專利名稱：抗腫瘤化合物間座殼內(nèi)酯的發(fā)酵基質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化合物的發(fā)酵基質(zhì)，尤其是涉及一種抗腫瘤化合物的發(fā)酵基質(zhì)。
背景技術(shù)：
化合物4-甲氧基-7-甲基3-氧-1，3-二氫異苯呋喃-5-甲醛(Diaporthelactone，定名為間座殼內(nèi)酯)最早為林昕、黃耀堅(jiān)等從一株海洋木棲真菌菜豆間座殼HLY2菌株分離獲得，該化合物具有抗腫瘤活性，并已申請(qǐng)發(fā)明專利(專利申請(qǐng)?zhí)?00410084813.X)。文獻(xiàn)未見有與本申請(qǐng)專利相同的發(fā)酵培養(yǎng)基配方的報(bào)道。利用液體發(fā)酵培養(yǎng)基，HLY2菌株液體發(fā)酵Diaporthelactone產(chǎn)量為34μg/L；利用固體發(fā)酵培養(yǎng)基，Diaporthelactone的固體發(fā)酵產(chǎn)量為387μg/L。
菜豆間座殼菌(Diaporhe phaseolorum)分離于福建省漳州市九龍江口浮宮鎮(zhèn)草埔頭村紅樹林生態(tài)區(qū)紅樹植物腐葉。文獻(xiàn)(裘緯蕃主編，菌物學(xué)大全[M]，北京科學(xué)出版社，1998)報(bào)道該屬真菌為植物寄生菌。該菌株在半海水配方馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)培養(yǎng)基上，生長(zhǎng)良好，菌絲純白，無(wú)明顯色素產(chǎn)生，不產(chǎn)孢子，培養(yǎng)10d以后，產(chǎn)生黑色子座。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用菜豆間座殼菌(Diaporhe phaseolorum)HLY2菌株發(fā)酵真菌代謝物間座殼內(nèi)酯的發(fā)酵基質(zhì)及其發(fā)酵方法。
本發(fā)明所采用的真菌為本申請(qǐng)發(fā)明人從福建省漳州市九龍江口浮宮鎮(zhèn)草埔頭(地名)紅樹林生態(tài)區(qū)的紅樹植物腐葉中分離得到的菌株HLY2，經(jīng)鑒定為菜豆間座殼菌(Diaporhephaseolorum)。該菌株已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，登記入冊(cè)的保藏編號(hào)為CCTCCNOM 204061，保藏的培養(yǎng)物名稱及注明的鑒別特征為菜豆間座殼菌Diaporhephaseolorum，保藏日為2004年9月1日。本發(fā)明所說(shuō)的真菌代謝產(chǎn)生的化合物4-甲氧基-7-甲基-3-氧-1，3-二氫異苯呋喃-5-甲醛(Diaporthelactone)的結(jié)構(gòu)式為
本發(fā)明所說(shuō)的抗腫瘤化合物Diaporthelactone的發(fā)酵基質(zhì)的組成及按質(zhì)量比的含量為馬鈴薯280～320g，葡萄糖90～110g，乳糖9～11g，硫酸胺9～11g，KH2PO40.8mmol，海水280～320ml，水補(bǔ)足1000ml，pH自然。
本發(fā)明所說(shuō)的抗腫瘤化合物Diaporthelactone的發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵步驟為將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種HLY2菌株，26～30℃通氣攪拌發(fā)酵7～10d，發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取6～36h，收集萃取所得的有機(jī)相，45℃減壓濃縮至干即為化合物Diaporthelactone的粗提物。
利用本發(fā)明所說(shuō)的抗腫瘤化合物Diaporthelactone的發(fā)酵基質(zhì)，采用常規(guī)的發(fā)酵技術(shù)，Diaporthelactone液體發(fā)酵的最高產(chǎn)量為40mg/L；固體發(fā)酵最高產(chǎn)量為552mg/L。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例將對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
實(shí)施例1本發(fā)明所說(shuō)的抗腫瘤化合物Diaporthelactone的發(fā)酵基質(zhì)的組成及其按質(zhì)量比的含量為馬鈴薯300g，葡萄糖100g，乳糖10g，硫酸胺10g，KH2PO40.8mmol，海水300ml，水補(bǔ)足1000ml，pH自然。發(fā)酵時(shí)，將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種HLY2菌株，30℃通氣攪拌發(fā)酵7d。發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取6h，收集萃取所得的有機(jī)相，45℃減壓濃縮至干即為化合物Diaporthelactone的粗提物。
實(shí)施例2與實(shí)施例1類似，其區(qū)別在于本發(fā)明所說(shuō)的抗腫瘤化合物Diaporthelactone的發(fā)酵基質(zhì)的組成及其按質(zhì)量比的含量為馬鈴薯280g，葡萄糖90g，乳糖9g，硫酸胺9g，KH2PO40.8mmol，海水280ml，水補(bǔ)足1000ml，pH自然。發(fā)酵時(shí)，將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種HLY2菌株，26℃通氣攪拌發(fā)酵10d。發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取12h，收集萃取所得的有機(jī)相，45℃減壓濃縮至干即為化合物Diaporthelactone的粗提物。
實(shí)施例3與實(shí)施例1類似，其區(qū)別在于本發(fā)明所說(shuō)的抗腫瘤化合物Diaporthelactone的發(fā)酵基質(zhì)的組成及其按質(zhì)量比的含量為馬鈴薯320g，葡萄糖110g，乳糖11g，硫酸胺11g，KH2PO40.8mmol，海水320ml，水補(bǔ)足1000ml，pH自然。發(fā)酵時(shí)，將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種HLY2菌株，28℃通氣攪拌發(fā)酵8d。發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取24h，收集萃取所得的有機(jī)相，45℃減壓濃縮至干即為化合物Diaporthelactone的粗提物。
權(quán)利要求
1.抗腫瘤化合物間座殼內(nèi)酯的發(fā)酵基質(zhì)，其特征在于其組成及按質(zhì)量比的含量為馬鈴薯280～320g，葡萄糖90～110g，乳糖9～11g，硫酸胺9～11g，KH2PO40.8mmol，海水280～320ml，水補(bǔ)足1000ml，pH自然。
2.如權(quán)利要求1所述的抗腫瘤化合物間座殼內(nèi)酯的發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵方法，其特征在于將發(fā)酵基質(zhì)滅菌后，接種HLY2菌株，26～30℃通氣攪拌發(fā)酵7～10d，發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取6～36h，收集萃取所得的有機(jī)相，45℃減壓濃縮至干即為化合物間座殼內(nèi)酯的粗提物。
全文摘要
抗腫瘤化合物間座殼內(nèi)酯的發(fā)酵基質(zhì)，涉及一種化合物的發(fā)酵基質(zhì)，尤其是涉及一種抗腫瘤化合物的發(fā)酵基質(zhì)。提供一種用菜豆間座殼菌HLY2菌株發(fā)酵真菌代謝物間座殼內(nèi)酯的發(fā)酵培養(yǎng)基。其組成及按質(zhì)量比的含量為馬鈴薯280～320g，葡萄糖90～110g，乳糖9～11g，硫酸胺9～11g，KH
文檔編號(hào)A61P35/00GK1904058SQ20051008567
公開日2007年1月31日 申請(qǐng)日期2005年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月25日
發(fā)明者黃耀堅(jiān), 鄭忠輝, 徐慶妍, 張蓮茹, 宋思揚(yáng), 蘇文金 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)