專(zhuān)利名稱：一種苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥的制備方法，屬于制藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
作為一種夏季時(shí)令蔬菜，苦瓜已有數(shù)百年食用和藥用歷史?？喙嫌星迨顪鞜?、明目解毒的功能，主治熱病煩渴引飲、中暑、痢疾、赤眼疼痛、癰腫丹毒、惡瘡。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，苦瓜果實(shí)有兩大明顯的用途倍受大家關(guān)注，即苦瓜果實(shí)的治療糖尿病和苦瓜籽的抗HIV的作用。尤其以苦瓜果實(shí)降糖尿病的作用已經(jīng)被開(kāi)發(fā)成相應(yīng)的原料藥和各類(lèi)保健藥品，上市銷(xiāo)售，但對(duì)其抗病毒活性作用的應(yīng)用開(kāi)發(fā)卻大大落后，至今并未出現(xiàn)相應(yīng)的原料藥和保健藥品面世。
發(fā)明內(nèi)容
為開(kāi)發(fā)利用苦瓜果實(shí)的抗病毒活性作用，本發(fā)明提供了一種苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥的制備方法，該方法通過(guò)對(duì)苦瓜果實(shí)中抗多種病毒的活性部位群的提取分離制得可抗多種病毒的原料藥。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥的制備方法，其具體步驟如下首先將苦瓜果實(shí)洗凈、打漿、榨汁，然后將所得果汁經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂富集，再將富集物用醇水溶液洗脫，最后收集醇水溶液，經(jīng)濃縮、干燥，所得黃褐色粉末即為苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥。
制備中用于吸附果汁中抗病毒活性成分的大孔吸附樹(shù)脂為D4006、AB8、D101，D301、NKA或S-9樹(shù)脂，大孔吸附樹(shù)脂/新鮮苦瓜果汁的用量比為10～100ml/L之間，最佳比例為50ml/L。洗脫富集物的醇水溶液為可以用甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙醇水溶液，最好為乙醇水溶液；醇水溶液體積百分比濃度為50％～100％，最好為75％，洗脫溶液體積為所用樹(shù)脂體積的2～50倍，以10倍體積為宜。
本發(fā)明利用大孔吸附樹(shù)脂選擇性地吸附苦瓜果實(shí)中含有的抗多種病毒成分的活性部分，通過(guò)回收溶劑而得到抗病毒原料藥。由于所得的干燥的苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥可在相關(guān)單方和復(fù)方制劑中的應(yīng)用，因此本發(fā)明在目前現(xiàn)有技術(shù)只開(kāi)發(fā)了苦瓜降糖原料藥和相應(yīng)產(chǎn)品的狀況下，對(duì)苦瓜果實(shí)的多種抗病毒活性作用進(jìn)行了有效的開(kāi)發(fā)和利用。而且，本發(fā)明采用大孔吸附樹(shù)脂吸附富集抗病毒成分，具有工藝簡(jiǎn)單穩(wěn)定、容易中試放大、容易控制、重復(fù)性好、提取效率高。
具體實(shí)施例方式
將新鮮的苦瓜果實(shí)50公斤洗凈、去籽打漿，用200目濾布?jí)赫ミ^(guò)濾，所得30升苦瓜果汁，于0～4℃保存?zhèn)溆谩?br>
實(shí)施例1取苦瓜果汁1升，讓其流過(guò)裝有10毫升D101大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用20毫升95％乙醇洗滌大孔樹(shù)脂，收集洗脫液，濃縮干燥，得0.2克黃褐色粉末產(chǎn)品。
實(shí)施例2取苦瓜果汁1升，讓其流過(guò)裝有50毫升D101大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用500毫升75％乙醇洗滌大孔樹(shù)脂，收集洗脫液，濃縮干燥，得0.95克黃褐色粉末產(chǎn)品。
實(shí)施例3取苦瓜果汁1升，讓其流過(guò)裝有100毫升D101大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用1000毫升50％乙醇洗滌大孔樹(shù)脂，收集洗脫液，濃縮干燥，得1.05克黃褐色粉末產(chǎn)品。
實(shí)施例4取苦瓜果汁1升，讓其流過(guò)裝有50毫升D301大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用500毫升75％乙醇洗滌大孔樹(shù)脂，收集洗脫液，濃縮干燥，得1.00克黃褐色粉末產(chǎn)品。
實(shí)施例5取苦瓜果汁1升，讓其流過(guò)裝有50毫升D4006大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用500毫升75％乙醇洗滌大孔樹(shù)脂，收集洗脫液，濃縮干燥，得1.10克黃褐色粉末產(chǎn)品。
實(shí)施例6取苦瓜果汁1升，讓其流過(guò)裝有50毫升AB8大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用500毫升75％甲醇洗滌大孔樹(shù)脂，收集洗脫液，濃縮干燥，得0.95克黃褐色粉末產(chǎn)品。
實(shí)施例7取苦瓜果汁1升，讓其流過(guò)裝有50毫升NKA大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用500毫升75％甲醇洗滌大孔樹(shù)脂，收集洗脫液，濃縮干燥，得0.99克黃褐色粉末產(chǎn)品。
實(shí)施例8取苦瓜果汁1升，讓其流過(guò)裝有50毫升S-9大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用500毫升75％甲醇洗滌大孔樹(shù)脂，收集洗脫液，濃縮干燥，得1.01克黃褐色粉末產(chǎn)品。
實(shí)施例9取苦瓜果汁20升，讓其流過(guò)裝有1000毫升4006大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用10000毫升75％乙醇洗滌大孔樹(shù)脂，收集洗脫液，濃縮干燥，得22克黃褐色粉末產(chǎn)品，即抗病毒原料藥。
對(duì)上述實(shí)施例所得的抗病毒原料藥進(jìn)行苦瓜提取物細(xì)胞毒性測(cè)定在24孔板上，加入0.8×103/ml濃度的Hep-2細(xì)胞1ml/孔，培養(yǎng)24h，棄上清液，加入含苦瓜抗病毒原料藥的維持液。藥物濃度分別為3、6、12、24、48、96、192μg/ml；37℃，5％CO2孵箱培養(yǎng)72h，以MMT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。每一藥物劑量均重復(fù)4孔，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照。藥物對(duì)Hep-2細(xì)胞的毒性表現(xiàn)為細(xì)胞增殖緩慢，顆粒增多，細(xì)胞大小不均，形態(tài)不規(guī)則，折光性增強(qiáng)。由于細(xì)胞代謝活性降低，MTT法檢測(cè)到的細(xì)胞活率下降。本實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)得到苦瓜提取液對(duì)Hep-2細(xì)胞的TC50為75.8μg/ml。
分別將100TCID50/0.1ml的CVB3和ADV與含苦瓜抗病毒原料藥的溶液等量混合，藥物終濃度為3、6、12、24、48μg/ml加到已長(zhǎng)滿單層的Hep-2的細(xì)胞中，37℃，作用90min，加細(xì)胞維持液，37，5％CO2孵箱培養(yǎng)，ADV培養(yǎng)72h，CVB3培養(yǎng)30h，逐日觀察CPE，最后用MMTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照組、病毒對(duì)照組。在上述各濃度下，苦瓜提取物對(duì)CVB3的抑制率分別為3.92％、7.84％、12.8％、39.50％、66.90％，半數(shù)有效濃度[EC50(μg/ml)]35.4，治療指數(shù)(TI)2.96；；對(duì)ADV的抑制率分別為3.92％、23.86％、48.80％、69.50％、84.90％，半數(shù)有效濃度[EC50(μg/ml)]8.6，治療指數(shù)(TI)12.18。
將100TCID50/0.1ml的HSV-I、HSV-II與苦瓜提取液等量混合，藥物終濃度為0.3、0.9、2.7、8.1、24.3μg/ml，37℃，作用90min，加到已長(zhǎng)滿單層的Hep-2細(xì)胞中，0.2ml/孔，37℃，吸附90min，棄上清，加細(xì)胞維持液，37℃，5％ CO2孵箱培養(yǎng)72h，逐日觀察CPE，最后用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。同時(shí)設(shè)立正常細(xì)胞對(duì)照組、病毒對(duì)照組。在上述各濃度下，苦瓜提取物對(duì)HSV-I的抑制率分別為5.5％、12.6％、20.0％、35.2％、56.3％，半數(shù)有效濃度[EC50(μg/ml)]11.1，治療指數(shù)(TI)6.8；對(duì)HSV-II的抑制率分別為10.5％、13.0％、26.5％、36.4％、65.3％，半數(shù)有效濃度[EC50(μg/ml)]8.9，治療指數(shù)(TI)8.5。
權(quán)利要求
1.一種苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥的制備方法，其特征在于采用如下具體步驟首先將苦瓜果實(shí)洗凈、打漿、榨汁，然后將所得果汁經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂富集，再將富集物用醇水溶液洗脫，最后收集醇水溶液，經(jīng)濃縮、干燥，所得黃褐色粉末即為苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥的制備方法，其特征在于用于吸附果汁中抗病毒活性成分的大孔吸附樹(shù)脂為D4006、AB8、D101，D301、NKA或S-9樹(shù)脂，大孔吸附樹(shù)脂/新鮮苦瓜果汁的用量比為10～100ml/L之間，最佳比例為50ml/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥的制備方法，其特征在于洗脫富集物的醇水溶液為可以用甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙醇水溶液，最好為乙醇水溶液；醇水溶液體積百分比濃度為50％～100％，最好為75％，洗脫溶液體積為所用樹(shù)脂體積的2～50倍，以10倍體積為宜。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥的制備方法，該方法先將苦瓜果實(shí)洗凈、打漿、榨汁，所得果汁經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂富集，富集物用醇水洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥，所得殘留物即為苦瓜果實(shí)抗病毒原料藥。本發(fā)明在目前現(xiàn)有技術(shù)只開(kāi)發(fā)了苦瓜降糖原料藥和相應(yīng)產(chǎn)品的狀況下，對(duì)苦瓜果實(shí)的多種抗病毒活性作用進(jìn)行了有效的開(kāi)發(fā)和利用。而且該原料藥的制備工藝采用大孔吸附樹(shù)脂吸附富集抗病毒成分，具有工藝簡(jiǎn)單穩(wěn)定、容易中試放大、容易控制、重復(fù)性好、提取效率高。
文檔編號(hào)A61K131/00GK1823873SQ20051002006
公開(kāi)日2006年8月30日 申請(qǐng)日期2005年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月16日
發(fā)明者邱國(guó)福, 胡先明, 楊占秋, 徐文縉, 吳臘梅, 蘇江濤 申請(qǐng)人:武漢大學(xué)