專利名稱：抗癌鎮(zhèn)痛的中藥組合物、其制備方法和它在制備治療抗癌產(chǎn)品和鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗癌鎮(zhèn)痛的中藥組合物，該組合物的制備方法，和該組合物在制備治療抗癌產(chǎn)品和鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。
(2)背景技術(shù)嗎啡是有效的鎮(zhèn)痛藥，能有效地幫助中晚期的癌癥病人鎮(zhèn)痛，但其副作用，特別是成癮性方面的副作用使其不利于長期使用，人們一直致力于找尋嗎啡的替代藥。癌癥治療是醫(yī)學(xué)界普遍關(guān)注與重點攻關(guān)的項目。西藥有其局限性，他把人體單純地視為一種物質(zhì)，并不斷地解剖成單體，因而對疾病的治療缺乏全身調(diào)整的觀念。且合成藥具有較明顯的毒副作用，易給患者產(chǎn)生藥源性痛苦，人們很需要能提高自身免疫功能，抑制腫瘤細(xì)胞，毒副作用小，療效顯著的天然藥物。本發(fā)明產(chǎn)品體現(xiàn)了中醫(yī)藥扶正祛邪，標(biāo)本兼治的特點。
(3)發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的是提供一種療效好、副作用少的抗癌鎮(zhèn)痛的中藥組合物；本發(fā)明的另一個目的是提供所述中藥組合物的制備方法；本發(fā)明的再一個目的是提供所述的中藥組合物在制備治療抗癌產(chǎn)品和鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的這些目的是通過下列構(gòu)思實現(xiàn)的一種抗癌鎮(zhèn)痛的中藥組合物，其特征在于，它是由下述重量配比的原料制成的藥劑靈芝3-4冬凌草 1.5-2.5延胡索 1-2黃芩1-2
防己1-2三七0.5-1.5甘草0.5-1.5最佳的原料重量配比為靈芝∶冬凌草∶延胡索∶黃芩∶防己∶三七∶甘草＝3∶1.8∶1.8∶1.5∶1.2∶0.9∶0.9。
所述黃芩的最佳產(chǎn)地是四川，最佳采集時間是秋季；所述冬凌草的最佳產(chǎn)地是河南，最佳采集時間是五月；靈芝是通過培育/發(fā)酵得到的，可采用上海農(nóng)科所出品的靈芝；甘草的最佳產(chǎn)地是甘肅，最佳采集時間是秋季；三七的最佳產(chǎn)地是云南，最佳采集時間是秋季；延胡索的最佳產(chǎn)地是浙江，最佳采集時間是夏季；(粉)防己的最佳產(chǎn)地是浙江，最佳采集時間是秋季。
本發(fā)明也涉及所述中藥組合物的制備方法，包括混合提取制備方法或目的物提取制備方法，所述的混合提取制備方法包括1)準(zhǔn)備原料將靈芝、冬凌草、延胡索、黃芩、防己、三七、甘草以重量比為3-4∶1.5-2.5∶1-2∶1-2∶1-2∶0.5-1.5∶0.5-1.5的比例進(jìn)行混合，將所述的混合物分成5等份；2)提取生物堿i)將步驟1)得到的一份中藥混合物用0.1％鹽酸乙醇液滲濾或分次浸濾，得到酸性乙醇提取液；ii)減壓濃縮得到濃縮物；iii)酸性水(pH＝4-5)洗滌，在一個實施方案中，優(yōu)選地使該酸性水液冷凍過夜，過濾，得到殘渣，殘渣用酸性水(pH＝4-5)洗滌，得到酸性水液；iv)向步驟iii)中得到的酸性水液中加氨水沉淀，過濾得到總生物堿沉淀；或者a)向步驟iii)中得到的酸性水液中加稀酸至pH＝2，用氯仿萃取，得到氯仿層和水層；蒸發(fā)氯仿層中的氯仿，得到弱生物堿；b)所述的水層加堿至pH＝6-7，用氯仿提取，得到水層和氯仿層，蒸發(fā)氯仿層中的氯仿，得到強生物堿；c)上述b)得到的水層用堿調(diào)節(jié)到pH10，然后用丁醇提取，蒸發(fā)丁醇層中的丁醇，得到水溶性的生物堿；d)合并上述a)、b)和c)得到的生物堿，得到總生物堿；3)提取多糖將步驟1)得到的一份中藥混合物用95-100℃的熱水提取，棄去殘渣，濾液放置12小時后，向上清液中加入濃度50％以上的乙醇，離心得到多糖沉淀；4)提取內(nèi)酯將步驟1)得到的一份中藥混合物用乙醚回流，除去色素，回收乙醚，得到總內(nèi)酯；5)提取皂甙將步驟1)得到的一份中藥混合物用石油醚回流，蒸發(fā)石油醚得到脫脂粗粉，用90-95％乙醇提取，減壓濃縮得到濃縮液；a)濃縮液依次用氯仿、乙醇提取，減壓回收氯仿、乙醇，得到總甙粗品；或者b)濃縮液用丁醇提取，減壓回收丁醇，得到皂甙粗品；6)提取黃酮向步驟1)得到的一份中藥混合物加70-80％乙醇浸漬，減壓回收乙醇液中的乙醇，殘留物用水溶解，過濾，得到水液；用乙酸乙酯提取水液，減壓濃縮乙酸乙酯液，得到總黃酮；將步驟2)-6)提取得到的生物堿、多糖、內(nèi)酯、皂甙、黃酮混合，得到所述的中藥組合物。
所述的目的物提取制備方法包括1)提取黃芩甙i)向上述黃芩組分中加入10-15倍(體積)量水煎煮1-2小時，過濾；ii)用酸將濾液調(diào)到pH1-2，在80-90℃下保持30-40分鐘，離心沉淀；沉淀物加水?dāng)嚢杈鶆?，加堿將pH調(diào)節(jié)到中性，再加入3-5倍(體積)量的乙醇，過濾；iii)向濾液中加酸將pH調(diào)節(jié)到1-2，攪拌，在80-90℃下保持30-40分鐘，過濾；iv)所得的沉淀物分別用水、50％乙醇洗滌，再用95％乙醇洗滌或重結(jié)晶，得到黃芩甙；2)提取三七皂甙i)用濃度在50％以下的甲醇提取三七根部粗粉中的可溶成分，減壓濃縮甲醇提取液，向殘留物中加入3-5倍(體積)量水；ii)水溶液用乙醚提取，水層再用正丁醇萃取，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH-H2O比65∶35∶10洗脫得到三七皂甙；3)提取冬凌草甲素用乙醚提取冬凌草葉干粉，棄去殘渣，回收乙醚液中的乙醚，得到綠褐色殘留物；用甲醇溶解殘留物，脫色得到澄明甲醇液，減壓濃縮后室溫放置過夜，過濾，甲醇母液蒸干，研細(xì)；用乙醚洗脫，結(jié)晶；4)提取延胡索素a)冷浸法延胡索粉末用14％氨水濕潤，加入乙醚∶氯仿∶乙醇為25∶8∶0.5的混合溶劑浸泡過夜，過濾；蒸干濾液得到所述的延胡索素；或者b)i)95％乙醇提取法延胡索粉末用濃氨水濕潤，向索氏提取器中加入所述的延胡索粉末和95％乙醇，回流提?。籭i)蒸干醇提取液，殘留物加1％鹽酸攪拌，過濾；iii)用1％鹽酸洗滌沉淀物，過濾；iv)合并ii)和iii)得到的濾液，加氨水調(diào)節(jié)pH至9-10，氯仿萃取；v)蒸發(fā)氯仿層中的氯仿，得到所述的延胡索素；5)提取漢防己堿防己粗粉用0.6％硫酸浸泡4次，酸水浸出液用石灰乳調(diào)節(jié)到pH＝10，過濾；沉淀在60℃下干燥，粉碎成細(xì)顆粒狀，得到防己砂；用冷苯浸泡6次，每次5-6小時；回收苯液中的苯，干燥殘留物；向殘留物中加入20倍體積量的丙酮使其溶解，加熱到55℃，回收丙酮至原體積的1/4，放置，冷卻，過濾，得到結(jié)晶；向結(jié)晶中加入5-6倍體積量苯及活性碳，室溫放置30分鐘，過濾；回收苯液中的苯，并用20倍體積量的乙醇重結(jié)晶，得到漢防己堿；6)提取甘草素、異甘草素甘草用3-4倍(體積)量的90-95％乙醇提取，乙醇液經(jīng)石油醚萃取，水層拌入硅膠，用MeOH-H2O 7∶3洗脫，濃縮洗脫液，得到殘留物；向殘留物中加水至完全溶解，向水溶液中加乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用5％Na2CO3水液萃取，用稀酸將碳酸鈉水液調(diào)節(jié)到pH5-6，再用乙酸乙酯萃取，干燥乙酸乙酯液，經(jīng)聚酰胺柱分離，用10-90％乙醇水溶液梯度洗脫得到甘草素和異甘草素；7)使包含靈芝糖肽和靈芝β-D葡聚糖的靈芝多糖與上述步驟1)-6)提取得到的活性成分混合得到所述的中藥組合物。
所述的靈芝糖肽和靈芝β-D葡聚糖也可用下述方法提取得到I.a)靈芝子實體去雜質(zhì)后粉碎，加水8-10倍浸泡24小時，加熱到95-100℃下攪拌8-10小時；b)過濾，優(yōu)選的是離心或板框分離提取液與藥渣，得到濾液和藥渣；c)向藥渣中加水3-4倍進(jìn)行浸提，優(yōu)選的是在95-100℃下攪拌8小時；重復(fù)步驟b)和c)，II.a)將靈芝發(fā)酵液(含有菌球)加熱到95-100℃，攪拌4小時；b)過濾，優(yōu)選的是離心或板框分離提取液與菌球；c)向含菌球的藥渣中加水3-4倍(體積)，提取2小時，過濾，分離提取液和藥渣，d)合并I.b)，c)和II.c)中的濾液，濃縮至原體積的1/8-1/10，加入食用酒精(3-5倍)，至酒精達(dá)到70％左右，靜置醇析24小時，用離心機分離沉淀物，回收酒精，干燥沉淀物?；蛘?，對靈芝子實體進(jìn)行索氏提取，用乙酸乙酯提取4小時，抽濾，得到的殘渣再進(jìn)行索氏提取，用丙酮提取4小時，抽濾，所得的殘渣用90％乙醇浸泡24小時，離心，抽濾；殘渣用0.2摩爾/升磷酸緩沖液(PBS，pH＝7.0)在80℃下提取三次，4小時/次，抽濾，棄去殘渣，緩沖液去除蛋白質(zhì)，離心，將所得的上層液透析，優(yōu)選的是清水透析7天，蒸餾水透析3天；向非透析液中加入大量丙酮，出現(xiàn)沉淀，棄去上清液，沉淀用丙酮洗滌6次，得到所需產(chǎn)品的粉狀固體。
本發(fā)明中藥組合物的制備方法進(jìn)一步還包括步驟8)
a)將所述的步驟1)-7)得到的活性成分粉碎至≤200微米細(xì)粉；b)粉碎，干燥無漏籽/海棗籽(PHOENIX DACTYLIFERA L)或酸石榴籽/矮石榴籽(PUNICA GRANAT-UN L)，用8倍體積量的無水乙醇提取，優(yōu)選的是提取三次，合并濾液，減壓濃縮，用乙炔化鉀處理，得到粉末，c)將a)、b)所得的物質(zhì)以100-200∶1的重量比混合。
在本發(fā)明的一個實施方案中，將上述步驟c)得到的混合物裝入膠囊。
本發(fā)明的產(chǎn)品能配制成多種劑型，優(yōu)選的是配制成膠囊劑型進(jìn)行口服，所述的賦形劑和配制技術(shù)是藥劑學(xué)領(lǐng)域中公知的，本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可根據(jù)相應(yīng)的文獻(xiàn)和現(xiàn)有技術(shù)中的工藝配制得到上述制劑。
(4)
圖1顯示癌癥病人服用淀粉(對照)、DHE(鴉片類制劑)和本發(fā)明中藥組合物后癌痛對生活質(zhì)量相關(guān)指標(biāo)的影響程度。
圖2是淀粉(對照)、DHE(鴉片類制劑)和本發(fā)明中藥組合物等不同藥物最佳癌痛緩解后的疼痛積分評估圖。
圖3顯示了淀粉(對照)、DHE(鴉片類制劑)和本發(fā)明中藥組合物等不同藥物作用后24小時內(nèi)癌痛緩解程度的評估。
圖4是淀粉、DHE(鴉片類制劑)和本發(fā)明組合物作用后24小時內(nèi)平均抗癌痛程度的評估。
圖5顯示了本發(fā)明中藥組合物對癌細(xì)胞的殺傷作用。圖5a顯示了給藥前人肝癌細(xì)胞的狀態(tài)；圖5b顯示，給予本發(fā)明中藥組合物后12小時人肝癌細(xì)胞變性；圖5c顯示，給藥后24小時人肝癌細(xì)胞被破壞。
圖6顯示本發(fā)組合物對胃癌組織中cAMP含量的影響。
(5)具體實施方式
下面通過實施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
實施例1按下述配比稱取原料(千克)
靈芝 3 冬凌草 1.8延胡索 1.8黃芩 1.5防己 1.2三七 0.9甘草 0.9混合上述原料，研磨成中藥粗粉，將所述的粗粉分成五等份供下列1)-5)個提取步驟使用；1)提取生物堿i)將上述得到的一份中藥粗粉用0.1％鹽酸乙醇(95％)液滲濾或分次浸濾，得到酸性乙醇提取液；ii)減壓濃縮得到濃縮物；iii)酸性水(pH＝4-5)洗滌，在一個實施方案中，優(yōu)選地使該酸性水液冷凍過夜，過濾，得到殘渣，殘渣用酸性水(pH＝4-5)洗滌，得到酸性水液；iv)向步驟iii)中得到的酸性水液中加氨水沉淀，過濾得到總生物堿沉淀；或者a)向步驟iii)中得到的酸性水液中加稀鹽酸至pH＝2，用氯仿萃取，得到氯仿層和水層；蒸發(fā)氯仿層中的氯仿，得到弱生物堿的殘渣；b)所述的水層加堿至pH＝6，用氯仿提取，得到水層和氯仿層，蒸發(fā)氯仿層中的氯仿，得到強生物堿的殘渣；c)上述b)得到的水層用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)到pH10，然后用丁醇提取，蒸發(fā)丁醇層中的丁醇，得到水溶性的生物堿；回收上述的氯仿、丁醇，供提取步驟循環(huán)使用。使所述的生物堿殘渣低溫干燥，結(jié)晶。
2)提取多糖用95℃的熱水提取上述得到的中藥粗粉達(dá)2小時，棄去殘渣，濾液放置12小時后，向上清液中加入濃度60％的乙醇，離心得到多糖沉淀；所述的多糖沉淀用乙醚精制。
3)提取內(nèi)酯將上述得到的中藥粗粉用乙醚回流，通過聚酰胺柱除色素，回收乙醚，得到總內(nèi)酯；4)提取皂甙
將上述得到的中藥粗粉用石油醚回流，蒸發(fā)石油醚得到脫脂粗粉，用95％乙醇提取，減壓濃縮得到濃縮液；a)濃縮液依次用氯仿、乙醇提取，減壓回收氯仿、乙醇，得到皂甙粗品；或者b)濃縮液用丁醇提取，得到丁醇層，減壓回收丁醇，得到皂甙粗品。
5)提取黃酮a)向上述得到的一份中藥粗粉中加70％乙醇浸漬，減壓回收乙醇液中的乙醇，殘留物用水溶解，過濾，得到水液；用乙酸乙酯提取水液，減壓濃縮乙酸乙酯液，得到總黃酮。
將步驟1)-5)提取得到的生物堿、多糖、內(nèi)酯、皂甙和黃酮混合，得到本發(fā)明的抗癌鎮(zhèn)痛的中藥組合物。
實施例21)提取黃芩甙i)向2千克黃芩中加入10倍(體積)量水煎煮1小時，過濾；ii)用酸將濾液調(diào)到pH2，在80℃下保持30分鐘，離心沉淀；沉淀物加水?dāng)嚢杈鶆颍訅A將pH調(diào)節(jié)到中性，再加入5倍(體積)量的乙醇，過濾；iii)向濾液中加鹽酸，將pH調(diào)節(jié)到2，攪拌，在80℃下保持30分鐘，過濾；iv)所得的沉淀物用分別用水、50％乙醇洗滌，再用95％乙醇洗滌或重結(jié)晶，得到黃芩甙。
2)提取三七皂甙i)用40％的甲醇提取1.5千克三七根部粗粉中的可溶成分，減壓濃縮甲醇提取液，向殘留物中加入5倍(體積)量水；ii)水溶液用乙醚提取，水層再用正丁醇萃取，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH-H2O比65∶35∶10洗脫得到三七皂甙。
3)提取冬凌草甲素用乙醚提取2.5千克冬凌草葉干粉，棄去殘渣，回收乙醚液中的乙醚，得到綠褐色殘留物；甲醇溶解殘留物，脫色得到澄明甲醇液，減壓濃縮后室溫放置過夜，過濾，甲醇母液蒸干，研細(xì)；再用中性Al2O3吸附，用乙醚洗脫，結(jié)晶。
4)提取延胡索素2千克延胡索粉末用14％氨水濕潤，加入乙醚∶氯仿∶乙醇為25∶8∶0.5的混合溶劑浸泡過夜，過濾；蒸干濾液得到所述的延胡索素。
5)提取漢防己堿2千克防己粗粉用0.6％硫酸浸泡4次，酸水浸出液用石灰乳調(diào)節(jié)到pH＝10，過濾；沉淀在60℃下干燥，粉碎成細(xì)顆粒狀，得到防己砂；用冷苯浸泡6次，每次6小時；回收苯液中的苯，干燥殘留物；向殘留物中加入20倍體積量的丙酮使其溶解，加熱到55℃，回收丙酮至原體積的1/4，放置，冷卻，過濾，得到結(jié)晶；向結(jié)晶中加入5倍體積量苯及活性碳，室溫放置30分鐘，過濾；回收苯液中的苯，并用20倍體積量的乙醇重結(jié)晶，得到漢防己堿。
6)提取甘草素、異甘草素1.5千克甘草用3倍(體積)量的95％乙醇提取，乙醇液經(jīng)石油醚萃取，水層經(jīng)硅膠柱洗脫，用MeOH-H2O為7∶3洗脫，濃縮洗脫液，得到殘留物；向殘留物中加水至完全溶解，向水液中加乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用5％Na2CO3水液萃取，用稀鹽酸將碳酸鈉水液調(diào)節(jié)到pH5，再用乙酸乙酯萃取，干燥乙酸乙酯液，經(jīng)60目聚酰胺柱分離，10-90％的乙醇水溶液梯度洗脫得到甘草素和異甘草素。
7)I.a)靈芝子實體去雜質(zhì)后粉碎，加水8倍浸泡24小時，加熱到95℃下攪拌8小時；b)離心分離提取液與藥渣，得到濾液和藥渣；c)向藥渣中加水3倍進(jìn)行浸提，在95℃下攪拌8小時；重復(fù)步驟b)和c)，II.a)將靈芝發(fā)酵液(含有菌球)加熱到95℃，攪拌4小時；b離心分離提取液與菌球；c)向含菌球的藥渣中加水3倍(體積)，提取2小時，過濾，分離提取液和藥渣，
d)合并I.b)，c)和II.c)中的濾液，濃縮至原體積的1/8，加入食用酒精(3-5倍)，至酒精達(dá)到70％左右，靜置醇析24小時，用離心機分離沉淀物，回收酒精，干燥沉淀物。
將上述步驟1)-7)提取得到的活性成分混合得到本發(fā)明中藥組合物(1)。
將中藥組合物(1)粉碎至≤200微米細(xì)粉(2)；粉碎，干燥無漏籽/海棗籽(PHOENIX DACTYLIFERA L)，用8倍體積量的無水乙醇提取，優(yōu)選的是提取三次，合并濾液，減壓濃縮，用乙炔化鉀處理，得到粉末(3)，將細(xì)粉(2)和粉末(3)以100-200∶1的重量比混合，然后裝入膠囊，得到本發(fā)明的中藥組合物的膠囊。
實施例31)提取黃芩甙i)向1千克黃芩中加入10倍(體積)量水煎煮1小時，過濾；ii)用稀鹽酸將濾液調(diào)到pH2，在80℃下保持30分鐘，離心沉淀；沉淀物加水?dāng)嚢杈鶆?，加堿將pH調(diào)節(jié)到中性，再加入3倍(體積)量的乙醇，過濾；iii)向濾液中加鹽酸，將pH調(diào)節(jié)到2，攪拌，在80℃下保持30分鐘，過濾；iv)所得的沉淀物分別用水、50％乙醇洗滌，再用95％乙醇洗滌或重結(jié)晶，得到黃芩甙。
2)提取三七皂甙i)用40％的甲醇提取0.5千克三七根部粗粉中的可溶成分，減壓濃縮甲醇提取液，向殘留物中加入5倍(體積)量水；ii)水溶液用乙醚提取，水層再用正丁醇萃取，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH-H2O比65∶35∶10洗脫得到三七皂甙。
3)提取冬凌草甲素用乙醚提取1.5千克冬凌草葉干粉，棄去殘渣，回收乙醚液中的乙醚，得到綠褐色殘留物；甲醇溶解殘留物，脫色得到澄明甲醇液，減壓濃縮后室溫放置過夜，過濾，甲醇母液蒸干，研細(xì)；再用中性Al2O3吸附，用乙醚洗脫，結(jié)晶。
4)提取延胡索素1千克延胡索粉末用濃氨水濕潤，向索氏提取器中加入所述的延胡索粉末和95％乙醇，回流提??；ii)蒸干醇提取液，殘留物加1％鹽酸攪拌，過濾；iii)用1％鹽酸洗滌沉淀物，過濾；iv)合并ii)和iii)得到的濾液，加氨水調(diào)節(jié)pH至9，氯仿萃?。籿)蒸發(fā)氯仿層中的氯仿，得到所述的延胡索素；5)提取漢防己堿1千克防己粗粉用0.6％硫酸浸泡4次，酸水浸出液用石灰乳調(diào)節(jié)到pH＝10，過濾；沉淀在60℃下干燥，粉碎成細(xì)顆粒狀，得到防己砂；用冷苯浸泡6次，每次5小時；回收苯液中的苯，干燥殘留物；向殘留物中加入20倍體積量的丙酮使其溶解，加熱到55℃，回收丙酮至原體積的1/4，放置，冷卻，過濾，得到結(jié)晶；向結(jié)晶中加入5-6倍體積量苯及活性碳，室溫放置30分鐘，過濾；回收苯液中的苯，并用20倍體積量的乙醇重結(jié)晶，得到漢防己堿。
6)提取甘草素、異甘草素0.9千克甘草用4倍(體積)量的95％乙醇提取，乙醇液經(jīng)石油醚萃取，水層拌入硅膠，用MeOH-H2O為7∶3洗脫，濃縮洗脫液，得到殘留物；向殘留物中加水至完全溶解，向水液中加乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用5％Na2CO3水液萃取，用稀酸將碳酸鈉水液調(diào)節(jié)到pH5-6，再用乙酸乙酯萃取，干燥乙酸乙酯液，經(jīng)聚酰胺柱分離，10-90％乙醇水溶液梯度洗脫得到甘草素和異甘草素。
7)對靈芝子實體進(jìn)行索氏提取，用乙酸乙酯提取4小時，抽濾，得到的殘渣再進(jìn)行索氏提取，用丙酮提取4小時，抽濾，所得的殘渣用90％乙醇浸泡24小時，離心，抽濾；殘渣用0.2摩爾/升磷酸緩沖液(PBS，pH＝7.0)在80℃下提取三次，4小時/次，抽濾，棄去殘渣，緩沖液去除蛋白質(zhì)，離心，將所得的上層液清水透析7天，蒸餾水透析3天；
向非透析液中加入大量丙酮，出現(xiàn)沉淀，棄去上清液，沉淀用丙酮洗滌6次，得到所需產(chǎn)品的粉狀固體。
將上述步驟1)-7)提取得到的活性成分混合，將該混合物粉碎成細(xì)粉，裝入膠囊供使用。
試驗實施例1將患有中晚期癌癥的病人隨機分成3組，以每人900mg淀粉、900mgDHE(鴉片類制劑)和900mg本發(fā)明中藥組合物對3組病人給藥，24小時后對病人的一般活動、情緒、走路能力、食欲、睡眠、生活情趣、體溫等進(jìn)行評估，積分越高，說明對生活質(zhì)量的影響越大，結(jié)果如圖1所示。
從圖1結(jié)果可見，淀粉作為對照，不能改變癌痛對生活質(zhì)量的影響；本發(fā)明的中藥組合物能最大程度地提高患者的生活質(zhì)量，例如一般活動、情緒、走路能力、食欲、睡眠、生活情趣的影響，并將體溫降低到正常的體溫，其藥效優(yōu)于DHE。
試驗實施例2如試驗實施例1所述對癌癥病人給藥，并對藥物的最佳癌痛緩解后的疼痛、給藥后24小時內(nèi)癌痛緩解程度、和不同藥物作用后24小時內(nèi)平均抗癌痛程度進(jìn)行評估，結(jié)果如圖2-4所示，表明本發(fā)明中藥組合物具有上佳的鎮(zhèn)痛效果。
試驗實施例3如試驗實施例1所述對癌癥病人給藥，24小時后評估各自的臨床不良反應(yīng)，結(jié)果如下表所示
從上述結(jié)果可見，本發(fā)明組合物副作用比DHE的低，并無成癮性和鴉片類的欣快感。
試驗實施例4本發(fā)明中藥組合物對肝癌細(xì)胞影響的超微結(jié)構(gòu)觀察I.SMMC 7721肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)1.細(xì)胞SMMC 7721肝癌細(xì)胞株每2-3天傳代一次，選用生長旺盛的對數(shù)生長期細(xì)胞，細(xì)胞滴度250000/ml。
2.試劑與培養(yǎng)基DMEM培養(yǎng)液(含15％小牛血清和50單位青鏈霉素)；胰酶消化液(含0.02％EDTA、0.25％胰蛋白酶、PBS緩沖液)。
3.分瓶從30毫升培養(yǎng)瓶中取對數(shù)生長期細(xì)胞，倒去原有瓶中培養(yǎng)液，加入1毫升胰酶消化液，消化至細(xì)胞出現(xiàn)輸送狀態(tài)，倒取胰酶，加入5毫升培養(yǎng)液，用吸管吹打，使細(xì)胞從瓶底脫落，用吸管將細(xì)胞吸入準(zhǔn)備好的培養(yǎng)液瓶和表面噴碳的蓋玻片上，注入DMEM培養(yǎng)液，使細(xì)胞滴度調(diào)整至250000/ml。在5％二氧化碳，37℃環(huán)境下培養(yǎng)24小時。
II.分組與用藥將分皿24小時后的36皿細(xì)胞隨即分為對照組和試驗組，每組各18皿，其中9皿用作表型結(jié)構(gòu)觀察，9皿用作內(nèi)部結(jié)構(gòu)觀察。本發(fā)明組合物在分組確定后即以200微克/皿的用量加入本發(fā)明組合物。
III.觀察與方法在加藥后4、12和24小時作為取樣點，每組每取樣點為3個樣本。癌細(xì)胞表型結(jié)構(gòu)觀察先取出載有培養(yǎng)細(xì)胞株的蓋玻片，浸入預(yù)冷的2.5％戊二醛溶液中，經(jīng)臨界點肝臟后，用FME COAT JEF-1100型離子濺射儀作樣品表面噴金，在JEO JXA-840型掃描墊子顯微鏡下作細(xì)胞表型結(jié)構(gòu)分析。
細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)觀察先吸取細(xì)胞培養(yǎng)液，加入預(yù)冷的2.5％戊二醛溶液，2小時后用磷酸緩沖液沖洗三次，用細(xì)胞刮匙將培養(yǎng)細(xì)胞刮落，再用1％鋨酸作后固定，經(jīng)磷酸緩沖液沖洗后，用75％乙醇脫水，植入瓊脂內(nèi)，再用Epon 812包埋，在60℃狀態(tài)下聚合，制成超薄切片(500)，經(jīng)醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重染色后，在JEOL JEM-1200型透射電子顯微鏡下作分析。
結(jié)果顯示，對照組在24小時后，細(xì)胞基本鋪滿，主要呈平面生長狀態(tài)。
試驗組使用了本發(fā)明組合物后4小時，平面生長的細(xì)胞間偽足出現(xiàn)斷離，細(xì)胞出現(xiàn)解離，細(xì)胞表面顆粒脫落，細(xì)胞顯示出脫水。12小時后，該細(xì)胞出現(xiàn)變性，表面顆粒脫落，一部分細(xì)胞出現(xiàn)蝕孔。(見圖5b)。給藥后24小時，肝癌細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞散離，表面顆粒消失，肝癌細(xì)胞膜明顯破損，部分細(xì)胞膜消失，細(xì)胞崩解。(見圖5c)。
試驗結(jié)果顯示，本發(fā)明的中藥組合物具有殺傷肝癌細(xì)胞的作用。
試驗實施例5本發(fā)明中藥組合物對胃癌組織中cAMP含量的影響腫瘤的發(fā)生和生長對環(huán)核苷酸水平有直接相關(guān)的作用，其涉及到cAMP、cGMP、cCMP水平和其相應(yīng)的腺苷酸環(huán)化酶和磷酸二酯酶的活性。近年來研究結(jié)果提示，cGMP在正常組織再生中有主導(dǎo)地位，而cAMP對腫瘤組織的發(fā)展占主導(dǎo)地位。該試驗實施例通過觀察本發(fā)明中藥組合物對癌變細(xì)胞中cAMP水平的影響來闡明其抗癌效應(yīng)。
I.人胃癌裸鼠模型的建立選擇內(nèi)窺鏡取材，病理切片證實為胃癌患者，手術(shù)切除時取其胃癌組織，將其剪成3mm3的小型組織塊，接種于裸鼠皮下，每區(qū)域接種3塊，常規(guī)飼養(yǎng)。
II分組與用藥設(shè)種植胃癌組織株為空白對照組；選擇胃癌裸鼠模型建立后72小時的實驗裸鼠16只，隨機分為陰性對照組和試驗組，每組8只。陰性對照組腹腔注射0.9％NaCl 0.5ml/只；試驗組腹腔注射等量的本發(fā)明中藥組合物(內(nèi)含本發(fā)明中藥組合物2.5毫克)，每日一次，連續(xù)注射5天。
III.取材與樣品處理在末次用藥完成后的24小時采用頸椎脫位處死陰性對照組和試驗組的裸鼠，摘取種植的人胃癌組織，用濾紙吸干表面體液，稱重定量約50毫克左右(空白對照組直接稱重定量)。加入50mM醋酸緩沖液1毫升，勻漿后將樣品轉(zhuǎn)移至離心管。用無水乙醇2毫升沖洗勻漿器，合并至離心管內(nèi)，離心(3000轉(zhuǎn)/分，15分鐘)，取上清液，同時再次用75％乙醇2毫升洗滌勻漿器，將洗滌液離心(3000轉(zhuǎn)/分，15分鐘)取上清液，合并2次離心后上清液入試管，置60℃烘箱內(nèi)烘干，冰箱4℃環(huán)境內(nèi)保存，采用125I標(biāo)記環(huán)核苷酸放射免疫分析技術(shù)檢測。
IV.結(jié)果圖6顯示了對照組和試驗組組織cAMP水平差異，從中可見本發(fā)明的中藥組合物能非常顯著地提高組織cAMP水平(p＜0.01)。相對比表明本發(fā)明中藥組合物比空白對照組高7.2倍，比陰性對照組高4.2倍。
惡性腫瘤普遍存在腺苷酸環(huán)化酶活性低下和磷酸二酯酶活性上升，故導(dǎo)致細(xì)胞第二信使cAMP水平下降，激活腫瘤組織的進(jìn)一步發(fā)展和惡化。cAMP水平有所上升，體現(xiàn)了對控制癌變組織的發(fā)展起到積極的作用。由此可見，本發(fā)明的中藥組合物能有效地控制癌組織細(xì)胞的動力。
權(quán)利要求
1.一種抗癌鎮(zhèn)痛的中藥組合物，其特征在于，它是由下述重量配比的原料制成的靈芝3-4冬凌草 1.5-2.5延胡索 1-2黃芩1-2防己1-2三七0.5-1.5甘草0.5-1.5
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其中各原料的重量配比是靈芝∶冬凌草∶延胡索∶黃芩∶防己∶三七∶甘草＝3∶1.8∶1.8∶1.5∶1.2∶0.9∶0.9。
3.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于，它包括混合提取制備方法或目的物提取制備方法。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其中所述的混合提取制備方法包括1)準(zhǔn)備原料將靈芝、冬凌草、延胡索、黃芩、防己、三七、甘草以重量比為3-4∶1.5-2.5∶1-2∶1-2∶1-2∶0.5-1.5∶0.5-1.5的比例進(jìn)行混合，將所述的混合物分成5等份；2)提取生物堿i)將步驟1)得到的一份中藥混合物用0.1％鹽酸乙醇液滲濾或分次浸濾，得到酸性乙醇提取液；ii)減壓濃縮得到濃縮物；iii)酸性水(pH＝4-5)洗滌，過濾，得到殘渣，殘渣用酸性水(pH＝4-5)洗滌，得到酸性水液；iv)向步驟iii)中得到的酸性水液中加氨水沉淀，過濾得到總生物堿沉淀；或者a)向步驟iii)中得到的酸性水液中加稀酸至pH＝2，用氯仿萃取，得到氯仿層和水層；蒸發(fā)氯仿層中的氯仿，得到弱生物堿；b)所述的水層加堿至pH＝6-7，用氯仿提取，得到水層和氯仿層，蒸發(fā)氯仿層中的氯仿，得到強生物堿；c)上述b)得到的水層用堿調(diào)節(jié)到pH10，然后用丁醇提取，蒸發(fā)丁醇層中的丁醇，得到水溶性的生物堿；d)合并上述a)、b)和c)得到的生物堿，得到總生物堿；3)提取多糖將步驟1)得到的一份中藥混合物用95-100℃的熱水提取，棄去殘渣，濾液放置12小時后，向上清液中加入濃度50％以上的乙醇，離心得到多糖沉淀；4)提取內(nèi)酯將步驟1)得到的一份中藥混合物用乙醚回流，除去色素，回收乙醚，得到總內(nèi)酯；5)提取皂甙將步驟1)得到的一份中藥混合物用石油醚回流，蒸發(fā)石油醚得到脫脂粗粉，用90-95％乙醇提取，減壓濃縮得到濃縮液；a)濃縮液依次用氯仿、乙醇提取，減壓回收氯仿、乙醇，得到皂甙粗品；或者b)濃縮液用丁醇提取，減壓回收丁醇，得到皂甙粗品；6)提取黃酮向步驟1)得到的一份中藥混合物加70-80％乙醇浸漬，減壓回收乙醇液中的乙醇，殘留物用水溶解，過濾，得到水液；用乙酸乙酯提取水液，減壓濃縮乙酸乙酯液，得到總黃酮；將步驟2)-6)提取得到的生物堿、多糖、內(nèi)酯、皂甙、黃酮混合，得到所述的中藥組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其中所述的目的物提取制備方法包括1)提取黃芩甙i)向上述黃芩組分中加入10-15倍(體積)量水煎煮1-2小時，過濾；ii)用酸將濾液調(diào)到pH1-2，在80-90℃下保持30-40分鐘，離心沉淀；沉淀物加水?dāng)嚢杈鶆?，加堿將pH調(diào)節(jié)到中性，再加入3-5倍(體積)量的乙醇，過濾；iii)向濾液中加酸將pH調(diào)節(jié)到1-2，攪拌，在80-90℃下保持30-40分鐘，過濾；iv)所得的沉淀物用分別用水、50％乙醇洗滌，再用95％乙醇洗滌或重結(jié)晶，得到黃芩甙；2)提取三七皂甙i)用濃度在50％以下的甲醇提取三七根部粗粉中的可溶成分，減壓濃縮甲醇提取液，向殘留物中加入3-5倍(體積)量水；ii)水溶液用乙醚提取，水層再用正丁醇萃取，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH-H2O比65∶35∶10洗脫得到三七皂甙；3)提取冬凌草甲素用乙醚提取冬凌草葉干粉，棄去殘渣，回收乙醚液中的乙醚，得到綠褐色殘留物；用甲醇溶解殘留物，脫色得到澄明甲醇液，減壓濃縮后，室溫放置過夜，過濾，甲醇母液蒸干，研細(xì)；用乙醚洗脫，結(jié)晶；4)提取延胡索素a)冷浸法延胡索粉末用14％氨水濕潤，加入乙醚∶氯仿∶乙醇為25∶8∶0.5的混合溶劑浸泡過夜，過濾；蒸干濾液得到所述的延胡索素；或者b)95％乙醇提取法i)延胡索粉末用濃氨水濕潤，向索氏提取器中加入所述的延胡索粉末和95％乙醇，回流提?。籭i)蒸干醇提取液，殘留物加1％鹽酸攪拌，過濾；iii)用1％鹽酸洗滌沉淀物，過濾；iv)合并ii)和iii)得到的濾液，加氨水調(diào)節(jié)pH至9-10，氯仿萃取；v)蒸發(fā)氯仿層中的氯仿，得到所述的延胡索素；5)提取漢防己堿防己粗粉用0.6％硫酸浸泡4次，酸水浸出液用石灰乳調(diào)節(jié)到pH＝10，過濾；沉淀在60℃下干燥，粉碎成細(xì)顆粒狀，得到防己砂；用冷苯浸泡6次，每次5-6小時；回收苯液中的苯，干燥殘留物；向殘留物中加入20倍體積量的丙酮使其溶解，加熱到55℃，回收丙酮至原體積的1/4，放置，冷卻，過濾，得到結(jié)晶；向結(jié)晶中加入5-6倍體積量苯及活性碳，室溫放置30分鐘，過濾；回收苯液中的苯，并用20倍體積量的乙醇重結(jié)晶，得到漢防己堿；6)提取甘草素、異甘草素甘草用3-4倍(體積)量的90-95％乙醇提取，乙醇液經(jīng)石油醚萃取，水層拌入硅膠，用MeOH-H2O 7∶3洗脫，濃縮洗脫液，得到殘留物；向殘留物中加水至完全溶解，向水溶液中加乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用5％Na2CO3水液萃取，用稀酸將碳酸鈉水液調(diào)節(jié)到pH5-6，再用乙酸乙酯萃取，干燥乙酸乙酯液，經(jīng)聚酰胺柱分離，用10-90％乙醇水溶液梯度洗脫得到甘草素和異甘草素；7)使包含靈芝糖肽和靈芝β-D葡聚糖的靈芝多糖與上述步驟1)-6)提取得到的活性成分混合得到所述的中藥組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，它還包括步驟8)a)將所述的步驟1)-7)得到的活性成分粉碎至≤200微米細(xì)粉；b)粉碎，干燥無漏籽/海棗籽或酸石榴籽/矮石榴籽，用8倍體積量的無水乙醇提取，減壓濃縮，用乙炔化鉀處理，得到粉末，c)將a)、b)所得的物質(zhì)以100-200∶1的重量比混合。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，它還包括步驟d)將c)中得到的混合物裝入膠囊。
8.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物在制備抗癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種中藥組合物，它是以靈芝、冬凌草、延胡索、黃芩、防己、三七和甘草為原料制成的。其制備方法包括混合提取和目的物提取，以多糖、內(nèi)酯、生物堿、黃酮和皂甙，或以靈芝糖肽、黃芩甙、冬凌草甲素、延胡索素、漢防己堿、甘草素、異甘草素和三七皂甙為提取的有效成分。該中藥組合物能有效地抗癌鎮(zhèn)痛，具有副作用小，有效率高，使用方便，質(zhì)量可控的特點，可作為癌癥患者的調(diào)理、治療產(chǎn)品或作為晚期原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性癌痛的鎮(zhèn)痛藥。
文檔編號A61P29/00GK1478537SQ0213665
公開日2004年3月3日 申請日期2002年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月26日
發(fā)明者楊億泓, 魏偉偉 申請人:上海中耀生物科技有限公司