再超聲處理1分鐘。此導致內(nèi)部乳滴粒徑小于0.5微米。不言而喻，可用任何適合的手段完成內(nèi)部乳劑的形成。乳劑形成的適合手段包括但不限于上述超聲處理和均化。
B.凝聚層形成然后通過經(jīng)約3-5分鐘時間將硅油(2294g二甲硅油，NF，350cs)加入到內(nèi)部乳劑中來實施凝聚步驟。這相當于1.5∶1的硅油與二氯甲烷比率。來自聚合物溶液的二氯甲烷分配到硅油中，開始在含毒蜥外泌肽4的水相周圍沉淀該聚合物，引起微囊化。如此形成的初期微球體是軟的，需要硬化。通常讓初期微球體在進行微球體硬化步驟之前靜置一段短時間，例如從約1分鐘到約5分鐘。
C.微球體硬化和漂洗然后將初期微球體立即轉(zhuǎn)移到庚烷/乙醇溶劑混合物中。所需的庚烷/乙醇混合物體積可基于微球體批料規(guī)模來確定。在本實施例中，在3℃的冷卻攪拌槽(350-450rpm)中使用約22kg庚烷和2448g乙醇。該溶劑混合物通過從微球體萃取額外的二氯甲烷來硬化微球體。此硬化步驟也可稱為淬滅。在3℃淬滅1小時后，在3℃輕輕倒出該溶劑混合物，并加入新鮮庚烷(13kg)，且保持1小時以沖洗掉微球體表面的殘留硅油、乙醇和二氯甲烷。
D.微球體干燥和收集在漂洗步驟結(jié)束時，轉(zhuǎn)移微球體，在錐形干燥室內(nèi)的6”直徑的20微米多層篩(用作死端式過濾器)上收集。用庚烷(4℃6公斤)實施最后漂洗，以確保最大限度的在線轉(zhuǎn)移。然后按下列方案在受控速率下用恒定氮氣吹掃干燥微球體3℃18小時；25℃24小時；35℃6小時；38℃42小時。
在完成干燥后，將微球體排放到連接至干燥錐室的特氟隆/不銹鋼滅菌收集容器中。密封該收集容器，移出干燥錐室，貯存于約-20±5℃直至填充使用。取拆卸清潔時殘留在錐室的物質(zhì)進行藥物含量分析。產(chǎn)量為大約100g微球體。
對于此中所制備的所有微粒制劑而言，所制備的制劑中多肽(例如毒蜥外泌肽4)和賦形劑的含量以占該緩釋組合物最終重量的％(w/w)來表示。除非指出，否則％(w/w)為額定百分數(shù)。
聚合物適于使用的具體PLG聚合物實例如下所列。下列實施例所用的所有聚合物示于此清單中，所有列出的聚合物都來自Cincinnati，OH的Alkermes，Inc.，可如下所述聚合物2A(丙交酯-乙交酯)共聚物；50∶50的丙交酯∶乙交酯比率；12.3kD分子量；IV＝0.15(dL/g)。
聚合物4A(丙交酯-乙交酯)共聚物；50∶50的丙交酯∶乙交酯比率；分子量為45-64kD；IV＝0.45-0.47(dL/g)。
PLG的純化本領(lǐng)域中已知(例如參見，Lucke等的PeptideAcylation by Poly(α-Hydroxy Esters)，Pharmaceutical Research，Vol.19，No.2，p.175-181，F(xiàn)ebruary 2002)，由于與PLG的降解產(chǎn)物或聚合物制備后殘留的雜質(zhì)相互作用，摻入PLG基質(zhì)中的蛋白質(zhì)和肽可被不想要地改變(例如，降解或化學修飾)。如此，在制備緩釋組合物之前，用本領(lǐng)域公認的純化方法純化制備本文所述的大部分微粒制劑所用的PLG聚合物。
表征方法已確定下列表征方法適于鑒別將提供所需活性藥劑的釋放曲線的微粒。
SEM用SEM評估微粒的粒徑、形態(tài)和表面特性。在Personal SEM系統(tǒng)(ASPEXTM，LLC)上實施SEM成像。所有樣品都通過抹刀沉積到覆有碳素雙面磁帶的標準SEM棒上。用Model SC 7620“微型”噴鍍儀(Sputter Coater，Energy Beam Sciences)在18mA發(fā)射電流下將樣品用Au噴鍍約90秒。用20KeV電子束在放大倍數(shù)為大約250-2500X范圍內(nèi)實施所有SEM成像。
低溫SEM用低溫SEM研究微粒橫截面。將微粒樣品與HISTO PREP溶液(Fischer)混合，于-20℃過夜保存于低溫恒溫器中。將硬化微粒固定于玻璃蓋玻片上，然后用金屬刀切片。將切片的粒子固定于用鉑和鈀噴鍍的鋁棒上，在掃描電鏡(Phillips 525M)下觀察。切片的目測觀察提供了測定微?？紫堵食潭鹊姆椒ā?br> 孔隙率測量-壓汞法用SutoPor IV 9500 Moden型壓汞孔率計(Micromeritics，Norcross，GA)測定微粒的孔容積分布。簡言之，通過逐步加壓的方式施加高至最大壓力為60,000Psia，將汞強壓入透度計內(nèi)已知量的微粒中。測量各種壓力下壓入到孔中的汞體積。該方法定量測定微粒的孔分布。也就是說，被壓入孔的孔徑與所施壓力負相關(guān)?？捎肳ashburn方程來闡述液-固-汽體系上內(nèi)力和外力的平衡。所施壓力與壓汞孔徑之間的關(guān)系由下式闡述D=-4γcosθP]]>其中D＝孔徑γ＝表面張力(常數(shù))θ＝接觸角(常數(shù))P＝壓力因此，汞壓入孔徑與所施壓力成反比。假定所有孔為密封的圓柱體，可通過孔容積(V＝πD2h/4)除以孔面積(A＝πDh)來計算平均孔徑(D＝4V/A)。
殘留溶劑用一種方法定量庚烷、乙醇和二氯甲烷。設(shè)備由帶有Rtx 1301，30cm×0.53mm柱的HP 5890 Series 2氣相色譜儀組成。將約130mg微粒溶于10ml N，N-二甲基酰胺中。乙酸丙酯用作內(nèi)標。調(diào)節(jié)樣品制劑以便可定量低至0.03％濃度的二氯甲烷。
微粒制劑表1中列出的微粒批料以100g規(guī)模如上所述制備，其使用4A聚合物和比率為1.5∶1或1∶1的硅油與二氯甲烷，硅油粘度為350cs。制劑中毒蜥外泌肽4和賦形劑的用量也在表1中列出。
表1
*除了#5外所有制劑藥物的負荷為3％
孔隙率獲自壓汞孔隙率測定法的總壓入體積和所計算的平均孔徑示于表2中。平均孔徑與體外釋放之間的關(guān)系示于圖1中。
表2
圖1顯示了硫酸銨對體外初始釋放的影響。數(shù)據(jù)表明體外初始釋放與微?？讖较嚓P(guān)。用硫酸銨制備的制劑顯示了不同的體外釋放水平和可變的孔隙率，不象無硫酸銨的制劑表現(xiàn)出一致的孔隙率和釋放。在制備微粒期間水相中存在硫酸銨可在制備內(nèi)部乳劑期間可使藥物物質(zhì)鹽析。沉淀物微環(huán)境的差異可導致孔隙率的不同，因此改變初始釋放。在不用硫酸銨制備的制劑中未觀察到這種影響。與含毒蜥外泌肽4、蔗糖和硫酸銨的制劑比較，含蔗糖和毒蜥外泌肽4的制劑顯示出更加合意和一致的初始釋放水平。
圖2進一步證明孔隙率對體外釋放的影響以及加工條件即硅油與二氯甲烷比率對所形成微?？紫堵实挠绊憽：喲灾?，用硅油與二氯甲烷比率為1∶1(表1中制劑2-4和2-5)制備的微粒制劑，比用硅油與二氯甲烷比率為1.5∶1(表1中制劑2、2-1和2-2)制備的相同制劑具有更高的初始釋放。圖2提示更高的硅油與二氯甲烷比率導致造成較低初始釋放的較低孔隙率。
低溫SEM如上所述對表1中的2、3和5型制劑進行低溫SEM分析。圖3A-3B為所選擇的2型(制劑2-2，圖3A)和5型(5％毒蜥外泌肽4，2％蔗糖，圖3B)制劑的掃描顯微圖。圖4A-D分別為表1中制劑3-4、3-5、3-6和3-7的掃描顯微圖。再次在圖4A-D的低溫SEM橫截面中可觀察到使用可造成初始釋放變異性的硫酸銨所展示的孔隙率的變化。
殘留溶劑水平所給制劑中殘留溶劑的水平可影響制劑的Tg。測定了表1中2型和5型微粒制劑的殘留溶劑水平。用一種方法定量庚烷、乙醇和二氯甲烷。設(shè)備由帶有Rtx 1301，30m×0.53mm柱的HP 5890 Series 2氣相色譜儀組成。將約130mg微粒溶于10毫升N，N-二甲基甲酰胺中。乙酸丙酯用作內(nèi)標。調(diào)節(jié)樣品制備以便可定量低至0.03％濃度的二氯甲烷。
圖5為對表1中2型和5型微粒制劑(3或5％毒蜥外泌肽4，2％蔗糖)所作的殘留乙醇和二氯甲烷百分率的圖。圖5顯示當殘留溶劑量增加時Tg降低。
制備具有3％毒蜥外泌肽4和2％蔗糖的微粒鑒于微粒制劑中存在硫酸銨所引入的孔隙率變化以及孔隙率被鑒定為顯著影響初始釋放的特性，在進一步發(fā)現(xiàn)中不繼續(xù)用硫酸銨。
內(nèi)部乳滴粒徑的影響進行下列研究以確定方法參數(shù)對形成內(nèi)部乳劑以及所得乳劑的穩(wěn)定性的影響，和對得到的用不同方法參數(shù)所產(chǎn)生的微球體24小時體外釋放的影響。如上所述，通過對100g規(guī)模對進行超聲處理，或用帶36/4發(fā)生器的MT5000均化器(Kinematica AG，Switzerland)以低速(10,800rpm)或高速(21,300rpm)均化，形成水相和溶劑相內(nèi)部乳劑。通過不同技術(shù)形成內(nèi)部乳劑后，在取出等份試樣之前，將乳劑保留于反應器中用懸掛式攪拌器溫和攪動5、15或60分鐘。在指定保留時間后，如上所述將內(nèi)部乳劑進一步加工成微粒，然后如下所述測定每批的24小時體外釋放。
可用Horiba粒徑分析儀測定內(nèi)部乳滴粒徑特性用玻璃移液管從反應器中取出內(nèi)部乳劑的等份試樣。用移液管將約30滴內(nèi)部乳劑加入到20毫升螺帽閃爍管制瓶內(nèi)約10毫升6％Medisorb50∶504A PLG聚合物溶液中，然后混合。也用6％Medisorb50∶50 4A PLG聚合物溶液作為參考空白溶液。然后將約9毫升這種稀釋乳劑樣品轉(zhuǎn)移到干凈的10毫升Horiba樣品貯罐(holder)中。將該樣品貯罐蓋上蓋子以防聚合物溶劑快速蒸發(fā)。制備的樣品在每個藍棒(燈)0.65％-0.90％透射率讀數(shù)的可接受百分率范圍內(nèi)。在程序準備中選擇相對折射率設(shè)置在0.94-0.00i。然后用Horiba粒徑分析儀例如LA 910型來測量樣品滴徑。與該方法參數(shù)有關(guān)的數(shù)據(jù)和經(jīng)5、15和60分鐘保留時間得到的內(nèi)部乳滴粒徑以及得到的24小時體外釋放結(jié)果(在括號內(nèi))示于圖9中。
微球體表征就毒蜥外泌肽4微球體的藥物含量、粒徑、殘留溶劑、體外初始釋放和在大鼠中的PK特性等有關(guān)方面進行常規(guī)表征。提取藥物，以獲得對包膠后所選批料中毒蜥外泌肽4純度的初步評價。
體外初始釋放通過測量在釋放緩沖液(10mM HEPES，100mM NaCl，pH 7.4)中1小時后毒蜥外泌肽4的濃度，可測定毒蜥外泌肽4的初始釋放。室溫下將150±5mg微球體置于5.0毫升10mM HEPES，100mM NaCl，pH7.4緩沖液中，渦流振蕩約30秒以懸浮該溶液，然后置于37℃氣室中1小時。1小時后，從氣室取出樣品，上下顛倒數(shù)次進行混合，接著以3500rpm離心10分鐘。除去上清液，立即用下列條件通過HPLC進行分析柱TSK-GEL，7.8mm×30cm，5m(TSOH BIOSEP PART#08540)；柱爐溫度環(huán)境溫度；自動加樣器溫度6℃；流速0.8毫升/分鐘；檢測280納米；進樣體積10升；流動相35％乙腈/65％水，含0.1％TFA/升(v/v)；運行時間大約20分鐘。將于30mM乙酸鹽緩沖液，pH 4.5中制備的0.2mg/ml毒蜥外泌肽4本體藥物物質(zhì)用作標準品。
動物研究本文所述所有藥代動力學(PK)研究皆在重約500±50g的成年雄性Sprague-Dawley大鼠中進行。
對于微粒制劑的PK表征，每只動物在肩胛間區(qū)接受懸浮于稀釋劑(3％羧甲基纖維素、0.9％NaCl、0.1％Tween 20)中的微粒的皮下注射。通常劑量大約為每只大鼠1.0mg毒蜥外泌肽4，注射體積為0.75毫升。在給藥后0.5、2、4、6、10、24小時和2、4、7、10、14、17、21、24和28天通過側(cè)部尾靜脈采集血液樣品。立即將血液樣品置于含有EDTA的MICROTAINER管中，以約14,000Xg離心約2分鐘。然后將血漿轉(zhuǎn)移到無添加劑的MICROTAINER管中，貯存于-70℃直至分析時。用IRMA測定血漿毒蜥外泌肽濃度。
體內(nèi)釋放-IRMA定量血漿中毒蜥外泌肽4的方法為夾層免疫測定，用固相單克隆抗體EXE42-8.4來捕獲分析物，通過放射性碘標記單克隆抗體GLP-13-3來檢測。從標準校準曲線來定量計數(shù)界限。該測定對全長或完整毒蜥外泌肽4為特異性的，不能檢測毒蜥外泌肽4(3-39)。典型標準曲線范圍為30pg/ml到2000pg/ml，其視示蹤抗體的使用年限而定。
體外和體內(nèi)釋放如上所述來測試制劑2、2-1和2-2(3％毒蜥外泌肽4和2％蔗糖)的體外初始釋放。體外釋放分別為0.4％、0.4％和0.5％。所有3批也具有相對低的體內(nèi)初始釋放，0-1天Cmax范圍為1154-1555pg/ml。圖6是具有3％毒蜥外泌肽4和2％蔗糖(2-1)的制劑和僅具有3％毒蜥外泌肽4的制劑(1)及具有3％毒蜥外泌肽4和0.5％硫酸銨的制劑(4)的代表性藥代動力學曲線。使用1.5∶1的硅油與二氯甲烷比率，硅油粘度為350cs。
從圖6可看出，不含硫酸銨的制劑表現(xiàn)出較低的初始釋放。盡管僅含毒蜥外泌肽4的制劑顯示了適合的初始釋放，但與含毒蜥外泌肽4和蔗糖組合的制劑比較，該藥物包膠后的純度降低了。在制劑中加入糖降低了藥劑的降解。
上面比較的3種制劑2、2-1和2-2的體內(nèi)釋放曲線示于圖7中。所有3批表現(xiàn)出相對低的初始釋放，接著是“溝”(約第4天到第7天之間血清水平低)，接著在約第21天到第28天內(nèi)緩釋。這3種制劑的低初始釋放和釋放曲線形狀一致。
使用1∶1的硅油與二氯甲烷比率的制劑用1∶1的硅油與二氯甲烷比率制備表1中的制劑2-3、2-4和2-5(3％毒蜥外泌肽4，2％蔗糖)。這些制劑的初始釋放高于表1中的制劑2、2-1和2-2(3％毒蜥外泌肽4，2％蔗糖，硅油與二氯甲烷比率為1.5∶1)。具體而言，1.5∶1比率的制劑提供約0.4％的平均初始釋放，而1∶1比率的制劑提供約1.0％的平均初始釋放。在體內(nèi)觀察到相同的趨勢，1∶1比率時大鼠中0-1天的Cmax為2288±520pg/ml，而1.5∶1比率時大鼠中0-1天Cmax為1300±221pg/ml。
增加藥物負荷增加毒蜥外泌肽4負荷到4％，同時保持蔗糖為2％，會導致與3％負荷同樣范圍的體外和體內(nèi)初始釋放。
制備表1中的3種5型制劑(5％藥物負荷，2％蔗糖，1.5∶1的硅油與二氯甲烷比率)。5-1、5-2和5-3三批都表現(xiàn)出介于0.2-0.5％范圍內(nèi)的體外低初始釋放。相似地，制劑的體內(nèi)Cmax一致地為介于467pg/ml到1267pg/ml范圍內(nèi)的低值。圖8展示了所測試的這3批的藥代動力學數(shù)據(jù)圖。與具有2％蔗糖的3％毒蜥外泌肽4制劑的行為相比，5％的制劑在約第1天和第2天表現(xiàn)出更高的血清藥物水平。5％制劑曲線的其余部分與具溝接著主要在初始第21天到第28天釋放藥物的3％制劑相似。
盡管已通過其優(yōu)選實施方案對本發(fā)明進行了具體展示和闡述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員會理解，在不偏離所附權(quán)利要求書所包括的本發(fā)明范圍的情況下，可對形式和細節(jié)作出各種改變。
權(quán)利要求
1.一種生物活性多肽緩釋用組合物，該組合物基本上由生物相容性聚合物、生物活性多肽和糖組成，其中Cmax與Cave的比率為約3以下。
2.權(quán)利要求1的緩釋組合物，其中所述多肽選自胰高血糖素、胰高血糖素樣肽、毒蜥外泌肽、胰高血糖素樣肽激動劑、血管活性腸肽、免疫球蛋白、抗體、細胞因子、白細胞介素、巨噬細胞激活因子、干擾素、促紅細胞生成素、腫瘤壞死因子、集落刺激因子、胰島素、酶、腫瘤抑制劑、血液蛋白、促卵泡激素、生長激素、促腎上腺皮質(zhì)激素和促黃體激素釋放激素、NGF、EGF、胃泌素、GRH、防御素、腦啡肽和上述物質(zhì)的突變蛋白、類似物、截短、缺失和替代變體及藥學上可接受鹽。
3.權(quán)利要求2的緩釋組合物，其中所述生物活性多肽為葡糖調(diào)節(jié)性肽。
4.權(quán)利要求3的緩釋組合物，其中所述葡糖調(diào)節(jié)性肽選自GLP-1、GLP-2、毒蜥外泌肽3、毒蜥外泌肽4或其組合。
5.權(quán)利要求4的緩釋組合物，其中所述多肽為所述緩釋組合物總重量的約0.1％w/w-約10％w/w。
6.權(quán)利要求5的緩釋組合物，其中所述多肽為所述緩釋組合物總重量的約0.5％w/w-約5％w/w。
7.權(quán)利要求6的緩釋組合物6，其中所述組合物的總孔容積用壓汞孔隙率測定法測定為約0.1ml/g以下。
8.權(quán)利要求7的緩釋組合物，其中所述糖為所述緩釋組合物總重量的約0.01％w/w-約10％w/w。
9.權(quán)利要求8的緩釋組合物，其中所述糖為所述緩釋組合物總重量的約0.1％w/w-約5％w/w。
10.權(quán)利要求9的緩釋組合物，其中所述糖選自單糖、二糖、糖醇或其組合。
11.權(quán)利要求10的緩釋組合物，其中所述糖選自蔗糖、甘露醇和其組合。
12.權(quán)利要求9的緩釋組合物，其中所述生物相容性聚合物選自聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯/乙交酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸/乙醇酸共聚物、聚己酸內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酰胺酯、聚酐、聚氨基酸、聚原酸酯、聚氰基丙烯酸酯、聚對二氧雜環(huán)己酮、聚乙二酸烷二酯、生物降解性聚氨酯、其摻和物和其共聚物。
13.權(quán)利要求12的緩釋組合物，其中所述聚合物包含丙交酯/乙交酯共聚物。
14.權(quán)利要求13的緩釋組合物，其中所述聚合物為50∶50的丙交酯/乙交酯共聚物。
15.權(quán)利要求14的緩釋組合物，其中所述聚合物的比濃對數(shù)粘度為約0.3-0.5dL/g。
16.一種生物活性多肽緩釋用組合物，該組合物包括生物相容性聚合物，所述聚合物中分散有占該組合物重量的約3％w/w以上的毒蜥外泌肽4和約2％w/w以上的蔗糖。
17.一種生物活性多肽緩釋用組合物，該組合物基本上由以下物質(zhì)組成生物相容性聚合物、占該組合物重量的約3％w/w以上的毒蜥外泌肽4和約2％w/w以上的蔗糖。
18.一種生物活性多肽緩釋用組合物，該組合物由以下物質(zhì)組成生物相容性聚合物、占該組合物重量的約3％w/w以上的毒蜥外泌肽4和約2％w/w以上的蔗糖。
19.權(quán)利要求18的組合物，其中所述生物相容性聚合物選自聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯/乙交酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸/乙醇酸共聚物和其摻和物及其共聚物。
20.權(quán)利要求19的組合物，其中所述Cmax與Cave的比率為約3以下。
21.權(quán)利要求20的組合物，其中所述組合物的總孔容積用壓汞孔隙率測定法測定為約0.1ml/g以下。
22.一種治療患有2型糖尿病的患者的方法，該方法包括給予治療有效量的緩釋組合物，該緩釋組合物基本上由生物相容性聚合物、生物活性藥劑和糖組成，該生物活性藥劑選自毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽類似物、衍生物或激動劑，其中Cmax與Cave的比率為3以下。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述藥劑為毒蜥外泌肽4。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述緩釋組合物的生物相容性聚合物選自聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯/乙交酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸/乙醇酸共聚物和其摻和物及其共聚物。
25.權(quán)利要求24的方法，其中所述糖以該緩釋組合物總重量的約0.01％w/w-約10％w/w的濃度存在于該緩釋組合物中。
26.權(quán)利要求24的方法，其中所述組合物的總孔容積用壓汞孔隙率測定法測定為約0.1ml/g以下。
27.權(quán)利要求26的方法，其中所述毒蜥外泌肽4以該組合物總重量的約0.1％-約10％的濃度存在于該緩釋組合物中。
28.一種治療患有2型糖尿病的患者的方法，該方法包括給予治療有效量的緩釋組合物，該緩釋組合物由含分散于其中的占該組合物重量的約3％w/w以上的毒蜥外泌肽4和約2％w/w以上的蔗糖的生物相容性聚合物組成。
29.一種制備多肽緩釋用組合物的方法，該方法包括如下步驟a)通過將包含水溶性多肽和糖的水相與包含生物相容性聚合物和該聚合物的溶劑的油混合來形成混合物；b)形成來自步驟a的混合物的油包水乳劑；c)將凝聚劑加入到該混合物形成初期微粒，其中所述凝聚劑為以足夠量加入以達到硅油與聚合物溶劑比率為約1∶1-約1.5∶1的硅油；d)將初期微粒轉(zhuǎn)移到淬滅溶劑中以使微粒硬化；e)收集硬化的微粒；和f)干燥硬化的微粒。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述硅油與聚合物溶劑的比率為1.5∶1。
31.權(quán)利要求29的方法，其中所述聚合物以約10％w/v以下存在于油相中。
32.權(quán)利要求29的方法，其中所述聚合物選自聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯/乙交酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸/乙醇酸共聚物和其摻和物及其共聚物。
33.權(quán)利要求29的方法，其中所述多肽選自胰高血糖素、胰高血糖素樣肽、毒蜥外泌肽、胰高血糖素樣肽激動劑、血管活性腸肽、免疫球蛋白、抗體、細胞因子、白細胞介素、巨噬細胞激活因子、干擾素、促紅細胞生成素、腫瘤壞死因子、集落刺激因子、胰島素、酶、腫瘤抑制劑、血液蛋白、促卵泡激素、生長激素、促腎上腺皮質(zhì)激素和促黃體激素釋放激素、NGF、EGF、胃泌素、GRH、防御素、腦啡肽和上述物質(zhì)的突變蛋白、類似物、截短、缺失和替代變體及藥學上可接受鹽。
34.一種生物活性藥劑緩釋用組合物，該組合物包括50∶50DLPLG 4A聚合物、約3-5％(w/w)毒蜥外泌肽4和約2％(w/w)蔗糖，其中Cmax與Cave的比率為約3以下，該組合物的總孔容積為約0.1ml/g以下。
35.一種治療患有2型糖尿病的患者的方法，該方法包括給予治療有效量的緩釋組合物，該緩釋組合物包括50∶50DL PLG 4A聚合物、約3-5％(w/w)毒蜥外泌肽4和約2％(w/w)蔗糖，其中Cmax與Cave的比率為約3以下，該組合物的總孔容積為約0.1ml/g以下。
36.一種治療患有2型糖尿病的患者的方法，該方法包括通過給予多劑作為緩釋組合物的毒蜥外泌肽4，為患者提供治療有效的血漿濃度的毒蜥外泌肽4，該緩釋組合物包括50∶50DL PLG 4A聚合物、約3-5％(w/w)毒蜥外泌肽4和約2％(w/w)蔗糖，其中Cmax與Cave的比率為約3以下，該組合物的總孔容積為約0.1ml/g以下。
37.一種制備毒蜥外泌肽4緩釋用組合物的方法，該方法包括如下步驟a)通過將包含水溶性毒蜥外泌肽4多肽和糖的水相與包含存于二氯甲烷中的生物相容性50∶50PLGA 4A聚合物的油混合來形成混合物；b)形成來自步驟a的混合物的油包水乳劑，其中內(nèi)部乳滴粒徑為約0.2-0.4微米；c)將凝聚劑加入到該混合物中形成初期微粒，其中所述凝聚劑為以足夠量加入以達到硅油與聚合物溶劑比率為約1∶1-約1.5∶1的硅油，其中將所述硅油在小于或約3分鐘內(nèi)加入到油包水乳劑中，且將該凝聚混合物保持小于或約1分鐘；d)將初期微粒轉(zhuǎn)移到淬滅溶劑中以使微粒硬化，其中所述淬滅溶劑為庚烷/乙醇混合物，轉(zhuǎn)移時間為小于或約3分鐘；e)收集硬化的微粒；和f)干燥硬化的微粒。
38.一種適于通過25號針的注射用組合物，該組合物包括懸浮于注射用載體中的緩釋組合物，所述緩釋組合物包含50∶50 DL PLG 4A聚合物、約3-5％(w/w)毒蜥外泌肽4和約2％(w/w)蔗糖，其中Cmax與Cave的比率為約3以下，該組合物的總孔容積為約0.1ml/g以下，所述注射用載體包含存于水中的3.0％(w/v)羧甲基纖維素鈉、0.9％(w/v)氯化鈉和0.1％(v/v)聚山梨醇酯20，NF(Tween 20)。
39.一種適于通過25號針的注射用組合物，該組合物包括懸浮于注射用載體中的緩釋組合物，所述緩釋組合物包含50∶50 DL PLG 4A聚合物、約3-5％(w/w)毒蜥外泌肽4和約2％(w/w)蔗糖，其中該毒蜥外泌肽4具有14位甲硫氨酸為亮氨酸所取代的氨基酸取代，Cmax與Cave的比率為約3以下，該組合物的總孔容積為約0.1ml/g以下，所述注射用載體包含存于水中的3.0％(w/v)羧甲基纖維素鈉、0.9％(w/v)氯化鈉和0.1％(v/v)聚山梨醇酯20，NF(Tween 20)。
40.一種用于制備適于通過25號針的注射用組合物的藥盒，該藥盒包括兩支管制瓶和用法說明，其中一支管制瓶包含治療有效劑量的干燥緩釋組合物，所述緩釋組合物包含50∶50 DL PLG 4A聚合物、約3-5％(w/w)毒蜥外泌肽4和約2％(w/w)蔗糖，其中Cmax與Cave的比率為約3以下，該組合物的總孔容積為約0.1ml/g以下；另一支管制瓶包含注射用載體，所述注射用載體包含存于水中的3.0％(w/v)羧甲基纖維素鈉、0.9％(w/v)氯化鈉和0.1％(v/v)聚山梨醇酯20，NF(Tween20)；其中有足量的注射用載體以懸浮所述緩釋組合物至少30mg/ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物活性多肽緩釋用組合物，和形成及使用所述生物活性多肽緩釋用組合物的方法。本發(fā)明緩釋組合物包含其中分散有生物活性多肽和糖的生物相容性聚合物。
文檔編號A61K47/38GK101065116SQ200580019229
公開日2007年10月31日 申請日期2005年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月15日
發(fā)明者S·G·賴特, T·克里斯滕森, T·Y·耶奧, M·E·賴基, J·M·霍茨, R·庫馬, H·R·科斯坦蒂諾, C·史密斯, D·M·洛肯斯加德, J·T·H·翁, M·菲內(nèi)曼 申請人:安米林藥品公司, 阿爾克梅斯公司