一種具有平肝活血安神作用的中藥組合物及制備方法

專(zhuān)利名稱(chēng)：一種具有平肝活血安神作用的中藥組合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種具有平肝活血安神作用的中藥組合物及制備方法。
背景技術(shù)：
花生枝葉為落花生的地上部分，含有多種揮發(fā)性成份，70年代以來(lái)始有文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于花生葉提取物的鎮(zhèn)靜催眠作用。本發(fā)明人在中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)99124202.5中公開(kāi)了一種含花生葉提取物的制劑，該制劑具有顯著的治療失眠癥的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是在中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)99124202.5的基礎(chǔ)上對(duì)花生枝葉提取物作進(jìn)一步的研究，并根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論，提供一種平肝活血安神作用更為明顯，治療因各種原因引起的失眠癥效果更為顯著的中藥復(fù)方組合物。
本發(fā)明公開(kāi)的具有平肝活血安神作用的中藥復(fù)方組合物是以落花生枝葉和丹參的提取物與藥用輔料組成的各種口服制劑。
落花生枝葉通過(guò)化學(xué)分離和藥理篩選得到一活性成份，經(jīng)MS、H1-NMR、C13-NMR和化學(xué)合成，確認(rèn)其化學(xué)結(jié)構(gòu)為4-羥基-N-甲基脯氨酸。
其中所述的落花生枝葉和丹參的提取物是指重量百分比組成為落花生枝葉15-85％和丹參85-15％的生藥材經(jīng)水煎醇沉后獲得的提取物，提取物經(jīng)HPLC檢測(cè)4-羥基-N-甲基脯氨酸的含量不低于0.067％，丹參素的含量不低于0.067％。
本發(fā)明所述的藥用輔料為常規(guī)制劑制備使用的各種輔料。所述的口服制劑是指醫(yī)學(xué)上可接受的各種口服制劑形成，包括口服液、膠囊劑、片劑、顆粒劑或丸劑等。
本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題在于提供上述中藥復(fù)方組合物的制備方法。
本發(fā)明公開(kāi)的具有平肝活血安神作用的中藥復(fù)方組合物的制備方法包括下列步驟1.提取物的制備取重量百分組成為落花生枝葉15-85％、丹參85-15％的藥材加水煎煮2次，合并水煎液濾液，濃縮至1-2g生藥/ml，加入乙醇使含醇量為70％，冷藏，過(guò)濾，濾液濃縮回收乙醇至相對(duì)密度1.10-1.40，過(guò)濾即得；或按上述藥材重量百分比組成和提取方法，將落花生枝葉和丹參分別進(jìn)行水提醇沉，合并二者提取液即得；提取物經(jīng)HPLC檢測(cè)4-羥基-N-甲基脯氨酸的含量不低于0.067％，丹參素的含量不低于0.067％；2.制劑制備取上述含活性成份提取液，加入藥用輔料，按常規(guī)方法制成各種制劑。
本發(fā)明所要解決的再一技術(shù)問(wèn)題在于公開(kāi)上述中藥復(fù)方組合物在制備治療因各種原因引起的失眠癥藥物中的應(yīng)用。
其中所述的失眠癥是指夜寐不安，間斷多夢(mèng)，早醒，醒后難以再入睡，或徹夜難寐。
花丹安神合劑以中醫(yī)“天人相應(yīng)”理論為指導(dǎo)，取花生葉具有“晝開(kāi)夜合”之特性，與人體睡眠同步一致，其性味甘平，微苦澀，入肝、心、肺三經(jīng)，具有平肝安神之效。加入丹參味苦微澀，入心、肝二經(jīng)，有活血化瘀安神寧心作用，以增強(qiáng)花生枝葉平肝活血安神之功，對(duì)臨床上各種原因引起的失眠癥均可以首選應(yīng)用或配合辨證論治復(fù)方對(duì)并有心腦血管病、肝病等參與應(yīng)用，可提高療效，相得益彰。
落花生枝葉提取物能減少小鼠自主活動(dòng)，加強(qiáng)并延長(zhǎng)戊巴比妥鈉的催眠作用，臨床治療失眠癥未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)和藥物依賴(lài)性。丹參制劑主要用于治療心血管疾病，但對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)也有抑制作用，臨床曾用于治療失眠癥患者亦有較好療效。丹參提取物也能減少小鼠自主活動(dòng)并有加強(qiáng)巴比妥類(lèi)藥物的催眠作用。落花生枝葉具有平肝活血安神作用，丹參具有活血安神之功，二者組合，可提高療效，相得益彰。
用本發(fā)明中藥復(fù)方組合物進(jìn)行相關(guān)藥理、毒理和臨床試驗(yàn)一、藥理試驗(yàn)1.本發(fā)明落花生枝葉和丹參提取物對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響1.1.光電管(photo-cell)法藥物本實(shí)驗(yàn)用落花生枝葉和丹參的提取物(簡(jiǎn)稱(chēng)花丹提取物)由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院中藥室提供。
儀器用小鼠自主活動(dòng)光電自動(dòng)記錄儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該儀器為圓形由三束光線(xiàn)組成，小鼠阻斷光線(xiàn)次數(shù)可即時(shí)顯示也可定時(shí)打印。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用昆明種雄性小鼠。實(shí)驗(yàn)前隨機(jī)取小鼠放入儀器中，適應(yīng)5分鐘，記錄10分鐘小鼠阻斷光線(xiàn)次數(shù)。先用8只小鼠篩選出10分鐘活動(dòng)的合格范圍，凡合乎此標(biāo)準(zhǔn)的小鼠用于實(shí)驗(yàn)。
劑量與分組每組10只動(dòng)物。用蒸餾水灌胃為空白對(duì)照組。設(shè)花丹提取物8g/kg組，含落花生枝葉生藥30g，丹參生藥15g，共計(jì)45g。此量為臨床每人(按60kg計(jì))每次用量，故動(dòng)物灌胃用量8g/kg、6g/kg、4.5g/kg、3.38g/kg分別為臨床用量的60、45、33.8、25.3倍(劑量間距1∶0.75)。陽(yáng)性對(duì)照藥棗仁安神液10ml/kg、。小鼠用量為臨床用量的60、30倍。西藥對(duì)照藥地西泮2.5mg/kg為臨床用量60倍。
方法將動(dòng)物放入儀器中適應(yīng)5分鐘后記錄10分鐘為用藥前活動(dòng)次數(shù)。灌胃給藥后適應(yīng)5分鐘，記錄每10分鐘動(dòng)物活動(dòng)次數(shù)，共40分鐘。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)由上海第二醫(yī)科大學(xué)金正均教授進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。以用藥前阻斷光線(xiàn)次數(shù)為100，用藥后每10分鐘活動(dòng)次數(shù)為其活動(dòng)率，先用單因素-方差分析Duncan法對(duì)用藥前和用藥后每個(gè)藥物各時(shí)間段之和的平均值與水對(duì)照組進(jìn)行比較為總體比較。用藥后每10min的結(jié)果用可重復(fù)雙因素方差分析法對(duì)水對(duì)照組和各用藥組的同一時(shí)間段進(jìn)行比較，以及各用藥組間進(jìn)行比較。
結(jié)果總體比較結(jié)果水對(duì)照組和花丹提取物前四個(gè)劑量組比較均有非常顯著差異?；ǖぬ崛∥?g/kg、8g/kg與棗仁安神液組比較有顯著和非常顯著差異。分段比較結(jié)果水對(duì)照組與花丹提取物8g/kg、6g/kg組有非常顯著差異，與4.5g/kg、3.38g/kg組有顯著差異，與棗仁安神液組有顯著差異。花丹提取物較棗仁安神液作用強(qiáng)，地西泮較花丹提取物作用強(qiáng)且維持時(shí)間也長(zhǎng)。花丹提取物四個(gè)劑量組量—效關(guān)系定量研究結(jié)果說(shuō)明量—效關(guān)系呈正相關(guān)。
1.2.開(kāi)闊(open field)法隨機(jī)取1只雄性昆明種小鼠放入一圓形盆中，盆底劃分為19格，放入小鼠適應(yīng)5分鐘以后以四肢離開(kāi)1格為穿越1格，記錄10分鐘小鼠穿越格數(shù)，經(jīng)篩選在合格范圍內(nèi)選為實(shí)驗(yàn)用鼠。給小鼠用蒸餾水灌胃為對(duì)照組，設(shè)花丹提取物8g/kg、6g/kg、4.5g/kg組，陽(yáng)性對(duì)照藥為棗仁安神液10ml/kg。每組動(dòng)物10只。觀察時(shí)間及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理方法與光電管法相同。
總體比較結(jié)果與水對(duì)照組比較花丹提取物各組、棗仁安神液組均有非常顯著差異，花丹提取物8g/kg組與棗仁安神液組比較有顯著差異。分段比較結(jié)果花丹提取物各劑量組與水對(duì)照組比較均有非常顯著差異，棗仁安神液有顯著差異。花丹提取物8g/kg組與棗仁安神液組比較有非常顯著差異，6g/kg組與棗仁安神液組比較有顯著差異?；ǖぬ崛∥镒饔幂^棗仁安神液強(qiáng)。
由以上結(jié)果可見(jiàn)兩種研究方法均證明花丹提取物能顯著減少小鼠自主活動(dòng)，其作用較棗仁安神液強(qiáng)，較地西泮稍弱。
2.花丹提取物與戊巴比妥鈉的協(xié)同作用2.1.延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間經(jīng)預(yù)試給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉35mg/kg為閾劑量。設(shè)蒸餾水對(duì)照組，花丹提取物8g/kg，6g/kg，4.5g/kg三個(gè)劑量組為實(shí)驗(yàn)組，陽(yáng)性對(duì)照藥為棗仁安神液10ml/kg。每組動(dòng)物20只，給各組動(dòng)物灌胃后25min腹腔注射戊巴比妥鈉以翻正反射消失至恢復(fù)的時(shí)間為睡眠時(shí)間。所得結(jié)果用多因素可重復(fù)方差分析Duncan法統(tǒng)計(jì)，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知花丹提取物8g/kg組能非常顯著延長(zhǎng)小鼠睡眠時(shí)間，花丹提取物6g/kg組、8g/kg組與棗仁安神液比較有顯著和非常顯著差異。
2.2.加強(qiáng)戊巴比妥鈉睡眠作用經(jīng)預(yù)試給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉20mg/kg為閾下睡眠劑量，實(shí)驗(yàn)分組和觀察指標(biāo)同2.1。給各組小鼠灌胃后25min，腹腔注射戊巴比妥鈉20mg/kg，記錄睡眠動(dòng)物數(shù)。用Fisher確切概率法統(tǒng)計(jì)。
由統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知花丹提取物與水對(duì)照組比較均有非常顯著差異，花丹提取物8g/kg與棗仁安神液組比較有非常顯著差異，6g/kg與棗仁安神液組比較有顯著差異，4.5g/kg與棗仁安神液組比較無(wú)差異。
3.花丹提取物對(duì)大鼠腦電活動(dòng)及睡眠的影響花丹提取物由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院中藥室提供。動(dòng)物用wister大鼠以ND-82B型八道腦電圖機(jī)記錄大鼠皮層腦電，同時(shí)記錄肌電活動(dòng)，設(shè)水對(duì)照組、花丹提取物5g/kg、4g/kg、3.2g/kg組，陽(yáng)性對(duì)照藥棗仁安神液8ml/kg，每組動(dòng)物8只，給大鼠灌胃后20分鐘開(kāi)始記錄，每次描記均從上午9:00開(kāi)始連續(xù)3小時(shí)，以30秒鐘為一時(shí)間段。將睡眠周期分為覺(jué)醒期(W)、慢波睡眠(SWS)、淺慢波睡眠(SWS1)、深慢波睡眠(SWS2)、異相睡眠(PS)、總睡眠時(shí)間(TST)。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用方差分析Duncan法統(tǒng)計(jì)處理。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明與水對(duì)照組比較花丹提取物各劑量組、棗仁安神液組覺(jué)醒時(shí)間均縮短，有顯著差異。慢波睡眠時(shí)間、總睡眠時(shí)間均延長(zhǎng)，有顯著差異?；ǖぬ崛∥锔鲃┝拷M均能延長(zhǎng)深慢波睡眠時(shí)間，棗仁安神液則未見(jiàn)此作用?；ǖぬ崛∥锝M與棗仁安神液組比較淺慢波睡眠、深慢波睡眠均延長(zhǎng)，有顯著差異。
由以上結(jié)果可見(jiàn)花丹提取物能減少大鼠覺(jué)醒時(shí)間，延長(zhǎng)總睡眠時(shí)間，尤其能顯著延長(zhǎng)深慢波睡眠時(shí)間。且與棗仁安神液相比有顯著差異。由于深慢波睡眠時(shí)間的延長(zhǎng)能提高睡眠質(zhì)量，對(duì)機(jī)體的體力和精力的恢復(fù)、促進(jìn)兒童生長(zhǎng)發(fā)育非常有益，故花丹安神合劑是一種較理想的催眠藥。
由以上藥理學(xué)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)證明花丹安神合劑有顯著減少小鼠自主活動(dòng)的作用?？稍鰪?qiáng)戊巴比妥鈉的催眠作用。腦電實(shí)驗(yàn)證明可延長(zhǎng)大鼠睡眠時(shí)間，尤其能延長(zhǎng)深慢波睡眠時(shí)間，較目前用的苯二氮卓類(lèi)催眠藥更為優(yōu)異。故是一種較理想的鎮(zhèn)靜催眠藥。
二、本發(fā)明花丹安神合劑與單味落花生枝葉、單味丹參的藥效比較1、材料1.1.花丹安神合劑取落花生枝葉100g、安徽產(chǎn)丹參50g，第一次加水1950ml煮沸后1h保溫2h將藥液濾出。第二次加入水1650ml煮沸后1h保溫2h將藥液濾出。濾液合并濃縮至100ml加入95％乙醇280ml，冷藏靜置24小時(shí)。過(guò)濾將濾液濃縮至流浸膏樣。根據(jù)藥理實(shí)驗(yàn)要求藥液濃度配制成規(guī)定量，待用。
2.1.單味落花生枝葉水煎酒沉液取落花生枝葉100g，第一次加水1300ml煮沸后1h保溫2h將藥液濾出。第二次加入水1100ml煮沸后1h保溫2h將藥液濾出。濾液合并濃縮至80ml加入95％乙醇224ml，冷藏靜置24小時(shí)。過(guò)濾將濾液濃縮至流浸膏樣。根據(jù)藥理實(shí)驗(yàn)要求藥液濃度配制成規(guī)定量，待用。
3.1.單味丹參水煎酒沉液取安徽產(chǎn)丹參50g，第一次加水650ml煮沸后1h保溫2h將藥液濾出。第二次加水550ml煮沸后1h保溫2h將藥液濾出。濾液合并濃縮至30ml加入95％乙醇84ml，冷藏靜置24小時(shí)。過(guò)濾將濾液濃縮至流浸膏樣。根據(jù)藥理實(shí)驗(yàn)要求藥液濃度配制成規(guī)定量，待用。
4.1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雄性昆明種小鼠17-23g，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。證號(hào)SCXK(滬)2002-0010。
5.1.實(shí)驗(yàn)儀器電腦一臺(tái)；小鼠自發(fā)活動(dòng)光電測(cè)試儀一套，由上海凱成電子技術(shù)研究所研制，型號(hào)2001-HDX。
2、實(shí)驗(yàn)方法2.1、分組空白對(duì)照組；單味丹參組；單味落花生枝葉組；花丹安神合劑組。
2.2、采用光電管法電腦自動(dòng)記數(shù)，記錄小鼠的平行移動(dòng)距離。將小鼠放入活動(dòng)箱內(nèi)先適應(yīng)5min，再記錄10min活動(dòng)。以平移距離為篩選指標(biāo)進(jìn)行篩選，用藥前10分鐘活動(dòng)次數(shù)高于2000或低于1000予以剔除。合格動(dòng)物進(jìn)行灌胃給藥，放入活動(dòng)箱內(nèi)5min后開(kāi)始記錄小鼠活動(dòng)次數(shù)作為藥理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。并儲(chǔ)存數(shù)據(jù)、分析數(shù)據(jù)。
2.3、給藥途徑和方法
1)水對(duì)照組隨機(jī)分組，每組12只，將小鼠放入自發(fā)活動(dòng)儀中觀察15分鐘后，按0.4ml/20g體重，灌胃給蒸餾水，灌胃后放入自發(fā)活動(dòng)儀中觀察40分鐘。
2)單味丹參組隨機(jī)分組，每組12只，灌胃給丹參藥液相當(dāng)于15g丹參/kg。方法同上。
3)單味落花生枝葉組隨機(jī)分組，每組12只，灌胃給落花生枝葉藥液相當(dāng)于30g落花生枝葉/kg。方法同上。
4)花丹安神合劑組隨機(jī)分組，每組12只，灌胃給花丹安神合劑相當(dāng)于30g落花生枝葉+15g丹參/kg。方法同上。
3、統(tǒng)計(jì)方法和實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件LSD法做方差分析統(tǒng)計(jì)比較試驗(yàn)藥物各時(shí)間段的活動(dòng)差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表表5 三組藥物對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響(光電管法)n＝12

注與水比較*P＜0.05；**P＜0.01；結(jié)果三組藥物與水比較用藥后5-15分鐘均有顯著性差異；用藥后15-45分鐘花丹安神合劑組與水比較有顯著性差異，而其他兩組則不明顯。說(shuō)明花丹安神合劑具有更顯著、更持久的鎮(zhèn)靜作用。
表6 花丹安神合劑與兩種單味藥物對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響(光電管法) n＝12


注花丹安神合劑組與丹參組比較▲P＜0.05；花丹安神合劑組與落花生枝葉組比較○P＜0.05；結(jié)果花丹安神合劑與單味丹參比較用藥后15-45分鐘均有顯著性差異；花丹安神合劑與落花生枝葉比較5-45分鐘有顯著性差異。說(shuō)明花丹安神合劑的作用優(yōu)于單味丹參、落花生枝葉的作用?；ǖぐ采竦慕M方確有增效作用。
三、毒理學(xué)研究資料綜述1.小鼠口服花丹安神合劑急性毒性試驗(yàn)花丹提取物由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院中藥室提供。昆明種小鼠共60只，雌雄各半。隨機(jī)分成6組，每組10只。單次灌胃給予花丹提取物按175、157.5、141.8、127.6、114.8g/kg(按花丹提取物中花生枝葉生藥計(jì)算)和蒸餾水。灌胃體積為60ml/kg。用藥后觀察14天內(nèi)小鼠急性毒性反應(yīng)和死亡情況。對(duì)照組小鼠灌胃給予蒸餾水后活動(dòng)自如，未見(jiàn)異常情況，灌胃給予花丹提取物175、157.5、141.8g/kg組小鼠給藥后萎靡不振，毛蓬松，平臥不動(dòng)。其余兩組(127.6、114.8g/kg)小鼠活動(dòng)減少。各組死亡情況花丹提取物175、157.5、141.8、127.6、114.8g/kg組用藥14天內(nèi)死亡數(shù)依次為10、8、5、2、0。存活動(dòng)物于用藥6-7小時(shí)后恢復(fù)正常。死亡動(dòng)物尸檢心、肝、脾、肺、腎未見(jiàn)明顯改變。用Bliss法計(jì)算口服花丹提取物對(duì)小鼠的LD50值及其95％可信限。結(jié)果為L(zhǎng)D50＝141.75g/kg；95％可信限為135.12-148.71g/kg(按花丹提取物中所含落花生枝葉生藥計(jì)算)。故LD50為臨床每人(體重60kg)每次用藥量的283倍。
2.大鼠口服花丹提取物長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)花丹提取物由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院中藥室提供。SD大鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)分為四組，每組20只。其中三組灌胃給予花丹提取物劑量分別為10，25，50g/kg(以?xún)?nèi)含落花生枝葉生藥計(jì)算)以每次每人(體重60kg)臨床用藥落花生枝葉30g、丹參15g計(jì)算，慢性毒性試驗(yàn)劑量為臨床用量的20，50，100倍。對(duì)照組用蒸餾水灌胃20ml/kg，每日1次。每周給藥6天，停藥1天，總共13周。用藥期間觀察大鼠體重、攝食量及一般情況。試驗(yàn)結(jié)束后處死2/3動(dòng)物進(jìn)行血液學(xué)、血液生化、病理學(xué)、臟器系數(shù)等檢查，其余動(dòng)物停藥后繼續(xù)觀察2周，然后處死重復(fù)上述檢驗(yàn)，試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用X±s表示，用單因子方差分析進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，當(dāng)方差分析結(jié)果顯示差別有顯著意義時(shí)，再用Q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果在13周用藥期間和恢復(fù)期兩周均未見(jiàn)動(dòng)物死亡，除花丹提取物大劑量組雄性大鼠第7周開(kāi)始毛色略黃外，其余各組大鼠活動(dòng)、精神狀態(tài)、皮毛、大便指標(biāo)在用藥期間和停藥后未見(jiàn)明顯改變。
臟器系數(shù)大劑量組雄性大鼠睪丸系數(shù)較對(duì)照組增大P＜0.01。大劑量組雌性大鼠肺的重量、肺系數(shù)、胸腺系數(shù)均較對(duì)照組增大P＜0.01。
血液學(xué)給藥13周后小劑量組雄性大鼠凝血時(shí)間比對(duì)照組長(zhǎng)P＜0.05病理學(xué)對(duì)照組腦2例可見(jiàn)蛛網(wǎng)膜下腔出血，其中1例伴淺表腦實(shí)質(zhì)出血小劑量組8例可見(jiàn)有肺出血，其中7例在支氣管腔中也同時(shí)發(fā)現(xiàn)有紅細(xì)胞，僅1例出血位于肺實(shí)質(zhì)，肺部有感染。腦1例蛛網(wǎng)膜下腔小出血灶。
中劑量組2例胸腺髓質(zhì)有少量出血，4例肺出血，僅1例出血主要位于間質(zhì)。
大劑量組1例心肌有小灶出血，6例肺出血，3例蛛網(wǎng)膜下腔出血。
根據(jù)支氣管腔內(nèi)有紅細(xì)胞大多數(shù)有肺出血應(yīng)視為割頸處死大鼠時(shí)血液被吸入所致。中、大劑量組可引起少數(shù)臟器小灶出血外，但對(duì)實(shí)質(zhì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。
研究結(jié)果提示，經(jīng)過(guò)3個(gè)月給藥后，各組大鼠的血液學(xué)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)均未見(jiàn)有臨床意義的改變，僅見(jiàn)用藥組小劑量雄性大鼠的凝血時(shí)間延長(zhǎng)。病理檢查發(fā)現(xiàn)中、大劑量組中有少數(shù)大鼠在用藥3個(gè)月后出現(xiàn)胸腺、肺、蛛網(wǎng)膜下腔、心肌小灶出血，但對(duì)實(shí)質(zhì)細(xì)胞并無(wú)明顯毒性。本研究所見(jiàn)的各組動(dòng)物肺部炎癥反應(yīng)，主要由于3個(gè)月的連續(xù)灌胃給藥所致，而并非為藥物引起。本研究的中、大劑量組藥物的劑量分別為臨床病人用量的50和100倍，且療程長(zhǎng)達(dá)90天，發(fā)生上述改變是可以預(yù)料的。此外，在這樣大劑量、長(zhǎng)療程的藥物作用下，未見(jiàn)動(dòng)物有各種異樣的表現(xiàn)和死亡。因此可以認(rèn)為本藥在臨床劑量和療程應(yīng)用時(shí)，為一種安全的藥物。
四、臨床觀察(一)觀察對(duì)象1.病人來(lái)源主要來(lái)自上海市中醫(yī)醫(yī)院和上海市中醫(yī)文獻(xiàn)館中醫(yī)門(mén)診部自愿接受該制劑治療的職工家屬、鄰居和部分病人。其中，性別男性9人、女性21人；年齡25-30歲3人、31-40歲0人、41-50歲10人、51-60歲7人、61歲以上10人；職業(yè)退休11人、工人6人、管理9人、醫(yī)師1人、財(cái)務(wù)2人、家務(wù)1人；病程2周至10年不等；并患其他疾病腦動(dòng)脈硬化3人、冠心病1人、高血壓1人、更年期綜合征2人、尿路感染1人、慢性胃炎1人、慢性肝炎1人；單純性失眠癥19人；一周內(nèi)未服過(guò)安定類(lèi)藥物16人；正在服安定類(lèi)藥物效果不佳或有副作用，要求服用中藥制劑治療者14人。
2.診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》(衛(wèi)生部1993年頒發(fā))①睡眠障礙；包括難以入睡、睡眠不深、多夢(mèng)易醒、早醒、醒后不能再入睡、或通宵難眠。
②上述睡眠障礙，每周至少發(fā)生3次，并持續(xù)兩周以上。
③白天精神緊張疲乏不適，影響正常工作學(xué)習(xí)或社會(huì)活動(dòng)功能。
④按國(guó)際通用的改進(jìn)型SPIEGEL量表記分≥12分為輕度失眠癥；≥18分為中度失眠癥；≥24分為重度失眠癥。
3.中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)參照《中醫(yī)辨證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》(國(guó)家中醫(yī)藥管理局1995年頒發(fā))，結(jié)合上海市中醫(yī)失眠癥網(wǎng)絡(luò)協(xié)作中心關(guān)于從肝論治失眠癥分為肝陽(yáng)上亢，肝郁化火，肝郁瘀阻，肝郁犯胃，肝郁犯心，肝亢腎虛6個(gè)證型進(jìn)行辨證分型。
(二)觀察方法1.治療藥物用本發(fā)明方法制得的口服制劑，簡(jiǎn)稱(chēng)花丹安神合劑，每支10ml(含生藥落花生枝葉15g，丹參7.5g)每日早晨飯后服一支，臨睡前服二支，連續(xù)服用兩周以上。服藥期間不得服用其他安眠藥，部分患者經(jīng)常服安定類(lèi)藥物有依賴(lài)性者，逐步遞減，直至停服。
2.觀察指標(biāo)按SPIEGEL量表檢測(cè)于服藥前、服藥后7天、14天、21天……分別記分，進(jìn)行治療前、后對(duì)照比較，作出療效統(tǒng)計(jì)。
3.療效評(píng)價(jià)根據(jù)《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》有關(guān)失眠癥的臨床療效評(píng)價(jià)，分為臨床痊愈、顯效、有效、無(wú)效；再按SPIEGEL量表的6項(xiàng)內(nèi)容(即入睡時(shí)間、總睡眠時(shí)間、夜醒次數(shù)、睡眠深度、做夢(mèng)多少、醒后感覺(jué))分別記分，然后將6項(xiàng)記分?jǐn)?shù)相加，得出總分。療程結(jié)束后，最后一次記分與治療前記分相比較，求得減分率。減分率≥80％為臨床痊愈、≥50％為顯效、≥25％為有效、＜25％為無(wú)效。
(三)觀察結(jié)果總共30例，其中重度失眠12例、中度失眠11例，輕度失眠7例。服藥2周21例，3周4例，4周0例，5周5例。結(jié)果見(jiàn)表7

30例中，臨床痊愈5例、顯效9例、有效10例、無(wú)效6例?？傆行?0％，其中臨床痊愈+顯效占46.67％，提示確有較好療效。
表8 30例失眠癥中醫(yī)辨證療效分析


提示肝郁瘀阻型療效最好，占91.67％，其中臨床痊愈+顯效9例，占75％。
(四)結(jié)論1.花丹安神合劑初步臨床觀察30例，總有效24例，占80.00％，其中臨床痊愈+顯效14例，占46.67％，有效10例，占33.33％，無(wú)效6例占20％。以失眠嚴(yán)重程度與療效關(guān)系分析，輕度失眠癥7例，有效4例，占57.1％，中度11例，有效9例，占81.8％，重度失眠癥12例，有效11例，占91.67％。提示，對(duì)重度失眠癥患者效果最好。
2.按中醫(yī)證型分析30例中，肝郁瘀阻型12例，11例有效，占91.67％，其中臨床痊愈+顯效9例，占75％。提示，花丹安神合劑與以花生枝葉為生藥，加入丹參后，加強(qiáng)了活血化瘀作用有關(guān)。
3.在服藥期間，未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)。
上述試驗(yàn)結(jié)果充分顯示，本發(fā)明中藥復(fù)方組合物具有很好的治療失眠效果，且優(yōu)于單獨(dú)的落花生提取物制劑和丹參提取物制劑，是一種安全有效的新型治療失眠的復(fù)方藥物。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(1)口服液制備處方落花生枝葉3000g、丹參1500g、苯甲酸鈉3g、蔗糖100g、甜蜜素2g制法取落花生枝葉、丹參，加水煎煮二次，每次1小時(shí)，保溫2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮，加3倍量95％乙醇使沉淀，靜置12～24小時(shí)，濾取上清液，濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.32，加甜蜜素、蔗糖、苯甲酸鈉，溶解，制成1000ml，混勻，即得。
含量測(cè)定(2)含量測(cè)定1)4-羥基N-甲基脯氨酸的含量測(cè)定柱KR100-5NH2流動(dòng)相乙腈—水(80∶20)檢測(cè)器示差檢測(cè)溫度30℃流速1.0mL/min測(cè)得口服液中4-羥基-N-甲基脯氨酸含量38mg/10ml。
(2)丹參素的含量測(cè)定柱C18流動(dòng)相甲醇—水—磷酸(20∶80∶0.05)檢測(cè)波長(zhǎng)280nm流速1.0mL/min測(cè)得口服液中丹參素含量42mg/10ml。
實(shí)施例2 顆粒劑制備處方落花生枝葉3000g、丹參1500g制法取落花生枝葉、丹參，加水煎煮二次，每次1小時(shí)，保溫2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮，加3倍量95％乙醇使沉淀，靜置12～24小時(shí)，濾取上清液，濃縮至相對(duì)密度為1.35～1.40，加一分蔗糖、一分糊精，混勻，制成顆粒，干燥，即得。4-羥基-N-甲基脯氨酸含量39mg/15g，丹參素含量43mg/15g。
實(shí)施例3吳XX，女，48歲，居委會(huì)干部，初診日期2002年3月21日，主訴失眠2-3年，病史始于月經(jīng)紊亂加工作過(guò)忙?，F(xiàn)一夜睡眠3-4小時(shí)，白天頭暈不適，心慌心煩，口干，時(shí)潮熱、自汗、月經(jīng)衍期，量少，服更年安稍好轉(zhuǎn)，失眠依然，未服過(guò)安定類(lèi)藥物。
檢查面色無(wú)華，眼眶黧黑，苔薄微黃，舌質(zhì)暗紅，脈細(xì)微弦。SPIEGEL量表記分24分。
診斷1.失眠癥2.更年期綜合征辨證肝郁瘀熱交阻，腎氣不足治則平肝活血安神處方花丹安神合劑×五盒 每日早晨飯后服一支，臨睡前服二支二診睡眠明顯改善，夜睡6-7小時(shí)，頭暈，心慌心煩均減輕，SPIEGEL量表記分14分。
三診自覺(jué)睡眠已恢復(fù)正常，夜睡6-7小時(shí)，白天精神振作，無(wú)頭暈心慌心煩，面色轉(zhuǎn)華，色斑已漸淡，自汗潮熱已止。SPIEGEL量表記分6分。
四診患者因工作較忙，失眠反復(fù)，改服棗仁安神口服液，連服一周后無(wú)效，SPIEGEL量表記分29分?；颊咭笤俜ǖぐ采窈蟿?，以觀察自身對(duì)照結(jié)果。一周后檢測(cè)SPIEGEL量表記分下降至19分，再一周后SPIEGEL量表記分為8分，又恢復(fù)正常睡眠。
隨訪近10個(gè)月，患者除因絕經(jīng)后，仍時(shí)有潮熱自汗外，睡眠基本正常。
實(shí)施例4徐XX，女，69歲，退休，初診日期2003年12月8日，主訴失眠2周，病史始于擔(dān)憂(yōu)身體健康致失眠。現(xiàn)一夜睡眠2-3小時(shí)，白天頭暈不適，心慌，口干，腰酸乏力，未服過(guò)安定類(lèi)藥物。
檢查面色尚華，苔薄，舌質(zhì)暗紅，脈細(xì)。SPIEGEL量表記分25分。
診斷失眠癥辨證肝郁瘀熱交阻治則平肝活血安神處方花丹安神合劑×五盒 每日早晨飯后服一支，臨睡前服二支二診睡眠明顯改善，夜睡5-6小時(shí)，頭暈，心慌均減輕，SPIEGEL量表記分11分。
三診自覺(jué)睡眠已恢復(fù)正常，夜睡6-7小時(shí)，白天精神振作，無(wú)頭暈心慌心煩。SPIEGEL量表記分6分。
隨訪一月來(lái)睡眠正常。
實(shí)施例5姚XX，女，73歲，退休，初診日期2003年11月7日，主訴失眠一年，病史始于高血壓頭暈后。現(xiàn)一夜睡眠2-3小時(shí)，白天頭暈不適，無(wú)心慌，未服過(guò)安定類(lèi)藥物。
檢查面色少華，苔薄，舌質(zhì)暗紅，脈細(xì)微弦。SPIEGEL量表記分18分。
診斷失眠癥辨證肝郁瘀熱交阻治則平肝活血安神處方花丹安神合劑 ×五盒 每日早晨飯后服一支，臨睡前服二支二診睡眠明顯改善，夜睡4-5小時(shí)，頭暈減輕，SPIEGEL量表記分12分。
三診自覺(jué)睡眠已恢復(fù)正常，夜睡6-7小時(shí)，白天精神振作，無(wú)頭暈。納可，便調(diào)。SPIEGEL量表記分7分。
隨訪二月來(lái)睡眠基本正常。
權(quán)利要求
1.一種具有平肝活血安神作用的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物是以落花生枝葉和丹參的提取物與藥用輔料組成的各種口服制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于其中所述的落花生枝葉和丹參的提取物是指重量百分比組成為落花生枝葉15-85％和丹參85-15％的生藥材提取獲得的提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物，其特征在于其中所述的提取物經(jīng)HPLC檢測(cè)4-羥基-N-甲基脯氨酸的含量不低于0.067％，丹參素的含量不低于0.067％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于其中所述的口服制劑是指醫(yī)學(xué)上可接受的各種口服制劑形成，包括口服液、膠囊劑、片劑、顆粒劑或丸劑。
5.一種制備權(quán)利要求1所述中藥組合物的方法，其特征在于該方法包括下列步驟1)有效成份提取物的制備取重量百分組成為落花生枝葉15-85％、丹參85-15％的藥材加水煎煮2次，合并水煎液濾液，濃縮至1-2g生藥/ml，加入乙醇使含醇量為70％，冷藏，過(guò)濾，濾液濃縮回收乙醇至相對(duì)密度1.10-1.40，過(guò)濾即得；或按上述藥材重量百分比組成和提取方法，將落花生枝葉和丹參分別進(jìn)行水提醇沉，合并二者提取液即得；提取物經(jīng)HPLC檢測(cè)4-羥基-N-甲基脯氨酸的含量不低于0.067％，丹參素的含量不低于0.067％；2)制劑制備取上述有效成份提取液，加入藥用輔料，按常規(guī)方法制成各種制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述中藥組合物在制備治療因各種原因引起的失眠癥藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有平肝活血安神作用的中藥組合物及制備方法。本發(fā)明公開(kāi)的具有平肝活血安神作用的中藥復(fù)方組合物是以落花生枝葉和丹參的提取物與藥用輔料組成的各種口服制劑。該中藥復(fù)方組合物具有很好的治療失眠效果，且優(yōu)于單獨(dú)的落花生提取物制劑和丹參提取物制劑，是一種安全有效的新型治療失眠的復(fù)方藥物。
文檔編號(hào)A61P25/00GK1657070SQ20041001641
公開(kāi)日2005年8月24日 申請(qǐng)日期2004年2月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月18日
發(fā)明者王翹楚, 龐傳宇, 錢(qián)伏剛, 施明, 解靜, 王國(guó)華, 范榮培, 胡鵬飛, 蔣愛(ài)芳, 杜上鑒, 許紅, 張曉峰, 張?chǎng)╈o, 徐建 申請(qǐng)人:上海太偉實(shí)業(yè)有限公司