專利名稱：抗栓膠囊的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥品檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，尤指抗栓膠囊的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
抗栓膠囊集9蟲(chóng)7草3香共19位天然藥物，具有良好的活血化淤，抗栓通脈功效?？顾z囊以蟲(chóng)類為主組成，其中，水蛭有很強(qiáng)的溶栓作用，地龍則有很強(qiáng)的通經(jīng)絡(luò)作用。草類藥中以“當(dāng)歸”為首，加之馬錢子、延胡索，攜眾草方可以活血化瘀，補(bǔ)血生血，當(dāng)歸“一味頂四湯”，具有超強(qiáng)的活血補(bǔ)血作用；延胡索，能行血中氣滯，氣中血滯，專治一身上下諸痛；制馬錢子散結(jié)消腫，功專通痹止痛。香類藥中有蜂房、麝香、蟾酥、抗菌消炎，其中麝香有超強(qiáng)的穿透力，可以穿透血腦屏障，使眾藥直達(dá)病灶，藥到病除。蟲(chóng)類藥藥力宏大，迅速起效，可以治標(biāo)草類藥漸入病源，鞏固療效，可以治本香類藥的麝香可以穿透血腦屏障，直達(dá)病所。
抗栓膠囊組方復(fù)雜，療效受藥材的品質(zhì)和含量影響大，然而現(xiàn)有法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只及粉末顯微特征鑒別及膠囊劑檢測(cè)，定性檢測(cè)不全面，且不涉及定量檢測(cè)，無(wú)法保證藥品的質(zhì)量，進(jìn)而對(duì)藥品使用的安全性和有效性構(gòu)成威脅。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一套全面有效的檢測(cè)方法，以彌補(bǔ)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)的不足，嚴(yán)格控制抗栓膠囊的質(zhì)量穩(wěn)定性。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的抗栓膠囊的檢測(cè)方法，步驟是a)粉末顯微特征鑒別；b)薄層色譜法鑒別方中當(dāng)歸藥材；c)薄層色譜法鑒別方中地龍藥材；d)氣相色譜法鑒別方中麝香藥材；e)高效液相色譜法鑒別方中蟾酥藥材；f)薄層色譜法鑒別方中甘草藥材；g)薄層色譜法鑒別方中延胡索藥材；
h)按《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄制劑通則中膠囊劑項(xiàng)下規(guī)定進(jìn)行水分、裝量差異、崩解時(shí)限、重金屬檢查、砷鹽檢查、微生物限度檢查；i)高效液相色譜法法測(cè)定方中丹參酮IIA的含量；j)高效液相色譜法法測(cè)定方中士的寧的含量。
圖1當(dāng)歸尾藥材薄層色譜圖；圖2地龍藥材薄層色譜圖；圖3麝香酮?dú)庀嗌V圖；圖4蟾酥高效液相色譜圖；圖5甘草次算薄層色譜圖；圖6延胡索乙素薄層色譜圖；圖7丹參酮IIA高效液相色譜圖；圖8士的寧高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
通過(guò)下面給出的本發(fā)明的具體實(shí)施例可以進(jìn)一步清楚地了解本發(fā)明，但它們不是對(duì)本發(fā)明的限定。
I鑒別1)薄層色譜法鑒別方中當(dāng)歸藥材，如圖1所示。
取本品內(nèi)容物3g，加正己烷20ml超聲處理15分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液，另取當(dāng)歸尾對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
2)薄層色譜法鑒別方中地龍藥材，如圖2所示。
取本品內(nèi)容物10g，加水250ml加熱微沸回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上濃縮至浸膏，加甲醇8ml，攪拌，放置1小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振搖，分取苯層作為供試品溶液。另取地龍對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯(9∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
3)氣相色譜法鑒別方中麝香藥材，如圖3所示。
取本品內(nèi)容物8g，置500ml圓底燒瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混勻，連接揮發(fā)油測(cè)定器及回流冷凝管，加熱至沸，并保持微沸2小時(shí)，放冷，分取苯層作為供試品溶液。另取麝香酮對(duì)照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照氣相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIE)，用100％甲基硅酮(OV-1)為固定相；FID檢測(cè)器；彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm×0.32μm)；程序升溫200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min。分別吸取上述兩種溶液各4μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰。
4)高效液相色譜法鑒別方中蟾酥藥材，如圖4所示。
取本品內(nèi)容物20g，加石油醚(30～60℃)50ml冷浸30分鐘，時(shí)時(shí)振搖，棄去石油醚液，藥渣揮干，加氯仿80ml超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至約2ml，用中性氧化鋁(100～200目)4g在水浴上攪拌干燥，裝入中性氧化鋁柱(1.5×20cm)，用氯仿50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取華蟾酥毒基、酯蟾毒配基對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1ml含華蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VID)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈(60∶40)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)296nm；柱溫40℃。理論板數(shù)以華蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰計(jì)，應(yīng)分別不低于4000。分別吸取上述兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，應(yīng)有與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰。
5)薄層色譜法鑒別方中甘草藥材，如圖5所示。
取本品內(nèi)容物10g，加水40ml，鹽酸3ml加熱微沸回流1.5小時(shí)，濾過(guò)，棄去濾液，藥渣揮干，加乙醚30ml回流提取1小時(shí)，棄去乙醚液，藥渣揮干，加氯仿30ml回流提取1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1ml使溶解，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
6)薄層色譜法鑒別方中延胡索藥材，如圖6所示。
取本品內(nèi)容物5g，加氨水適量攪拌濕潤(rùn)后，加乙醚40ml放置24小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并醋酸層，用氨水調(diào)pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并氯仿液，用水洗至中性，加適量無(wú)水硫酸鈉，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5μl，對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(2∶1.7)為展開(kāi)劑，置氨蒸氣飽和的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干，碘熏數(shù)秒后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
II含量測(cè)定1)丹參酮IIA照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定。如圖7所示。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相 甲醇-水(85∶15)；流速 1.0ml/min；柱溫 40℃；檢測(cè)波長(zhǎng) 270nm。
理論板數(shù)以丹參酮IIA(C19H18O3)峰計(jì)，應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹參酮IIA對(duì)照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含丹參酮IIA16μg)。
供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，放置過(guò)夜，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液用濾膜(0.45μm)濾過(guò)，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每粒含丹參以丹參酮IIA(C19H18O3)計(jì)不得少于52μg。
2)士的寧照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定。如圖8所示。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用硅膠為填充劑； 氯仿-環(huán)己烷-二乙胺(75∶25∶2)流動(dòng)相；流速 1.0ml/min；柱溫 40℃；檢測(cè)波長(zhǎng) 254nm。
理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取士的寧對(duì)照品適量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿50ml與濃氨試液8ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時(shí)，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定，再稱定重量，用提取液補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取7次，每次25ml，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿提取7次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每粒含馬錢子以士的寧(C21H22N2O2)計(jì)為47～86μg。
綜上，本發(fā)明提供了抗栓膠囊的全面檢測(cè)方法，在原有標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上增加了針對(duì)方中主藥的定量、定性鑒別方法薄層色譜法鑒別方中當(dāng)歸藥材；薄層色譜法鑒別方中地龍藥材；氣相色譜法鑒別方中麝香藥材；高效液相色譜法鑒別方中蟾酥藥材；薄層色譜法鑒別方中甘草藥材；薄層色譜法鑒別方中延胡索藥材；高效液相色譜法法測(cè)定方中丹參酮IIA的含量；高效液相色譜法法測(cè)定方中士的寧的含量。有效保證了藥物的安全性有效性。
權(quán)利要求
1.抗栓膠囊的檢測(cè)方法，步驟是a)粉末顯微特征鑒別；b)薄層色譜法鑒別方中當(dāng)歸藥材；c)薄層色譜法鑒別方中地龍藥材；d)氣相色譜法鑒別方中麝香藥材；e)高效液相色譜法鑒別方中蟾酥藥材；f)薄層色譜法鑒別方中甘草藥材；g)薄層色譜法鑒別方中延胡索藥材；h)對(duì)膠囊劑進(jìn)行水分、裝量差異、崩解時(shí)限、重金屬檢查、砷鹽檢查、微生物限度檢查；i)高效液相色譜法法測(cè)定方中丹參酮IIA的含量；j)高效液相色譜法法測(cè)定方中士的寧的含量。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥品檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，尤指抗栓膠囊的檢測(cè)方法。在原有標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上增加了針對(duì)方中主藥的定量、定性鑒別方法薄層色譜法鑒別方中當(dāng)歸藥材；薄層色譜法鑒別方中地龍藥材；氣相色譜法鑒別方中麝香藥材；高效液相色譜法鑒別方中蟾酥藥材；薄層色譜法鑒別方中甘草藥材；薄層色譜法鑒別方中延胡索藥材；高效液相色譜法法測(cè)定方中丹參酮IIA的含量；高效液相色譜法法測(cè)定方中士的寧的含量。有效保證了藥物的安全性有效性。
文檔編號(hào)A61K36/50GK1951407SQ200510030620
公開(kāi)日2007年4月25日 申請(qǐng)日期2005年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月18日
發(fā)明者劉華 申請(qǐng)人:上海佰加壹醫(yī)藥有限公司