專利名稱：一種硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制備方法，尤其涉及2′，3′-O-異亞丙基核苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物的制備方法，該類化合物具有良好的生物活性和抗病毒、抗腫瘤、抗愛茲病毒等藥物活性，可在臨床應(yīng)用中發(fā)展成為一種核苷類抗病毒、抗腫瘤、抗愛茲病毒前藥(prodrugs)。
硫代磷酸在磷原子上含有一個硫取代氧的結(jié)構(gòu)，雖然這個結(jié)構(gòu)仍然保留著原來的電荷，保留著高水溶性的性質(zhì)，但硫代磷酸的寡聚脫氧核糖核酸(S-oligos)的其他理化特性和生物學(xué)屬性均與天然的磷酸二酯原型有很大的差別。最顯著的差別之一是硫代磷酸對核酸酶具有抵抗性。由于細胞內(nèi)外核酸酶的存在，很快消化掉了加入的磷酸二酯類反義寡聚核苷酸，使其喪失作用功能。通過合成具有抵抗核酸酶的硫代磷酸類化合物，對于今后應(yīng)用合成的寡聚脫氧核糖核酸用于治療目的，無疑是開辟了一條希望之路。
本發(fā)明的目的是提出一種硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制備方法，具體地講，是2′，3′-O-異亞丙基核苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物的制備方法，以用于開發(fā)抗病毒、抗腫瘤、抗愛茲病毒的活性藥物。
本發(fā)明提出的2′，3′-O-異亞丙基核苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物，其結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R為H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2；B為腺嘌呤，鳥嘌呤，胞嘧啶，尿嘧啶。
上述化合物的制備方法，包括如下步驟1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃的條件下，將原料(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成濃度為0.8～1.0mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入與原料相同物質(zhì)的量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑三乙胺，縛酸劑的加入量是原料物質(zhì)的量的2倍。
3)制備2′，3′-O-異亞丙基核苷溶液備用室溫下取核苷懸浮于干燥的溶劑中配成0.5～1.0mol/L的溶液，邊攪拌邊向其中加入與核苷等物質(zhì)的量的對甲苯磺酸和四倍物質(zhì)的量的原甲酸三乙酯，體系變澄清后，用濃氨水與大量水進行中和使PH＝7～8，然后將上述溶液減壓濃縮，在冰箱中靜置過夜即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基核苷。將制得的2′，3′-O-異亞丙基核苷抽濾干燥后溶于溶劑中配制成0.5～1.0mol/L的溶液。
4)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待原料全部反應(yīng)完畢以后，將與原料相同物質(zhì)的量的上述第三步制備的2′，3′-O-異亞丙基核苷溶液慢慢滴入第二步的溶液中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加與原料相同物質(zhì)的量的縛酸劑三乙胺。
5)監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。再用硅膠柱進行柱層析分離，即可得到2′，3′-O-異亞丙基核苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物。
用本發(fā)明的方法制備的2′，3′-O-異亞丙基核苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰氨基酸甲酯，是一類全新的具有抗愛茲病毒藥物活性的化合物，通過合成不同種類的核苷-氨基酸綴合物，并進行活性實驗，初步得到了滿意的結(jié)果，為進一步研制和開發(fā)新型抗愛茲病毒藥物提供了基礎(chǔ)研究成果。
以下介紹
具體實施例方式實施例1制備2′，′-O-異亞丙基腺苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物，其中R為H，B為腺嘌呤。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)制備2′，3′-O-異亞丙基腺苷備用室溫下取1mol(267g)腺苷懸浮于2L的丙酮中，攪拌下向其中加入1.1mol(210g)對甲苯磺酸和4mol(640ml)原甲酸三乙酯，約1小時后體系變澄清，用100ml濃氨水與5.9L水進行中和，然后將上述溶液減壓濃縮至1.5L，在冰箱中靜置過夜即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基腺苷266g(87％)。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測上述第二步的反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基腺苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為58.4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ60.38，61.02；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.26，9.22(bs，1H，NH)，8.43(1H，s，H-2)，8.23(1H，s，H-8)，7.40(2H，s，NH2)，6.44(1H，m，H-1′)，4，50(2H，m，H-2′，3′)，3.97(1H，m，H-4′)，3.88(3H，s，OCH3)，3.64(2H，m，H-5′)，3.57(2H，m，H-α)，1.54(3H，s，CH3)，1.33(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ173.24(COOMe)，163.70(C-2)，150.43(C-4)，140.76(C-6)，117.02，116.96(＞CMe2)，101.76(C-1′)，87.74(C-5)，84.83(C-2′)，73.54(C-3′)，69.80(C-4′)，60.87(C-5′)，54.78(OCH3)，45.86(C-α)，26.40(CH3)，26.86(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 476(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 474(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗愛茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細胞毒性指標(biāo)
ED50CEM-TK-5×10-3M (CD507×10-6M)CEM-SS 4×10-3M (CD608×10-6M)MT42×10-3M (CD608×10-6M)實施例2制備2′，3′-O-異亞丙基腺苷5′-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物，其中R為CH3，B為腺嘌呤。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.14g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基腺苷的合成同上述實施例(1)。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基腺苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為62.4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ57.86，57.03；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.44，9.40(bs，1H，NH)，8.89(1H，s，H-2)，8.67(1H，s，H-8)，7.67(2H，s，NH2)，6.59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4.22(1H，m，H-4′)，3.98(3H，s，OCH3)，3.85(2H，m，H-5′)，3.67(2H，m，H-α)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)，1.31，1.30(3H，d，3J＝6，β-CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ180.24(COOMe)，170.70(C-2)，156.43(C-4)，149.76(C-6)，117.02，116.96(＞CMe2)，108.23(C-1′)，89.66(C-5)，85.87(C-2′)，76.23(C-3′)，69.66(C-4′)，61.23(C-5′)，54.78(OCH3)，50.73(C-α)，48.66(C-β)，26.40(CH3)，26.86(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 487(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 489(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 4×10-3M (CD502×10-6M)CEM-SS 6×10-3M (CD509×10-6M)MT4 8×10-3M (CD506×10-6M)實施例3制備2′，3′-O-異亞丙基腺苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物，其中R為C6H5CH2，B為腺嘌呤。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.22g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基腺苷的合成同上述實施例(1)。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基腺苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為58.7％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ58.64，58.33；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.21，9.15(bs，1H，NH)，8.67(1H，s，H-2)，8.58(1H，s，H-8)，7.88(2H，s，NH2)，7.15-7.35(5H，m，Ph)，6.59(1H，m，H-1′)，4，55(2H，m，H-2′，3′)，4.37(1H，m，H-4′)，3.79(3H，s，OCH3)，3.66(2H，m，H-5′)，3.48(2H，m，H-α)，2.32(2H，m，H-β)，1.61(3H，s，CH3)，1.49(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ174.24(COOMe)，170.60(C-2)，159.43(C-4)，148.36(Ph-jpso)，117.02，116.96(＞CMe2)，136.11(C-6)，135.12(Ph-para)，130.42(Ph-ortho)，119.91(Ph-meta)，108.23(C-1′)，89.65(C-5)，87.87(C-2′)，76.23(C-3′)，72.66(C-4′)，61.23(C-5′)，56.82(C-β)，56.78(OCH3)，52.73(C-α)，26.40(CH3)，23.80(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 565(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 563(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 8×10-3M (CD504×10-6M)CEM-SS9×10-3M (CD507×10-6M)MT4 6×10-3M (CD508×10-6M)實施例4制備2′，3′-O-異亞丙基腺苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CHCH2，B為腺嘌呤?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.17g)的纈氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)2′，3′-O-異亞丙基腺苷的合成同上述實施例(1)。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基腺苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為55.2％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ56.32，56.14；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.44，9.40(bs，1H，NH)，8.67(1H，s，H-2)，8.58(1H，s，H-8)，7.54(2H，s，NH2)，6.59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4.22(1H，m，H-4′)，3.98(3H，s，OCH3)，3.85(2H，m，H-5′)，3.67(1H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)，1.31(3H，d，3J＝6，CH3)，1.25(3H，d，3J＝6，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ172.24(COOMe)，165.70(C-2)，159.43(C-4)，145.76(C-6)，117.02，116.96(＞CMe2)，108.23(C-1′)，89.66(C-5)，85.87(C-2′)，76.23(C-3′)，69.66(C-4′)，61.23(C-5′)，54.78(OCH3)，50.73(C-α)，48.66(C-β)，26.40(CH3)，26.86(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 518(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 516(M-H)-.該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 5×10-3M (CD502×10-6M)CEM-SS6×10-3M (CD505×10-6M)MT4 8×10-3M (CD506×10-6M)實施例5制備2′，3′-O-異亞丙基腺苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CHCH2，B為腺嘌呤。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.18g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)2′，3′-O-異亞丙基腺苷的合成同上述實施例(1)。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基腺苷5′-硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為53.2％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ54.32，54.14；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.31，9.27(bs，1H，NH)，8.67(1H，s，H-2)，8.58(1H，s，H-8)，7.54(2H，s，NH2)，6.59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4.22(1H，m，H-4′)，3.98(3H，s，OCH3)，3.85(2H，m，H-5′)，3.67(1H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，3.21(1H，m，H-γ)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)，1.31(3H，d，3J＝6，CH3)，1.25(3H，d，3J＝6，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ172.24(COOMe)，165.70(C-2)，159.43(C-4)，145.76(C-6)，116.02，115.96(＞CMe2)，109.23(C-1′)，89.66(C-5)，85.87(C-2′)，76.23(C-3′)，69.66(C-4′)，61.23(C-5′)，54.78(OCH3)，50.73(C-α)，48.66(C-β)，46.35(C-γ)，23.40(CH3)，22.86(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 531(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 529(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK-5×10-3M (CD502×10-6M)CEM-SS 2×10-3M (CD505×10-6M)MT45×10-3M (CD509×10-6M)實施例6制備2′，3′-O-異亞丙基鳥苷5′-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物，其中R為H，B為鳥嘌呤?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下
1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)制備2′，3′-O-異亞丙基鳥苷備用室溫下取1mol(286g)鳥苷懸浮于2L的丙酮中，攪拌下向其中加入1.1mol(210g)對甲苯磺酸和4mol(640ml)原甲酸三乙酯，約1小時后體系變澄清，用100ml濃氨水與5.9L水進行中和，此時產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基鳥苷慢慢析出，室溫下靜置過夜，過濾后再用冰-水混合物充分洗滌，干燥后得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基鳥苷240g(74％)。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.323g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基鳥苷5′-(異丙氧基取代)二氯硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為58.4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ56.68，56.39；1H NMR(500MHz，D2O)δ8.18(1H，s，H-8)，5.82，5.81(1H，d，3J＝6.0，H-1′)，4，89(1H，m，H-2′)，4.23(1H，m，H-3′)，3.23(1H，m，H-4′)，3.54(3H，s，OCH3)，3.65(2H，m，H-5′)，3.54(2H，m，H-α)，1.66，1.65(3H，d，3J＝6.0，β-CH3)，1.35(3H，s，CH3)，1.33(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ172.31(COOMe)，165.81(C-2)，158.67(C-6)，152.34(C-4)，139.66(C-8)，121.11(＞CMe2)，118.71(C-5)，89.42(C-4′)，86.25(C-1′)，73.55(C-3′)，70.82(C-2′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，50.62(C-β)，45.89(C-α)，28.66(CH3)，26.1 5(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 491(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 489(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 8×10-3M (CD506×10-6M)CEM-SS3×10-3M (CD504×10-6M)MT4 6×10-3M (CD503×10-6M)實施例72′，3′-O-異亞丙基鳥苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制備，其中R為CH3，B為鳥嘌呤。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.140g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基鳥苷的合成同上述實施例(6)。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基鳥苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為52.3％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ55.88，55.37；1H NMR(500MHz，D2O)δ8.07(1H，s，H-8)，5.82，5.81(1H，d，3J＝6.0，H-1′)，4，51(1H，m，H-2′)，4.18(1H，m，H-3′)，3.94(1H，m，H-4′)，3.86(3H，s，OCH3)，3.68(2H，m，H-5′)，3.57(2H，m，H-α)，1.35(3H，s，CH3)，1.33(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178.31(COOMe)，156.81(C-2)，153.67(C-6)，151.34(C-4)，135.66(C-8)，120.11(＞CMe2)，116.71(C-5)，86.42(C-4′)，85.25(C-1′)，73.74(C-3′)，70.42(C-2′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，45.89(C-α)，23.66(CH3)，23.15(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 506(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 504(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 6×10-3M (CD507×10-5M)CEM-SS6×10-3M (CD509×10-6M)MT4 2×10-4M (CD507×10-5M)實施例8制備2′，3′-O-異亞丙基鳥苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物，其中R為C6H5CH2，B為鳥嘌呤。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.21g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基鳥苷的合成同上述實施例(6)。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基鳥苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為50.3％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57.18，56.89；1H NMR(500MHz，D2O)δ8.07(1H，s，H-8)，7.25-7.41(5H，m，Ph)，5.79，5.78(1H，d，3J＝6.0，H-1′)，4，41(1H，m，H-2′)，4.18(1H，m，H-3′)，3.94(1H，m，H-4′)，3.86(3H，s，OCH3)，3.68(2H，m，H-5′)， 3.57(2H，m，H-α)，2.27(2H，m，H-β)，1.21(3H，s，CH3)，1.17(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ180.31(COOMe)，166.81(C-2)，161.67(C-6)，158.34(C-4)，151.26(Ph-jpso)，135.66(C-8)，130.07(Ph-para)，128.23(Ph-ortho)，118.45(Ph-meta)，108.11(＞CMe2)，96.71(C-5)，86.42(C-4′)，85.25(C-1′)，73.74(C-3′)，70.42(C-2′)，61.45(C-5′)，57.22(C-β)，54.62(OCH3)，45.89(C-α)，23.66(CH3)，23.15(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 581(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 579(M-H)-.該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 6×10-3M (CD507×10-5M)CEM-SS6×10-3M (CD509×10-6M)MT4 2×10-4M (CD507×10-5M)實施例9制備2′，3′-O-異亞丙基鳥苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CH2，B為鳥嘌呤。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.170g)的纈氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基鳥苷的合成同上述實施例(6)。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基鳥苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為56.2％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ58.86，58.27；1H NMR(500MHz，D2O)δ9.07(1H，s，H-8)，6.82，6.81(1H，d，3J＝6.0，H-1′)，5，48(1H，m，H-2′)，4.95(1H，m，H-3′)，4.36(1H，m，H-4′)，3.86(3H，s，OCH3)，3.68(2H，m，H-5′)，3.57(2H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，1.35(3H，s，CH3)，1.31(3H，s，CH3)，1.16，1.15(3H，d，3J＝6.0，CH3)，1.06，1.05(3H，d，3J＝6.0，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178.31(COOMe)，156.81(C-2)，153.67(C-6)，151.34(C-4)，135.66(C-8)，120.11(＞CMe2)，116.71(C-5)，86.42(C-4′)，85.25(C-1′)，73.74(C-3′)，70.42(C-2′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，45.89(C-α)，44.24(C-β)，23.66(CH3)，23.15(CH3)，2 1.26(CH3)，20.05(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 533(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 531(M-H)-.該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK-5×10-3M (CD506×10-5M)
CEM-SS7×10-2M (CD509×10-5M)MT44×10-4M (CD508×10-5M)實施例10制備2′，3′-O-異亞丙基鳥苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CHCH2，B為鳥嘌呤。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.180g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基鳥苷的合成同上述實施例(6)。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基鳥苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為50.2％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ55.86，55.27；1H NMR(500MHz，D2O)δ9.07(1H，s，H-8)，6.82，6.81(1H，d，3J＝6.0，H-1′)，5，48(1H，m，H-2′)，4.95(1H，m，H-3′)，4.36(1H，m，H-4′)，3.86(3H，s，OCH3)，3.68(2H，m，H-5′)，3.57(2H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，3.22(1H，m，H-γ)，1.35(3H，s，CH3)，1.31(3H，s，CH3)，1.16，1.15(3H，d，3J＝6.0，CH3)，1.06，1.05(3H，d，3J＝6.0，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178.31(COOMe)，166.81(C-2)，159.67(C-6)，156.34(C-4)，134.66(C-8)，17.11(＞CMe2)，116.71(C-5)，86.42(C-4′)，85.25(C-1′)，73.74(C-3′)，70.42(C-2′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，45.89(C-α)，44.24(C-β)，41.24(C-γ)，21.26(CH3)，20.05(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 548(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 546(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK-6×10-3M (CD506×10-5M)CEM-SS 8×10-3M (CD508×10-6M)MT48×10-4M (CD502×10-5M)實施例11制備2′，3′-O-異亞丙基胞苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物，其中R為H，B為胞嘧啶。
化合物的結(jié)構(gòu)式為
化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)制備2′，3′-O-異亞丙基胞苷備用室溫下取1mol(244g)鳥苷懸浮于2L的丙酮中，攪拌下向其中加入1.1mol(210g)對甲苯磺酸和4mol(640ml)原甲酸三乙酯，約1小時后體系變澄清，加入1mol(84g)NaHCO3進行中和，繼續(xù)攪拌15分鐘，過濾后固體用丙酮洗滌，將濾液與洗滌液蒸干后得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基胞苷慢慢析出，室溫下靜置過夜，過濾后再用冰-水混合物充分洗滌，干燥后得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基胞苷263g(92％)。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.282g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基胞苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為60.4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57.68，56.26；1H NMR(500MHz，D2O)δ7.90，7.89(1H，d，3J＝5.5，H-6)，6.24(1H，m，H-1′)，5.84，5.83(1H，d，3J＝6，H-5)，4.28(1H，m，H-3′)，3.88(1H，m，H-4′)，3.71(3H，s，OCH3)，3.65(2H，m，H-5′)，2.69(2H，m，H-α)，2.1 5(1H，H-2′)，1.1 5(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ177.63(COOMe)，165.82(C-4)，158.13(C-2)，140.34(C-6)，121.11(＞CMe2)，93.71(C-5)，87.25(C-1′)，84.42(C-4′)，70.42(C-3′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，45.89(C-α)，39.82(C-2′)，28.66(CH3)，26.15(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 451(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 449(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 8×10-4M (CD506×10-5M)CEM-SS 6×10-3M (CD504×10-5M)MT4 6×10-4M (CD503×10-6M)實施例12制備2′，3′-O-異亞丙基胞苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物，其中R為CH3，B為胞嘧啶。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.14g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基胞苷的合成同上述實施例11。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.282g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基胞苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為62.4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ55.66，55.31；1H NMR(500MHz，D2O)δ7.90，7.89(1H，d，3J＝5.5，H-6)，6.88(1H，m，H-1′)，5.84，5.83(1H，d，3J＝6，H-5)，4.68(1H，m，H-3′)，3.88(1H，m，H-4′)，3.71(3H，s，OCH3)，3.65(2H，m，H-5′)，2.89(2H，m，H-α)，2.66(1H，H-2′)，1.45(3H，d，3J＝6，H-β)，1.15(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ185.63(COOMe)，165.82(C-4)，158.13(C-2)，145.34(C-6)，121.11(＞CMe2)，93.71(C-5)，87.25(C-1′)，84.42(C-4′)，70.42(C-3′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，50.86(C-β)，45.89(C-α)，39.82(C-2′)，27.66(CH3)，24.15(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 464(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 462(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK-5×10-3M (CD505×10-5M)CEM-SS 5×10-3M (CD508×10-6M)MT47×10-4M (CD503×10-6M)實施例13制備2′，3′-O-異亞丙基胞苷5′-(異丙氧基取代)二氯硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物，其中R為C6H5CH2，B為胞嘧啶。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.22g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基胞苷的合成同上述實施例11。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.282g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基胞苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為56.7％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ58.71，58.13；1H NMR(500MHz，D2O)δ8.22，8.21(1H，d，3J＝5.5，H-6)，7.29-7.41(5H，m，Ph)，7.03(1H，m，H-1′)，5.84，5.83(1H，d，3J＝6，H-5)，4.66(1H，m，H-3′)，3.82(1H，m，H-4′)，3.58(3H，s，OCH3)，3.44(2H，m，H-5′)，2.89(2H，m，H-α)，2.66(1H，H-2′)，2.27(1H，m，H-β)，1.15(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ180.63(COOMe)，165.82(C-4)，158.13(C-2)，146.36(Ph-jpso)，117.02，136.11(C-6)，137.12(Ph-para)，136.42(Ph-ortho)，122.91(Ph-meta)，121.11(＞CMe2)，93.71(C-5)，87.25(C-1′)，84.42(C-4′)，70.42(C-3′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，50.86(C-β)，45.89(C-α)，39.82(C-2′)，27.66(CH3)，24.15(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 540(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 538(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 5×10-4M (CD508×10-5M)CEM-SS 6×10-4M (CD508×10-5M)MT4 8×10-4M (CD507×10-6M)實施例14制備2′，3′-O-異亞丙基胞苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CH2，B為胞嘧啶。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1) 在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.17g)的纈氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基胞苷的合成同上述實施例11。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.282g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基胞苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為52.4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ56.98，56.21；1H NMR(500MHz，D2O)δ7.90，7.89(1H，d，3J＝5.5，H-6)，6.63(1H，m，H-1′)，5.84，5.83(1H，d，3J＝6，H-5)，4.61(1H，m，H-3′)，3.69(1H，m，H-4′)，3.76(3H，s，OCH3)，3.65(2H，m，H-5′)，2.89(2H，m，H-α)，2.66(1H，H-2′)，2.14(1H，m，H-β)，1.15(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ185.63(COOMe)，165.82(C-4)，158.13(C-2)，145.34(C-6)，121.11(＞CMe2)，93.71(C-5)，87.25(C-1′)，84.42(C-4′)，70.42(C-3′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，50.86(C-β)，49.89(C-α)，46.21(C-β)，39.82(C-2′)，24.37(CH3)，23.22(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 506(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 504(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 5×10-4M (CD505×10-7M)CEM-SS5×10-4M (CD506×10-6M)MT4 8×10-3M (CD503×10-5M)實施例15.2′，3′-O-異亞丙基胞苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制備，其中R為(CH3)2CHCH2，B為胞嘧啶。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.18g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基胞苷的合成同上述實施例11。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.282g)已溶于吡啶中的2′，3′-O-異亞丙基胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基胞苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為55.4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ54.36，53.56；1H NMR(500MHz，D2O)δ7.96，7.95(1H，d，3J＝6，H-6)，6.36(1H，m，H-1′)，5.84，5.83(1H，d，3J＝6，H-5)，4.78(1H，m，H-3′)，3.88(1H，m，H-4′)，3.76(3H，s，OCH3)，3.65(2H，m，H-5′)，3.22(2H，m，H-α)，2.96(1H，H-2′)，2.77(1H，m，H-β)，2.39(1H，m，H-γ)，1.15(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ185.63(COOMe)，165.82(C-4)，158.13(C-2)，145.34(C-6)，121.11(＞CMe2)，93.71(C-5)，88.25(C-1′)，85.42(C-4′)，70.42(C-3′)，61.45(C-5′)，54.88(OCH3)，50.86(C-β)，48.89(C-α)，46.21(C-γ)，39.82(C-2′)，23.39(CH3)，23.01(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 508(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 506(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 5×10-3M (CD506×10-6M)CEM-SS 8×10-4M (CD509×10-6M)MT4 7×10-4M (CD508×10-6M)實施例16制備2′，3′-O-異亞丙基尿苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物，其中R為H，B為尿嘧啶?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)制備2′，3′-O-異亞丙基尿苷備用室溫下取1mol(244g)尿苷懸浮于2L的丙酮中，攪拌下向其中加入1.1mol(210g)對甲苯磺酸和4mol(640ml)原甲酸三乙酯，約1小時后體系變澄清，加入1mol(84g)NaHCO3進行中和，繼續(xù)攪拌15分鐘，過濾后固體用丙酮洗滌，將濾液與洗滌液蒸干后得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基尿苷慢慢析出，室溫下靜置過夜，過濾后再用冰-水混合物充分洗滌，過濾后濾液經(jīng)減壓蒸餾得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基尿苷256g(90％)。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.284g)已溶于THF中的2′，3′-O-異亞丙基尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基尿苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為63.4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57.68，56.26；1H NMR(500MHz，D2O)δ7.90，7.89(1H，d，3J＝5.5，H-6)，6.24(1H，m，H-1′)，5.84，5.83(1H，d，3J＝6，H-5)，4.28(1H，m，H-3′)，3.88(1H，m，H-4′)，3.71(3H，s，OCH3)，3.65(2H，m，H-5′)，2.69(2H，m，H-α)，2.15(1H，H-2′)，1.15(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ177.63(COOMe)，165.82(C-4)，158.13(C-2)，140.34(C-6)，121.11(＞CMe2)，93.71(C-5)，87.25(C-1′)，84.42(C-4′)，70.42(C-3′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，45.89(C-α)，39.82(C-2′)，28.66(CH3)，26.15(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 480(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 478(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 8×10-3M (CD509×10-5M)CEM-SS9×10-3M (CD508×10-5M)MT4 8×10-4M (CD505×10-6M)實施例17制備2′，3′-O-異亞丙基尿苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物，其中R為CH3，B為尿嘧啶。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.14g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基尿苷的合成同上述實驗16。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.284g)已溶于THF中的2′，3′-O-異亞丙基尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基尿苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為58.4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ58.32，57.68；1H NMR(500MHz，D2O)δ7.90，7.89(1H，d，3J＝5.5，H-6)，6.24(1H，m，H-1′)，5.84，5.83(1H，d，3J＝6，H-5)，4.28(1H，m，H-3′)，3.88(1H，m，H-4′)，3.71(3H，s，OCH3)，3.65(2H，m，H-5′)，2.69(2H，m，H-α)，2.15(1H，H-2′)，1.15(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ 177.63(COOMe)，165.82(C-4)，158.13(C-2)，140.34(C-6)，121.11(＞CMe2)，93.71(C-5)，87.25(C-1′)，84.42(C-4′)，70.42(C-3′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，45.89(C-α)，39.82(C-2′)，28.66(CH3)，26.15(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 466(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 464(M-H)-.該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 8×10-4M (CD509×10-4M)CEM-SS7×10-4M (CD506×10-5M)MT4 8×10-3M (CD505×10-5M)實施例18.2′，3′-O-異亞丙基尿苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制備，其中R為C6H5CH2，B為尿嘧啶?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.21g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基尿苷的合成同上述實驗16。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.284g)已溶于THF中的2′，3′-O-異亞丙基尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基尿苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為51.4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ60.32，59.68；1H NMR(500MHz，D2O)δ7.90，7.89(1H，d，3J＝5.5，H-6)，6.24(1H，m，H-1′)，5.84，5.83(1H，d，3J＝6，H-5)，4.28(1H，m，H-3′)，3.88(1H，m，H-4′)，3.71(3H，s，OCH3)，3.65(2H，m，H-5′)，2.69(2H，m，H-α)，2.15(1H，H-2′)，1.15(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ 177.63(COOMe)，165.82(C-4)，158.13(C-2)，140.34(C-6)，121.11(＞CMe2)，93.71(C-5)，87.25(C-1′)，84.42(C-4′)，70.42(C-3′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，45.89(C-α)，39.82(C-2′)，28.66(CH3)，26.15(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 542(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 540(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 6×10-4M (CD507×10-5M)CEM-SS9×10-3M (CD509×10-5M)MT4 5×10-3M (CD506×10-4M)實施例19制備2′，3′-O-異亞丙基尿苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CH2，B為尿嘧啶。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.17g)的纈氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-異亞丙基尿苷的合成同上述實驗16。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.284g)已溶于THF中的2′，3′-O-異亞丙基尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基尿苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為66.4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ60.82，59.98；1H NMR(500MHz，D2O)δ7.90，7.89(1H，d，3J＝5.5，H-6)，6.24(1H，m，H-1′)，5.84，5.83(1H，d，3J＝6，H-5)，4.28(1H，m，H-3′)，3.88(1H，m，H-4′)，3.71(3H，s，OCH3)，3.65(2H，m，H-5′)，2.69(2H，m，H-α)，2.15(1H，H-2′)，1.15(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ 177.63(COOMe)，165.82(C-4)，158.13(C-2)，140.34(C-6)，121.11(＞CMe2)，93.71(C-5)，87.25(C-1′)，84.42(C-4′)，70.42(C-3′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，45.89(C-α)，39.82(C-2′)，28.66(CH3)，26.15(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 542(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 540(M-H)-.該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 6×10-4M (CD507×10-5M)CEM-SS9×10-3M (CD509×10-5M)MT4 5×10-3M (CD506×10-4M)實施例20制備2′，3′-O-異亞丙基尿苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CHCH2，B為尿嘧啶。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.17g)的(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.18g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)2′，3′-O二異亞丙基尿苷的合成同上述實驗16。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待(異丙氧基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將lmmol(0.284g)已溶于THF中的2′，3′-O-異亞丙基尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解。水解完成以后，用硅膠柱進行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水＝33∶1∶1即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基尿苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為62.4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ59.87，59.68；1H NMR(500MHz，D2O)δ7.90，7.89(1H，d，3J＝5.5，H-6)，6.24(1H，m，H-1′)，5.84，5.83(1H，d，3J＝6，H-5)，4.28(1H，m，H-3′)，3.88(1H，m，H-4′)，3.71(3H，s，OCH3)，3.65(2H，m，H-5′)，2.69(2H，m，H-α)，2.15(1H，H-2′)，1.15(3H，s，CH3)，1.07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ177.63(COOMe)，165.82(C-4)，158.13(C-2)，140.34(C-6)，121.11(＞CMe2)，93.71(C-5)，87.25(C-1′)，84.42(C-4′)，70.42(C-3′)，61.45(C-5′)，54.62(OCH3)，45.89(C-α)，39.82(C-2′)，28.66(CH3)，26.15(CH3)；ESI-MS(pos.)m/z 542(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 540(M-H)-.
該化合物在CEM細胞和MT-4細胞中的抗愛茲病毒-1活性實驗ED50CEM-TK- 6×10-4M (CD507×10-5M)CEM-SS9×10-3M (CD509×10-5M)MT4 5×10-3M (CD506×10-4M)
權(quán)利要求
1.一種2′，3′-O-異亞丙基核苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于該化合物的結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R為H、CH3、C6H5CH2、(CH3)2CH2或(CH3)2CHCH2中的任何一種；B為腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶中的任何一種。
2.一種如權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟1)在氮氣保護下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃的條件下，將原料(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃中，配制成濃度為0.8～1.0mol/L的溶液；2)向上述溶液中加入與原料相同物質(zhì)的量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑乙三胺，縛酸劑的加入量是原料物質(zhì)的量的2倍；3)制備2′，3′-O-異亞丙基核苷溶液備用室溫下取核苷懸浮于干燥的溶劑中配成0.5～1.0mol/L的溶液，攪拌下向其中加入與核苷等物質(zhì)的量的對甲苯磺酸和四倍物質(zhì)的量的原甲酸三乙酯，體系變澄清后，用濃氨水與大量水進行中和使PH＝7～8，然后將上述溶液減壓濃縮，在冰箱中靜置過夜即可得到產(chǎn)物2′，3′-O-異亞丙基核苷。將制得的2′，3′-O-異亞丙基核苷抽濾干燥后溶于溶劑中配制成0.5～1.0 mol/L的溶液；4)跟蹤上述第二步的反應(yīng)進程，待原料全部反應(yīng)完畢以后，將與原料相同物質(zhì)的量的上述第三步制備的2′，3′-O-異亞丙基核苷溶液慢慢滴入第二步的溶液中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加與原料相同物質(zhì)的量的縛酸劑；5)監(jiān)測反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點物質(zhì)，最后用氨水進行水解，再用硅膠柱進行柱層析分離，即可得到2′，3′-O-異亞丙基核苷5′-(異丙氧基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種硫代磷酰氨基酸酯化合物,結(jié)構(gòu)式為:其制備方法為首先將原料(異丙氧基取代)二氯硫磷溶于四氫呋喃中,向上述溶液中加入氨基酸甲酯鹽酸鹽,再滴加縛酸劑,將2′,3′－O－異亞丙基核苷溶液加入上述溶液中,再滴加縛酸劑,反應(yīng)完成后,過濾,旋轉(zhuǎn)蒸餾,,柱層析分離,即得硫代磷酰氨基酸酯化合物。
文檔編號A61P31/00GK1337401SQ0113078
公開日2002年2月27日 申請日期2001年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月24日
發(fā)明者趙玉芬, 苗志偉, 付華, 成昌梅, 韓波 申請人:清華大學(xué)