專利名稱：總藤黃酸制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑，特別是涉及總藤黃酸、含有它的制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
藤黃為藤黃科植物藤黃樹分泌的干燥樹脂，美國藥典曾收載該品，其活性成分主要為藤黃酸等酸性有效部位，即總藤黃酸。1955年Amorosa通過制成吡啶鹽結(jié)晶，首次獲得純的藤黃酸，1965年借助核磁共振儀確定了分子結(jié)構(gòu)，以后對藤黃酸的研究工作不斷深化。藤黃酸的制備方法文獻(xiàn)報(bào)道較多，其中主要有三條。第一條路線是將藤黃碎粒加丙酮浸泡過夜，合并丙酮液，得藤黃樹脂的丙酮提取液，經(jīng)濃縮后，通過硅膠柱層析，收集苯-乙酸乙酯(9∶1)洗脫部分，用硅膠G制板，氯仿-甲醇-二乙胺(15∶1∶1)展開，割取Rf值0.4的亮黃色部分，硅膠用0.5％Na2CO3洗滌，過濾，濾液用稀鹽酸酸化，即得亮黃色沉淀，水洗至中性，抽干得藤黃酸。第二條路線是將藤黃碎粒用丙酮浸泡過夜，合并丙酮液，減壓蒸干得棕黑色膠狀物，加吡啶熱溶后，加水，固體物用石油醚及70％吡啶洗滌，得橙黃色藤黃酸吡啶鹽，將此吡啶鹽溶于乙醚，用1N HCl洗滌，乙醚層加無水硫酸鈉干燥，蒸去乙醚，得藤黃酸。第三條路線將藤黃碎粒直接加吡啶熱浸，合并吡啶液，加熱水過夜，析出藤黃酸吡啶鹽，吡啶水溶液洗滌，紅外烘干，用乙醚熱溶，濾過，濃縮至適量，加入等體積的石油醚(60～90℃)，室溫下析出固體，將此固體物照第二條路線同法酸化，提取，干燥得藤黃酸，用上述方法提取的藤黃酸具有抗腫瘤作用，用藤黃酸制成的注射劑應(yīng)用于抗腫瘤研究也有報(bào)道，目前報(bào)道的注射劑主要有直接溶解在水中的、用硼酸溶液配制的，這些注射劑需要加入大量助溶劑，穩(wěn)定性差，臨床使用不便。
本發(fā)明公開了一種新的藤黃酸組合物，該組合物配方改進(jìn)了上述注射劑的缺陷，具有良好的溶解性和穩(wěn)定性，并且經(jīng)濟(jì)實(shí)用，治療效果優(yōu)良。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種新的藤黃酸組合物，該組合物由總藤黃酸，L-精氨酸和甘露醇組成，其中各組分所占比例按重量份計(jì)為總藤黃酸12.5-37.5，L-精氨酸10-30，甘露醇20-60，本發(fā)明還包括制備這種組合物的方法。
本發(fā)明優(yōu)選的配方組成為按重量份計(jì)為總藤黃酸25，L-精氨酸20，甘露醇40。
本發(fā)明的藤黃酸藥物組合物制劑可以制成各種制劑形式，包括片劑、膠囊劑、噴霧劑、凝膠劑、凝膠吸入劑、口服液、混懸劑、沖劑、貼劑、丸劑、散劑、注射劑、輸液劑、凍干注射劑、脂質(zhì)體注射劑、靶向給藥注射劑、栓劑、緩釋制劑、控釋制劑等，優(yōu)選的是注射劑，最優(yōu)選的是凍干注射劑。
本發(fā)明的藤黃酸組合物制劑可以通過如下方式制備，將三種組分按配方量混合，制成所需的制劑，本發(fā)明優(yōu)選的凍干注射劑可以通過如下方法制備，取總藤黃酸，加入注射用水，加入L-精氨酸，使混合物溶解，加入甘露醇，使溶解，加入碳粉，攪拌，脫色，過濾，灌裝，冷凍干燥。
本發(fā)明所用原料總藤黃酸包含多種成分，可測定的成分有近10種，總藤黃酸具有抗腫瘤作用是這多種成分共同作用的結(jié)果，本發(fā)明所用總藤黃酸可使用背景技術(shù)中的方法制備，也可使用如下方法制備將藤黃樹脂剪成小粒，用粉碎機(jī)粉碎成粉(約10目)，將藤黃粉600g，置3000ml三角燒瓶中，加入1500ml吡啶，振搖、靜置30分鐘后，移入85℃水浴中熱浸2小時(shí)，并不斷振搖，趁熱過濾，濾瓶用熱吡啶洗滌3次，每次100ml，合并濾液及洗滌液加入60℃熱水150ml，放置于冰箱中過夜。于次日取出，減壓濾過，濾餅用70％吡啶洗滌兩次，每次80ml，再用蒸餾水洗滌三次，每次60ml，抽干后，于紅外燈下烘干，得干品75g，收率12.5％。
將上述干燥品放入1000ml圓底燒瓶中，加乙醚600ml，水浴上回流溶解，放冷，濾出不溶物，濾液濃縮至1/3體積，向燒瓶中加入同體積石油醚搖勻，放置2小時(shí)。濾出固體，用石油醚(60℃～90℃)洗滌三次，每次50ml，抽干后，紅外光下烘干，得干品42g，收率56％。
將上述干品用乙醚溶解后，移置1000ml分液漏斗中，用1N鹽酸1200ml，分四次洗滌，每次300ml，再用蒸餾水洗滌至水層顯中性，分取乙醚層，用無水Na2SO4干燥，抽濾，于水浴上濃縮乙醚至干，得成品總藤黃酸原料35g，收率83.3％。TLC檢查一個(gè)主斑點(diǎn)，Rf0.65[硅膠G板，展開劑苯-乙酸乙酯-甲酸(75∶24∶1.5)]。本發(fā)明的最佳配方劑量選擇依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，藤黃酸劑量5mg/kg時(shí)對小鼠S-180或EC腹水癌有明顯的抑制作用，我們通過藥效學(xué)試驗(yàn)，結(jié)果也表明總藤黃酸靜脈給藥劑量在4mg/kg時(shí)對小鼠移植性腫瘤肉瘤S-180實(shí)體型、肝癌H-22實(shí)體型、艾氏癌實(shí)體瘤(EC)均有明顯的抑制作用(抑制率＞30％)，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果及文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果可知，總藤黃酸對小鼠S-180或H-22以及EC實(shí)體瘤靜脈給藥的有效劑量為4mg/kg左右。根據(jù)小鼠藥效學(xué)劑量通常為人臨床用藥劑量的9-10倍之規(guī)定，可以初步推斷出人臨床用劑量。4mg/kg÷9＝0.44mg/kg(人用劑量)4mg/kg÷10＝0.40mg/kg(人用劑量)按一個(gè)人體重為60kg計(jì)算，一個(gè)人一次靜脈用劑量為0.44mg/kg×60kg＝26.4mg0.40mg/kg×60kg＝24.0mg平均值為(26.4+24.0)/2＝25.2mg即一個(gè)60公斤的病人，一次用量應(yīng)在25mg左右。因此根據(jù)臨床可能用藥劑量，本發(fā)明處方的劑量設(shè)計(jì)為每瓶含25mg總藤黃酸。本發(fā)明組合物配方的篩選總藤黃酸為橙黃色結(jié)晶性粉末，在乙醇、甲醇等有機(jī)溶劑中溶解，水中不溶在大堿性如氫氧化鈉溶液中溶解，但是不穩(wěn)定，易水解，故選擇助溶劑是關(guān)鍵。我們選擇了多種助溶劑如氫氧化鈉、碳酸氫鈉、吐溫80、泊拉沙姆、菸酰胺、葡甲胺、L-精氨酸、L-半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸等，在0.1mol/L氫氧化鈉中和碳酸氫鈉中溶解最快，溶液在數(shù)小時(shí)后顏色變深，可見有降解，表面活性劑對本品增溶效果不明顯，L-半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸助溶差，L-精氨酸助溶液較好，水溶液放置數(shù)天顏色基本不變，含量變化較小，所以選擇L-精氨酸為本品的助溶劑，結(jié)果見下表。表1總藤黃酸選用助、增溶劑的試驗(yàn)結(jié)果(總藤黃酸125mg10ml)助、增溶劑 用量 定容后量(ml)溶解情況 溶液顏色變化情況氫氧化鈉 0.1mol/L 8ml10 澄清 4h顏色逐漸加深碳酸氫鈉 0.1mol/L 8ml10 澄清 4h顏色逐漸加深吐溫80 0.2g10 混濁 橙黃色乳光泊拉沙姆 0.2g10 混濁 橙黃色混懸菸酰胺 0.2g10 部分溶解橙黃色混濁葡甲胺 0.2g10 部分溶解橙黃色混濁L-半胱氨酸 0.2g10不溶液 混懸L-精氨酸 0.1g10 澄清 3d橙黃色不變谷氨酸 0.1g10 不溶 混懸甘氨酸 0.1g10 不溶 混懸無水乙醇 2ml 10先澄清，加水后析出橙黃色混濁本制劑主藥每瓶僅為25mg，如不加骨架劑，凍干后呈網(wǎng)狀，松散，易碎，所以我們進(jìn)行了骨架劑的篩選，選擇的骨架劑有甘露醇、乳糖、右旋糖苷、氯化鈉，葡萄糖，結(jié)果見表2。
表2骨架劑的篩選結(jié)果骨架劑 用量(mg) 外觀澄清度甘露醇 40 塊狀 澄清氯化鈉 40 塊狀起皮 澄清葡萄糖 40 塊狀 混濁乳糖 40 塊狀 乳光右旋糧苷 40 塊狀 略帶乳光無 - 網(wǎng)狀、松散、易碎 澄清本發(fā)明的25mg總藤黃酸配方的組合物經(jīng)過穩(wěn)定性對比實(shí)驗(yàn)，證明具有更加優(yōu)良的穩(wěn)定性。不加L-精氨酸的溶液，在經(jīng)過一定時(shí)間后溶液變得渾濁，同樣時(shí)間內(nèi)，加入了L-精氨酸的溶液不變，另外，在高濕高熱情況下，上述組合物也表現(xiàn)出非常的穩(wěn)定性。加入了L-精氨酸大大增加了溶解度，也使穩(wěn)定性提高。
本發(fā)明的藤黃酸制劑具有良好的抗腫瘤作用，以下通過實(shí)驗(yàn)例說明本發(fā)明的有益效果。
實(shí)驗(yàn)例1
注射用總藤黃酸靜脈途徑給藥對小鼠移植性腫瘤肉瘤S-180的抑制作用1.實(shí)驗(yàn)材料(1)實(shí)驗(yàn)藥物名稱注射用總藤黃酸性狀黃色疏松塊狀物及粉末來源南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所批號(hào)20010105規(guī)格25mg/支(2)陽性對照藥A.名稱羥基喜樹堿注射液來源黃石飛云制藥有限公司批號(hào)010203規(guī)格2ml5mgB.名稱氟脲嘧啶注射液來源上海旭東制藥有限公司批號(hào)010208規(guī)格10ml0.25g(3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系昆明種小鼠，20～22g，雄性來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室合格證號(hào)SCXK11-00-0005(4)瘤株名稱肉瘤S-180來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院2.實(shí)驗(yàn)方法(1)藥物配制取注射用總藤黃酸內(nèi)容物適量，精密稱定，根據(jù)內(nèi)容物含量，加入生理鹽水配成所需濃度的溶液，備用。
(2)劑量設(shè)置總藤黃酸組高劑量組8mg/kg
中劑量組4mg/kg低劑量組2mg/kg羥基喜樹堿組1mg/kg5-Fu組20mg/kg生理鹽水對照組0.1ml/只(3)給藥途徑靜脈給藥(4)實(shí)驗(yàn)方法參照中華人民共和國藥政管理局《中藥新藥研究指南》第二部分“中藥新藥藥理學(xué)研究指南”第三章第四十五節(jié)“治療惡性腫瘤中藥的藥效學(xué)研究”的有關(guān)要求，及徐叔云等主編《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》第60章“動(dòng)物腫瘤體內(nèi)篩選法”中相關(guān)方法，取昆明小鼠60只，雄性，20-22g，正常飼養(yǎng)觀察3天無異常，常規(guī)腋下接種小鼠肉瘤S-180后隨機(jī)分組，10只/組共6組。注射用總藤黃酸以生理鹽水溶解，配制1.6mg/ml，0.8mg/ml和0.4mg/ml三種濃度，分別用于8mg/kg、4mg/kg和2mg/kg即高、中、低三個(gè)劑量組，靜脈給藥，給藥體積為0.05ml/10g體重，接種次日開始給藥，隔日連續(xù)給藥二天，1次/天，共6次。同時(shí)設(shè)陽性藥對照組二組(羥基喜樹堿1mg/kg和5-FU 20mg/kg)及單純對照組(生理鹽水0.1ml/只)。末次給藥后次日處死動(dòng)物稱體重，剝?nèi)∧[瘤稱瘤重，按公式[(對照組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重)/對照組平均瘤重]×100％，計(jì)算腫瘤抑制率，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
上述實(shí)驗(yàn)在相同條件下重復(fù)三次。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，注射用總藤黃酸高、中、低三個(gè)劑量組及羥基喜樹堿組和5-Fu組對小鼠移植性腫瘤肉瘤S-180的抑制率平均值分別為63.8±4.1％、58.6±2.5％、47.1±4.8％、63.1±3.8％和68.4±3.7％，與生理鹽水組相比，均P＜0.001。本實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果均表明，注射用總藤黃酸對小鼠移植性腫瘤肉瘤S-180有顯著的抑制作用，高劑量時(shí)尤為突出。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、
圖1。
表1注射用總藤黃酸靜脈注射對小鼠肉瘤S-180的實(shí)驗(yàn)結(jié)果批次 組別動(dòng)物數(shù)平均體重平均瘤重**抑瘤率 P***始 末 始末*(g) (％)第 生理鹽水10 10 19.7 22.2 2.7±0.59 - -
羥基喜樹堿 10 1020.1 20.90.93±0.1765.6＜0.001氟脲嘧啶 10 1019.8 21.30.74±0.2772.6＜0.001藤黃酸8mg10 1020.2 22.60.85±0.2368.5＜0.001藤黃酸4mg10 1020.4 22.21.04±0.4961.5＜0.001藤黃酸2mg10 1020.1 22.81.56±0.5642.2＜0.001生理鹽水 10 1020.6 21.42.60±0.49- -羥基喜樹堿 10 1019.9 20.70.91±0.4465.0＜0.001第氟脲嘧啶 10 1019.9 20.80.90±0.3265.4＜0.001二藤黃酸8mg10 1020.5 21.51.02±0.3060.8＜0.001批藤黃酸4mg10 1020.3 20.41.11±0.4057.3＜0.001藤黃酸2mg10 1020.2 22.31.25±0.2451.9＜0.001生理鹽水 10 1020.3 22.22.62±0.58- -羥基喜樹堿 10 1020.1 22.61.08±0.3158.8＜0.001第氟脲嘧啶 10 1020.2 21.90.86±0.2867.2＜0.001三藤黃酸8mg10 1020.2 23.20.99±0.3462.2＜0.001批藤黃酸4mg10 1020.1 22.51.13±0.4056.9＜0.001藤黃酸2mg10 1020.2 22.11.38±0.5047.3＜0.001*去瘤體重**X±SD n＝10***實(shí)驗(yàn)組平均瘤重與對照組平均瘤重比較本實(shí)驗(yàn)給藥途徑為靜脈注射，為確保實(shí)驗(yàn)的順利完成，給藥方案設(shè)計(jì)為隔日連續(xù)給藥二天，1次/天，共6次。參照注射用總藤黃酸靜脈一次給藥的半數(shù)致死量(LD50)為41.4mg/kg，同時(shí)預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示該藥的安全范圍較小，考慮到該藥在本實(shí)驗(yàn)方案中每個(gè)療程給藥6次，因此高劑量定為8mg/kg(約LD50的1/5)。三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高劑量組(8mg/kg體重)對腫瘤抑制率平均值為63.8±4.1％，最高值為68.52％(P＜0.001)，中、低劑量組(4mg、2mg/kg體重)也有顯著療效。實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物無死亡。
實(shí)驗(yàn)例2注射用總藤黃酸靜脈給藥對小鼠肝癌H-22的抑制作用1.實(shí)驗(yàn)材料(1)實(shí)驗(yàn)藥物名稱注射用總藤黃酸性狀黃色疏松塊狀物及粉末來源南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所批號(hào)20010105規(guī)格25mg/支(2)陽性對照藥A.名稱羥基喜樹堿注射液來源黃石飛云制藥有限公司批號(hào)010203規(guī)格2ml5mgB.名稱氟脲嘧啶注射液來源上海旭東制藥有限公司批號(hào)010208規(guī)格10ml0.25g(3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系昆明種小鼠，20～22g，雄性來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室合格證號(hào)SCXK11-00-0005(4)瘤株名稱肝癌H-22來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院2.實(shí)驗(yàn)方法(1)藥物配制取注射用總藤黃酸內(nèi)容物適量，精密稱定，根據(jù)內(nèi)容物含量，加入生理鹽水配成所需濃度的溶液，備用。
(2)劑量設(shè)置總藤黃酸組高劑量組8mg/kg中劑量組4mg/kg低劑量組2mg/kg羥基喜樹堿組1mg/kg
5-Fu組20mg/kg生理鹽水對照組0.1ml/只(3)給藥途徑靜脈注射(4)實(shí)驗(yàn)方法參照中華人民共和國藥政管理局《中藥新藥研究指南》第二部分“中藥新藥藥理學(xué)研究指南”第三章第四十五節(jié)“治療惡性腫瘤中藥的藥效學(xué)研究”的有關(guān)要求，及徐叔云等主編《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》第60章“動(dòng)物腫瘤體內(nèi)篩選法”中相關(guān)方法。取昆明小鼠60只，雄性，20-22g，正常飼養(yǎng)觀察3天無異常，常規(guī)腋下接種小鼠肝癌H-22后隨機(jī)分組，10只/組共6組。注射用總藤黃酸以生理鹽水溶解，配制1.6mg/ml，0.8mg/ml和0.4mg/ml三種濃度，分別用于8mg/kg、4mg/kg和2mg/kg即高、中、低三個(gè)劑量組，靜脈給藥，給藥體積為0.05ml/10g體重，接種次日開始給藥，隔日連續(xù)給藥二天，1次/天，共6次。同時(shí)設(shè)陽性藥對照組二組(羥基喜樹堿1mg/kg和5-FU 20mg/ml)及單純對照組(生理鹽水0.1ml/只)。末次給藥后次日處死動(dòng)物稱體重，剝?nèi)∧[瘤稱瘤重，按公式[(對照組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重)/對照組平均瘤重]×100％，計(jì)算腫瘤抑制率，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
上述實(shí)驗(yàn)在相同條件下重復(fù)三次。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，注射用總藤黃酸高、中、低三個(gè)劑量組及羥基喜樹堿組和5-Fu組對小鼠肝癌H-22腫瘤的抑制率平均值分別為56.6±5.3％、39.1±5.0％、33.3±8.9％、62.8±2.5％和57.1±1.7％，與生理鹽水組相比，均P＜0.001。本實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果均表明，注射用總藤黃酸對小鼠移植性腫瘤肝癌H-22實(shí)體型有顯著的抑制作用，高劑量時(shí)尤為突出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，圖2。
表2注射用總藤黃酸靜脈注射對小鼠肝癌H-22的實(shí)驗(yàn)結(jié)果動(dòng)物數(shù)平均體重平均瘤重**抑瘤率批次 組別 P***始 末 始末*(g) (％)第生理鹽水10 10 20.6 22.1 3.39±0.31 --一羥基喜樹堿 10 10 19.9 21.1 1.17±0.31 65.5 ＜0.001批氟脲嘧啶10 10 19.8 21.5 1.39±0.37 59.0 ＜0.001藤黃酸8mg 10 10 20.3 22.0 1.34±0.31 60.5 ＜0.001
藤黃酸4mg10 1020.322.12.25±0.4033.6＜0.001藤黃酸2mg10 1020.223.31.92±0.3143.4＜0.001生理鹽水 10 1021.623.62.50±0.35- -羥基喜樹堿 10 1021.824.60.94±0.1562.4＜0.001第氟脲嘧啶 10 1021.823.41.09±0.2856.4＜0.001二藤黃酸8mg10 1021.822.11.03±0.3258.8＜0.001批藤黃酸4mg10 1021.623.61.49±0.2040.4＜0.001藤黃酸2mg10 1021.823.91.75±0.3130.0＜0.001生理鹽水 10 1021.523.92.97±0.50- -羥基喜樹堿 10 1021.423.61.70±0.2960.6＜0.001第氟脲嘧啶 10 1021.522.71.31±0.4855.9＜0.001三藤黃酸8mg10 1021.523.81.41±0.4652.5＜0.001批藤黃酸4mg10 1021.624.51.68±0.5243.4＜0.001藤黃酸2mg10 1021.724.72.18±0.7526.6＜0.001*去瘤體重**X±SD n＝10***實(shí)驗(yàn)組平均瘤重與對照組平均瘤重比較本實(shí)驗(yàn)給藥途徑為靜脈注射，為確保實(shí)驗(yàn)的順利完成，給藥方案設(shè)計(jì)為隔日連續(xù)給藥二天，1次/天，共6次。參照注射用總藤黃酸靜脈一次給藥的半數(shù)致死量(LD50)為41.4mg/kg，同時(shí)預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示該藥的安全范圍較小，考慮到該藥在本實(shí)驗(yàn)方案中每個(gè)療程給藥6次，因此高劑量定為8mg/kg(約LD50的1/5)。三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高劑量組(8mg/kg體重)對腫瘤抑制率平均值為56.6±5.3％，最高值為60.5％(P＜0.001)，中劑量組(4mg/kg體重)也有確實(shí)療效。實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物無死亡。
實(shí)驗(yàn)例3注射用總藤黃酸靜脈給藥對小鼠艾氏癌實(shí)體瘤的抑制作用1.實(shí)驗(yàn)材料(1)實(shí)驗(yàn)藥物名稱注射用總藤黃酸性狀黃色疏松塊狀物及粉末來源南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所批號(hào)20010105規(guī)格25mg/支(2)陽性對照藥A.名稱羥基喜樹堿注射液來源黃石飛云制藥有限公司批號(hào)010203規(guī)格2ml5mgB.名稱氟脲嘧啶注射液來源上海旭東制藥有限公司批號(hào)010208規(guī)格10ml0.25g(3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系昆明種小鼠，20～22g，雄性來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室合格證號(hào)SCXK11-00-0005(4)瘤株名稱艾氏癌實(shí)體瘤(EC)來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院2.實(shí)驗(yàn)方法(1)藥物配制取注射用總藤黃酸內(nèi)容物適量，精密稱定，根據(jù)內(nèi)容物含量，加入生理鹽水配成所需濃度的溶液，備用。
(2)劑量設(shè)置總藤黃酸組高劑量組8mg/kg中劑量組4mg/kg低劑量組2mg/kg羥基喜樹堿組1mg/kg5-Fu組20mg/kg生理鹽水對照組0.1ml/只(3)給藥途徑靜脈給藥
(4)實(shí)驗(yàn)方法參照中華人民共和國藥政管理局《中藥新藥研究指南》第二部分“中藥新藥藥理學(xué)研究指南”第三章第四十五節(jié)“治療惡性腫瘤中藥的藥效學(xué)研究”的有關(guān)要求，及徐叔云等主編《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》第60章“動(dòng)物腫瘤體內(nèi)篩選法”中相關(guān)方法，取昆明小鼠60只，雄性，18-22g，正常飼養(yǎng)觀察3天無異常，常規(guī)腋下接種小鼠艾氏癌實(shí)體瘤后隨機(jī)分組，10只/組，共6組。注射用總藤黃酸以生理鹽水溶解，配制1.6mg/ml，0.8mg/ml和0.4mg/ml三種濃度，分別用于8mg/kg、4mg/kg和2mg/kg即高、中、低三個(gè)劑量組，靜脈給藥，給藥體積為0.05ml/10g體重，接種次日開始給藥，隔日連續(xù)給藥二天，1次/天，共6次。同時(shí)設(shè)陽性藥對照組二組(羥基喜樹堿1mg/kg和5-FU 20mg/kg)及單純對照組(生理鹽水0.1ml/只)。末次給藥后次日處死動(dòng)物，剝?nèi)∧[瘤，稱體重及瘤重，按公式[(對照組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重)/對照組平均瘤重]×100％，計(jì)算腫瘤抑制率，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
上述實(shí)驗(yàn)在相同條件下重復(fù)三次。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，注射用總藤黃酸高、中、低三個(gè)劑量組及羥基喜樹堿組和5-Fu組對小鼠移植性腫瘤艾氏癌實(shí)體瘤(EC)的抑制率平均值分別為51.3±4.3％、45.6±8.9％、29.4±5.6％、52.3±5.2％和70.0±5.8％，與生理鹽水組相比，均P＜0.001。本實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果表明，注射用總藤黃酸對小鼠移植性腫瘤艾氏癌實(shí)體瘤(EC)有顯著的抑制作用，高劑量時(shí)尤為突出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3，圖3。
表3注射用總藤黃酸靜脈注射對小鼠艾氏癌實(shí)體瘤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果動(dòng)物數(shù)平均體重平均瘤重**抑瘤率批次組別P***始 末 始 末*(g)(％)生理鹽水10 10 21.828.02.28±0.34 - -羥基喜樹堿 10 10 21.626.10.95±0.32 58.3＜0.001第氟脲嘧啶10 10 21.425.10.61±0.16 73.2＜0.001一藤黃酸8mg10 9 21.524.61.00±0.37 56.1＜0.001批藤黃酸4mg10 10 21.927.11.04±0.41 54.4＜0.001藤黃酸2mg10 9 21.724.81.52±0.35 33.3＜0.001第生理鹽水10 10 19.123.72.70±0.38 - -
羥基喜樹堿 10 1019.322.61.39±0.3348.5＜0.001氟脲嘧啶 10 1019.420.90.99±0.2863.3＜0.001藤黃酸8mg10 1019.222.71.35±0.3950.0＜0.001藤黃酸4mg10 1019.323.01.47±0.4046.0＜0.001藤黃酸2mg10 1019.423.22.08±0.5923.0＜0.001生理鹽水 10 1021.224.22.41±0.39- -羥基喜樹堿 10 1021.623.61.20±0.1650.2＜0.001第氟脲嘧啶 10 1021.522.80.64±0.1673.4＜0.001三藤黃酸8mg10 1021.223.41.26±0.4047.7＜0.001批藤黃酸4mg10 1021.523.71.53±0.3336.5＜0.001藤黃酸2mg10 1021.224.71.64±0.3432.0＜0.001*去瘤體重**X±SD n＝10***實(shí)驗(yàn)組平均瘤重與對照組平均瘤重比較參照注射用總藤黃酸靜脈一次給藥的半數(shù)致死量(LD50)為41.4mg/kg，同時(shí)預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示該藥的安全范圍較小?？紤]到該藥在本實(shí)驗(yàn)方案中每個(gè)療程給藥6次，因此高劑量定為8mg/kg(約LD50的1/5)。三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高劑量組(8mg/kg體重)對腫瘤抑制率平均值為51.3±4.3％，最高值為56.1％(P＜0.001)；中劑量組(4mg/kg體重)對腫瘤抑制率平均值為45.6±8.9％。實(shí)驗(yàn)例4注射用總藤黃酸腹腔給藥對肉瘤S～180腹水型荷瘤小鼠生存期的延長作用1.實(shí)驗(yàn)材料(1)實(shí)驗(yàn)藥物名稱注射用總藤黃酸性狀黃色疏松塊狀物及粉末來源南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所批號(hào)20010105規(guī)格25mg/支(2)陽性對照藥名稱羥基喜樹堿注射液來源黃石飛云制藥有限公司批號(hào)010203規(guī)格2ml5mg(3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系昆明種小鼠，20～22g，雄性來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室合格證號(hào)SCXK11-00-0005(4)瘤株名稱肉瘤S-180來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院2.實(shí)驗(yàn)方法(1)藥物配制取注射用總藤黃酸內(nèi)容物適量，精密稱定，根據(jù)內(nèi)容物含量，加入生理鹽水配成所需濃度的溶液，備用。
(2)劑量設(shè)置總藤黃酸組高劑量組1.2mg/kg中劑量組0.6mg/kg低劑量組0.3mg/kg羥基喜樹堿組1mg/kg生理鹽水對照組0.1ml/只(3)給藥途徑腹腔注射(4)實(shí)驗(yàn)方法參照中華人民共和國藥政管理局《中藥新藥研究指南》第二部分“中藥新藥藥理學(xué)研究指南”第三章第四十五節(jié)“治療惡性腫瘤中藥的藥效學(xué)研究”的有關(guān)要求，及徐叔云等主編《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》第60章“動(dòng)物腫瘤體內(nèi)篩選法”中相關(guān)方法，取昆明小鼠50只，雄性，18-22g，下常飼養(yǎng)觀察3天無異常，常規(guī)腹腔接種小鼠肉瘤S-180后隨機(jī)分組，10只/組，共5組。注射用總藤黃酸以生理鹽水溶解，配制0.12mg/ml，0.06mg/ml和0.03mg/ml三種濃度，分別用于1.2mg/kg、0.6mg/kg、0.3mg/kg即高、中、低三個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)陽性藥對照組(羥基喜樹堿1mg/kg)及單純對照組(生理鹽水0.2ml/只)。腹腔給藥，給藥體積為0.1ml/10g體重，接種次日開始給藥，1次/天，共8次。末次給藥后繼續(xù)觀察動(dòng)物死亡，記錄生存天數(shù)，按公式[(實(shí)驗(yàn)組平均生存天數(shù)-對照組平均生存天數(shù))/對照組平均生存天數(shù)]×100％，計(jì)算生命延長率，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。上 述實(shí)驗(yàn)在相同條件下重復(fù)三次。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明注射用總藤黃酸高劑量組及羥基喜樹堿組對肉瘤S-180腹水型荷瘤小鼠生存期延長率平均值為135.5±27.1％、62.9±3.4％，與生理鹽水組相比，P＜0.001。注射用總藤黃酸中、低劑量組對肉瘤S-180腹水型荷瘤小鼠生存期延長無明顯作用。重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4、圖4。
表4注射用總藤黃酸腹腔注射對小鼠肉瘤S-180腹水型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果動(dòng)物數(shù)平均體重平均生存時(shí)間**生命延長率批次組別 P***始 末*始末*(天) (％)生理鹽水10 10 20.2 29.617.6±2.4 - -羥基喜樹堿 10 10 20.0 24.128.0±4.2 59.1 ＜0.001第一 藤1.2mg 10 10 19.6 23.246.9±9.3 166.5 ＜0.001批藤0.6mg 10 10 19.8 26.323.2±9.5 31.8 ＞0.05藤0.3mg 10 10 20.1 26.417.4±9.6 -1.1 ＞0.05生理鹽水10 10 20.0 28.418.1±3.9 - -羥基喜樹堿 10 10 19.9 23.730.0±4.8 65.7 ＜0.001第二藤1.2mg 10 10 19.9 25.539.1±11.7 116＜0.001批藤0.6mg 10 10 20.0 26.720.4±4.4 12.7 ＞0.05藤0.3mg 10 10 19.8 27.918.5±4.4 2.2＞0.05生理鹽水10 10 18.9 28.820.8±3.1 - -羥基喜樹堿 10 10 18.7 24.134.1±9.3 63.9 ＜0.001第三 藤1.2mg10 10 18.9 24.946.6±14.9 124＜0.001批藤0.6mg 10 10 18.9 22.722.6±5.6 8.7＞0.05藤0.3mg 10 10 18.5 27.721.0±4.4 0 ＞0.05*給藥結(jié)束**X±SD n＝10***實(shí)驗(yàn)組平均瘤重與對照組平均瘤重比較參照注射用總藤黃酸腹腔一次給藥的半數(shù)致死量(LD50)為6.4mg/kg(見文件一)，同時(shí)預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示該藥的安全范圍較小?？紤]到該藥在本實(shí)驗(yàn)方案中每個(gè)療程給藥8次，因此高劑量定為1.2mg/kg(約LD50的1/5)。
三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高劑量組(1.2mg/kg體重)對荷瘤小鼠生命延長率平均值為135.5±27.1％，最高值為166.5％(P＜0.001)，其中平均20％動(dòng)物生存期超過60天。
實(shí)驗(yàn)例5注射用總藤黃酸腹腔給藥對艾氏癌腹水型荷瘤小鼠生存期的延長作用1.實(shí)驗(yàn)材料(1)實(shí)驗(yàn)藥物名稱注射用總藤黃酸性狀黃色疏松塊狀物及粉末來源南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所批號(hào)20010105規(guī)格25mg/支(2)陽性對照藥名稱氟脲嘧啶注射液來源上海旭東制藥有限公司批號(hào)010208規(guī)格10ml0.25g(3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系昆明種小鼠，20～22g，雄性來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室合格證號(hào)SCXK11-00-0005(4)瘤株名稱艾氏癌來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院2.實(shí)驗(yàn)方法(1)藥物配制取注射用總藤黃酸內(nèi)容物適量，精密稱定，根據(jù)內(nèi)容物含量，加入生理鹽水配成所需濃度的溶液，備用。
(2)劑量設(shè)置總藤黃酸組高劑量組1.2mg/kg中劑量組0.6mg/kg
低劑量組0.3mg/kg5-Fu組20mg/kg生理鹽水對照組0.1ml/只(3)給藥途徑腹腔注射(4)實(shí)驗(yàn)方法參照中華人民共和國藥政管理局《中藥新藥研究指南》第二部分“中藥新藥藥理學(xué)研究指南”第三章第四十五節(jié)“治療惡性腫瘤中藥的藥效學(xué)研究”的有關(guān)要求，及徐叔云等主編《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》第60章“動(dòng)物腫瘤體內(nèi)篩選法”中相關(guān)方法，取昆明小鼠50只，雄性，18-22g，正常飼養(yǎng)觀察3天無異常，常規(guī)腹腔接種艾氏腹水癌后隨機(jī)分組，10只/組，共5組。注射用總藤黃酸以生理鹽水溶解，配制0.12mg/ml，0.06mg/ml和0.03mg/ml三種濃度，分別用于1.2mg/kg、0.6mg/kg、0.3mg/kg即高、中、低三個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)陽性藥對照組(5-Fu20mg/kg)及單純對照組(生理鹽水0.1ml/只)。腹腔給藥，給藥體積為0.1ml/10g體重，接種次日開始給藥，1次/天，共8次。術(shù)次給藥后繼續(xù)觀察動(dòng)物死亡，記錄生存天數(shù)，按公式[(實(shí)驗(yàn)組平均生存天數(shù)-對照組平均生存天數(shù))/對照組平均生存天數(shù)]×100％，計(jì)算生命延長率，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
上述實(shí)驗(yàn)在相同條件下重復(fù)三次。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明注射用總藤黃酸高劑量組及5-Fu組對艾氏癌腹水型荷瘤小鼠生存期延長率平均值為116.1±16.0％、78.4±7.9％，與生理鹽水組相比，P＜0.001。注射用總藤黃酸中、低劑量組對艾氏癌腹水型荷瘤小鼠生存期延長無明顯作用。重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5、圖6表5注射用總藤黃酸腹腔注射對小鼠艾氏腹水癌的實(shí)驗(yàn)結(jié)果批次組別動(dòng)物數(shù)平均體重平均生存時(shí)間**生命延長率 P***—— 始 末*始末*(天)(％)生理鹽水 10 10 19.4 29.3 15.9±2.9 - -5-FU 10 10 19.3 20.6 26.9±4.4 69.2 ＜0.001第一藤1.2mg10 10 19.6 23.4 33.4±8.3 110.0 ＜0.001批藤0.6mg10 10 19.0 28 219.0±5.7 19.5 ＞0.05藤0.3mg10 10 19.2 27.114.2±6.1 -10.7 ＞0.05
生理鹽水10 1020.7 28.517.3±3.0- -5-FU 10 1020 5 21.931.6±5.782.7＜0.001第二藤1.2mg 10 1020.5 23.035.3±5.7104.0 ＜0.001批藤0.6mg 10 1020.5 26.819.3±3.511.6＞0.05藤0.3mg 10 1020.3 28.417.6±3.11.7 ＞0.05生理鹽水 10 1019.3 25.816.1±2.2- -5-FU 10 1019.2 20.529.5±3.083.2＜0.001第三藤1.2mg 10 1019.0 22.637.7±7.2134.2 ＜0.001批藤0.6mg 10 1019.0 23.719.9±5.623.6＞0.05藤0.3mg 10 1019.2 24.519.5±4.521.1＞0.05*末次給藥次日**X±SD n＝10***實(shí)驗(yàn)組平均瘤重與對照組平均瘤重比較參照注射用總藤黃酸腹腔一次給藥后半數(shù)致死量(LD50)為6.4mg/kg，同時(shí)預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示該藥的安全范圍較小，考慮到該藥在本實(shí)驗(yàn)方案中每個(gè)療程給藥8次，因此高劑量定為1.2mg/kg(約LD50的1/5)。
三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示高劑量組(1.2mg/kg體重)對艾氏癌腹水型荷瘤小鼠生命延長率平均值為116.1％±16.0％，最高值為134.2％(P＜0.001)。
實(shí)驗(yàn)例6注射用總藤黃酸靜脈給藥對裸鼠人肝癌7721的實(shí)驗(yàn)治療作用1.實(shí)驗(yàn)材料(1)實(shí)驗(yàn)藥物名稱注射用總藤黃酸性狀黃色疏松塊狀物及粉末來源南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所批號(hào)20010105規(guī)格25mg/支陽性對照藥名稱羥基喜樹堿注射液來源黃石飛云制藥有限公司批號(hào)010203
規(guī)格2ml5mg(3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系裸鼠，16～18g，6～8周齡來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室合格證號(hào)SCXK11-00-0005(4)瘤株名稱裸鼠人肝癌7721來源中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院2.實(shí)驗(yàn)方法(1)藥物配制取注射用總藤黃酸內(nèi)容物適量，精密稱定，根據(jù)內(nèi)容物含量，加入生理鹽水配成所需濃度的溶液，備用。
(2)劑量設(shè)置總藤黃酸組高劑量組6mg/kg中劑量組3mg/kg低劑量組1.5mg/kg羥基喜樹堿組1mg/kg5-Fu組15mg/kg生理鹽水對照組0.1ml/只(3)給藥途徑靜脈給藥(4)實(shí)驗(yàn)方法參照中華人民共和國藥政管理局《中藥新藥研究指南》第二部分“中藥新藥藥理學(xué)研究指南”第三章第四十五節(jié)“治療惡性腫瘤中藥的藥效學(xué)研究”中有關(guān)要求，及徐叔云等主編《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》第60章“動(dòng)物腫瘤體內(nèi)篩選法”中相關(guān)方法。取裸鼠48只，同一性別，16-18g，正常飼養(yǎng)觀察3天無異常后，在無菌條件下腋下小塊(2mm3/塊，1塊/只)接種裸鼠人肝癌7721后隨機(jī)分組，8只/組，共6組。注射用總藤黃酸以生理鹽水溶解，配制1.2mg/ml，0.6mg/ml和0.3mg/ml三種濃度，分別用于6mg/kg、3mg/kg和1.5mg/kg即高、中、低三個(gè)劑量組。靜脈給藥，給藥體積為0.05ml/10g體重，接種后第5日開始給藥，1次/3天，共10次。同時(shí)設(shè)陽性藥對照二組(羥基喜樹堿1mg/kg和5-FU 15mg/kg)及單純對照組(生理鹽水0.1ml/只)。末次給藥后次日處死動(dòng)物稱體重，剝?nèi)∧[瘤稱瘤重，按公式[(對照組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重)/對照組平均瘤重]×100％，計(jì)算腫瘤抑制率，并用t檢驗(yàn)對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
上述實(shí)驗(yàn)在相同條件下重復(fù)三次。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明注射用總藤黃酸高、中、低劑三個(gè)劑量組及羥基喜樹組及5-Fu組對裸鼠人肝癌7721抑制率分別為53.7％±6.6％、26.8％±3.4％、19.9％±10.1％、69.9％±4.9、45.6％±2.3％，與生理鹽水組比較，均P＜0.001，本實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果均表明注射用總藤黃酸對裸鼠人肝癌7721有顯著的抑制作用，高劑量時(shí)尤為突出。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6、表6注射用總藤黃酸靜脈注射對裸鼠人肝癌7721的實(shí)驗(yàn)結(jié)果動(dòng)物數(shù)平均體重平均瘤重*抑瘤率批次組別P**始 末 始末 (g) (％)生理鹽水 8 8 16.3 18.4 1.39±0.25 - -羥基喜樹堿8 8 16.6 19.6 0.46±0.17 66.9 ＜0.001第氟脲嘧啶 8 8 16.3 18.7 0.76±0.18 45.3 ＜0.001一藤黃酸6mg8 8 16.3 18.8 0.54±0.09 61.1 ＜0.001批藤黃酸3mg8 8 16.6 17.7 0.98±0.25 29.5 ＜0.01藤黃酸1.5mg 8 8 16.1 18.8 1.03±0.14 25.9 ＜0.001生理鹽水 8 8 16.8 19.8 1.98±0.26 - -羥基喜樹堿8 8 16.8 20.5 0.65±0.14 67.2 ＜0.001第氟脲嘧啶 8 8 16.9 18.9 1.03±0.19 48.0 ＜0.001二藤黃酸6mg8 8 16.8 19.4 0.96±0.14 51.5 ＜0.001批藤黃酸3mg8 8 16.8 20.1 1.43±0.32 27.8 ＜0.001藤黃酸1.5mg 8 8 16.8 20.3 1.83±0.25 7.6 ＞0.05生理鹽水8 8 16.4 20.3 2.0±0.36 - -羥基喜樹堿 8 8 16.3 19.4 0.49±0.11 75.5 ＜0.001第氟脲嘧啶8 8 16.4 19.7 1.13±0.17 43.5 ＜0.001三藤黃酸6mg 8 8 16.4 18.5 1.03±0.14 48.5 ＜0.001批藤黃酸3mg 8 8 16.4 21.2 1.54±0.29 23.0 ＜0.01藤黃酸1.5mg 8 8 16.4 24.4 1.89±0.30 5.5 ＞0.05*X±SD n＝8
**實(shí)驗(yàn)組平均瘤重與對照組平均瘤重比較本實(shí)驗(yàn)給藥途徑為靜脈注射，同時(shí)考慮到裸鼠特殊的生理特點(diǎn)，為確保實(shí)驗(yàn)的順利完成，給藥方案設(shè)計(jì)為1次/3天，共10次。參照注射用總藤黃酸小鼠靜脈一次給藥的半數(shù)致死量(LD50)為41.4mg/kg(見文件二)，同時(shí)預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示該藥的安全范圍較小，因此高劑量定為6mg/kg。三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高劑量組(6mg/kg體重)對腫瘤抑制率平均值為53.7±6.6％，最高值為61.1％(P＜0.001)。實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物無死亡。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
取處方量總藤黃酸置適宜容器中，加適量注射用水(總體積的80％，)攪勻，加入L-精氨酸超聲溶解至澄清，加入甘露醇，攪拌溶解，加入1％針用炭，攪拌30分鐘，脫炭，加注射用水至足量，測定中間體含量合格后，在無菌條件下，0.22 微孔濾膜過濾，濾液灌裝于10ml西林瓶中，每瓶2ml，半加塞，裝盤，送入凍干箱中，插入溫度傳感器，關(guān)閉箱門開機(jī)并至干燥，密塞，出箱，扎蓋，檢查，包裝即可。
取處方量總藤黃酸置適宜容器中，加適量注射用水(總體積的80％，)攪勻，加入L-精氨酸超聲溶解至澄清，加入甘露醇，攪拌溶解，加入1％針用炭，攪拌30分鐘，脫炭，加注射用水至足量，測定中間體含量合格后，在無菌條件下，0.22 微孔濾膜過濾，濾液灌裝于10ml西林瓶中，每瓶2ml。
將上述干燥品放入1000ml圓底燒瓶中，加乙醚600ml，水浴上回流溶解，放冷，濾出不溶物，濾液濃縮至1/3體積，向燒瓶中加入同體積石油醚搖勻，放置2小時(shí)。濾出固體，用石油醚(60℃～90℃)洗滌三次，每次50ml，抽干后，紅外光下烘干，得干品42g，收率56％。
將上述干品用乙醚溶解后，移置1000ml分液漏斗中，用1N鹽酸1200ml，分四次洗滌，每次300ml，再用蒸餾水洗滌至水層顯中性，分取乙醚層，用無水Na2SO4干燥，抽濾，于水浴上濃縮乙醚至干，得成品總藤黃酸原料35g，收率83.3％。TLC檢查一個(gè)主斑點(diǎn)，Rf0.65[硅膠G板，展開劑苯-乙酸乙酯-甲酸(75∶24∶1.5)]。
權(quán)利要求
1.一種總藤黃酸藥物組合物，其特征在于該組合物由有以下重量份的組分組成，總藤黃酸12.5-37.5，L-精氨酸10-30，甘露醇20-60。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物是片劑、膠囊劑、噴霧劑、凝膠劑、凝膠吸入劑、口服液、混懸劑、沖劑、貼劑、丸劑、散劑、注射劑、輸液劑、凍干注射劑、脂質(zhì)體注射劑、靶向給藥注射劑、栓劑、緩釋制劑、控釋制劑。
3.權(quán)利要求2的藥物組合物是注射劑。
4.權(quán)利要求3的藥物組合物是凍干注射劑。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物其中各組分重量份為總藤黃酸25，L-精氨酸20，甘露醇40。
6.權(quán)利要求5的藥物組合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟a.將配方量的總藤黃酸加入注射用水；b.加入L-精氨酸；c.使混合物溶解；d.加入甘露醇，使溶解；e.加入碳粉，攪拌，脫色，過濾；f.灌裝，冷凍干燥。
7.權(quán)利要求1的組合物，其中的總藤黃酸是按如下方法制備的，藤黃碎粒加吡啶熱浸，合并吡啶液，加熱水過夜，析出藤黃酸吡啶鹽，吡啶水溶液洗滌，烘干，用乙醚熱溶，濾過，濃縮至適量，加入等體積的石油醚(60～90℃)，室溫下析出固體，將此固體物用鹽酸酸化，提取，干燥得總藤黃酸。
8.權(quán)利要求1的組合物，其中的總藤黃酸是按如下方法制備的，藤黃碎粒用丙酮浸泡過夜，合并丙酮液，減壓蒸干得棕黑色膠狀物，加吡啶熱溶后，加水，固體物用石油醚及70％吡啶洗滌，得橙黃色藤黃酸吡啶鹽，將此吡啶鹽溶于乙醚，用1N HCl洗滌，乙醚層加無水硫酸鈉干燥，蒸去乙醚，得總藤黃酸。
9.權(quán)利要求1的組合物，其中的總藤黃酸是按如下方法制備的，藤黃碎粒加丙酮浸泡過夜，合并丙酮液，得藤黃樹脂的丙酮提取液，經(jīng)濃縮后，通過硅膠柱層析，收集苯-乙酸乙酯(9∶1)洗脫部分，用硅膠G制板，氯仿-甲醇-二乙胺(15∶1∶1)展開，割取Rf值0.4的亮黃色部分，硅膠用0.5％Na2CO3洗滌，過濾，濾液用稀鹽酸酸化，即得亮黃色沉淀，水洗至中性，抽干得總藤黃酸。
10.權(quán)利要求1的組合物在制備一種抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種新的藤黃酸制劑配方，該配方由總藤黃酸，L－精氨酸和甘露醇組成，其中各組分所占比例按重量份計(jì)為總藤黃酸12.5－37.5，L－精氨酸10－30，甘露醇20－60，本發(fā)明還包括制備這種制劑的方法。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1391892SQ0212882
公開日2003年1月22日 申請日期2002年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月14日
發(fā)明者陳慶才, 趙俊 申請人:南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所