專利名稱:一種促血管新生的中藥復(fù)方制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方制劑,尤其涉及一種促血管新生的中藥復(fù)方制劑。
背景技術(shù):
目前缺血性心臟病的治療方法主要有藥物治療、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(CABG)、經(jīng)皮冠脈內(nèi)血管成形術(shù)(PTCA)以及心肌內(nèi)激光打孔等,但部分患者藥物效果不佳,又不適宜血管重建術(shù),且CABG和PTCA術(shù)后25%-50%的再狹窄率至今尚無(wú)完全解決的辦法,因此國(guó)際上心血管病學(xué)者設(shè)想通過(guò)治療性血管新生來(lái)減輕心肌缺血,即血管新生療法受到越來(lái)越多的重視,現(xiàn)已成為冠心病治療研究的最新熱點(diǎn)。機(jī)體組織缺血時(shí)往往有側(cè)枝形成,如冠狀動(dòng)脈急性閉塞時(shí)主要通過(guò)原有小動(dòng)脈擴(kuò)張維持灌注量,而漸進(jìn)性閉塞時(shí),血管新生側(cè)枝形成則對(duì)血流量的維持更為重要。血管新生療法正是通過(guò)強(qiáng)化這一過(guò)程來(lái)治療冠心病。研究發(fā)現(xiàn)多種生長(zhǎng)因子能促進(jìn)血管新生,因而通過(guò)給予外源性生長(zhǎng)因子或促進(jìn)它們產(chǎn)生的藥物,可以達(dá)到自身冠脈搭橋的目的。
中草藥治療冠心病雖然有著悠久的歷史,但按照現(xiàn)代醫(yī)學(xué),尤其是循證醫(yī)學(xué)的標(biāo)準(zhǔn),中草藥治療冠心病心肌缺血尚未獲得確切療效的證據(jù)。如果中草藥能夠促血管新生,其作用機(jī)理與應(yīng)用值得探討。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種促血管新生的中藥復(fù)方制劑,其具有促進(jìn)缺血心肌血管生成的作用,從而能有效治療冠心病心肌缺血。
為解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明一種促血管新生的中藥復(fù)方制劑,由以下重量比的原料藥制成降香5%~95%,紅景天5%~95%。
優(yōu)選為降香75%,紅景天25%。
本發(fā)明選擇降香、紅景天進(jìn)行組合,將這些藥材組合使得各藥物功效產(chǎn)生協(xié)同作用,從而能有效促血管新生。其中,降香為豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T.Chen樹(shù)干和根的干燥心材;紅景天為景天科植物大花紅景天Rhodiola crenulata(Hook.L.Thoms.)H.Ohba的干燥根及根莖。降香具有理氣、補(bǔ)氣的功效,紅景天具有活血化淤的功效。
為了達(dá)到更好的療效,本發(fā)明還與白芍進(jìn)行組合。白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。白芍具有補(bǔ)血養(yǎng)血的功效。三味藥合用,可平補(bǔ)氣血,行氣化瘀,使補(bǔ)而不滯,虛實(shí)兼顧。
本發(fā)明中藥復(fù)方制劑還可以由以下重量比的原料藥制成降香8%~90%,紅景天8%~90%,白芍2%~40%。
優(yōu)選為降香40%,紅景天20%,白芍40%。
本發(fā)明中藥復(fù)方制劑是中藥內(nèi)服制劑,優(yōu)選為顆粒劑、片劑、膠囊劑或口服液。
本發(fā)明的中藥復(fù)方制劑可以采用中藥制劑的常規(guī)方法制備。例如可以在一定量、一定組成的原料藥中,加入一定量的萃取劑,分別加熱回流提取2次,時(shí)間分別為2h、1h,過(guò)濾,合并萃取液,濃縮,得中間體。加入一定的輔料,可得不同劑型的內(nèi)服制劑,如顆粒劑、片劑、膠囊劑或口服液。
本發(fā)明中藥復(fù)方制劑的用量和療程可根據(jù)劑型、患者的年齡、疾病的輕重程度作適當(dāng)調(diào)整,但一般為每日口服2次,每次2片(粒)(袋)(瓶),以6個(gè)月為一個(gè)療程,可連續(xù)使用3個(gè)療程或更長(zhǎng)時(shí)間。
本發(fā)明具有以下有益效果經(jīng)過(guò)藥效學(xué)研究,比較單味藥物降香、紅景天、白芍和本發(fā)明中藥復(fù)方制劑的量效曲線,在常用濃度下,復(fù)方提取物的藥效要比單味藥物更為強(qiáng)大,證實(shí)了本發(fā)明復(fù)方制劑的合理性和配伍的必要性。采用ABC法檢測(cè)雞胚CAM組織中血管內(nèi)皮VIII因子,證實(shí)了滴加本發(fā)明復(fù)方提取物藥液后,胚層增生,間充質(zhì)中的新生血管確實(shí)增加。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示本發(fā)明中藥復(fù)方制劑在心臟內(nèi)科臨床,具有促進(jìn)缺血心肌血管生成作用,從而能有效治療冠心病心肌缺血。
圖1是補(bǔ)氣理氣藥物的促血管新生比較圖;圖2是活血化淤藥物的促血管新生比較圖;圖3是養(yǎng)血補(bǔ)血藥物的促血管新生比較圖;圖4是本發(fā)明各藥物的促血管新生效應(yīng)和濃度的關(guān)系曲線圖。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明的有益效果作進(jìn)一步的闡述試驗(yàn)例1促血管新生作用研究(單味藥物)選擇11種中草藥降香、前胡、黃芪、黨參、紅花、丹參、紅景天、赤芍、川芎、當(dāng)歸和白芍,在雞胚絨毛尿囊膜(CAM)模型上,以生理鹽水為陰性對(duì)照,生長(zhǎng)因子FGF為陽(yáng)性對(duì)照,以血管指數(shù)為主要藥效指標(biāo),研究其促血管新生的作用。
1.原料和試劑1)選取三組待選藥物中草藥,理氣補(bǔ)氣組降香、前胡、黃芪、黨參;活血化淤組紅花、丹參、紅景天、赤芍、川芎;養(yǎng)血補(bǔ)血組藥物當(dāng)歸、白芍(購(gòu)自上海眾益達(dá)號(hào)中藥店);2)孵育第7天的雞胚(上海滬廣家禽育種有限公司);3)0.45μm和0.25μm微孔濾膜;4)陽(yáng)性對(duì)照藥物bFGF(即貝復(fù)濟(jì),珠海東大生物制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)(98)衛(wèi)藥準(zhǔn)字S-01號(hào),總濃度36000Au/ml)。
2.儀器微量進(jìn)樣器,眼科鑷及剪,無(wú)菌透明膜,解剖顯微鏡(8X或16X),打孔器(直徑5mm)等。
3.實(shí)驗(yàn)方法3.1被測(cè)物的制備(1)各中藥提取物的制備在各中藥中,加入10倍藥材量的水,浸泡1小時(shí),加熱回流提取2小時(shí),過(guò)濾。藥渣中再加入8倍量水繼續(xù)加熱回流1小時(shí),過(guò)濾。合并兩次濾液,于水浴上濃縮成每毫升相當(dāng)于原藥材0.5g/ml的母液,用0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾消毒后備用。
(2)濾膜載體的制備利用打孔器將0.45μm的微孔濾膜制成直徑5mm的圓片,121℃高壓滅菌30分鐘后待用。
3.2中藥對(duì)CAM血管生成影響效應(yīng)之測(cè)定(參考張樹(shù)成等法[1])(1)雞胚孵育若干白皮種蛋消毒后放入37℃孵化箱,氣室向上,每天小心轉(zhuǎn)動(dòng)3-4次,至第6天用照卵燈選擇良好的雞胚供實(shí)驗(yàn)使用;(2)取孵化第7天的雞胚在氣室端鉆約1.0mm的小孔,并穿透氣室殼膜,在胚頭右下方劃定1cm×1cm的位置開(kāi)窗,揭除該處蛋殼及殼膜,小心露出絨毛尿囊膜;(3)將濾膜放在絨毛尿囊膜的血管較少部位,用微量進(jìn)樣器將待測(cè)液(0.5g/ml)或生理鹽水5μl滴入,滅菌透明膠帶封窗后放入孵化箱;(4)孵化72小時(shí)后,取出雞胚,用甲醇∶丙醇=1∶1的混和固定液固定30分鐘后將膜取出展開(kāi),貼在濾紙上,晾干后拍照保存;(5)血管計(jì)數(shù)采用“血管指數(shù)”進(jìn)行盲法計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí),以濾膜的圓心為圓心,在其周圍形成一個(gè)1mm的圓環(huán)。凡經(jīng)過(guò)圓環(huán)的放射狀血管,只要可以辨認(rèn),無(wú)論是毛細(xì)血管、小動(dòng)脈,還是小靜脈,若與濾膜半徑的夾角小于45度者即可計(jì)數(shù)。在環(huán)內(nèi)分支出的新血管應(yīng)單獨(dú)計(jì)數(shù)。
4.結(jié)果研究結(jié)果顯示理氣補(bǔ)氣、活血化淤和養(yǎng)血補(bǔ)血中藥都存在不同程度的促血管新生作用,但和陽(yáng)性對(duì)照藥bFGF相比都呈弱勢(shì),并有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異,分析可能與藥物濃度或中藥中有效成分的純度有關(guān)。三組藥物中,從對(duì)血管計(jì)數(shù)這一指標(biāo)的影響來(lái)看,降香、紅景天和白芍在各組中表現(xiàn)最顯著,與陰性對(duì)照組的差異最明顯,而其余各藥均有一定效果。
同類舉例
第一組補(bǔ)氣理氣藥物
如圖1所示,在上述補(bǔ)氣理氣藥物中,從對(duì)血管計(jì)數(shù)這一指標(biāo)的影響來(lái)看,降香的表現(xiàn)最顯著,促血管新生效果最明顯。
第二組活血化瘀藥物
如圖2所示,在上述活血化瘀藥物中,從對(duì)血管計(jì)數(shù)這一指標(biāo)的影響來(lái)看,紅景天的表現(xiàn)最顯著,促血管新生效果最明顯。
第三組養(yǎng)血補(bǔ)血藥物
如圖3所示,在上述養(yǎng)血補(bǔ)血藥物中,從對(duì)血管計(jì)數(shù)這一指標(biāo)的影響來(lái)看,白芍的表現(xiàn)最顯著,促血管新生效果最明顯。
試驗(yàn)例2促血管新生作用研究(組合藥物)將75%的降香、25%的紅景天配伍得中藥復(fù)方1;將40%的降香、20%的紅景天、40%的白芍配伍得中藥復(fù)方2。對(duì)于五種中藥提取物(降香、紅景天、白芍、復(fù)方1、復(fù)方2)采用5個(gè)劑量組,及陽(yáng)性對(duì)照(bFGF)分別采用3個(gè)劑量組,進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果加以比較
結(jié)果1.六種藥物的血管指數(shù)值
2.平滑曲線的描繪如圖4所示。
結(jié)果表明采用同一濃度時(shí),復(fù)方1、復(fù)方2的促血管新生效應(yīng)均強(qiáng)于其他單味藥物,且復(fù)方1與復(fù)方2作用的效果及趨勢(shì)幾乎是一致的。
試驗(yàn)例3免疫組化法鑒定新生的血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管結(jié)構(gòu)1.原料和試劑標(biāo)本CAM組織標(biāo)本,取樣時(shí)要求同Barnhill和Ryan的組織學(xué)分析,取得陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和新復(fù)方制劑組的代表樣本,石蠟切片,厚4μm。
試劑1)兔抗人第八因子多克隆抗體(注DAKO兔抗人八因子抗體與雞有強(qiáng)烈的交叉反應(yīng)),工作濃度1∶100,DAKO產(chǎn)品;2)生物素兔抗小鼠IgG(b-RAMC),工作濃度1∶100,Vecter公司產(chǎn)品;3)ABC試劑(至少在用前半小時(shí)配制),工作濃度1∶100,Vecter公司產(chǎn)品;4)正常兔血清,工作濃度1∶20,實(shí)驗(yàn)室自制;5)0.3%H2O2-甲醇溶液(臨用前配1ml的30%H2O2加甲醇溶液至100ml,充分混勻);6)0.1%胰蛋白酶消化液(稱取胰蛋白酶100mg,無(wú)水Cacl2100mg,放于小燒杯內(nèi),加少量蒸餾水調(diào)成糊狀,再稀釋至100ml,用0.1%mol/LNaOH調(diào)PH至7.8,用前預(yù)溫,使溶液溫度達(dá)到37℃);7)DAB顯色液(即3,3’-二氨基聯(lián)苯胺顯色液)DAB取5mg,0.05mol/LpH7.6的TBS10ml,30%H2O25ul,將DAB溶于TBS中,充分?jǐn)嚢枋怪芙夂螅秒p層濾紙過(guò)濾,用前加30%H2O25μl,顯色時(shí)間5-10min,顯色陽(yáng)性結(jié)果為棕褐色。(注0.05mol/L pH7.6 TBS配制0.2mol/Ltris250ml;0.1mol/L Hcl400ml;Nacl8.5g;蒸餾水加至1000ml);8)0.01mol/l pH7.4 PBS;9)1%甲基綠。
2.實(shí)驗(yàn)方法染色步驟1)石蠟切片常規(guī)脫蠟后,用自來(lái)水洗,再用蒸餾水洗;2)切片入0.3%H2O2-甲醇溶液,37℃,30min,以消除組織內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性;3)切片經(jīng)水洗,蒸餾水洗,入已預(yù)熱的0.1%胰蛋白酶消化液,37℃,30min;4)切片經(jīng)蒸餾水洗,再用PBS洗5min*3次;
5)擦去組織周圍PBS,滴加1∶20正常兔血清,置切片于濕盒內(nèi),37℃,20min;6)傾去正常兔血清,滴加1∶100的多克隆抗體,37℃,1小時(shí),移至4℃冰箱過(guò)夜;7)隔夜取出的切片以PBS洗5min*3次;8)滴加1∶100b-RAMC,37℃,1小時(shí),切片以PBS洗5min*3次;9)滴加1∶100的ABC試劑,37℃,30min-45min,切片以PBS洗5min*3次;10)滴加DAB顯色液,顯色時(shí)間為5-10min(顯微鏡下控制顯色程度);11)切片經(jīng)蒸餾水洗,入1%甲基綠復(fù)染細(xì)胞核;切片脫水、透明、封固、鏡下觀察。
3.結(jié)果觀察標(biāo)本的橫切面,上下兩層為雞胚尿囊膜外胚層的上皮,中間是間充質(zhì)血管層,其中可見(jiàn)一根中等程度大小的血管,而當(dāng)給予藥物刺激后,可見(jiàn)有上層的外胚層上皮增生,中間的間充質(zhì)層血管到處可見(jiàn),即使在低倍鏡視野中也能觀察得很清楚。
血管八因子的檢測(cè)結(jié)果從另一方面顯示復(fù)方1、復(fù)方2與陰性對(duì)照相比,明顯存在較多的陽(yáng)性細(xì)胞,和陽(yáng)性對(duì)照組的結(jié)果很接近。這一組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果和觀察血管指數(shù)定量指標(biāo)的結(jié)論是一致的,血管新生不僅表現(xiàn)在宏觀上的血管數(shù)目增多,血管直徑加大,而且有一致的組織學(xué)變化,通過(guò)第八因子多克隆抗體和血管內(nèi)抗原結(jié)合染色后觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞,提示新生血管的生成和較大血管的數(shù)目較陰性對(duì)照組明顯增多。
研究表明采用ABC法檢測(cè)雞胚CAM組織中血管內(nèi)皮VIII因子,證實(shí)了滴加本發(fā)明的復(fù)方1、復(fù)方2藥液后,胚層均增生,間充質(zhì)中的新生血管確實(shí)增加。
以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述實(shí)施例1稱取原料藥降香30克,紅景天570克,在該原料藥中,加入10倍量的水,加熱回流提取2h,過(guò)濾;再加入8倍量的水,加熱回流提取1h,過(guò)濾;棄藥渣,合并兩次萃取液。濃縮,干燥,得干浸膏;再加入適量輔料后,制得顆粒劑。
實(shí)施例2稱取原料藥降香450克,紅景天150克,在該原料藥中,加入10倍量的水,加熱回流提取2h,過(guò)濾;再加入8倍量的水,加熱回流提取1h,過(guò)濾;棄藥渣,合并兩次萃取液。濃縮,干燥,得干浸膏;再加入適量輔料后,制得片劑。
實(shí)施例3稱取原料藥降香570克,紅景天30克,在該原料藥中,加入10倍量的水,加熱回流提取2h,過(guò)濾;再加入8倍量的水,加熱回流提取1h,過(guò)濾,取濾液,濃縮至一定體積,加入適量輔料,灌裝制得口服液。
實(shí)施例4稱取原料藥降香48克,紅景天540克,白芍12克,在該原料藥中,加入10倍量的水,加熱回流提取2h,過(guò)濾;再加入8倍量的水,加熱回流提取1h,過(guò)濾;棄藥渣,合并兩次萃取液。濃縮,干燥,得干浸膏;加入適量輔料,制粒,灌制成膠囊劑。
實(shí)施例5稱取原料藥降香240克,紅景天120克,白芍240克,在該原料藥中,加入10倍量的水,加熱回流提取2h,過(guò)濾;再加入8倍量的水,加熱回流提取1h,過(guò)濾;棄藥渣,合并兩次萃取液。濃縮,干燥,得干浸膏;再加入適量輔料后,制得顆粒劑。
實(shí)施例6稱取原料藥降香540克,紅景天48克,白芍12克,在該原料藥中,加入10倍量的水,加熱回流提取2h,過(guò)濾;再加入8倍量的水,加熱回流提取1h,過(guò)濾;棄藥渣,合并兩次萃取液。濃縮,干燥,得干浸膏;再加入適量輔料后,制得片劑。
實(shí)施例7稱取原料藥降香300克,紅景天300克,在該原料藥中,加入10倍量的水,加熱回流提取2h,過(guò)濾;再加入8倍量的水,加熱回流提取1h,過(guò)濾,取濾液,濃縮至一定體積,加入適量輔料,灌裝制得口服液。
實(shí)施例8稱取原料藥降香360克,紅景天120克,白芍120克,在該原料藥中,加入10倍量的水,加熱回流提取2h,過(guò)濾;再加入8倍量的水,加熱回流提取1h,過(guò)濾;棄藥渣,合并兩次萃取液。濃縮,干燥,得干浸膏;加入適量輔料,制粒,灌制成膠囊劑。
權(quán)利要求
1.一種促血管新生的中藥復(fù)方制劑,其特征在于,由以下重量比的原料藥制成降香5%~95%,紅景天5%~95%。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方制劑,其特征在于,所述原料藥的重量比為降香75%,紅景天25%。
3.如權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方制劑,其特征在于,由以下重量比的原料藥制成降香8%~90%,紅景天8%~90%,還包括白芍2%~40%。
4.如權(quán)利要求3所述的中藥復(fù)方制劑,其特征在于,所述原料藥的重量比為降香40%,紅景天20%,白芍40%。
5.如權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方制劑,其特征在于,所述的中藥復(fù)方制劑是中藥內(nèi)服制劑。
6.如權(quán)利要求5所述的中藥復(fù)方制劑,其特征在于,所述的中藥內(nèi)服制劑為顆粒劑、片劑、膠囊劑或口服液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種促血管新生的中藥復(fù)方制劑,其主要是由降香、紅景天按一定重量比制備而成。本發(fā)明中藥復(fù)方制劑具有促進(jìn)缺血心肌血管生成作用,能有效治療冠心病心肌缺血。
文檔編號(hào)A61K9/20GK1951414SQ20051003061
公開(kāi)日2007年4月25日 申請(qǐng)日期2005年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月18日
發(fā)明者范維虎, 阮克鋒, 李勇, 王娟, 蔣霞, 沈平孃, 葉子, 林志宏 申請(qǐng)人:國(guó)家中藥制藥工程技術(shù)研究中心, 上海中藥制藥技術(shù)有限公司