專利名稱：一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑及其制備方法，屬中藥領(lǐng)域。
藥物治療(化療)是目前臨床腫瘤治療最有效的手段之一。現(xiàn)今用于腫瘤治療的化學(xué)治療藥物有百余種，這些化學(xué)治療藥物雖能在一定程度上控制腫瘤的發(fā)展，延長(zhǎng)腫瘤患者的生存時(shí)間，但治愈率仍很低。此外，目前所有這些化學(xué)治療藥物，其選擇性作用普遍較差，對(duì)機(jī)體造血系統(tǒng)、肝臟、腎臟、心臟等毒副作用均很強(qiáng)，晚期腫瘤患者甚至很難接受。因此，對(duì)療效好、毒副作用低的治療腫瘤藥物仍存在很大需求。
毛蘭素為聯(lián)芐類化合物，其結(jié)構(gòu)式名稱為3-羥基-4，3′，4′，5′-四甲氧基聯(lián)芐，分子量318，其英文名為erianin或dihydrocombretastatin A-4，溶于有機(jī)溶劑，極微溶于水。二十世紀(jì)90年代初，Cushman，M.等人(Cushman，M.等，J MedChem。1991，34，2579-2588)通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法研究發(fā)現(xiàn)，毛蘭素對(duì)體外培養(yǎng)的人體肺腺癌細(xì)胞株A-549、乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29、白血病細(xì)胞株MLM等的生長(zhǎng)均有抑制作用，其作用機(jī)制與抑制微管蛋白聚合、抑制新生血管形成、收縮血管減少組織血流量等有關(guān)。然而到目前為止，還沒(méi)發(fā)現(xiàn)單用毛蘭素或以毛蘭素為組合物的抗腫瘤藥物的報(bào)道。
另外，如上所述，毛蘭素具有溶于有機(jī)溶劑，極微溶于水的物理性質(zhì)，因此，若將其制成水溶性的口服制劑或供注射用的粉針劑或水針劑，勢(shì)必用量體積大，臨床使用十分困難。當(dāng)然，也可以將毛蘭素先制成毛蘭素鹽的形式，達(dá)到增加其在水中的溶解度，再將毛蘭素鹽制成水溶性的口服制劑或供注射用的粉針劑或水針劑，這樣做，從技術(shù)角度看雖然可行，但工藝相對(duì)較為復(fù)雜，成本也較高。本發(fā)明依據(jù)毛蘭素溶于植物油等有機(jī)溶劑的性質(zhì)，將其制成油與水能均勻混合的脂肪乳劑，解決了不需要以毛蘭素鹽的形式，而是直接將毛蘭素制成可供口服或供注射、使用方便的脂肪乳劑藥物。
一、一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑本發(fā)明依據(jù)毛蘭素溶于有機(jī)溶劑、微溶于水，極性較低等理化性質(zhì)特點(diǎn)，并根據(jù)藥效學(xué)研究靜脈給藥能最大限度發(fā)揮其抗腫瘤生物活性的特點(diǎn)，將其制備成可供注射用脂肪乳劑。
本發(fā)明一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑，它主要包含抗腫瘤有效量的活性成分毛蘭素、可藥用的植物油、乳化劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑和水。毛蘭素溶解在植物油中。
活性成分毛蘭素是從中藥材石斛中提取的提取物，它可以通過(guò)采取“一種石斛中提取毛蘭素的方法”(申請(qǐng)?zhí)枮?3115752.1，申請(qǐng)日為2003年3月12日的發(fā)明專利申請(qǐng)文件中作了詳細(xì)的敘述)而獲得，但這不是獲得毛蘭素的唯一方法和唯一來(lái)源。
制備脂肪乳劑的可藥用的植物油一般選自大豆油、玉米油、芝麻油、橄欖油、亞麻子油、藏紅花油以及這些油的混合物，也可以用甘油三脂肪酸酯，本發(fā)明實(shí)施例中植物油選用大豆油。
可藥用的乳化劑可以用大豆磷脂或卵磷脂，本發(fā)明實(shí)施例中乳化劑選用大豆磷脂。
可藥用的滲透壓調(diào)節(jié)劑可選用甘油、葡萄糖、甘露醇、山梨醇以及這些調(diào)節(jié)劑的混合物，本發(fā)明實(shí)施例中滲透壓調(diào)節(jié)劑選用的是甘油。
本發(fā)明藥物毛蘭素脂肪乳劑的各組分的用量和質(zhì)量應(yīng)當(dāng)符合藥學(xué)的一般標(biāo)準(zhǔn)。為了保證本發(fā)明抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑達(dá)到注射用標(biāo)準(zhǔn)，其所有組分包括活性成分毛蘭素、水、植物油、乳化劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑以及其它用料，都應(yīng)當(dāng)同時(shí)達(dá)到注射用標(biāo)準(zhǔn)。
前文所述的活性成分毛蘭素的“抗腫瘤有效量”，是指毛蘭素脂肪乳劑中含有能夠有效地治療腫瘤的毛蘭素的量。由于給藥對(duì)象不同，體重不同以及每人對(duì)藥物的反應(yīng)不同，該有效劑量也不同。但從產(chǎn)品的角度看，該有效劑量取決于產(chǎn)品中毛蘭素的濃度和給予產(chǎn)品的體積。產(chǎn)品中毛蘭素的濃度可在合適的范圍內(nèi)變化，濃度變化的范圍取決于毛蘭素在所用植物油中的溶解度、給藥量、給藥的體積以及人對(duì)可藥用植物油和乳化劑大豆磷脂或卵磷脂的最大耐受的限度等。據(jù)此，本發(fā)明毛蘭素脂肪乳劑中毛蘭素的濃度可在1-3.8mg/ml范圍內(nèi)。再結(jié)合患者的給藥量、給藥體積以及人對(duì)大豆磷脂或卵磷脂和可藥用植物油的耐受程度，以2.0mg/ml為優(yōu)選濃度。
在本發(fā)明抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑的組分中，植物油是抗腫瘤活性成分毛蘭素的溶媒，由于植物油種類繁多，不同種類的植物油其極性又各有不同，因此毛蘭素在不同種類的植物油中的溶解度亦有差別。鑒此，為了使毛蘭素脂肪乳劑中活性成分毛蘭素達(dá)到“抗腫瘤有效量”，所以不同種類的植物油在用量范圍上可以存在一定的差異。在本發(fā)明實(shí)施例中，植物油選用大豆油，其合理用量應(yīng)在100-250mg/ml之間，優(yōu)選用量為200mg/ml。
為保證毛蘭素脂肪乳劑的乳化質(zhì)量和穩(wěn)定性，在本發(fā)明的抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑中，乳化劑的用量與植物油的用量應(yīng)當(dāng)匹配。在本發(fā)明實(shí)施例中，植物油選用的大豆油與乳化劑選用的大豆磷脂的合適比例約為1∶0.06，相應(yīng)地，乳化劑匹配用量約為6-15mg/ml，優(yōu)選用量為12mg/ml。此外，由于不同種類的乳化劑乳化能力有差別，在用量上也應(yīng)有所不同。
在本發(fā)明的抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑組分中，滲透壓調(diào)節(jié)劑其作用是使本發(fā)明抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑的滲透壓調(diào)節(jié)至人的正常生理范圍內(nèi)。一般來(lái)說(shuō)講，不同的滲透壓調(diào)節(jié)劑由于其分子大小和極性不同，即使相同重量，不同滲透壓調(diào)節(jié)劑所產(chǎn)生的滲透壓也可不同。同時(shí)還必須注意，在本發(fā)明抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑中，其它組分(如抗腫瘤活性成分、植物油、乳化劑等)對(duì)滲透壓也產(chǎn)生一定影響，鑒于以上原因，每種滲透壓調(diào)節(jié)劑的用量須根據(jù)毛蘭素脂肪乳劑中其它組分的用量以及該種所選定的滲透壓調(diào)節(jié)劑的分子大小和極性強(qiáng)弱而定；在本發(fā)明實(shí)施例中，為了使本發(fā)明的抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑的滲透壓在人正常生理范圍內(nèi)，所選用的滲透壓調(diào)節(jié)劑甘油其合適用量為18-25mg/ml，優(yōu)選用量為22mg/ml。
綜上所述，本發(fā)明藥物毛蘭素脂肪乳劑的一般處方是活性成分毛蘭素 1-3.8g大豆油 100-250g大豆磷脂6-15g甘油25-18g注射用水加至1000ml其優(yōu)選處方是活性成分毛蘭素 2.0g大豆油 200g大豆磷脂12g甘油22g注射用水加至1000ml在本發(fā)明抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑中，還可以含有其它的抗腫瘤活性成分，借此可以提高療效、降低毒副作用以及擴(kuò)大應(yīng)用范圍，如包含紫杉醇、卡鉑、環(huán)磷酰胺、氟尿嘧啶、阿霉素等已知的抗腫瘤活性成分。
此外，在本發(fā)明抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑中，也可以加入抗氧化劑如維生素E、抗壞血酸等；也可以加入增加乳粒表面ζ電勢(shì)，提高毛蘭素脂肪乳劑穩(wěn)定性的穩(wěn)定劑，如油酸、膽酸、脫氧膽酸及其它們相應(yīng)的鹽。
本發(fā)明的抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑可以通過(guò)注射或口服的方式給藥，用作腫瘤的治療。本專業(yè)的技術(shù)人員可根據(jù)患者的實(shí)際情況，依據(jù)毛蘭素脂肪乳劑中毛蘭素的濃度和患者單位體重用藥量(如20mg/kg)或單位面積用藥量(如100mg/m2)，很容易確定給藥的劑量。
本發(fā)明抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑可以用以下所述工藝制備而得。
二、一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑的制備方法本發(fā)明抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑的制備方法其內(nèi)容包括處方和工藝，其處方已如上所述，其制備工藝包括如下步驟(1)按處方稱取各組分備用；將活性成分毛蘭素溶解在植物油中(必要時(shí)水浴加溫溶解)，得油相溶液；(2)將乳化劑用適量預(yù)熱的注射用水完全溶解，再加入滲透壓調(diào)節(jié)劑，混合均勻，得水相溶液；(3)向上述制備的水相溶液內(nèi)通入超純氮?dú)?，打開(kāi)攪拌機(jī)高速攪拌，邊攪拌邊向其中滴加上述制備的油相溶液，滴加完畢后再攪3-5分鐘，得乳白色較為均勻的初乳。
(4)將初乳加入高壓均質(zhì)機(jī)內(nèi)，打開(kāi)空氣泵，調(diào)節(jié)高壓均質(zhì)機(jī)壓力至83-138MPa，待壓力穩(wěn)定后開(kāi)始高壓均質(zhì)，收集經(jīng)高壓均質(zhì)的乳液；將其靜置到室溫，補(bǔ)加注射用水至處方總量，混合均勻，即得乳白色均一的毛蘭素脂肪乳劑。
(5)用堿溶液調(diào)節(jié)其PH值至8.5-9.5；在通超純氮?dú)獾臈l件下，濾過(guò)、分裝、密封，最后濕熱滅菌，即得可供注射用的毛蘭素脂肪乳劑成品。
在上述含毛蘭素的油相溶液的制備過(guò)程中，為了節(jié)省時(shí)間，必要時(shí)可采取水浴加熱的方式加速毛蘭素在可藥用植物油中的溶解，水浴溫度可在60-80℃之間。
上述的乳化劑大豆磷脂和卵磷脂在加熱或暴露在空氣中極容易氧化，為避免或減少乳化劑的氧化，在上述毛蘭素脂肪乳劑的制備過(guò)程中，至少應(yīng)從步驟(2)制備水相溶液開(kāi)始至步驟(5)分裝前的操作均需在通氮?dú)獾臈l件下進(jìn)行。
在本發(fā)明中，上述初乳的制備可采用高速攪拌法，攪拌速度在8000-20000轉(zhuǎn)/分鐘之間，優(yōu)選的攪拌速度為15000-18000轉(zhuǎn)/分鐘之間。
在高壓均質(zhì)時(shí)，均質(zhì)壓力可在83-138Mpa范圍內(nèi)，優(yōu)選壓力在96-120Mpa之間。該均質(zhì)方法不排除采用二步高壓均質(zhì)的方法，關(guān)于二步高壓均質(zhì)的均質(zhì)壓力等各個(gè)參數(shù)，本專業(yè)技術(shù)人員對(duì)此很容易調(diào)整。
實(shí)施例1稱取毛蘭素2.0g，注射用大豆油200g，注射大豆磷脂12g，注射用甘油22g，注射用水適量。將毛蘭素加入到注射用大豆油中，置于70℃的恒溫水浴中水浴，使其完全溶解，得油相溶液；將注射用大豆磷脂用適量預(yù)熱至70℃的注射用水完全溶解，再加入注射用甘油，混合均勻，得水相溶液；向上述水相溶液內(nèi)通入超純氮?dú)?，打開(kāi)攪拌機(jī)，以18000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速攪拌，邊攪拌邊向其中滴加上述制備好的油相溶液，滴加完畢后再繼續(xù)攪拌5分鐘，得乳白色較為均勻的初乳。
再將初乳溶液加入到高壓均質(zhì)機(jī)的料斗內(nèi)，打開(kāi)空氣泵開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)高壓均質(zhì)機(jī)壓力至110MPa，待壓力穩(wěn)定后進(jìn)行高壓均質(zhì)；收集經(jīng)高壓均質(zhì)的乳液，將其靜置到室溫，補(bǔ)加注射用水至1000ml(在本實(shí)施中實(shí)際用水約769ml)，混合均勻，即得乳白色均一的毛蘭素脂肪乳劑。
向上述制得的毛蘭素脂肪乳劑中滴加0.1M的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)其PH值至8.5；濾過(guò)，在通超純氮?dú)獾臈l件下，將其分裝于輸液瓶?jī)?nèi)，扎蓋密封，置于濕熱滅菌器內(nèi)120℃滅菌30分鐘，得可供注射用的毛蘭素脂肪乳劑成品。
實(shí)施例2、3實(shí)施例2、3的工藝步驟與例1完全相同，其處方中各組分及用量、工藝中參數(shù)如表1所示表1各實(shí)施例中所用的組分、分量及壓力參數(shù)
在上述實(shí)施例中，所用的注射用大豆油，也可用注射用玉米油、芝麻油、橄欖油、亞麻子油、藏紅花油、甘油三脂肪酸酯等油溶劑及其混合物來(lái)替換；所用的注射用大豆磷脂亦可用注射用卵磷脂或兩者混合物來(lái)替換。
采用本發(fā)明制得的毛蘭素脂肪乳劑，經(jīng)檢測(cè)其質(zhì)量外觀均一，呈乳白色液狀，PH為6.8-7.3(滅菌后的PH值)，滲透壓在人的正常的生理范圍內(nèi)，粒徑1um以下占80％，粒徑在5um以上的未檢出，無(wú)菌，內(nèi)毒素等質(zhì)量指標(biāo)符合中華人民共和國(guó)藥典相關(guān)規(guī)定。3個(gè)月加速實(shí)驗(yàn)和一年的室溫下穩(wěn)定性試驗(yàn)表明質(zhì)量穩(wěn)定。
以下通過(guò)試驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡明本發(fā)明藥物毛蘭素脂肪乳劑的有益效果，這些試驗(yàn)包括體外抗腫瘤試驗(yàn)和體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)。[試驗(yàn)例1]體外法抗腫瘤試驗(yàn)1、試驗(yàn)材料試驗(yàn)藥品毛蘭素脂肪乳劑(浙江天皇藥業(yè)有限公司提供)；陽(yáng)性對(duì)照品阿霉素(浙江海正藥業(yè)有限公司產(chǎn)品)；腫瘤細(xì)胞株白血病細(xì)胞株HL-60，肺腺癌細(xì)胞株A-549，結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-116，肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞株BEL-7402，乳腺癌細(xì)胞株MCF-7。2、試驗(yàn)方法分別將一定數(shù)量的上述腫瘤細(xì)胞株接種在96孔的培養(yǎng)板，懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞在接種后立即加藥，，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)待其貼壁后再加藥。試驗(yàn)藥品毛蘭素脂肪乳劑設(shè)8或10個(gè)作用濃度，每個(gè)濃度設(shè)8個(gè)復(fù)孔。另設(shè)無(wú)細(xì)胞調(diào)零孔、相應(yīng)的溶媒作為陰性對(duì)照孔和阿霉素陽(yáng)性對(duì)照孔。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞采用MTT法測(cè)定。藥物作用48小時(shí)后，加入MTT工作液(5mg/ml，Sigma)，每孔20ul；37℃作用4小時(shí)，再加入三聯(lián)液(10％SDS-5％異丁醇-0.01mol/L HCl)；37℃作用12-20小時(shí)后，在酶標(biāo)儀上于570nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值；貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞采用SRB法測(cè)定。藥物作用72小時(shí)后，傾去培養(yǎng)液，加10％TCA，每孔100ul，4℃固定1小時(shí)；傾去固定液，用蒸餾水洗5次，自然干燥。再加SRB工作液(4mg/ml，Sigma)，每孔100ul，室溫染色15分鐘，棄去染液，用1％的冰醋酸洗5次，自然干燥。最后加入Tris緩沖液，每孔150ul，搖勻，酶標(biāo)儀上于515nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值。按下列公式計(jì)算細(xì)胞增殖生長(zhǎng)抑制率抑制率(％)＝(OD值對(duì)照空-OD值給藥孔)/OD值對(duì)照空×100％采用LOGIT法計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50值。以IC50值作為抑制能力的最終指標(biāo)。3、試驗(yàn)結(jié)果毛蘭素脂肪乳劑體外對(duì)5株不同組織來(lái)源的人腫瘤細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)均呈現(xiàn)出較強(qiáng)的抗腫瘤作用(見(jiàn)下表)，其中對(duì)人白血病細(xì)胞HL-60生長(zhǎng)抑制作用最強(qiáng)，IC50值為0.0025ug/ml；對(duì)呼吸系統(tǒng)來(lái)源的腫瘤細(xì)胞A-549作用次之，IC50值為0.012ug/ml；對(duì)胃腸道來(lái)源的腫瘤細(xì)胞HCT-116的生長(zhǎng)抑制作用又次，IC50值為0.05ug/ml；對(duì)乳腺癌和肝癌的作用略弱，IC50值分別為0.94ug/ml和1.07ug/ml。試驗(yàn)結(jié)果還顯示，毛蘭素脂肪乳劑抗腫瘤作用具有一定程度的選擇性。
表1、毛蘭素脂肪乳劑體外對(duì)4株人腫瘤細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)抑制率和IC50值細(xì)胞株 不同濃度毛蘭素(ug/ml)的增殖生長(zhǎng)抑制率(％) IC50值2 10.50.250.1250.06250.0310.0160.0080.004 (ug/ml)HL-60 未測(cè)未測(cè)68.9 66.864.5 64.5 52.6 65.2 63. 144.1 0.0025A-549 未測(cè)未測(cè)94.1 96.090.4 88.4 86.4 75.4 37.8 12.10.012HCT-116 85.4 85.281.4 78.169.0 46.8 25.8 0.0 未測(cè) 未測(cè)0.05MCF-7 71.7 45.936.0 19.917.8 11.8 6.9 12.0 未測(cè) 未測(cè)0.94表2、毛蘭素脂肪乳劑體外對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402的增殖生長(zhǎng)抑制率和IC50值細(xì)胞株 不同濃度毛蘭素(ug/ml)的增殖生長(zhǎng)抑制率(％) IC50值20 105 2.5 1.250.625 0.312 0.156 (ug/ml)BEL-7402 98.598.597.687.791.262.7 4.3 0 1.07表3、 陽(yáng)性對(duì)照藥阿霉素對(duì)5株人腫瘤細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)IC50值細(xì)胞株 HL-60 A-549 HCT-116 BEL-7402 MCF-7IC50值(mg/ml) 0.02 0.0160.02 0.0616.04、試驗(yàn)結(jié)論
毛蘭素脂肪乳劑體外對(duì)白血病和不同組織來(lái)源的人腫瘤細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的抑制作用，并顯示出一定的選擇性。[試驗(yàn)例2]體內(nèi)法抗腫瘤試驗(yàn)1、試驗(yàn)材料試驗(yàn)藥毛蘭素脂肪乳劑(浙江天皇藥業(yè)有限公司)，陽(yáng)性對(duì)照藥注射用環(huán)磷酰胺(上海華聯(lián)制藥集團(tuán)出品)、注射用順鉑(山東齊魯制藥廠出品)；瘤源小鼠S180肉瘤、人體肺癌(均有上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理室傳代提供)；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠(由中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)滬動(dòng)合證字第107號(hào))，裸鼠(由中科院上海藥物所提供，合格證號(hào)滬動(dòng)合證字第122號(hào))。2、試驗(yàn)方法小鼠S180肉瘤動(dòng)物皮下接種模型無(wú)菌條件下取生長(zhǎng)旺盛的S180腫瘤，以適當(dāng)量的生理鹽水稀釋成細(xì)胞勻漿，濃度為1-2×107/ml，于昆明種小鼠腋皮下接種0.2ml/只，次日開(kāi)始給藥。毛蘭素脂肪乳劑分三個(gè)劑量組，每天尾靜脈注射1次，連續(xù)給藥15天；對(duì)照設(shè)陰性空白對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照兩組，陰性空白對(duì)照組小鼠每天給予尾靜脈注射相同體積的空白乳劑，連續(xù)給藥15天。陽(yáng)性對(duì)照組小鼠每天給予尾靜脈注射環(huán)磷酰胺，連續(xù)給藥7天。3周后處死各組動(dòng)物，剖取腫瘤稱重，按下列公式計(jì)算腫瘤抑制率腫瘤抑制率(％)＝[(對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重]×100％。
人體肺癌A549異種移植于裸鼠模型無(wú)菌條件下取生長(zhǎng)于裸鼠的A549人體肺癌第三代腫瘤組織，以生理鹽水按1∶6的比例稀釋成細(xì)胞勻漿，濃度為1-2×107/ml，于裸鼠腋皮下接種0.2ml/只，次日開(kāi)始給藥。毛蘭素脂肪乳劑分三個(gè)劑量組，每天尾靜脈注射1次，連續(xù)給藥15天。對(duì)照設(shè)陰性空白對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照兩組，陰性空白對(duì)照組小鼠每天給予尾靜脈注射相同體積的空白乳劑，連續(xù)給藥15天。陽(yáng)性對(duì)照組小鼠每天給予尾靜脈注射順鉑，連續(xù)給藥7天；3周后處死各組動(dòng)物，剖取腫瘤稱重，按上述計(jì)算腫瘤抑制率的公式進(jìn)行計(jì)算。3、試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果顯示，高劑量毛蘭素脂肪乳劑對(duì)動(dòng)物皮下接種小鼠S180肉瘤模型腫瘤生長(zhǎng)增殖抑制率為54.45％，對(duì)異種移植于裸鼠人體肺癌A549腫瘤模型的腫瘤生長(zhǎng)增殖抑制率為59.36％。試驗(yàn)過(guò)程中還發(fā)現(xiàn)，毛蘭素脂肪乳劑各試驗(yàn)組小鼠活動(dòng)、飲食、毛色均正常，體重增加。提示毛蘭素對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)增殖具有顯著的抑制作用，而且無(wú)明顯毒性。具體結(jié)果見(jiàn)表4、表5表4、毛蘭素脂肪乳劑對(duì)小鼠S180肉瘤(皮下接種)療效樣品 劑量 給藥方案 動(dòng)物數(shù)(只) 動(dòng)物體重 瘤重 抑瘤率(mg/kg)始/終 始/終(g)X±SD(g)(％)毛蘭素10iv×15qd 10/1018.7/24.0 1.83±0.1934.88毛蘭素50iv×15qd 10/1018.7/25.9 1.44±0.1648.75毛蘭素100 iv×15qd 10/1018.5/26.2 1.28±0.1854.45環(huán)磷酰胺 30ip×7qd 10/1018.6/24.0 0.30±0.1689.57陰件對(duì)照相應(yīng)溶劑iv×15qd 20/2018.8/26.5 2.81±0.34
表5、毛蘭素脂肪乳劑對(duì)人體肺癌A549異種移植模型的療效樣品劑量給藥方案動(dòng)物數(shù)(只) 動(dòng)物體重瘤重抑瘤率(mg/kg) 始/終始/終(g)X±SD(g) (％)毛蘭素 50iv×15qd 6/6 19.5/24.00.82±0.15 56.15毛蘭素 100 iv×15qd 6/6 19.0/23.70.78±0.12 58.29毛蘭素 200 iv×15qd 6/6 19.3/24.20.76±0.07 59.36順鉑30ip×7qd 6/6 19.3/19.80.22±0.08 88.24陰性對(duì)照相應(yīng)溶劑iv×15 qd 12/1219.1/23.81.87±0.224、結(jié)論毛蘭素脂肪乳劑具有顯著的抗腫瘤作用，而且毒性較低。根據(jù)一般脂肪乳劑藥劑學(xué)的特點(diǎn)，本發(fā)明的抗腫瘤藥物毛蘭索脂肪乳劑還具有緩釋、靶向、為機(jī)體提供能量等作用。
權(quán)利要求
1.一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑，其特征在于它主要包含可藥用的植物油、乳化劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、水和溶解在植物油中的抗腫瘤有效量的活性成分毛蘭素。
2.如權(quán)利要求1所述的一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑，其特征在于所述的植物油選自大豆油、玉米油、芝麻油、橄欖油、亞麻子油、藏紅花油以及這些植物油的混合物；乳化劑選自大豆磷脂、卵磷脂；滲透壓調(diào)節(jié)劑選自甘油、葡萄糖、山梨醇以及這些調(diào)節(jié)劑的混合物。
3.如權(quán)利要求2所述的一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑，其特征在于所述的植物油為大豆油，乳化劑為大豆磷脂，滲透壓調(diào)節(jié)劑為甘油。
4.如權(quán)利要求2、3所述的一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑，其特征在于其處方是活性成分毛蘭素 1.0-3.8g大豆油 100-250g大豆磷脂 6-15g甘油 25-18g注射用水 加至1000ml
5.如權(quán)利要求4所述的一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑，其特征在于其處方為活性成分毛蘭素 2.0g大豆油 200g大豆磷脂 12g甘 油 22g注射用水 加至1000ml
6.如權(quán)利要求1的一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑的制備方法，其特征在于有以下步驟(1)將抗腫瘤有效量的活性成分毛蘭素溶解在可藥用的植物油中(必要時(shí)水浴加溫溶解)，得油相溶液；(2)將適量的乳化劑加入適量的注射用水使之完全溶解，再加入適量的滲透壓調(diào)節(jié)劑，混合均勻，得水相溶液；(3)向水相溶液內(nèi)通入超純氮?dú)猓脭嚢铏C(jī)進(jìn)行高速攪拌，邊攪拌邊向其中滴入前述配制的油相溶液，滴加完畢后，再攪拌3-5分鐘，即得白色較為均勻的初乳；(4)將初乳加入高壓均質(zhì)機(jī)內(nèi)，使用均質(zhì)壓力在83-138MPa之間，調(diào)節(jié)均質(zhì)機(jī)壓力，待壓力穩(wěn)定后開(kāi)始高壓均質(zhì)，收集經(jīng)高壓均質(zhì)的乳液，即為白色均一的毛蘭素脂肪乳劑；靜置至室溫，補(bǔ)加注射用水至處方總量；(5)用堿溶液調(diào)節(jié)上述毛蘭素脂肪乳劑的PH值至8.5-9.5之間，濾過(guò)、灌封滅菌，即為毛蘭素脂肪乳劑成品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗腫瘤藥物毛蘭素脂肪乳劑及其制備方法。該毛蘭素脂肪乳劑，其處方組成成分包括毛蘭素、大豆油、大豆磷脂、甘油和注射用水。本發(fā)明毛蘭素脂肪乳劑的制備工藝包括初乳制備、高壓均質(zhì)、pH值調(diào)節(jié)和濕熱滅菌等步驟。本發(fā)明毛蘭素脂肪乳劑，可用于治療腫瘤，或者治療與新生血管形成相關(guān)的疾病。毛蘭素脂肪乳劑抗腫瘤作用藥效明顯，且具有緩釋、靶向、毒副作用低、并能夠?yàn)闄C(jī)體提供能量等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K47/44GK1451378SQ03117069
公開(kāi)日2003年10月29日 申請(qǐng)日期2003年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月21日
發(fā)明者陳立鉆, 楊兵勛, 孫繼軍 申請(qǐng)人:浙江天皇藥業(yè)有限公司