專利名稱：靈芝多糖肽標準品及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靈芝多糖肽標準品。同時，本發(fā)明還涉及一種靈芝多糖肽標準品的制備方法及其在靈芝或靈芝孢子制品中含量測定的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)普遍認為靈芝、靈芝孢子產(chǎn)品中多糖含量的測定以葡萄糖為標準品。其采用硫酸蒽酮溶液，紫外分光光度法測定，含靈芝多糖以無水葡萄糖(C6H12O6)計，而忽視有藥用價值的多糖肽活性成分的含量。特別是靈芝精粉生產(chǎn)工藝過程中，往往在靈芝提取液中加入淀粉，或其它淀粉類輔料，使該法無法排除干擾，造成靈芝產(chǎn)品的多糖含量偏高的問題，從而影響了靈芝產(chǎn)品的質(zhì)量提高。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，而提供一種可用于檢測靈芝和靈芝孢子產(chǎn)品中多糖肽含量、從而可提高靈芝產(chǎn)品質(zhì)量的靈芝多糖肽標準品。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種制備靈芝多糖肽標準品的制備方法。
本發(fā)明的目還在于提供一種靈芝多糖肽標準品在檢查靈芝產(chǎn)品質(zhì)量中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了一種靈芝多糖肽標準品，該靈芝多糖肽GL-PPT標準品由下述法制備獲得首先是獲得含有高分子量的多糖肽溶液(其制備的詳細方法請參見申請人的另一份專利文件—申請?zhí)?00410014681.3)其是以靈芝為原料進行水提取，將提取液濃縮離心，用無水乙醇沉淀，沉淀用水溶解，透析，截留(Gamoderma LucidumPolysaccharide Peptide簡稱GL-PP)。再通過進一步分離與純化，而得到在毛細管電泳中呈多糖對稱峰的靈芝多糖肽GL-PPT標準品，其具有下述的理化及生物性質(zhì)1.形狀淺褐色至褐色粉末狀2.分子量相對分子質(zhì)量(Mr)為20萬～40萬3.靈芝多糖與肽結(jié)合不分離，其結(jié)構(gòu)中的單糖主要以β-型糖苷鍵連接，另有少數(shù)量以α-糖苷鍵連接4.多糖肽的糖鏈和肽鏈的連接性質(zhì)為O-糖苷鍵連接。在溫和條件下的稀堿水解，可以把與肽鏈上絲氨酸或蘇氨酸的羥基相連的單糖或鏈水解下來。
5.經(jīng)毛細管電泳測多糖呈對稱峰，因此說明該標準品是純的(見圖1)6.紅外光譜(IR)紅外光譜(IR)，通過400-4000cm-1掃描，GL-PPT組分分析表明，具有多糖吸收峰，分別為3385cm-1，2931cm-1，1647cm-1，1385cm-1和1074cm-1等多糖吸收峰，其中3385cm-1為強寬峰分子中羥基形成多種氫鍵所致的強吸收峰，在(891±7)cm-1處有吸收峰，這表明該糖肽具β-D葡萄糖苷鍵(見圖2)。
7.1H-核磁共振譜(1HNMR)多糖的信號多數(shù)在δ4.0-5.5ppm范圍，β型的多糖小于5.0ppm。靈芝多糖肽δ4.21ppm處具有寬的異頭碳信號，說明這是D-葡萄糖殘基的構(gòu)象(見圖3)。
8.13C-核磁共振譜(13C NMR)靈芝多糖肽化學(xué)位移103.8→70.2ppm，表明有β-(1→6)；103.8→86.7ppm，表明有β-(1→3)；103.8-80.1ppm，表明有β-(1→4)存在，β-(1→4)連接還有δ81.0處的信號；103-105ppm為甘露糖和雜多糖等單糖構(gòu)型和構(gòu)象(見圖4)9.靈芝多糖肽中糖與肽連接性質(zhì)在溫和條件下，用稀堿水解，可以把與肽鏈上絲氨酸或蘇氨酸的羥基相連的單糖或鏈水解下來，說明靈芝多糖肽中糖與肽為O-糖苷鍵連接。(見圖5.1，5.2)一般認為靈芝主要活性成分為靈芝多糖，由于現(xiàn)有技術(shù)中還沒有意識到靈芝多糖與肽牢固結(jié)合存在的現(xiàn)實。自然不可能把它作為檢測與控制它的質(zhì)量指標。本發(fā)明首先確定該化合物存在，提取該化合物做藥理實驗，證明它是活性成分后，又尋找應(yīng)用這個化合物GL-PPT來鑒別與控制靈芝產(chǎn)品的質(zhì)量方法，從而可提高被測產(chǎn)品的的質(zhì)量。這種以多糖肽為標準品，在現(xiàn)有靈芝多糖的研究中未見記載。
現(xiàn)有技術(shù)中從靈芝提取的多糖有白色和淡黃色，分子量有高有低之分，一般在近萬到十幾萬范圍內(nèi)，而本發(fā)明所獲得多糖肽，從顏色上從淡褐色至褐色，分子量都比現(xiàn)有的多糖高。
本發(fā)明提供了一種制造靈芝多糖肽GL-PPT標準品的方法，該方法包括下述順序的步驟(1)以靈芝為原料母體提取液，濃縮、離心、透析、截留而獲得的含有高分子量多糖肽(GL-PP)，用濃度為1％的靈芝多糖肽GL-PP溶液，在不斷攪拌中緩慢加入或無水乙醇、或甲醇、或丙酮至原體積的一半、靜置過夜，用3000-4000r/min離心，得GL-PP-1沉淀，再用或無水乙醇、或丙酮、或乙醚、或者它們的混合物洗滌該沉淀，并冷藏干燥。
(2)取步驟1所得的1％GL-PP-1溶液，3℃-5℃冷藏12個小時以上，次日對此溶液進行離心、棄去沉淀，取清液加2～4倍量無水乙醇或甲醇或丙酮沉淀，離心靈芝多糖肽，再用或無水乙醇、或丙酮、或乙醚、或者它們的混合物洗滌該沉淀，冷藏干燥，得GL-PP-2靈芝多糖肽。
(3)取GL-PP-2，加1∶20水溶解，3℃-5℃冷藏12個小時以上，次日過DEAE-纖維素柱分離，分別用水，0.1mol/LNaCl和0.5mol/LNaCl及1mol/L NaCl先后洗脫，收集0.5mol/L NaCl洗脫部分，流水透析12～48h，蒸餾水透析4～12h，袋內(nèi)液濃縮，冷凍干燥，得淺褐色至褐色粉末狀物質(zhì)為靈芝多糖肽GL-PPT標準品。
在制造方法步驟2中的離心優(yōu)選轉(zhuǎn)速12000r/min離心10～40分鐘。
當需要進一步提高標準品GL-PPT的純度時，可重復(fù)上述的第3步驟。
本發(fā)明提供了一種靈芝多糖肽GL-PPT標準品在測定靈芝或靈芝孢子產(chǎn)品質(zhì)量中的應(yīng)用。
本發(fā)明靈芝多糖肽GL-PPT標準品在測定靈芝藥材活性成分-靈芝多糖肽中的應(yīng)用，以靈芝多糖肽計，靈芝藥材多糖肽不得少于0.15％。
本發(fā)明靈芝多糖肽GL-PPT標準品在測定藥準字《雙靈固本散》中的應(yīng)用，其質(zhì)量應(yīng)控制以靈芝多糖肽計，2g不得少于0.05g。
圖1為靈芝多糖肽的多糖毛細管電泳2為GL-PPT紅外光譜3為GL-PPT1H核磁共振4為GL-PPT13C核磁共振5.1為稀堿水解前紫外光譜掃描5.2為稀堿水解后紫外光譜掃描6為靈芝多糖肽紫外光譜掃描7為靈芝多糖肽標準曲線圖具體實施方式
通過下面給出的本發(fā)明的具體實施例以及比較實施例可以進一步清楚地了解本發(fā)明。但它們不是對本發(fā)明的限定。
實施例1(一)制造靈芝多糖肽GL-PPT標準品的方法1.將以靈芝為原料母體提取液，濃縮、離心、透析、截留而獲得的含有高分子量的靈芝多糖肽。取濃度為1％的靈芝多糖肽GL-PP溶液，在不斷攪拌中緩慢加入無水乙醇至原體積的一半、靜置過夜，用4000r/min離心20分鐘，得GL-PP-1沉淀，分別用乙醇、丙酮、乙醚洗滌該沉淀，并冷藏干燥。
靈芝多糖肽(GL-PP)溶液是經(jīng)由下述方法制備而成的(詳細的請參見申請人的另一份中國專利申請2004100146813)1)、挑選段木或袋栽靈芝，將靈芝干品子實體清潔后，烘干，用粗顆粒粉碎機破碎成10-20目左右的煙絲狀物質(zhì)。
2)、稱取300克的已經(jīng)粉碎的煙絲狀靈芝，用95％的乙醇3000-4000毫升回流3小時，回收乙醇，干燥靈芝絲狀物。采用靈芝絲狀物∶熱水＝1∶15的比例對靈芝絲狀物進行熱水回流提取3次，時間分別為2.5小時、2小時、1小時，合并過濾后的水提取液。
3)、在60-90℃的溫度下濃縮水提取液至原體積的十分之一，再用速度為3000-4000r/min，時間為15-30min的離心機進行離心分離，將上清液濃縮至相當于每毫升含靈芝生藥量1克為標準。
4)、用三倍量的95％乙醇沉淀濃縮液，攪拌，冷藏靜置得第一沉淀物。將第一沉淀物溶于適量的蒸餾水，將此溶液用2-3倍量的無水乙醇或甲醇或丙酮沉淀，攪拌，冷藏靜置24小時得第二沉淀物，將第二沉淀物再離心冷藏干燥得多糖肽粗制品。
5)、將4)糖肽溶于蒸餾水，放置于透析袋內(nèi)，逆流透析48小時得透析液，將透析液在60-90℃下濃縮，離心而得濃縮液。
6)、用三倍量于濃縮液的無水乙醇處理濃縮液，得多糖肽沉淀，將多糖肽沉淀用無水乙醇，丙酮和乙醚各洗滌3次，用速度為3000-4000r/min，時間為10-20min的離心機進行離心分離，棄上清液，取沉淀物于冷藏干燥即得靈芝多糖肽(GL-PP)，該靈芝多糖肽的重均分子量MW在45萬-54萬之間，多糖肽呈黃褐色至褐色粉末狀，其多糖組成為鼠李糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖，且各糖摩爾比為0.549∶3.614∶3.167∶0.556∶6.89。
2.取步驟1所得的1％GL-PP-1溶液，冷藏過夜，次日用12000r/min離心20分鐘，棄去沉淀，取清液加3倍量無水乙醇沉淀多糖肽，分別用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀，冷藏干燥，得GL-PP-2多糖肽。
3.取GL-PP-2，加1∶20水溶解，冷藏過夜，次日過DEAE-纖維素柱分離，分別用水，0.1mol/L NaCl和0.5m0l/L NaCl及1mol/L NaCl先后洗脫，收集0.5mol/L NaCl洗脫部分，流水透析16h，蒸餾水透析4h，袋內(nèi)液濃縮，冷凍干燥，得淺褐色至褐色粉末物質(zhì)為標準品GL-PPT。
該標準品在檢糖的同時又檢肽，證明糖肽不分離。通過分離、純化所得GL-PPT多糖肽中多糖，經(jīng)毛細管電泳(CE)測定其多糖呈對稱峰，說明該標準品是純的。
(二)以GL-PPT作為標準品檢測靈芝產(chǎn)品的方法1.檢測條件試驗1.1波長的選擇以0.25％GL-PPT在紫外分光光度計上掃描(900～450nm)，其最大吸收峰處在761.50nm上，吸收值為0.509。因此，檢測吸收波長選擇為760nm(見圖6)。
1.2供試液的制備1.2.1靈芝供試液的制備準確稱取粉碎的靈芝子實體5g置于100mL錐形瓶中，加入20倍體積蒸餾水，60℃下超聲30min，冷卻后過濾，得濾液①。濾渣再加入10倍體積蒸餾水，60℃下超聲20min，冷卻后過濾，得濾液②。濾渣再加入10倍體積蒸餾水，60℃下超聲20min，冷卻后過濾，得濾液③。合并①②③濾液，蒸發(fā)濃縮，4000rpm離心20分鐘，定容100mL。精確量取定容液4mL，加12mL無水乙醇，10000rpm離心10min，沉淀加水溶解，定容于10mL。
1.2.2《雙靈固本散》供試液的制備隨機抽取《雙靈固本散》產(chǎn)品5～10袋，撤開混勻，按四分法逐級縮分2g左右，準確稱取1g置于小燒杯中，加少許水混勻，移入100ml容量瓶，60℃超聲溶解10分鐘，冷卻后，加水稀釋至刻度。搖勻，過濾。精確量取4ml，加12ml無水乙醇攪勻，10000rpm離心10分鐘，沉淀加水溶解并定容至10ml。
1.3制備供試液的條件試驗1.3.1超聲時間的選擇
1.3.2離心時間的選擇
1.3.3用無水乙醇沉淀多糖肽時間的選擇
結(jié)論由上述試驗結(jié)果可知，制備供試液的最佳條件為在60℃超聲10min，過濾后，濾液可立即離心，離心時間為10min。
2 檢測方法(分光光度法)2.1 供試液的制備2.1.1靈芝供試液的制備準確稱取粉碎的靈芝子實體5g置于100mL錐形瓶中，加入20倍體積蒸餾水，60℃下超聲30min，冷卻后過濾，得濾液①。濾渣再加入10倍體積蒸餾水，60℃下超聲20min，冷卻后過濾，得濾液②。濾渣再加入10倍體積蒸餾水，60℃下超聲20min，冷卻后過濾，得濾液③。合并①②③濾液，蒸發(fā)濃縮，4000rpm離心20分鐘，定容100mL。精確量取定容液4mL，加12mL無水乙醇，10000rpm離心10min，沉淀加水溶解，定容于10mL。
2.1.2《雙靈固本散》供試液的制備隨機抽取《雙靈固本散》產(chǎn)品5～10袋，撤開混勻，按四分法逐級縮分2g左右，準確稱取1g置于小燒杯中，加少許水混勻，移入100ml容量瓶，60℃超聲溶解10分鐘，冷卻后，加水稀釋至刻度。搖勻，過濾。精確量取4ml，加12ml無水乙醇攪勻，10000rpm離心10分鐘，沉淀加水溶解并定容至10ml。
2.2 改良Lowry法2.2.1原理Lowry反應(yīng)是雙縮脲方法的發(fā)展，第一步涉及到在堿性溶液中銅-蛋白質(zhì)復(fù)合物的形成，然后這個復(fù)合物還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑(Folin氏試劑)，產(chǎn)生深藍色(鉬藍和鎢藍混合物)。
2.2.2方法特點A.0.25％GL-PPT光譜掃描結(jié)果表明，其最大吸收峰處于760nm，故檢測波長做了修改(原方法中檢測波長為500nm)。
B.原方法中在加入(Folin氏試劑)后，于20～25℃保溫30分鐘，進行比色，其結(jié)果穩(wěn)定性較差。經(jīng)過反復(fù)實驗結(jié)果表明，當加入Folin氏試劑后，于60℃保溫30分鐘，再進行比色，其結(jié)果穩(wěn)定。
2.2.3操作方法A.樣品測定取1mL供試液(約含20-250μg多肽)，加入5mL試劑甲，混勻，于20～25℃放置10分鐘。再加入0.5mL試劑乙(Folin氏試劑)，立即振搖均勻，在60℃保溫30分鐘，然后于760nm處比色。以1mL水代替供試液做空白對照。
B.標準曲線的繪制精確稱取GL-PPT12.5mg，用70℃熱水溶解，并定溶50ml。分別吸取0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL GL-PPT標品溶液(250μg/mL)，用水補足到1mL，然后按樣品測定方法進行操作，測定光吸收值。以GL-PPT濃度為橫坐標，光吸收值為縱坐標，繪制標準曲線，作為定量的依據(jù)(見圖7)。
C.Folin-酚試劑的配置(均用分析純試劑)試劑甲由下述4種溶液配制。(1)4％碳酸鈉(Na2CO3)溶液；(2)0.2mol/L氫氧化鈉溶液；(3)1％硫酸銅溶液(CuSO4·2H2O)溶液；(4)2％酒石酸鉀鈉溶液(或酒石酸鉀、酒石酸鈉)。在使用前，將(1)與(2)等體積混和配成碳酸鈉-氫氧化鈉溶液，將(3)與(4)等體積配成硫酸銅-酒石酸鉀鈉溶液。然后將這兩種溶液按50∶1的比例混合，即為Folin-酚試劑甲。該試劑只能用一天，過期失效。試劑乙(Folin氏試劑)購于SIGMA公司產(chǎn)品。
3 試驗結(jié)果3.1 紫外光譜掃描圖(見圖6)。
3.2 標準曲線圖標準曲線用計算回歸方程為r相關(guān)系數(shù)r為0.99957；線性范圍在50～500μg/ml，其呈良好線性關(guān)系。(見圖7)3.3 穩(wěn)定性試驗(見表1)
表1穩(wěn)定性試驗由表1可見檢測結(jié)果穩(wěn)定，精確稱取樣品1g，按樣品測定方法進行顯色測定，每隔30分鐘再測一次，持續(xù)2小時。連續(xù)測定三個樣品，其RSD在0.74-0.82之間。將2小時內(nèi)測定穩(wěn)定的樣品，延長至4小時，再度檢測，依然穩(wěn)定(見穩(wěn)定性試驗)。
3.4精密度試驗(見表2)
表2精密度實驗由表2可見，精密度高，將待測液分別連續(xù)進樣5次，RSD在0.09-0.24之間(n＝3)3.5重現(xiàn)性實驗(見表3)
表3重現(xiàn)性實驗3.6回收率實驗(見表4)
表4回收率實驗結(jié)論據(jù)上述試驗結(jié)果表明，用GL-PPT作為標準品，檢測《雙靈固本散》中靈芝多糖肽含量的方法，其穩(wěn)定性、精密度、回收率和重現(xiàn)性均符合要求，RSD分別為0.74-0.82％、0.09-0.10％、1.73％、1.26-1.86％。
(三)靈芝藥材及其制品的多糖肽含量測定
1 GL-PPT用于靈芝藥材活性成分多糖肽的檢測，以多糖肽計，不得少于0.15％。
2 對于測定藥準字《雙靈固本散》質(zhì)量標準應(yīng)控制以多糖肽計，2g不得少于0.05g。
附20批《雙靈固本散》多糖肽含量檢測結(jié)果
權(quán)利要求
1.靈芝多糖肽GL-PPT標準品，其特征在于以靈芝(Ganodermalucidum)為原料母體提取液，將其濃縮，離心，透析而截留高分子量的多糖肽GL-PP，而后將高分子量多糖肽GL-PP進一步分離、純化而得到的靈芝多糖肽GL-PPT標準品，其具有下述的理化性質(zhì)(1)形狀淺褐色至褐色粉末狀(2)分子量相對分子質(zhì)量(Mr)為20萬～40萬(3)靈芝多糖與肽結(jié)合不分離，其結(jié)構(gòu)中的單糖主要以β-(1→3)(1→6)(1→4)聚糖肽，另有少量以α-糖苷鍵連接存在。(4)多糖肽的糖鏈和肽鏈連接性質(zhì)為0-糖苷鍵連接。在溫和條件下的稀堿水解，可以把與肽鏈上絲氨酸或蘇氨酸的羥基相連的單糖或鏈水解下來。(5)靈芝多糖肽GL-PPT標準品，其多糖在毛細管電泳(CE)中呈對稱峰。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靈芝多糖肽GL-PPT標準品，其特征在于紅外光譜(IR)，用KBr壓片400-4000cm-1掃描，GL-PPT組分分析表明，具有多糖吸收峰，分別為3385cm-1，2931cm-1，1647cm-1，1385cm-1和1074cm-1等多糖吸收峰，其中3385cm-1為強寬峰分子中羥基形成多種氫鍵所致的強吸收峰，在(891±7)cm-1處有吸收峰，這表明該糖肽具β-D葡萄糖苷鍵。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靈芝多糖肽GL-PPT標準品，其特征在于1H核磁共振譜(1HNMR)多糖的信號多數(shù)在δ4.0-5.5ppm范圍，β型的多糖小于5.0ppm。靈芝多糖肽δ4.21ppm處具有寬的異頭碳信號，說明這是D-葡萄糖殘基的構(gòu)象。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靈芝多糖肽GL-PPT標準品，其特征在核磁共振譜(13C NMR)多糖肽化學(xué)位移103.8→70.2ppm，表明有β-(1→6)；103.8→86.7ppm，表明有β-(1→3)；103.8-80.1ppm，表明有β-(1→4)；103-105ppm為甘露糖和雜多糖構(gòu)型。
5.一種制造權(quán)利要求1所述的靈芝多糖肽GL-PPT標準品的方法，其特征在于以靈芝(Ganoderma lucidum)為原料母體提取液，將其濃縮，離心、透析而截留高分子量的多糖肽GL-PP，而后將高分子量多糖肽GL-PP進一步分離、純化為靈芝多糖肽GL-PPT標準品，所述的靈芝多糖肽標準品通過下述步驟制備(1)將以靈芝為原料母體提取液，濃縮、離心、透析、截留而獲得的含有高分子量多糖肽(GL-PP)，用濃度為1％的靈芝多糖肽GL-PP溶液，在不斷攪拌中緩慢加入或無水乙醇、或甲醇、或丙酮至原體積的一半、靜置過夜，用3000-4000r/min離心，得GL-PP-1沉淀，再用或無水乙醇、或丙酮、或乙醚、或者它們的混合物洗滌該沉淀，并冷藏干燥。(2)取步驟1所得的1％GL-PP-1溶液，3℃-5℃冷藏12個小時以上，次日對此溶液進行離心、棄去沉淀，取清液加2～4倍量無水乙醇或甲醇或丙酮沉淀，離心靈芝多糖肽，再用或無水乙醇、或丙酮、或乙醚、或者它們的混合物洗滌該沉淀，冷藏干燥，得GL-PP-2靈芝多糖肽。(3)取GL-PP-2，加1∶20水溶解，3℃-5℃冷藏12個小時以上，次日過DEAE-纖維素柱分離，分別用水，0.1mol/LNaCl和0.5mol/LNaCl及1mol/L NaCl先后洗脫，收集0.5mol/LNaCl洗脫部分，流水透析12～48h，蒸餾水透析4～12h，袋內(nèi)液濃縮，冷凍干燥，得淺褐色至褐色粉末狀物質(zhì)為靈芝多糖肽GL-PPT標準品。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的靈芝多糖肽GL-PPT標準品的制備方法，其特征在于所述的步驟2中的離心為轉(zhuǎn)速12000r/min離心10～40分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靈芝多糖肽GL-PPT標準品在測定靈芝或靈芝孢子的產(chǎn)品質(zhì)量中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的靈芝多糖肽GL-PPT標準品在測定靈芝藥材活性成分-靈芝多糖肽中的應(yīng)用，以靈芝多糖肽計，靈芝藥材多糖肽不得少于0.15％。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的靈芝多糖肽GL-PPT標準品在測定藥準字《雙靈固本散》中的應(yīng)用，其質(zhì)量應(yīng)控制以多糖肽計，2g不得少于0.05g。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種多糖肽標準品及其制備方法與應(yīng)用。所說的多糖肽標準品以靈芝(Ganoderma lucidum)為原料母體提取液，將其濃縮，離心，透析而截留高分子量的多糖肽GL－PP，而后將高分子量多糖肽GL－PP進一步分離、純化而得到。所述的靈芝多糖肽標準品可用于測定靈芝或靈芝孢子的產(chǎn)品多糖肽含量，從而提高靈芝產(chǎn)品的質(zhì)量。
文檔編號A61K36/06GK1786023SQ20051001917
公開日2006年6月14日 申請日期2005年7月27日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月27日
發(fā)明者王賽貞, 林志彬, 劉梅英, 李寶棣, 林樹錢, 劉斌, 曹琦珍 申請人:西安綠谷制藥有限公司, 福州綠谷生物藥業(yè)技術(shù)研究所, 王賽貞, 林志彬, 劉梅英, 李寶棣, 林樹錢, 劉斌, 曹琦珍