專利名稱：一種治療呼吸道病毒感染性疾病的清肺制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是涉及以中草藥為原料而制備治療呼吸道病毒感染性疾病的藥物。
背景技術(shù)：
呼吸道病毒感染性疾病歷來是臨床的常見病、多發(fā)病，嚴(yán)重威脅著人們的健康甚至生命。迄今為止，對病毒引起的呼吸道疾病，至今仍未找到特效療法，其中多數(shù)病種起病急驟、傳播迅速、病理損害嚴(yán)重、病情復(fù)雜多樣，一旦發(fā)病往往造成很大危害。自2002年11月起在世界范圍蔓延，并造成生命財產(chǎn)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展嚴(yán)重?fù)p失的SARS，即是一個典型的例子。而2003年下半年在亞洲流行的禽流感造成的人類感染，也對人們的健康和社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成了嚴(yán)重的影響。因此，對各種呼吸道病毒感染性疾病的治療，一直是國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的熱點。
呼吸道病毒感染性疾病的主要臨床特征是發(fā)熱、咳嗽、咯痰等表現(xiàn)，主要依賴藥物的抗病毒及解熱作用進(jìn)行治療。因此，從該領(lǐng)域現(xiàn)有的技術(shù)水平來看，在西藥方面，主要有鹽酸嗎啉雙胍、金剛烷胺、利巴韋林等抗病毒藥物。但是，這些藥物只能對某些病毒有一定作用，而且多有一定的副作用。如金剛烷胺有神經(jīng)毒性，可影響腦內(nèi)多巴胺合成、釋放和攝取，引起多動、抑郁、幻覺等。廣譜抗病毒藥物利巴韋林可引起溶血性貧血、白細(xì)胞下降、肝功能異常和膽紅素升高等副作用。動物實驗表明，動物使用后可出現(xiàn)明顯的消瘦、乏力等癥狀。同時，西藥雖有不少有效的解熱藥，但只能作為對癥處理用，不斷阻止病情的發(fā)展，而且有些也有較大的副作用。西醫(yī)學(xué)針對病毒性疾病的主要對策在于研制相應(yīng)的疫苗，但一方面其研制需要一定的周期，往往趕不上疾病防治的需要；另一方面，對大多數(shù)呼吸道病毒而言，其變異性極強，所以對呼吸道病毒性疾病來說，即使對某種病毒研制出了疫苗，而其后流行的疾病很可能又是另外一種病毒引起的，所以疫苗的研制往往應(yīng)付不了現(xiàn)實中變化無窮的新的病毒株的出現(xiàn)。中藥治療呼吸道病毒感染性疾病始終有一定優(yōu)勢，能夠在短時間內(nèi)顯著緩解癥狀。從目前的研究現(xiàn)狀來看，相關(guān)報道及現(xiàn)有的中成藥均不少見，但其中存在明顯不足。主要表現(xiàn)在此類研究在組方上往往局限于清熱解毒藥，對疾病兼夾證候的辨證和方藥的配伍均不夠重視，尤其對該類疾病常見的寒熱相夾或寒熱不清的治療缺乏針對性的治療方藥，因而大大限制了運用中藥治療各種呼吸道病毒感染的使用范圍。
發(fā)明內(nèi)容
1、發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供一種療效顯著、適用面廣、寒熱兼顧的治療呼吸道病毒感染性疾病的藥物。
2、技術(shù)方案一種治療呼吸道病毒感染性疾病清肺制劑，由下列重量配比的原料藥所組成荊芥8～15克、金銀花8～15克、青蒿8～15克、人工牛黃0.2～1.0克。
組方意義方中金銀花，性味甘寒，具清熱解毒之功，擅清肺衛(wèi)之熱，且質(zhì)輕氣香，兼有宣散之功，為治溫病初起、邪在肺衛(wèi)之主藥，用為君藥。
荊芥，味辛微苦性微溫，能祛風(fēng)解表，疏散邪熱，微溫而不燥，用為臣藥。銀花配荊芥，稟承了吳鞠通銀翹散配伍之精髓，以銀花之辛涼配荊芥之芳香，共奏散熱解毒之功；寒溫并用，也擴(kuò)大了本方的使用范圍。牛黃，味甘苦性涼，有較強的清熱解毒之功，方中用為使藥，一可加強銀花清熱解毒的力量，二可發(fā)揮“超前截斷”的功效，阻止風(fēng)溫邪毒向里傳變。青蒿，味苦微辛性寒，其氣芳香，能清熱、辟穢、化濕，為使藥。銀花、荊芥、青蒿皆質(zhì)輕氣香之品，可辟穢、化濕、除瘟。本方謹(jǐn)遵治療溫病之古訓(xùn)“治療上焦如羽，非輕不舉”，用藥輕靈而味薄，又結(jié)合溫病學(xué)“超前截斷”的新理論，寒溫并用，旨在清解疏散上焦肺衛(wèi)之風(fēng)溫邪毒。全方法度嚴(yán)謹(jǐn)，配伍精當(dāng)，藥簡效專，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱、辟穢除瘟的功效。
稱取上述重量的荊芥、青蒿經(jīng)過整理，去雜、去老梗，分別切成一寸大小的小段；銀花經(jīng)整理后去雜，一同投入提取罐內(nèi)，加水使之將藥材浸沒，放置30min，連接揮發(fā)油收集裝置(選用比水重?fù)]發(fā)油及比水輕揮發(fā)油均可收集的型號)，加熱至沸，并微沸保溫30min，，收集第一次煎液和揮發(fā)油；然后再加水過藥材表面，加熱至沸，并微沸保溫30min，收集第二次煎液和揮發(fā)油；合并2次煎液，靜置至室溫，離心過濾，噴霧干燥，干法制粒，噴入揮發(fā)油，加入人工牛黃粉，即得清肺制劑。
上述清肺制劑，只需加入適宜的輔料即可制成顆粒劑、片劑和膠囊劑等固體口服制劑。
一種清肺制劑在制備治療呼吸道病毒感染性疾病藥物中的應(yīng)用。
該藥物經(jīng)藥理試驗結(jié)果表明清肺膠囊與同類西藥相比，具有良好的抗病毒及調(diào)節(jié)免疫功能的作用，能減輕因流感病毒感染而引起的肺部病變，降低肺指數(shù)，能降低因病毒感染而引起的死亡率，并具有明顯的抗炎、化痰作用。由于清肺膠囊在組方上具有寒熱藥物同用的特點，尤其適用于呼吸道病毒感染性疾病早、中期寒熱兼夾、寒熱不清證候的治療。
3、有益效果目前臨床上治療呼吸道感染性疾病可選擇的中成藥種類不多，在證情復(fù)雜、寒熱兼雜的情況下，用藥更是捉襟見肘，本發(fā)明的清肺藥物與現(xiàn)有中成藥相比，具有以下優(yōu)點(1)、清肺膠囊在組方上具有寒熱藥物同用的特點，尤其適用于呼吸道病毒感染性疾病早、中期寒熱兼夾、寒熱不清證候的治療。并且辛溫發(fā)散與辛涼清解兩類原料藥合理配伍，協(xié)同作用，可以產(chǎn)生比單類清熱解毒藥更為理想的治療效果。
(2)清肺膠囊與同類西藥相比，具有良好的抗病毒及調(diào)節(jié)免疫功能的作用，并且有與西藥常用解熱鎮(zhèn)痛劑相似的追熱效果。
(3)清肺膠囊能減輕流感病毒感染引起的肺部病變，降低肺指數(shù)，能降低因流感病毒感染而引起的死亡率。
(4)清肺膠囊具有明顯的抗炎、化痰作用。
具體實施例方式
實施例1、清肺制劑的組成荊芥10g、金銀花12g、青蒿10g、人工牛黃0.5g實施例2、清肺膠囊的制備稱取上述重量的荊芥、青蒿經(jīng)過整理，去雜、去老梗，分別切成一寸大小的小段；銀花經(jīng)整理后去雜，投入提取罐內(nèi)，加水使之將藥材浸沒，放置30min，連接揮發(fā)油收集裝置(選用比水重?fù)]發(fā)油及比水輕揮發(fā)油均可收集的型號)，加熱至沸，并微沸保溫30min，，收集第一次煎液和揮發(fā)油；加水過藥材表面，加熱至沸，并微沸保溫30min，收集第二次煎液和揮發(fā)油；合并2次煎液，靜置至室溫，離心過濾，噴霧干燥，干法制粒，噴入揮發(fā)油，加入人工牛黃粉，然后灌膠囊，制成清肺膠囊。
實施例3、清肺膠囊的抗病毒作用(一)清肺膠囊對流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響1.實驗材料1.1藥物與試劑清肺膠囊，南京中醫(yī)藥大學(xué)溫病研究所提供，規(guī)格0.2g生藥/ml。
利巴韋林注射液，江蘇鹽城制藥有限公司生產(chǎn)，批號為20023003，用蒸餾水稀釋至0.0065g/ml。
乙醚，南京第一化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號021010785。
1.2實驗動物ICR小鼠，體重20±2g，雌雄各半，共72只。南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(蘇)2002-031。
1.3病毒毒種流感病毒鼠適應(yīng)株FM1，南京中醫(yī)藥大學(xué)溫病研究所保存，血凝效價為1∶640，LD50為10-4.68。
2.實驗方法2.1動物分組 將動物隨機分為正常對照組、病毒模型組(陰性對照)、利巴韋林組(陽性對照)、清肺膠囊藥組，共4個組，每組12只，雌雄各半。
2.2給藥方法和劑量 清肺膠囊組給予藥物灌胃，劑量為10g/kg/d，病毒模型組和正常對照組用生理鹽水灌胃，灌胃量均為0.2ml/10g，一日2次。利巴韋林組每只小鼠腹腔注射利巴韋林0.13g/kg/d，一日2次，連續(xù)給藥7天。
2.3造模方法 第一次給藥后，用乙醚將小鼠輕度麻醉，從鼻腔滴入2LD50的病毒液50ul。正常對照組滴以等量的生理鹽水。
2.4觀察指標(biāo)取肺稱重，按以下公式計算肺指數(shù)肺指數(shù)＝小鼠肺重/小鼠體重×100給藥7天后，全部處死小鼠，稱取體重。打開胸腔取出肺臟，摘除氣管、肺門淋巴結(jié)等組織，用濾紙吸干肺臟表面瘀血，稱取肺臟重量，根據(jù)肺重和體重計算出肺指數(shù)。
3 結(jié)果實驗結(jié)果表明，清肺膠囊藥能降低病毒感染引起的肺指數(shù)增高，統(tǒng)計學(xué)具有顯著性差異。見表1。
表1 清肺膠囊對流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響(X±s)分組 動物數(shù)(n) 劑量(g/kg)肺指數(shù)正常對照組 12 等容積 0.706±0.106**病毒模型組 12 等容積 1.7±0.492利巴韋林組 12 0.13 1.234±0.357*清肺二號藥組12 10.0 1.166±0.385**與病毒模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
4結(jié)論清肺膠囊能減輕流感病毒感染引起的肺部病變，降低肺指數(shù)。
(二)清肺膠囊對流感病毒感染小鼠死亡保護(hù)率的影響1.實驗材料1.1藥物與試劑同上。
1.2動物 ICR清潔級純系小鼠，體重15±2g，雌雄各半，共96只。南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。
1.3病毒 流感病毒鼠適應(yīng)株FM1，南京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥抗病毒實驗室保存。雞胚傳代后測得其血凝效價為1∶640，LD50為10-4.68。
2.實驗方法2.1動物分組 方法同上。
2.2給藥方法和劑量 清肺膠囊組給予藥物灌胃，劑量為10g/kg/d，病毒模型組和正常對照組用生理鹽水灌胃，灌胃量均為0.2ml/10g，一日2次。利巴韋林組每只小鼠腹腔注射利巴韋林0.13g/kg/d，一日2次，連續(xù)給藥7天。
2.4造模方法 第一次給藥后，用乙醚將小鼠輕度麻醉，從鼻腔滴入20LD50的病毒液50ul。
2.3觀察指標(biāo)逐日觀察小鼠死亡情況，共14天。按以下公式計算死亡率死亡率＝死亡小鼠數(shù)/實驗小鼠×100％按以下公式計算死亡保護(hù)率死亡保護(hù)率＝(對照組死亡率-實驗組死亡率)×100％3 結(jié)果實驗結(jié)果表明，清肺膠囊能提高流感病毒感染小鼠的死亡保護(hù)率，統(tǒng)計學(xué)具有顯著性差異。見表2。
表2清肺膠囊藥對流感病毒感染小鼠死亡保護(hù)率的影響分組 動物數(shù)(n) 死亡數(shù)(n) 存活數(shù)(n) 死亡率(％) 死亡保護(hù)率(％)正常對照組24 0 24 0**病毒對照組24 204 83.33利巴韋林組24 1212 50*33.33清肺二號藥組 24 3 21 12.5**70.83與病毒模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
4 結(jié)論清肺膠囊對流感病毒感染小鼠有一定保護(hù)作用，能降低流感病毒感染引起的死亡率。
(三)清肺膠囊對仙臺病毒感染小鼠肺部病變的影響1.實驗材料1.1藥物與試劑 同上。
1.2動物 ICR種小鼠，體重20±2g，雌雄各半。南京中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。
1.3病毒 副粘病毒仙臺株，南京醫(yī)科大學(xué)姚堃教授惠贈，雞胚傳代后測得其血凝效價為1∶1280。
2.實驗方法2.1動物分組 同上。
2.2給藥方法和劑量 清肺膠囊組給予藥物灌胃，劑量為10g/kg/d，病毒模型組和正常對照組用生理鹽水灌胃，灌胃量均為0.2ml/10g，一日2次。利巴韋林組每只小鼠腹腔注射利巴韋林0.13g/kg/d，一日2次，連續(xù)給藥6天。
2.3造模方法 第一次給藥后，用乙醚將小鼠輕度麻醉，從鼻腔滴入病毒原液50ul。正常對照組滴以等量的生理鹽水。
2.4觀察指標(biāo)取肺稱重，按以下公式計算肺指數(shù)。
肺指數(shù)＝小鼠肺重/小鼠體重×100給藥6天后，全部處死小鼠，稱取體重。打開胸腔取出肺臟，摘除氣管、肺門淋巴結(jié)等組織，用濾紙吸干肺臟表面瘀血，稱取肺臟重量，根據(jù)肺重和體重計算出肺指數(shù)。
3 結(jié)果實驗結(jié)果表明，清肺膠囊能降低仙臺病毒感染小鼠的肺指數(shù)，其統(tǒng)計學(xué)具有顯著性差異。見表3。
表3 清肺膠囊對仙臺病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響(X±s)分組 動物數(shù)(n) 劑量(g/kg)肺指數(shù)正常對照組 12等容積 0.706±0.106**病毒模型組 12等容積 2.196±0.167利巴韋林組 120.13 1.159±0.37**清肺膠囊組 1210.0 1.752±0.651*與病毒模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
4 結(jié)論清肺膠囊能減輕仙臺病毒感染引起的肺部病變，降低肺指數(shù)。
(四)清肺膠囊對仙臺病毒感染小鼠死亡保護(hù)率的影響1.實驗材料1.1藥物與試劑 同上。
1.2動物 ICR清潔級純系小鼠，體重15±1g，雌雄各半。南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。
1.3 病毒副粘病毒仙臺株，南京醫(yī)科大學(xué)姚堃教授惠贈，雞胚傳代后測得其血凝效價為1∶1280。
2.實驗方法2.1動物分組 同上。
2.2給藥方法和劑量 清肺膠囊組給予藥物灌胃，劑量為10g/kg/d，病毒模型組和正常對照組用生理鹽水灌胃，灌胃量均為0.2ml/10g，一日2次。利巴韋林組每只小鼠腹腔注射利巴韋林0.13g/kg/d，一日2次，連續(xù)給藥6天。
2.4造模方法 第一次給藥后，用乙醚將小鼠輕度麻醉，從鼻腔滴入病毒原液50ul。正常對照組滴以等量的生理鹽水。
2.4觀察指標(biāo)逐日觀察小鼠死亡情況，共7天，并作好記錄。按以下公式計算死亡率死亡率＝死亡小鼠數(shù)/實驗小鼠×100％按以下公式計算死亡保護(hù)率死亡保護(hù)率＝(對照組死亡率-實驗組死亡率)×100％2.5統(tǒng)計分析 方法同上。
3 結(jié)果實驗結(jié)果表明，清肺膠囊能提高仙臺病毒感染小鼠的死亡保護(hù)率，統(tǒng)計學(xué)具有顯著性差異。見表4。
表4清肺膠囊對仙臺病毒感染小鼠死亡保護(hù)率的影響分組 動物數(shù)(n) 死亡數(shù)(n) 存活數(shù)(n) 死亡率(％) 死亡保護(hù)率(％)正常對照組16 0 16 0**病毒對照組16 160 100利巴韋林組16 2 14 12.5**87.5清肺膠囊組16 115 68.75*31.25與病毒模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
4 結(jié)論清肺膠囊對流感病毒感染小鼠有一定保護(hù)作用，能降低流感病毒感染引起的死亡率。
實施例4、清肺膠囊的解熱作用(一)清肺膠囊對家兔發(fā)熱效應(yīng)的影響1 實驗?zāi)康? 觀察清肺膠囊對大腸桿菌內(nèi)毒素所致家兔發(fā)熱效應(yīng)的影響。
2 材料和方法2.1藥物與致熱劑清肺膠囊，規(guī)格0.4生藥/ml，由南京中醫(yī)藥大學(xué)溫病研究所研制。
對乙酰氨基酚片(撲熱息痛)，規(guī)格0.5g/片，批號030810，汕頭金石制藥總廠生產(chǎn)，用時以蒸餾水配成所需濃度的混懸液。
大腸桿菌內(nèi)毒素，Ecoli O127 B6，由美國Sigma公司生產(chǎn)，以生理鹽水配成1ug/ml溶液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>
2.2實驗動物 日本大耳白兔，體重1.8～2.5kg，雌雄不拘，金陵種兔埸提供。
2.3實驗器材 電子體溫計，歐姆龍大連有限公司生產(chǎn)。
2.4方法基礎(chǔ)體溫測定家兔于實驗室適應(yīng)性喂養(yǎng)2天后，每日測肛溫2次，連續(xù)2天，選取體溫正常者進(jìn)行實驗，并以4次肛溫的均值作為基礎(chǔ)體溫。
分組將入選家兔按體溫分層后隨機分為模型組、撲熱息痛組和清肺膠囊組。
造模及給藥各組家兔分別灌胃給藥，撲熱息痛組為0.047g/kg，清肺膠囊組為10.4g/kg，模型組給等容積生理鹽水。給藥后立即由耳緣靜脈注入經(jīng)37℃水浴預(yù)溫的大腸桿菌內(nèi)毒素水溶液，劑量為0.4ug/kg。1小時后如上法重復(fù)給藥1次。
體溫觀測于攻毒后0.5h、1h、2h、3h、4h、5h各測肛溫1次，以基礎(chǔ)體溫為基線繪制體溫曲線，計算5小時體溫反應(yīng)指數(shù)(TRI5)。
3 結(jié)果實驗結(jié)果表明，清肺膠囊能明顯降低攻毒后引起的家兔體溫升高，與模型組有顯著差異。見表5。
表5清肺膠囊對體溫反應(yīng)指數(shù)的影響(X±SD)組別 動物數(shù)(n) 劑量(g/kg) TRI5模型組 8等容積生理鹽水 24.6±2.76撲熱息痛 80.045 9.66±4.90**清肺膠囊組 810.4 14.61±9.10**注**P＜0.014結(jié)論清肺膠囊對大腸桿菌內(nèi)毒素引起的發(fā)熱具有一定的退熱作用。
(二)、清肺膠囊的對干酵母所致大鼠發(fā)熱的影響1.實驗?zāi)康? 利用干酵母復(fù)制大鼠發(fā)熱模型，觀察清肺膠囊的退熱作用。
2.實驗材料2.1藥物與致熱劑清肺膠囊，規(guī)格0.2g生藥/ml，南京中醫(yī)藥大學(xué)溫病研究所研制。
對乙酰氨基酚片(撲熱息痛)，規(guī)格0.5g/片，批號030810，汕頭金石制藥總廠生產(chǎn)，用時以蒸餾水配成2.25mg/ml的混懸液。
干酵母，規(guī)格10g/袋，批號20040614，湖北安琪酵母有限公司生產(chǎn)，臨用前稱取干酵母15g，置研缽中，逐漸加入蒸餾水研磨為均勻的懸漿，最后定容為100ml，配成15％的懸液。
2.2動物 SD清潔級大鼠30只，體重200g±20g，雌雄各半，中科院上海實驗動物中心提供。
2.3器械 電子測溫計，歐姆龍大連有限公司生產(chǎn)。
3.實驗方法3.1大鼠基礎(chǔ)體溫的測定大鼠于實驗室環(huán)境適應(yīng)3天后，每日用溫度計測肛溫1次，連續(xù)4天，選取標(biāo)準(zhǔn)差＜±0.3的動物供實驗用，把4次肛溫的均值作為基礎(chǔ)體溫。
3.2預(yù)實驗取大鼠3只，于背部皮下注入15％酵母懸液，劑量為1.5g/kg，以后每膈1h測大鼠體溫一次，觀察體溫曲線的變化，確定正確的給藥時機為注射酵母后6h。
3.3模型制備及分組所有入選大鼠背部皮下注入15％干酵母懸液，劑量為1.5g/kg，于注射后6h測體溫，將體溫升高0.8℃的大鼠隨機分為3組，分別為模型組、撲熱息痛組和清肺膠囊組，每組10只，雌雄各半。
3.4給藥方法模型制備成功并分組后即灌胃給藥一次。清肺膠囊組劑量為4g/kg，撲熱息痛組劑量為用藥液灌胃，劑量為0.045g/kg，模型組用等容積的生理鹽水灌胃。1.5h后重復(fù)給藥一次。
3.4觀察指標(biāo)給藥后1/2h、1h、2h、3h、4h、5h各測大鼠肛溫一次，按以下公式計算體溫凈增值，并根據(jù)實驗測得體溫和體溫凈增值繪出體溫曲線。
體溫凈增值(℃)＝實驗測得體溫-基礎(chǔ)體溫。
4 結(jié)果用藥后半小時，撲熱息痛組體溫開始下降，持續(xù)下降到第一次給藥后3小時體溫再次上升。清肺膠囊組在第一次給藥后2小時開始降溫，降溫幅度雖不如撲熱息痛組明顯，但持續(xù)時間較長，可維持到第一次給藥后5小時。實驗結(jié)果表明，撲熱息痛降溫迅速，體溫下降幅度大，但持續(xù)時間相對較短，而清肺膠囊雖然降溫速度稍慢，體溫下降幅度不如撲熱息痛明顯，但體溫下降持續(xù)時間長而穩(wěn)定，兩組體溫下降與模型組比較，均有統(tǒng)計學(xué)差異，見表6、表7。
表6.清肺膠囊對干酵母所致大鼠發(fā)熱的影響(X±s)(n＝10)體 溫(℃)組別給藥后時間(h)基礎(chǔ)體溫 造模后6h0.5 1 2 34 5模型組 38.1±0.3 39.6±0.4 39.7±0.4 39.9±0.3 39.7±0.4 39.8±0.3 39.7±0.5 39.5±0.6撲熱息痛組 38.2±0.4 39.7±0.3 38.6±0.2**38.8±0.5**38.5±1.0**38.8±0.8**39.4±0.2 39.7±0.3清肺膠囊組 38.2±0.3 39.6±0.3 39.7±0.4 39.8±0.2 39.1±0.8* 39.1±0.8* 39.0±0.7**39.0±0.6*與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
表7.清肺膠囊對干酵母所致大鼠發(fā)熱凈增殖的影響(X±s)(n＝10)組別 體 溫 凈 增 值(℃)給藥后時間(h)造模后6h0.5 1 23 4 5模型組 1.4±0.41.6±0.5 1.8±0.4 1.6±0.5 1.6±0.5 1.6±0.6 1.4±0.7撲熱息痛組 1.5±0.40.4±0.5**0.6±0.7**0.3±1.3**0.7±1.2**1.2±0.5 1.5±0.5清肺膠囊組 1.4±0.31.5±0.4 1.6±0.3 0.9±0.7* 0.8±0.9* 0.8±0.8**0.8±0.7*與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
5.結(jié)論 清肺膠囊藥對干酵母引起的發(fā)熱有一定的抑制作用。
實施例5、清肺膠囊對調(diào)節(jié)免疫功能的作用1.實驗?zāi)康耐ㄟ^觀察清肺膠囊對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，研究其對機體非特異性免疫功能的作用。
2.實驗材料2.1藥物清肺膠囊，規(guī)格0.2g生藥/ml，南京中醫(yī)藥大學(xué)溫病研究所研制。
陽性對照藥黃芪口服液，批號020118-2，江蘇省中醫(yī)院生產(chǎn)，用蒸餾水配制成含原液0.104ml/ml的溶液。
2.2動物ICR小鼠，體重20±2g，雌雄各半，共30只。中國藥科大學(xué)實驗動物中心提供。公雞1只。
2.3器械與試劑顯微鏡、高壓消毒鍋、離心機、孵箱、載玻片等。
Alsever’s液葡萄糖2.08g、檸檬酸鈉0.80g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.42g，加蒸餾水至100ml，過濾后10磅15min高壓滅菌。
4％瑞-姬氏染色液試劑1和試劑2個一瓶(50ml)，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。
3.實驗方法3.1分組 分生理鹽水組、黃芪口服液組和清肺膠囊藥組，每組10只，雌雄各半。
3.2給藥劑量和方法清肺膠囊組用藥液灌胃，劑量為0.25ml/10g，生理鹽水組和黃芪口服液組則灌以等容積的生理鹽水和黃芪口服液。每日給藥2次，給藥5天。
3.3檢測指標(biāo)按文獻(xiàn)方法制備5％的雞紅細(xì)胞懸液。小鼠腹腔注射5％的雞紅細(xì)胞，劑量為1ml/10g。5小時后動物斷頭泄血處死，剪開腹部皮膚，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2ml，輕柔腹部1min，剪開腹壁，抽出腹腔洗液1ml，滴涂于干凈載玻片上，每片0.2ml。然后放在墊有濕紗布的鋁飯盒中，置于37℃孵箱中孵育30min。溫育結(jié)束后，將載玻片投入生理鹽水中漂洗，以除去未貼壁細(xì)胞，晾干，以甲醇液固定5min，再用4％瑞-姬氏染色液染色3min后，用蒸餾水漂洗、晾干，在油鏡下每片計數(shù)200個巨噬細(xì)胞中所吞噬的雞紅細(xì)胞數(shù)，按以下公式計算吞噬百分率和吞噬指數(shù)
4 結(jié)果清肺膠囊能提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對雞紅細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，且有統(tǒng)計學(xué)意義，表明清肺膠囊能提高小鼠非特異性免疫功能。結(jié)果見表8和表9。
表8.清肺膠囊對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率的影響分組 樣本數(shù)吞噬百分率(X±s)生理鹽水組 10 15.65±4.65黃芪口服液組10 26.25±10.51*清肺膠囊10 25.44±9.12*與生理鹽水組比較，*P＜0.05。
表9.清肺膠囊對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)的影響分組樣本數(shù) 吞噬指數(shù)(X±s)生理鹽水組 10 0.1855±0.0447黃芪口服液組10 0.3506±0.1427**清肺膠囊10 0.3163±0.0467*與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
實施例6、清肺膠囊的抗炎作用1.實驗?zāi)康挠弥卵讋┐碳ざ鷼?，引起耳殼局部皮膚發(fā)生腫脹，然后觀察并測定清肺膠囊與對照組耳殼的重量，并比較其腫脹率的差異，從而研究清肺膠囊的抗炎作用。
2.實驗材料2.1藥物清肺膠囊，規(guī)格0.2g生藥/ml，南京中醫(yī)藥大學(xué)溫病研究所研制。
陽性對照藥強地松，批號20000901，南京第二制藥廠生產(chǎn)，配成0.16mg/ml的混懸液。
2.2動物 ICR小鼠，體重20±2g，雌雄各半，共36只。中國藥科大學(xué)實驗動物中心提供。
2.3器械與試劑器械打孔器、精密天平、移液器等。
致炎劑二甲苯(化學(xué)純)，南京化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號20020901。配成0.3mg/ml的濃度。
3.實驗方法3.1分組 分生理鹽水組、強地松組和清肺膠囊藥組，每組12只，雌雄各半。
3.2給藥劑量和方法清肺膠囊組用藥液灌胃，劑量為0.25ml/10g，生理鹽水組和強地松組則灌以等容積的生理鹽水和強地松懸液。每日給藥2次，給藥4天。
3.3檢測指標(biāo)將二甲苯涂于小鼠右耳前后兩面，每鼠約0.1ml，左耳作對照。30min后處死動物，沿耳廓基線剪下兩耳，用9mm直徑打孔器分別在兩耳同一部位打下圓耳片，用精密天平稱重。根據(jù)公式計算小鼠耳廓的腫脹率。
腫脹率(％)＝(右耳-左耳)÷左耳×100％。
4 結(jié)果清肺膠囊能降低二甲苯所致小鼠耳殼腫脹率，與生理鹽水組比較，有顯著性差異，表明清肺膠囊有抗炎作用，見表10。
表10.清肺膠囊對二甲苯所致小鼠耳殼腫脹率的影響分組 樣本數(shù) 腫脹率(X±s)生理鹽水組121.000±0.273強地松組 120.681±0.327*清肺膠囊 120.677±0.328*與生理鹽水組比較，*P＜0.05。
實施例7、清肺膠囊的止咳、化痰作用(一)、清肺膠囊的止咳作用1.實驗?zāi)康耐ㄟ^用氨水造成小鼠咳嗽模型，研究清肺膠囊的止咳作用，為臨床運用提供參考。
2.實驗材料2.1藥物清肺膠囊，規(guī)格0.2g生藥/ml，南京中醫(yī)藥大學(xué)溫病研究所研制。
陽性對照藥咳必清，規(guī)格25mg咳必清/片，蘇州醫(yī)藥集團(tuán)有限公司出品，批號020118-2，研為極細(xì)粉末，過80目篩，用CMC-Na配制成0.457mg/ml的咳必清懸液。
2.2動物 ICR小鼠，體重20±2g，雌雄各半，共36只。中國藥科大學(xué)實驗動物中心提供。
2.3器械與試劑器械超聲霧化器，秒表。
氨水批號02033157，南京化學(xué)試劑一廠生產(chǎn)，實驗時用蒸餾水配成25％的濃度。
3.實驗方法3.1分組 分生理鹽水組、咳必清組和清肺膠囊藥組，每組12只，雌雄各半。
3.2給藥劑量和方法清肺膠囊組用藥液灌胃，劑量為0.25ml/10g，生理鹽水組和咳必清組則灌以等容積的生理鹽水和咳必清懸液。每日給藥2次，給藥4天。
3.3檢測指標(biāo)將小鼠放入倒置的250ml燒杯內(nèi)，構(gòu)成一密閉空間，向該空間內(nèi)超聲霧化入25％的氨水，為時20秒，觀察小鼠咳嗽潛伏期和2min咳嗽次數(shù)，兩人記數(shù)后取平均值。
4結(jié)果清肺膠囊與生理鹽水組比較，咳嗽潛伏期略有增長，2min咳嗽次數(shù)有所減少，但并沒有統(tǒng)計學(xué)差異，說明清肺膠囊止咳作用不明顯。結(jié)果見表11和表12。
表11.清肺膠囊對小鼠咳嗽潛伏期的影響分組 樣本數(shù) 咳嗽潛伏期(X±s秒)生理鹽水組12 34.36±10.45咳必清組 12 36.75±7.56清肺膠囊 12 35.17±8.43表12.清肺膠囊對小鼠2min咳嗽次數(shù)的影響分組 樣本數(shù)2min咳嗽次數(shù)(X±s)生理鹽水組12 66.64±13.25咳必清組 12 52.85±11.72*清肺膠囊 12 61.33±11.54與生理鹽水組比較，*P＜0.01。
(二)、清肺膠囊的化痰作用1.實驗?zāi)康耐ㄟ^給小鼠注射酚紅然后觀察氣管酚紅排泄量，研究清肺膠囊的化痰作用，為臨床運用提供參考。
2.實驗材料2.1藥物清肺膠囊，規(guī)格0.2g生藥/ml，南京中醫(yī)藥大學(xué)溫病研究所研制。
陽性對照藥氯化銨，許可證編號XK 13-2010282197II，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司出品，實驗時配制成0.02g/ml的溶液。
2.2動物 ICR小鼠，體重20±2g，雌雄各半，共36只。中國藥科大學(xué)實驗動物中心提供。
2.3器械與試劑654型分光光度計，上海醫(yī)用儀器廠生產(chǎn)。
苯酚紅，批號951124，上海試劑三廠生產(chǎn)，用生理鹽水配成5g/dl的懸液。
氫氧化鈉，批號970106，南京化學(xué)試劑廠，用蒸餾水配成1N的氫氧化鈉溶液。
3.實驗方法3.1分組分生理鹽水組、氯化銨組和清肺膠囊藥組，每組12只，雌雄各半。
3.2給藥劑量和方法清肺膠囊組用藥液灌胃，劑量為0.25ml/10g，生理鹽水組和氯化銨組則灌以等容積的生理鹽水和氯化銨溶液。每日給藥2次，給藥4天。
3.3檢測指標(biāo)每只小鼠腹腔注射0.1ml(5mg)/10g的酚紅懸液，半小時后處死，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2ml生理鹽水的試管中，再加0.1ml氫氧化鈉，用654型分光光度計以546nm波長測OD值。先用酚紅作一標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)曲線計算酚紅含量(ug/ml)，再與各組相比較。
3 結(jié)果清肺膠囊與生理鹽水組比較，氣管酚紅排泌量顯著升高，且有統(tǒng)計學(xué)差異，說明清肺膠囊有明顯化痰作用。結(jié)果見表13。
表13.清肺膠囊對小鼠氣管段酚紅排泌量的影響(X±s)分組 動物數(shù)氣管酚紅排泌量(ug/ml)生理鹽水組120.965±0.488氯化銨組 122.056±0.734*清肺膠囊 122.006±0.949*與生理鹽水組比較，*P＜0.01。
權(quán)利要求
1.一種清肺制劑，其特征是由下列重量配比的原料藥所組成荊芥8-15克、金銀花8-15克、青蒿8-15克、人工牛黃0.2-1.0克。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清肺制劑，其特征在于加入適量的輔料可制成固體口服制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的清肺制劑，其特征在于所述的制劑為膠囊劑。
4.清肺制劑在制備治療呼吸道病毒感染性疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種清肺藥物，它是由荊介、金銀花、青蒿和人工牛黃所組成。首先將荊介、青蒿、金銀花整理、去雜后，用水煎煮，離心過濾，噴霧干燥，干法制粒，噴入揮發(fā)油，加入牛黃粉而制成清肺膠囊、該膠囊劑在組方上有寒熱原料藥同用的特點，尤其適用于呼吸道病毒感染性疾病早、中期寒熱兼夾、寒熱不清證候的治療，并且辛溫發(fā)散與辛涼清解兩類原料藥合理配伍，協(xié)同作用，從而產(chǎn)生比單類清熱解毒藥更顯著的治療效果，為臨床用藥提供了一種更為理想的中成藥。
文檔編號A61P11/00GK1593595SQ20041004140
公開日2005年3月16日 申請日期2004年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月16日
發(fā)明者楊進(jìn), 龔婕寧, 劉濤, 朱荃, 魏凱峰 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)