專利名稱：抗乙肝病毒表面抗原的人源單克隆抗體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗乙肝病毒表面抗原的人源單克隆抗體的制備方法，更確切地說是利用細胞程和抗體工程技術(shù)，獲得分泌抗乙肝表面抗原的人源單克隆抗體的人-鼠雜交瘤和人-人雜交瘤細胞系，并通過雜交瘤細胞的多孔微載體培養(yǎng)，及采用親和層析方法純化細胞培養(yǎng)上清，制備可用于乙型肝炎的預防和治療的抗乙肝表面抗原的人源單克隆抗體的方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。
抗體被動免疫能夠有效地預防和治療病毒感染，從anti-HBsAg陽性的人血漿中提取的乙肝免疫球蛋白(Hepatitis B Immune Globulin，HBIG)Nabi-HBTM已經(jīng)在1999年獲得FDA批準用于預防和治療乙肝。我國也有類似的產(chǎn)品上市，如深圳市衛(wèi)武光明生物制品有限公司生產(chǎn)的人乙型肝炎免疫球蛋白(批準文號國藥準字SF20010049，國藥準字SF20010050)。人Anti-HBsAg抗體能夠中和血液循環(huán)中的乙肝病毒，大大減小血液中的病毒顆粒數(shù)和HBV DNA，以減輕癥狀。也可與其他抗病毒藥物如干擾素、拉夫米定等聯(lián)合使用，以增強療效。這些治療方法正處于臨床實驗中。但是，由于乙肝免疫球蛋白從人血漿中提取，雖經(jīng)過嚴格的滅毒提純工藝，但仍存在傳播傳染性疾病的危險，并且來源有限價格昂貴，因而大大限制了其在臨床中的應(yīng)用。利用基因工程、抗體工程和細胞工程等生物技術(shù)，開發(fā)基因工程或抗體工程的人Anti-HBsAg抗體以取代目前的乙肝免疫球蛋白，將會大大促進乙型肝炎的防治。
鼠源單抗由于存在半衰期短、Fc段與人體細胞的FcR結(jié)合能力差以及反復使用可使人體產(chǎn)生人抗鼠抗體(HAMA)引起過敏反應(yīng)等原因，限制了鼠源單抗在疾病治療中的應(yīng)用。治療用抗體藥物開發(fā)的最主要的障礙是如何獲得人源抗體。目前批準用于臨床治療的單抗藥物都是基于鼠源單抗，通過基因工程手段改造而獲得的。鼠源抗體的人源化極大地促進了抗體藥物開發(fā)的進展，但也有一些不足，如(1)技術(shù)路線較復雜，開發(fā)的難度大、周期長；(2)在人源化過程中，抗體與抗原的親和能力可能會大大下降，從而影響其治療效果；(3)由于人源化抗體中還包含部分鼠源序列，在使用過程中仍有部分病人會產(chǎn)生人抗嵌合抗體抗體(HACA)。
從理論上說利用雜交瘤技術(shù)制備人—人雜交瘤細胞是生產(chǎn)人源單克隆抗體最理想的方法，但是難度很大，主要問題有(1)缺乏理想的親本人骨髓瘤細胞株。許多人骨髓瘤細胞自身分泌抗體，且融合后不穩(wěn)定。(2)難于獲得大量的抗原特異性人B淋巴細胞。(3)人單克隆抗體的大量生產(chǎn)問題。由于免疫排斥，人雜交瘤細胞不能在小鼠或其他動物體內(nèi)生長，在裸鼠體內(nèi)生長的效果也很不理想。比較理想的方法是利用生物反應(yīng)器大規(guī)模高密度培養(yǎng)人雜交瘤細胞。因此，盡管抗體藥物在許多領(lǐng)域表現(xiàn)出較好的治療效果，但至今還沒有一種利用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的人源(而非人源化)單克隆抗體藥物問世。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案抗乙肝病毒表面抗原的人源單克隆抗體的制備方法，該方法包括以下步驟(1)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞的分離先用0.1％的甲基纖維素生理鹽水溶液初步沉降乙肝表面抗體陽性的健康人外周血中的紅細胞，再利用淋巴細胞分離液(Ficoll-Hypaque，d＝1.077)分離其中的單個核細胞。獲得的細胞中包含分泌乙肝抗體的B細胞及可以在SCID鼠體內(nèi)形成類似于人體免疫系統(tǒng)的一些造血干細胞。
(2)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞的的體外培養(yǎng)通過體外混合培養(yǎng)外周血單個核細胞以活化、致敏和增殖其中的HBsAg特異的B細胞。
(3)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞培養(yǎng)增殖后B細胞和T細胞的分離采用植物凝聚素等方法，去除混合培養(yǎng)外周血單個核細胞中的T細胞，以獲得分泌anti-HBsAg滴度較高并且相對較純的人B細胞供細胞融合使用。
(4)用SCID鼠體內(nèi)培養(yǎng)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞；也可通過將人外周血單個核細胞移植到SCID小鼠體內(nèi)，來活化、致敏和增殖其中的HBsAg特異的B細胞，經(jīng)過一段時間收集SCID小鼠的脾細胞做細胞融合。
(5)收集含表達乙肝表面抗體的人B細胞，與人骨髓瘤細胞SP2或小鼠骨髓瘤細胞NS-1、SP2/0融合將體外混合培養(yǎng)或SCID小鼠體內(nèi)培養(yǎng)獲得的可分泌抗HBsAg抗體的的人B細胞與人骨髓瘤細胞SP2或小鼠骨髓瘤細胞NS-1、SP2/0融合。
(6)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選雜交細胞，檢測篩選陽性細胞，克隆化培養(yǎng)，進一步克隆篩選陽性細胞，陽性克隆擴增與凍存，單克隆抗體性質(zhì)的鑒定，獲得分泌抗乙肝表面抗原的單克隆抗體的人-人雜交瘤或人-鼠雜交瘤細胞系。
(7)培養(yǎng)雜交瘤細胞，獲得大量的含抗乙肝表面抗原的單克隆抗體的培養(yǎng)上清。
(8)收集細胞培養(yǎng)上清，用親和層析柱純化上清中的抗乙肝表面抗原的人源單克隆抗體。
本發(fā)明的優(yōu)點是(1)安全性好。用本方法生產(chǎn)乙肝表面抗體，不需要從乙肝表面抗體陽性人血中提取，從而避免了血液制品中可能污染其他致病原如丙肝、HIV等而導致用藥者感染這些疾病的可能性。(2)來源方便。目前生產(chǎn)的乙肝免疫球蛋白是從乙肝表面抗體陽性人血中提取，原料來源非常有限，并且價格昂貴，采用本發(fā)明中可分泌乙肝表面抗體的雜交瘤細胞的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)可以無限制大量生產(chǎn)乙肝表面抗體，并且隨著生產(chǎn)規(guī)模的擴大可以大大降低生產(chǎn)成本。(3)產(chǎn)品質(zhì)量可控性好。由于細胞的背景、細胞培養(yǎng)基的成分以及細胞培養(yǎng)上清的純化都是明確可控的，用這種方法生產(chǎn)出的單克隆抗體的質(zhì)量具有很強的可控性和可重復性，而血液來源的乙肝免疫球蛋白，由于人血成分的復雜及其不同捐血者的個體差異，其產(chǎn)品質(zhì)量容易受到不同批次血液原料的影響。(4)可節(jié)約大量寶貴的血液資源。
二、體外培養(yǎng)獲得供細胞融合的可分泌抗HBsAg抗體的的人B細胞1、乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞的體外培養(yǎng)將第步驟一獲得的單個核細胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)的培養(yǎng)基將細胞配成1×106/ml濃度，用細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添加適量的細胞因子如IL-2、IL-4和(或)IL-6，～0.1μg/ml乙肝表面抗原，適量的可促進淋巴細胞分裂的植物凝聚素如商陸促有絲細胞分裂原，2-巰基乙醇5×10-5mol/mL，青霉素100U/ml，鏈霉素100U/ml。
2、單個核細胞中的T細胞刪除經(jīng)過7天體外培養(yǎng)，收集培養(yǎng)的單個核細胞，將細胞用PBS配成4×108/mL，取0.5mL細胞懸液與0.5mL 2mg/mL的大豆凝聚素混合，室溫反應(yīng)5～10min，使B細胞凝聚。在15mL離心管中加入10mL2％BSA溶液，垂直放置離心管，將上述細胞懸液慢慢加至BSA溶液上面，令細胞自然沉降，凝聚的B細胞可在10～15min內(nèi)沉降至管底，而未凝聚的T細胞則在BSA溶液上部，吸出未凝聚細胞，收集沉降的B細胞，用D-半乳糖溶液解聚，便可獲得純度較高的單個B細胞。
三、SCID鼠體內(nèi)培養(yǎng)獲得供細胞融合的可分泌抗HBsAg抗體的的人B細胞將步驟一獲得的單個核細胞用DMEM/F12(1∶1)的培養(yǎng)基將細胞配成1～2×108/ml的細胞懸液，經(jīng)尾靜脈或腹腔注射到8～11周的SCID小鼠體內(nèi)，每只小鼠注射的人單個核細胞數(shù)為5×107～1×108，5μg含Al(OH)3佐劑的乙肝疫苗。也可事先將SCID小鼠用2.5Gy的γ射線照射，再移植人單個核細胞。將SCID鼠置于SPF等級的動物房中飼養(yǎng)。14天后取小鼠眼球血一滴，用ELISA法測定anti-HBsAg抗體滴度，視情況決定是否再接種乙肝疫苗。20～30天左右，引頸法處死小鼠，無菌操作取小鼠脾臟，在小平皿中壓碎研磨，加入少許不含血清的培養(yǎng)基，用100目的不銹鋼網(wǎng)過濾，收集過濾后的細胞懸液于離心管中，記數(shù)，取1×108個細胞離心，棄上清，置室溫待用。
四、人骨髓瘤細胞SP2的準備復蘇凍存的人骨髓瘤細胞SP2，用含10～20％的優(yōu)級胎牛血清(美國Hyclone公司生產(chǎn))的DMEM/F12(1∶1)培養(yǎng)基培養(yǎng)，融合前2天，將1瓶細胞傳至3瓶培養(yǎng)，使細胞處于對數(shù)生長期，活力最好，收集此時的SP2細胞，記數(shù)，取1～2×107個細胞，離心，棄上清，置室溫待用。
五、細胞融合將準備好的人骨髓瘤細胞SP2和體外培養(yǎng)或SCID體內(nèi)培養(yǎng)獲得的含分泌anti-HBsAg抗體的人B細胞的混合細胞移至一50mL離心管中，加入10～20mL不含血清的RPMI1640培養(yǎng)基，離心，棄上清。將離心管放在掌心搖動，使細胞團成松散的糊狀。將離心管置37℃水浴中，吸取～1mL 50％的PEG溶液，慢慢加入細胞中，邊加邊攪，1min加完。靜置1min，在2min內(nèi)慢慢加入2mL無血清培養(yǎng)基，再在2min內(nèi)加入8mL無血清培養(yǎng)基，邊加邊攪。離心，吸去上清，將細胞團搖散，加入5mL新鮮的RPMI1640培養(yǎng)基。
六、融合細胞的篩選、擴增和抗體類型鑒定1、融合細胞的選擇性培養(yǎng)與陽性克隆檢測用人間充質(zhì)干細胞或人骨髓細胞做飼養(yǎng)細胞，用前用10Gy的γ射線照射，將融合細胞和飼養(yǎng)細胞移至一250mL鹽水瓶中，加入50mL含20％胎牛血清的HAT選擇性培養(yǎng)基，混勻后接種到兩塊96孔細胞培養(yǎng)板或兩塊24孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)。96孔板每孔加250μL，含細胞5×105(不包括飼養(yǎng)細胞)；24孔板每孔加1mL，含細胞2×106。培養(yǎng)7～10d換HT培養(yǎng)基。按廠家說明書中所述方法和步驟，用乙肝表面抗體ELISA檢測試劑盒檢測各孔上清中的乙肝表面抗體，并做好陽性孔標記。
2、陽性雜交瘤的克隆化培養(yǎng)收集乙肝表面抗體陽性的培養(yǎng)孔中的細胞，記數(shù)，按100,000、10,000、1000、100和10倍的密度用RPMI1640培養(yǎng)基做系列稀釋，取一96孔培養(yǎng)板，預先按每孔105～106加入飼養(yǎng)細胞和100μL RPMI1640培養(yǎng)基，然后加入8～10個/mL的低密度細胞懸液100μL。將培養(yǎng)板置于5％CO2、37℃培養(yǎng)7～10d。2～4d左右對確為1個細胞克隆生長的孔做好標記，若該孔再進行克隆化培養(yǎng)，并及時凍存獲得的陽性雜交瘤細胞。我們從中篩選到幾株可分泌乙肝表面抗體的雜交瘤細胞。
3、抗體類型鑒定用0.1M的PBS配置1％的瓊脂溶液，趁熱倒入小平皿中，凝結(jié)后打孔，中間打一個，周圍打4～8個。取雜交瘤細胞培養(yǎng)上清1mL，加硫酸銨0.3g，沉淀抗體。1000rpm離心5min，棄上清，加入100μL PBS，溶解沉淀物。取上述溶液10μL加至中央孔中，周邊孔中分別加入不同抗人Ig類的抗體10μL，4℃保濕放置24h以上，出現(xiàn)沉淀線者對應(yīng)著周邊孔中的Ig類型。
七、雜交瘤細胞的擴增用100mL方瓶培養(yǎng)得到的可分泌anti-HBsAg單克隆抗體的雜交瘤細胞Hu-atHb28，每瓶加入10mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)基為我們自行配制，以DMEM/F12(1∶1)為基礎(chǔ)，添加了適量氨基酸、維生素、微量元素及白介素-2、白介素-4、白介素-6等細胞因子，胎牛血清含量為5～10％，待細胞長滿后轉(zhuǎn)入1000mL轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)，一般3個方瓶可傳一個轉(zhuǎn)瓶，轉(zhuǎn)瓶中加入100mL 2％血清的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速為0.3rpm。細胞在轉(zhuǎn)瓶中長滿后，3～5瓶轉(zhuǎn)瓶中的細胞可轉(zhuǎn)入一個1.5L攪拌瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)基體積為300～500mL，采用Cytopore-2多孔微載體培養(yǎng)雜交瘤細胞，多孔微載體的使用濃度為1～2g/L培養(yǎng)基。培養(yǎng)的初始階段，血清濃度為1～2％，待細胞密度大于5×106后，可使用低血清(0.1％～0.5％)或無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。收集培養(yǎng)上清純化其中的單抗。
八、單克隆抗體的純化利用蛋白A親和層析法，純化培養(yǎng)上清中的抗乙肝表面抗原的單克隆抗體。先用2～3倍柱床體積的PBS(0.1mol/L，pH7.1)平衡親和柱，取培養(yǎng)上清過柱，流速為1～2ml/min，使單抗充分結(jié)合在親和柱上，用PBS(0.1mol/L，pH7.1)洗滌親和柱至OD值接近于零，再用0.5mol/L NaCl-PBS溶液洗柱以去除非特異性吸附，之后用三倍柱床體積的PBS洗滌親和柱。以50mmol/L的甘氨酸-HCl溶液(pH2.3)洗脫，流速為1～2ml/min，收集洗脫液，并用1mol/L的Tris溶液迅速將洗脫液的pH調(diào)至中性。
實施例2、表達抗乙肝病毒表面抗原的人源單克隆抗體的hu-NS-1人-鼠雜交瘤細胞的制備用小鼠骨髓瘤細胞NS-1替代人骨髓瘤細胞SP2，按照實施例1的相同方法與獲得的分泌anti-HBsAg抗體的人B細胞融合，可以獲得表達抗乙肝病毒表面抗原的人源單克隆抗體的人-鼠雜交瘤細胞。
實施例3、表達抗乙肝病毒表面抗原的人源單克隆抗體的hu-SP2/0人-鼠雜交瘤細胞的制備用小鼠骨髓瘤細胞SP2/0替代人骨髓瘤細胞SP2，按照實施例1的相同方法與獲得的分泌anti-HBsAg抗體的人B細胞融合，可以獲得表達抗乙肝病毒表面抗原的人源單克隆抗體的人-鼠雜交瘤細胞。
實施例4、抗乙肝病毒表面抗原的人源單克隆抗體的初步鑒定按照實施例1中步驟六(2)所述方法，在周邊孔上分別加入10μL羊抗人IgG、羊抗人IgM、羊抗人IgA，將實施例1純化得到的單克隆抗體加入中間孔，4℃保濕放置24h后，與IgG對應(yīng)的一邊出現(xiàn)沉淀線，表明人-人雜交瘤細胞Hu-atHb28表達的是人IgG抗體。
用北京四環(huán)生物工程制品廠生產(chǎn)的乙肝表面抗體ELISA檢測試劑盒(批準文號(91)衛(wèi)藥準字(京環(huán))S-05號)檢測實施例1純化得到的單克隆抗體，呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，表明人-人雜交瘤細胞Hu-atHb28表達的IgG抗體是抗乙肝表面抗原的特異性人源單克隆抗體。
權(quán)利要求
1.抗乙肝病毒表面抗原的人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞的分離；(2)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞的的體外培養(yǎng)；(3)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞培養(yǎng)增殖后B細胞和T細胞的分離；(4)用SCID鼠體內(nèi)培養(yǎng)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞；(5)收集含表達乙肝表面抗體的人B細胞，與人骨髓瘤細胞SP2或小鼠骨髓瘤細胞NS-1、SP2/0融合；(6)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選雜交細胞，檢測篩選陽性細胞，克隆化培養(yǎng)，進一步克隆篩選陽性細胞，陽性克隆擴增與凍存，單克隆抗體性質(zhì)的鑒定；(7)培養(yǎng)雜交瘤細胞；(8)收集細胞培養(yǎng)上清，用親和層析柱純化上清中的抗乙肝表面抗原的人源單克隆抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求書1所述方法，其特征在于所述步驟(1)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞的分離是指先用0.1％的甲基纖維素生理鹽水溶液初步沉降外周血中的紅細胞，再利用淋巴細胞分離液(Ficoll-Hypaque，d＝1.077)分離其中的單個核細胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求書1所述方法，其特征在于所述步驟(2)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞的的體外培養(yǎng)是指在體外混合培養(yǎng)分離獲得的外周血單個核細胞，培養(yǎng)基為DMEM/F12(1∶1)，添加IL-2、IL-4、IL-6等細胞因子，并添加適量的促有絲細胞分裂原、乙肝疫苗、適量氨基酸、維生素、微量元素及20％的小牛血清，培養(yǎng)條件37℃溫箱。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(3)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞培養(yǎng)增殖后B細胞和T細胞的分離是指采用植物凝聚素法，去除收集的體外混合培養(yǎng)的外周血單個核細胞中的T細胞，以富集和純化B細胞，提高細胞融合效率。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(4)用SCID鼠體內(nèi)培養(yǎng)乙肝表面抗體陽性的健康人外周血單個核細胞是指將獲得的外周血單個核細胞腹腔注射或尾靜脈注射至經(jīng)過2.5Gy照射處理的SCID鼠或用未經(jīng)處理的SCID鼠體內(nèi)，建立hu-PBMC-SCID混合免疫系統(tǒng)，模擬人體的免疫系統(tǒng)，使人B細胞在SCID鼠體內(nèi)活化、增殖、致敏。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(5)收集含表達乙肝表面抗體的人B細胞，與人骨髓瘤細胞SP2或小鼠骨髓瘤細胞NS-1、SP2/0融合是指在培養(yǎng)上清或hu-PBMC-SCID小鼠血清中的乙肝表面抗體滴度較高時，收集體外培養(yǎng)得到的去除了T細胞的外周血單個核細胞或收集hu-PBMC-SCID的脾臟，經(jīng)過一定方法處理，得到富含人B細胞的細胞懸液，按照制備雜交瘤細胞的經(jīng)典方法，與人骨髓瘤細胞SP2或小鼠骨髓瘤細胞NS-1、SP2/0融合。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(6)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選雜交細胞，檢測篩選陽性細胞，克隆化培養(yǎng)，進一步克隆篩選陽性細胞，陽性克隆擴增與凍存，單克隆抗體性質(zhì)的鑒定是指用內(nèi)含HAT的選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)融合后的細胞，并且用經(jīng)過10Gyγ-射線照射的人間充質(zhì)干細胞做滋養(yǎng)細胞，將融合后的細胞和滋養(yǎng)細胞用選擇性培養(yǎng)基混勻后，按5×105/孔接種到96孔板中培養(yǎng)；用乙肝表面抗體試劑盒檢測陽性孔，取陽性空中的細胞用有限稀釋法進行克隆篩選，直至獲得分泌均一的單克隆抗體的雜交瘤細胞，將細胞擴增和凍存，并鑒定單抗類型。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(7)培養(yǎng)雜交瘤細胞是指用Cytopore-2纖維素多孔微載體在攪拌瓶中培養(yǎng)獲得的雜交瘤細胞，培養(yǎng)基為自行研制的以DMEM和F12為基礎(chǔ)的添加了某些營養(yǎng)成分的低/無血清培養(yǎng)基，視培養(yǎng)基中的葡萄糖濃度和抗體滴度決定換液量和換液頻率，收集培養(yǎng)上清。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(8)收集細胞培養(yǎng)上清，用親和層析柱純化上清中的抗乙肝表面抗原的人源單克隆抗體是指先用2～3倍柱床體積的PBS(0.1mol/L，pH7.1)平衡親和柱，取培養(yǎng)上清過柱，流速為1～2ml/min，使單抗充分結(jié)合在親和柱上，用PBS(0.1mol/L，pH7.1)洗滌親和柱至OD值接近于零，再用0.5mol/L NaCI-PBS溶液洗柱以去除非特異性吸附，之后用三倍柱床體積的PBS洗滌親和柱；以50mmol/L的甘氨酸-HCl溶液(pH2.3)洗脫，流速為1～2ml/min，收集洗脫液，并用1mol/L的Tris溶液迅速將洗脫液的pH調(diào)至中性。
全文摘要
本發(fā)明建立了分泌抗乙肝表面抗原的人源單克隆抗體的人－鼠雜交瘤和人－人雜交瘤的制備方法。采用體外模擬人體抗原遞呈加工過程，以及采用SCID小鼠建立人體免疫系統(tǒng)的方法，獲得乙肝表面抗原特異性的人B細胞，將B細胞與人骨髓瘤細胞或鼠骨髓瘤細胞融合，利用ELISA方法判斷陽性克隆，不斷篩選和克隆抗乙肝表面抗原的人源單克隆抗體的雜交瘤細胞系。經(jīng)多孔微載體培養(yǎng)雜交瘤細胞，可獲得抗乙肝表面抗原的人源單克隆抗體，這類單抗可用于乙型肝炎的預防和治療。
文檔編號A61P1/16GK1421531SQ02156869
公開日2003年6月4日 申請日期2002年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月19日
發(fā)明者胡顯文, 高麗華, 陳惠鵬, 胥照平, 李世崇, 陳昭烈 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所