專利名稱：重組人干擾素α噴霧劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及重組人α干擾素噴霧劑的配方、生產(chǎn)工藝及適應(yīng)癥。
背景技術(shù)：
干擾素是具有多種生物活性的蛋白質(zhì)，其中某些具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)和抗增生作用。干擾素保護動物組織和細胞不受病毒攻擊，是一種重要的宿主防御機制。人干擾素有幾種不同類型，一般分為白細胞(α干擾素)、成纖維細胞(β干擾素)和免疫細胞(γ干擾素)，以及它們的大量變體。
在臨床應(yīng)用中，干擾素的給藥方式是影響干擾素作用的一個重要因素。呼吸道病毒的種類雖然很多，但是，這種病毒引起人類的呼吸道感染卻有一個共同的特點，就是基本上是表面感染的性質(zhì)，也就是呼吸道粘膜上皮細胞的急性病毒感染。而且呼吸道的局部免疫系統(tǒng)較之全身性的免疫系統(tǒng)更為直接，更為重要。
呼吸道病毒的多樣性和可變性，說明采用具有廣譜的抗病毒活性的干擾素制劑是適宜的；急性上呼吸道病毒感染是表面感染性質(zhì)，說明采用呼吸道局部用藥途徑是適宜的；流感、感冒發(fā)病的可能機制，也說明采用干擾素制劑是有益的。據(jù)此，呼吸道局部應(yīng)用干擾素對防治流感及其它呼吸道病毒感染可獲得良好的效果。
因此，尋求合適的呼吸道局部應(yīng)用干擾素制劑，一直是大家關(guān)注的焦點。
本申請人經(jīng)過努力，研究成了一種重組人干擾素α噴霧劑。該重組人干擾素α噴霧劑與鼻粘液等滲，不改變鼻粘液的正常粘度，不影響纖毛運動和分泌液離子組成。該重組人干擾素α噴霧劑采用噴鼻給藥，藥液直接作用于鼻腔，從而達到有效預防和治療呼吸道病毒感染的目的。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種重組人干擾素α噴霧劑水溶性配方。
本發(fā)明的另一目的是提供一種重組人干擾素α噴霧劑。
本發(fā)明的又一目的是提供重組人干擾素α噴霧劑水溶性配方的應(yīng)用。
本發(fā)明的其他目的，在下面對本發(fā)明的具體描述中體現(xiàn)出來。
附圖1是本發(fā)明的制備重組人干擾素α噴霧劑的示意圖。
本發(fā)明的重組人干擾素α噴霧劑采用水溶性配方，因為干擾素是水溶性的，且水溶性的藥液能與鼻腔分泌物相溶，利于干擾素直接作用于鼻腔粘膜細胞，促進干擾素的吸收，并使鼻腔粘膜細胞處于一種抗病毒狀態(tài)，從而達到阻斷病毒感染的作用。
根據(jù)本發(fā)明，一種重組人干擾素α噴霧劑水溶性配方，含有重組人干擾素α，含量為20-300萬IU/ml，粘膜吸收促進劑，濃度為5-20％(v/v)保護劑，濃度為0.4-2.0％(w/v)，抑菌劑，濃度為0.25-0.5％(v/v)，緩沖液，pH值為5.0-8.0。
根據(jù)本發(fā)明，粘膜吸收促進劑的濃度，優(yōu)選為6-14％(v/v)，保護劑的濃度，優(yōu)選為0.8-1.5％(w/v)，抑菌劑的濃度，優(yōu)選為0.30-0.40％(v/v)。
重組人干擾素α可以是干擾素α2a，干擾素α2b，干擾素α2c或干擾素α1b，優(yōu)選的干擾素α是干擾素α2b。
根據(jù)本發(fā)明，粘膜吸收促進劑為甘油，終濃度5-20％(v/v)，優(yōu)選為6-14％(v/v)；緩沖液為0.85％生理鹽水；保護劑為人血白蛋白，終濃度為0.4-2％(w/v)，優(yōu)選為0.8-1.5％(w/v)；抑菌劑為三氯叔丁醇，終濃度為0.25-0.5％(v/v)，優(yōu)選為0.30-0.40％(v/v)；pH值為5.0-8.0。
本發(fā)明的重組人干擾素α噴霧劑，含有重組人干擾素α，含量為20-300萬IU/ml；粘膜吸收促進劑甘油，終濃度5-20％(v/v)，優(yōu)選為6-14％(v/v)；緩沖液為0.85％生理鹽水；保護劑為人血白蛋白，終濃度為0.4-2％(w/v)，優(yōu)選為0.8-1.5％(w/v)；抑菌劑為三氯叔丁醇，終濃度為0.25-0.5％(v/v)，優(yōu)選為0.30-0.40％(v/v)；pH值5.0-8.0。
本發(fā)明的重組人干擾素α噴霧劑，通過將重組人干擾素α與適量保護劑及抑菌劑混合而制成，其制備工藝的一種方案，可參見附圖1。
用于本發(fā)明重組人干擾素α噴霧劑的噴霧裝置，其各部件均應(yīng)采用無毒、無刺激性、性質(zhì)穩(wěn)定、與藥液不起發(fā)生理化作用的材料制造。利用該噴霧裝置噴出的霧粒大小，應(yīng)符合藥典關(guān)于噴霧劑噴射試驗的要求。
包裝瓶可以采用棕色玻璃瓶，利于避光保存，以保證干擾素生物活性的穩(wěn)定。
例如，本發(fā)明重組人干擾素α噴霧劑的成品可以是規(guī)格5.0ml(含重組人干擾素α100-1500萬IU)；貯藏2-8℃避光保存；包裝棕色玻璃瓶加聚乙烯塑料噴霧裝置及蓋帽；有效期12個月。
本發(fā)明的重組人干擾素α噴霧劑，可用于增強機體免疫力，預防和治療呼吸道病毒感染性疾病，如病毒性感冒，病毒性肺炎等。
本發(fā)明的重組人干擾素α噴霧劑，可通過鼻腔給藥。
本發(fā)明的重組人干擾素α噴霧劑水溶性配方，可用于制備本發(fā)明的噴霧制劑，噴霧制劑可用于預防和治療呼吸道病毒感染性疾病。
具體實施例方式實施例1取滅菌注射用水70ml至100ml量筒中，加入氯化鈉0.85g，甘油5ml，三氯叔丁醇0.35ml，人血白蛋白1g，攪拌使充分溶解，冷卻后加入干擾素α使成40萬IU/ml，用滅菌注射用水稀釋至100ml，混勻后用0.22μm濾膜除菌過濾，無菌分裝。
實施例2取滅菌注射用水70ml至100ml量筒中，加入氯化鈉0.85g，甘油10ml，三氯叔丁醇0.35ml，人血白蛋白1g，攪拌使充分溶解，冷卻后加入干擾素α使成100萬IU/ml，用滅菌注射用水稀釋至100ml，混勻后用0.22μm濾膜除菌過濾，無菌分裝。
實施例3取滅菌注射用水70ml至100ml量筒中，加入氯化鈉0.85g，甘油15ml，三氯叔丁醇0.35ml，人血白蛋白1g，攪拌使充分溶解，冷卻后加入干擾素α使成200萬IU/ml，用滅菌注射用水稀釋至100ml，混勻后用0.22μm濾膜除菌過濾，無菌分裝。
一、本發(fā)明重組人干擾素α2b噴霧劑穩(wěn)定性試驗材料和方法一、材料本發(fā)明的重組人干擾素α2b噴霧劑，為連續(xù)生產(chǎn)的三批制品，批號為20020201、20020202、20020203，試驗前于4℃冰箱保存。
二、方法將上述三批樣品，每批分別存放于4-8℃、20-25℃和37℃條件下，于放置當時及放置后不同時間分別抽樣進行IFN生物活性測定、微生物限度檢查、外觀和pH值檢查。
1.IFN生物活性測定采用Wish細胞-VSV檢測系統(tǒng)，微量細胞病變抑制法測定IFN生物活性單位，用中國藥品生物制品檢定所頒發(fā)的干擾素標準品校正。
2.微生物限度檢查按《中華人民共和國藥典》二部2000年版要求進3.外觀檢查按《藥劑學》進行。
結(jié)果1.在不同溫度條件下，保存不同時間的重組人干擾素α2b噴霧劑三批IFN生物活性測定結(jié)果見表1。
由表1結(jié)果可見重組人干擾素α2b噴霧劑在4-8℃條件放置當時和放置12個月后的IFN生物活性基本一致，未見下降；在20-25℃條件下放置4個月后的IFN生物活性未見下降；37℃條件下放置1個月生物活性未見下降。上述三批間結(jié)果基本一致，說明該制劑IFN生物活性十分穩(wěn)定，在4-8℃條件下可保存12個月以上。
2.重組人干擾素α2b噴霧劑在不同溫度條件保存。不同時間抽樣進行微生物限度檢查，按《中華人民共和國藥典》二部2000年版要求進行，結(jié)果表明4-8℃條件下放置12個月、20-25℃條件下放置4個月后，細菌、霉菌記數(shù)均小于10個，綠膿桿菌、金黃色葡萄糖球菌培養(yǎng)均為陰性。
3.抽樣測定IFN生物活性、微生物限度檢查的同時，觀察了重組人干擾素α2b噴霧劑的外觀。結(jié)果證明重組人干擾素α2b噴霧劑在4-8℃、20-25℃條件下可保存前后，外觀、pH無變化，符合《中華人民共和國藥典》二部2000年版和《藥劑學》的有關(guān)規(guī)定。
上述結(jié)果表明重組人干擾素α2b噴霧劑在4-8℃、20-25℃條件下保存，其生物活性、微生物限度檢查和外觀、pH均十分穩(wěn)定。說明該制劑生產(chǎn)工藝穩(wěn)定、可靠。為長途運輸、保存溫度與確定效期和大規(guī)模生產(chǎn)提供了科學依據(jù)。4-8℃或20-25℃條件，在一般醫(yī)院和家庭中均可達到。使臨床應(yīng)用易于普及，患者使用方便，重組人干擾素α2b噴霧劑確實是一個局部應(yīng)用的好劑型。
表1本發(fā)明重組人干擾素α2b噴霧劑穩(wěn)定性測定結(jié)果
二、本發(fā)明重組人干擾素α2b噴霧劑局部用藥毒性試驗a、材料1、本發(fā)明的重組人干擾素α2b噴霧劑，為連續(xù)生產(chǎn)的三批制品，批號為20020201、20020202、20020203，效價為2.25×105IU/ml，比活性為3.0×105IU/mg。
2、豚鼠由長春生物制品研究所供應(yīng)，體重為300～400克，雌雄各半，共30只。
b、試驗方法1、本發(fā)明的重組人干擾素α2b噴霧劑分為3個濃度組，第一組為2.25×103IU/ml，第二組為2.25×104IU/ml。第三組為2.25×105IU/ml，用前置低溫冰箱中凍結(jié)保存，使用當日融化。
每個劑量組10只豚鼠，雌雄各半，并分籠室飼養(yǎng)。每只豚鼠每日滴鼻2次，每次0.1毫升(雙孔)。連續(xù)滴鼻10天，于滴鼻當時、滴鼻之后及末次滴鼻后，連續(xù)觀察14天，判定結(jié)果。
c、試驗結(jié)果滴鼻用藥毒性觀察結(jié)果如表2所示。由表2結(jié)果可見接受2.25×103IU/ml的10只豚鼠，2.25×104IU/ml的10只豚鼠2.25×105IU/ml的10只豚鼠，于滴鼻當時，滴鼻后和連續(xù)14天觀察期間，均未發(fā)現(xiàn)局部刺激癥狀或毒性反應(yīng)，豚鼠全部健存。證明2.25×103IU/ml～2.25×105IU/ml三種劑量的本發(fā)明的重組人干擾素α2b噴霧劑滴鼻，對鼻腔局部及呼吸系統(tǒng)無刺激性，亦無炎癥反應(yīng)。
表2本發(fā)明重組人干擾素α2b噴霧劑豚鼠滴鼻毒性觀察 ※滴鼻當時，滴鼻后及末次滴鼻后連續(xù)觀察14天的結(jié)果。
Δ雌雄各半。
三、本發(fā)明重組人干擾素α2b噴霧劑抗HCMV的敏感性試驗材料1.HCMV中國生物制品檢定所提供，由本組按常規(guī)方法連續(xù)傳代，病毒滴度為10-5。
2.二倍體細胞由長春生物制品研究所提供。
3.本發(fā)明的重組人干擾素α2b噴霧劑效價為5.0×106IU/瓶，試驗使用濃度為100萬IU/ml，50萬IU/ml，10萬IU/ml。使用時，用滅菌生理鹽水稀釋。
4.培養(yǎng)液生長液MEM+10％小牛血清維持液MEM+1％小牛血清。
5.細胞培養(yǎng)板96孔costar細胞培養(yǎng)板方法干擾素病毒同時感染法(CPE法)用96孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細胞，每孔加入0.1ml細胞懸液，待細胞形成單層后，用于試驗。試驗組16孔。對照組16個孔，去除生長液，試驗組每孔加入0.1ml病毒，0.1ml干擾素，對照組每孔加入0.1ml病毒，置于37℃CO2孵箱中培養(yǎng)，每天觀察病變，7天后判定，常規(guī)方法計算病毒抑制滴度。結(jié)果見表3。
表3本發(fā)明重組人干擾素α2b噴霧劑抗HCMV的試驗結(jié)果
從上表可以看出，本發(fā)明重組干擾素α2b噴霧劑對HCMV抑制滴度大于10-4.5，說明本發(fā)明重組干擾素α2b噴霧劑對HCMV有很強的抑制作用。
四、本發(fā)明重組人干擾素α噴霧劑抗HSV1和HSV2的敏感性試驗材料1、HSV1和HSV2由中國預防醫(yī)學科學院病毒學研究所提供。-60℃凍存，取出溶化后為5個TCID50。
2、本發(fā)明重組人干擾素α噴霧劑中，重組人干擾素α分別為rIFNα1、α2a、α2b。
3、FL(人羊膜細胞)，長春生物制品研究所提供。
4、培養(yǎng)液199液，長春生物制品研究所提供。
方法用IFN和病毒同時感染FL細胞法。
用青霉素瓶培養(yǎng)FL細胞，每瓶加1ml細胞懸液，待細胞形成單層后用于試驗，每試驗4個細胞瓶，對照組4個細胞瓶，去掉生長液，試驗組每瓶加0.1mlIFN、0.1ml病毒、0.8ml維持液，對照組每瓶加0.1ml病毒、0.1ml維持液，放入35℃培養(yǎng)，每天觀察病變，待對照組出現(xiàn)明顯病變后，將各瓶凍存于-60℃冰箱。滴定前各組分別溶化合并，經(jīng)1500轉(zhuǎn)/分，15分鐘離心后取上清，按常規(guī)方法進行，滴定結(jié)果用TCID50計算抑制效價。結(jié)果見表4。
表4本發(fā)明重組人干擾素α噴霧劑對HSV1和HSV2的抑制作用
從上表可以看出，α各亞型重組干擾素對HSV1和HSV2均有較強的抑制作用，但對HSV2的敏感性高于HSV1的敏感性。
權(quán)利要求
1.重組人α干擾素噴霧劑水溶性配方，包含重組人干擾素α，含量20-300萬IU/ml，粘膜吸收促進劑，濃度為5-20％(v/v)，優(yōu)選6-14％(v/v)，保護劑，濃度為0.4-2.0％(w/v)，優(yōu)選0.8-1.5％(w/v)，抑菌劑，濃度為0.25-0.5％(v/v)，優(yōu)選0.30-0.40％(v/v)，緩沖液，pH值為5.0-8.0。
2.權(quán)利要求1的配方，其中粘膜吸收促進劑為甘油。
3.權(quán)利要求1的配方，其中保護劑為人血白蛋白。
4.權(quán)利要求1的配方，其中抑菌劑為三氯叔丁醇。
5.權(quán)利要求1的配方，其中緩沖液為0.85％生理鹽水。
6.權(quán)利要求1-5的配方在制備預防和治療呼吸道病毒感染性疾病的噴霧制劑中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求6的應(yīng)用，其中呼吸道病毒感染性疾病為病毒性感冒、病毒性肺炎。
全文摘要
本發(fā)明提供了預防和治療人上呼吸道病毒感染的干擾素噴霧制劑。本發(fā)明的制劑是一種重組人干擾素原液配以適當?shù)谋Ｗo劑、粘膜吸收促進劑、抑菌劑等制成的液體制劑，pH值在5.0－8.0。該制劑的適應(yīng)癥為預防和治療呼吸道病毒感染性疾病，如病毒性感冒、病毒性肺炎。
文檔編號A61P11/00GK1569225SQ03147580
公開日2005年1月26日 申請日期2003年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月24日
發(fā)明者郭橋, 盛軍, 陳爽, 鄭輝, 朱麗娜, 王萬明, 崔穎杰 申請人:長春生物制品研究所