專利名稱：具有抗病毒作用的藥物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種以天然藥用植物的有效成分為有效藥物成分的具有抗病毒作用的藥物，具體講是一種以具有水溶性的穿心蓮內酯衍生物作為有效藥物成分的抗病毒作用藥物。
背景技術：
穿心蓮(Andrographis paniculata(Burm.f.)nees)始載于《常用中草藥手冊》，為爵床科植物穿心蓮的全草或葉，具有清熱解毒，清化濕熱功效。據(jù)《中華藥?！酚涊d，其主要成份為二萜內酯和黃酮類化合物，內酯主要有穿心蓮甲素、穿心蓮乙素、穿心蓮丙素、穿心蓮丁素。具有抗菌、抗炎、解熱以及提高免疫功能等多種藥理作用。從穿心蓮中提取分離而得的脫水穿心蓮內酯，即穿心蓮丁素是其四種主要的內酯類化合物中的一種，在對穿心蓮甲、乙、丙、丁素的藥理作用比較中，顯示其抗炎作用最強，但因其難溶于水，不適合用于注射劑，往往以鹽的形式才能制成注射劑，目前已有記載和報導使用的以脫水穿心蓮內酯為有效藥用成分的藥物有以脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯單鉀鹽的“注射用穿琥寧”凍干注射液和以脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯鉀鈉鹽為有效藥用成分的“注射用炎琥寧”無菌粉末制劑。由于這些藥物制劑中均含有鉀離子，長期和/或過量使用后會造成心血管方面的諸多不良影響和副反應，并會因此而限制了其使用對象和/或應用范圍。盡管已有穿琥寧鈉鹽問世，但有其制備工藝復雜，生產(chǎn)成本高，難提純等缺點。
發(fā)明內容
針對上述情況，本發(fā)明將提供一種以具有理想水溶性的穿心蓮內酯的衍生物作為有效藥物成分的抗病毒作用藥物。
本發(fā)明具有抗病毒作用的藥物，是以如式(I)所示結構的精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯衍生物為有效藥物成分，與藥物中允許接受的輔助成分共同組成。其中，式(I)結構中n＝1～2；R1、R2、R3分別為H或Na，且R1、R2不同時為Na。
上述藥物中，所說的該有效藥物成分精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯衍生物，可以為精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯，即式(I)結構中的R1、R2、R3均為H；也可以為精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯單鈉鹽或精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半
酯二鈉鹽，即式(I)結構中的n＝1，R1和R2均為H或是其中的一個為H，另一個為Na，R3為Na；還可以為式(I)結構中的n＝2，即含有兩個精氨酸的相應二精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯單鈉鹽、二精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯二鈉鹽等。
以上述式(I)結構的精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯衍生物為有效藥物成分，與藥物中可以接受的相應藥用輔料或載體等輔助添加成分組合，并按相應的制藥方法加工，可制成為相應的劑型的藥物制劑。例如，與口服制劑中可以被接受的崩解劑、賦形劑、潤滑劑、粘合劑、填充劑等常用的輔助添加成份混合后，按相應的常規(guī)工藝方法處理，即可制成為片劑、丸劑、膠囊劑或適當形式的緩釋劑、控釋劑等固體制劑形式的口服藥物；與常用的增溶劑、乳化劑、潤濕劑、起泡或消泡劑等表面活性劑、稀釋劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、矯味劑、增稠劑等混合，按相應的常規(guī)工藝方法處理，即可制成為水劑、糖漿等液體制劑形式的口服藥物或口含制劑。與注射藥物中允許使用的適當溶劑和/或附加劑配合并按相應的工藝操作處理后，即可以制備成相應的水針或粉針等肌肉或靜脈形式的注射制劑藥物。還可以制備成包括普通皮膚粘膜用藥、滴眼劑、滴鼻劑或滴耳劑等適當形式的外用制劑。
以下通過具體實施方式
的實例再對本發(fā)明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。在不脫離本發(fā)明上述技術思想情況下，根據(jù)本領域普通技術知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均包括在本
具體實施例方式
實施例1精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯鹽的制備方法之一精密稱取脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯溶于甲醇中，另精密稱取L-精氨酸，加水溶解，將兩液在室溫下混合反應。分別用異丙醇等易溶解精氨酸的溶劑溶解除去未反應的游離精氨酸；用易溶解脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯的無水乙謎等溶劑除去未反應的游離脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯，即得粉末狀脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯精氨酸鹽(I)，收率50.2％。
對所得到產(chǎn)物進行了下屬的結構分析鑒定試驗紫外吸收光譜分別以水和甲醇為試驗溶劑配制成25μg的溶液，用TU-1800spc儀器在200-700nm波長范圍內掃描，記錄光譜結果如表1所示。結果表明試驗樣品在兩種不同的溶液中均有兩個雙鍵的吸收峰。
表1紫外吸收光譜吸收峰及其歸屬分析
紅外吸收光譜KBr壓片，用Nicolet FourierTransform IR型光譜儀檢測，聚苯乙烯薄膜進行校正。特征吸收峰(cm-1)3400(υO-H)，3169(υN-H)，2948(υC-H)，1726(υC＝O)，1640(多重峰υC＝O，-NH2，C＝N，C＝C，1559(υasCOO-)，1401(υs COO-)，1256(υC-O)，1052(γC-H)核磁共振光譜在Bruker Avance 600核磁共振光譜儀檢測1H-NMR光譜的化學位移(ppm)質子數(shù)及歸屬解析7.449(t，1HC14-H)，6.875(dd，1HC11-H)，6.188d，1HC12-H)，4.835(s，2HC15-H)，4.777(S，1HC17-Hβ)，4.513(S，1HC17-Hα)，4.627(dd，1HC3-H)，4.366(d，1HC19-Hα)，4.288(d，1HC19-Hβ)，3.582(t，1HC9-H)，3.3-3.31(m，2HargC-H)，3.17-3.23(m，2HargC5-H)，2.561-2.57(m，4HC22-H，C23-H)，2.434-2.482(m，4HC26-H，C27-H)，2.070-2.1442(m，2HC7-H)，1.83-1.929(m，2HargC4-H)，1.614-1.77(m，2HargC3-H)，1.160-1.68(m，2HC5-H)，1.519-1.153(m，2HC6-H)，1.398-1.423(m，2HC2-H)，1.288-1.333(m，2HC1-H)，0.905(s，3HC20-H)，1.058(s，3H；C19-H)。
13C-NMR光譜的化學位移(ppm)質子數(shù)及歸屬解析14.224(C20)；21.849(C18)；23.811(C6)；23.986(C2)；24.320(arg-C6)，28.068(arg-C5)；30.585，30.701，31.817，31.877(C22，C23，C326，C27)；36.454(C7)；37.37.998(C1)；38.332(C4)；40.466(C10)；41.297(arg-C4)；54.093(C9)；54.435(arg-C3)；61.254(C5)；64.797(C19)；70.188(C15)；80.026(C3)；107.760(C17)；11.347(C12)；128.159(C13)；137.750(C11)；145.515(C14)；148.610(C8)；157.444(arg-C2)；173.304，173.365，173.403，173.790(C21，C24，C25，C28)；178.778(C16)；178.877(arg-C1)。
質譜分析采用HP1101色質聯(lián)用儀，主要峰歸屬如下707.1[M+1]+，415.0[C24H30O6+H]+，175.0[C6H14N4O2+H]+，297[C20H24O2+H]+。
熱分解溫度150℃以上逐步變色分解。
薄層色譜薄層色譜顯示在酸性和堿性條件下，此復鹽可以離解成相應的精氨酸和脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯。
樣品經(jīng)0.25％CMC-Na調制的硅膠H薄層層析，氯仿-甲醇-乙酸(18∶2∶0.5)展開，碘蒸氣顯色，以脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯為對照，供試品色譜中，在與對照品相應位置上，顯相同顏色斑點。
樣品經(jīng)0.25％CMC-Na調制的硅膠H薄層層析，甲醇-水-三乙胺(5∶5∶1)展開，茚三酮顯色，以精氨酸為對照，供試品色譜中，在與對照品相應位置上，顯相同顏色斑點。
上述的結構分析實驗表明上述產(chǎn)物的分子式組成為C34H50N4O12；由質譜圖分子離子峰707.1即為其分子量；由1H-NMR譜的化學位移、裂分情況及質子數(shù)目，以及13C-NMR譜，并結合紫外和紅外圖譜的綜合解析證明其結構為式(I)中R1、R2和R3均為H的形式。
實施例2 精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯鹽的制備方法之二精密稱取脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯、精氨酸，加水攪拌溶解，冷凍干燥。得粉末狀精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯，收率99.8％。
實施例3二精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯鹽的制備按上述兩例的操作方法，分別加入2倍量的精氨酸，即可分別得到相應的二精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯。
實施例4精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯單鈉鹽的制備按上述各例的操作方法，用脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯單鈉鹽代替原例中的脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯，即可分別得到一精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯單鈉鹽和二精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯單鈉鹽。
實施例5 精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸注射劑藥物原科與用量單精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯二鈉鹽10g注射用水 1000ml
取單精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯二鈉鹽(即式(I)中n＝1，R1和R2中一個為H，另一個為Na，R3為Na)10g，加注射用水溶解，再加注射用水至1000ml，過濾，灌封，用100℃流通蒸氣滅菌30分鐘，即得。
實施例6 精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸片劑藥物原科與用量精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯1.0kg糖粉 3.0kg淀粉 7.0kg淀粉漿(8％) 0.1kg硬脂酸鎂 0.1kg制成 10萬片將精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯(即式(I)中R1＝R2＝R3＝H)與淀粉(1∶1)混合粉碎成100-120目細粉，加淀粉漿，充分攪拌混合后，用16目尼龍篩制拉，70℃通風干燥，干粒加入硬脂酸鎂，14目篩整粒，混勻，用6mm沖模壓片，包裝即得。
實施例7 精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸滴眼液藥物原科與用量二精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯二鈉鹽1g氯化鈉0.7g尼泊金乙酯0.03g注射用水 100ml將二精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯二鈉鹽(即式(I)中n＝2，R1＝R2＝H，R3＝Na)、氯化鈉，加適量滅苗蒸餾水溶解，過濾，自濾器上添加滅菌蒸餾水至全量，攪勻.即得。
實施例8 精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸膠囊劑藥物原科與用量二精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯單鈉鹽1kg淀粉 10kg淀粉漿(8％) 0.1kg將二精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯單鈉鹽(即式(I)中n＝2，R1＝R2＝H，兩個R3分別為H和Na)與淀粉(1∶1)混合粉碎成100-120目細粉，加淀粉漿，充分攪拌混合后，用16目尼龍篩制拉，70℃通風干燥，干粒，填充，包裝即得。
以本發(fā)明的上述精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯化合物(即式(I)結構中n＝1，R1、R2和R3均為H)為試驗藥物，進行了下屬的藥效學試驗。
抗病毒試驗以本發(fā)明的試驗藥物與穿琥寧(40mg/支，黑龍江飛峽制藥工業(yè)有限公司，批號030902)和病毒唑(三氮唑核苷)注射液(100mg/ml，湖北宜藥集團公司生產(chǎn)，批號0301001)兩對照藥物進行平行試驗。其中，穿琥寧用1％Na2CO3稀釋為66.7mg/ml濃度；病毒唑和本發(fā)明藥物用生理鹽水稀釋，并以藥物稀釋液Hanks作陰性空白對照。毒株為北京兒科研究所引進提供的腺病毒3型(Adv3)及四川省衛(wèi)生防疫站引進的流感病毒FM1和柯薩奇B病毒(COXBV)；細胞株為汕頭華苗生物工程公司細胞室提供的Hep-2細胞和Z-HL16C細胞。
1.細胞毒性試驗將本發(fā)明試驗藥物和兩對照藥物分別均配制成20、10、5、2.5和1.25(mg/ml)的5種不同濃度藥液，分別接種2支Z-HL16C及Hep-2細胞管，加2％小牛血清Eagles維持液，于37℃恒溫，觀察對正常細胞的毒性影響并設空白對照，逐日觀察細胞毒性反應界線。試驗結果如表2所示。
表2 細胞毒性試驗結果
(注表中“++”～“+”表示細胞圓縮，有不同程度毒性，“±”表示細胞極少數(shù)圓縮，“-”表示細胸無任何毒性。)上述結果表明，本發(fā)明藥物和病毒唑(10、5、2.5、1.25mg/ml各組)藥液對Z-HL16C及Hep-2細胞均無任何毒性反應，本發(fā)明藥物的10mg/ml組對Z-HL16C及Hep-2細胞可致極少許圓縮(非毒性所致)；三種藥液的無毒界線均從10mg/ml開始?？瞻讓φ?Hanks)對Z-HL16C及Hep-2細胞均無任何毒性反應。
2.體外抗病毒試驗取100TCID50/0.1ml(半數(shù)細胞病變量)的Adv3和COXBV病毒分別接種Hep-2細胞，取100TCID50/0.1ml(半數(shù)細胞病變量)的FM1病毒分接種Z-HL16C細胞，腮腺吸附30分鐘后洗去病毒，分別加入無毒界線的上述三種藥物的10、5、2.5、1.25(mg/ml)4個濃度組的試驗藥液，同時設病毒唑、穿琥寧對照和觀察對正常細胞影響的細胞對照組。置37℃恒溫，逐日觀察細胞病變。實驗結果如表3所示。
表3體外抗病毒試驗結果
(注表中“+++”～“+”表示細胞病變程度，“±”表示細胞極少數(shù)圓縮，“-”表示細胸無病變。)表3結果表明，本發(fā)明藥物的10mg/ml濃度對Adv3病毒，10～5mg/ml各濃度組對FM1和COXBV均有抑制作用；對照藥物病毒唑的10～5mg/ml各濃度組對FM1和COXBV病毒，10～2.5ml各濃度組對Adv3均有抑制作用對照藥物穿琥寧的10mg/ml組對Adv3和FM3病毒均有抑制作用，10～5mg/ml各濃度組對COXBV均有抑制作用。表明本發(fā)明藥物對Adv3和FM1病毒的抑制作用與穿琥寧的作用基本一致，且對FM1的抑制作用優(yōu)于穿琥寧，與病毒唑基本一致，但對Adv3病毒的抑制作用則不如病毒唑。
上述試驗結果已顯示，本發(fā)明的精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯鹽，能具有滿意的抗病毒作用。由于其具有理想的水溶性，因此可以被制成為多種不同制劑形式和有極大價值的藥物供使用。
權利要求
1.具有抗病毒作用的藥物，其特征是以如式(I)所示結構的精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯衍生物為有效藥物成分，與藥物中允許接受的輔助成分共同組成 其中n＝1～2；R1、R2、R3分別為H或Na，且R1、R2不同時為Na。
2.如權利要求1所述的具有抗病毒作用的藥物，其特征是所說有效藥物成分的式(I)結構精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯衍生物中的R1、R2、R3均為H。
3.如權利要求1所述的具有抗病毒作用的藥物，其特征是所說有效藥物成分的式(I)結構精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯衍生物中的n＝1，R1、R2、R3其中一個為Na，其余均為H。
4.如權利要求1所述的具有抗病毒作用的藥物，其特征是所說有效藥物成分的式(I)結構精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯衍生物中的n＝1，R1和R2中一個為H，另一個為Na，R3為Na。
5.如權利要求1所述的具有抗病毒作用的藥物，其特征是所說有效藥物成分的式(I)結構精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯衍生物中的n＝2，R1＝R2＝H，R3＝Na。
6.如權利要求1至5之一所述的具有抗病毒作用的藥物，其特征是所說的藥物為口服型制劑。
7.如權利要求1至5之一所述的具有抗病毒作用的藥物，其特征是所說的藥物為口含制劑。
8.如權利要求1至5之一所述的具有抗病毒作用的藥物，其特征是所說的藥物為包括注射液和凍干粉針制劑在內的注射型制劑。
9.如權利要求1至5之一所述的具有抗病毒作用的藥物，其特征是所說的藥物為外用制劑。
10.如權利要求8所述的具有抗病毒作用的藥物，其特征是所說的外用制劑包括普通皮膚粘膜用藥、滴眼劑、滴鼻劑或滴耳劑。
全文摘要
具有抗病毒作用的藥物，其特征是以如式(I)所示結構的精氨酸脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯衍生物為有效藥物成分，與藥物中允許接受的輔助成分共同組成，其中n＝1～2；R
文檔編號A61P31/00GK1596890SQ20041004026
公開日2005年3月23日 申請日期2004年7月21日 優(yōu)先權日2004年7月21日
發(fā)明者吳四靈, 王小林 申請人:四川標新醫(yī)藥科技有限公司