用于在放射免疫療法之前測定血液學(xué)毒性的新臨床參數(shù)的制作方法

專利名稱：用于在放射免疫療法之前測定血液學(xué)毒性的新臨床參數(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明報道用于預(yù)報血液學(xué)毒性的新臨床參數(shù)，這能夠根據(jù)放射性標(biāo)記的治療性抗-CD20抗體以及其他具有定向免疫細(xì)胞潛力的治療性抗體給藥加以預(yù)測。本發(fā)明的臨床參數(shù)是在治療之前用γ-放射性標(biāo)記的抗體進(jìn)行劑量測定法試驗(yàn)的有用的替代選擇。
背景技術(shù)：
脊椎動物(例如靈長動物，包括人、無尾猿、猴等)的免疫系統(tǒng)由大量器官和細(xì)胞類型組成，它們已經(jīng)進(jìn)化為準(zhǔn)確和特異性地識別侵入脊椎動物宿主的外來微生物(“抗原”)；特異性地與這類外來微生物結(jié)合；消除/破壞這類外來微生物。淋巴細(xì)胞以及其他細(xì)胞類型對免疫系統(tǒng)起決定性作用。淋巴細(xì)胞是在胸腺、脾和骨髓(成年)中產(chǎn)生的，占到人(成年)循環(huán)系統(tǒng)中總白細(xì)胞的約30％。
淋巴細(xì)胞有兩種主要的亞種群T細(xì)胞和B細(xì)胞。T細(xì)胞負(fù)責(zé)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，B細(xì)胞負(fù)責(zé)抗體的產(chǎn)生(體液免疫)。不過，T細(xì)胞和B細(xì)胞可以被認(rèn)為是相互依賴的——在典型的免疫應(yīng)答中，抗原片段與抗原呈遞細(xì)胞表面上的主要組織相容性復(fù)合體(“MHC”)糖蛋白結(jié)合，當(dāng)T細(xì)胞受體再與該抗原片段結(jié)合時，T細(xì)胞被活化；這類活化導(dǎo)致生物遞質(zhì)(“白介素”)的釋放，它從本質(zhì)上刺激B細(xì)胞分化和產(chǎn)生對抗該抗原的抗體(“免疫球蛋白”)。
宿主內(nèi)的每個B細(xì)胞在其表面上表達(dá)不同的抗體——因而一個B細(xì)胞將表達(dá)一種抗原特異性的抗體，另一個B細(xì)胞將表達(dá)不同抗原特異性的抗體。因此，B細(xì)胞是相當(dāng)多樣的，這種多樣性對免疫系統(tǒng)起決定性作用。在人類中，每個B細(xì)胞能夠產(chǎn)生大量的抗體分子(即約107至108個)。當(dāng)外來抗原已被中和時，這類抗體產(chǎn)生大多通常停止(或者基本上減少)。不過，特定B細(xì)胞的增殖偶爾將繼續(xù)不減弱；這類增殖能夠?qū)е卤环Q為“B細(xì)胞性淋巴瘤”的癌癥。
T細(xì)胞和B細(xì)胞都包含細(xì)胞表面蛋白，它們能夠用作分化和鑒定的“標(biāo)記”。一種這類人B細(xì)胞標(biāo)記是人B淋巴細(xì)胞限制性分化抗原Bp35，稱為“CD20”。CD20是一種B淋巴細(xì)胞限制性分化抗原，它在前B細(xì)胞發(fā)育早期被表達(dá)，并保留至血漿細(xì)胞分化。有人認(rèn)為CD20分子可以調(diào)節(jié)B細(xì)胞活化過程中細(xì)胞周期引發(fā)與分化所需的步驟。而且，CD20通常在瘤性(“腫瘤”)B細(xì)胞上被高水平表達(dá)。CD20抗原滿足定向療法的要求，因?yàn)樗幻撀?、調(diào)制或內(nèi)在化。因而，CD20表面抗原是B細(xì)胞性淋巴瘤“定向”的有力候選。
本質(zhì)上，這類定向可以概括如下將B細(xì)胞的CD20表面抗原特異性抗體例如注射給患者。這些抗-CD20抗體特異性地結(jié)合(表面上)正常與惡性B細(xì)胞的CD20細(xì)胞表面抗原；與CD20表面抗原結(jié)合的抗-CD20抗體可以引起瘤性B細(xì)胞的破壞和消耗。另外，具有破壞腫瘤潛力的化學(xué)試劑或放射性標(biāo)記能夠與抗-CD20抗體綴合，以便試劑被特異性地釋放至例如瘤性B細(xì)胞。無論什么方法，主要目標(biāo)都是破壞腫瘤所采用的特定抗-CD20抗體決定了具體方法，因而，可用于定向CD20抗原的方法可能是各不相同的。
例如，已經(jīng)報道了針對這種CD20表面抗原定向所作的努力。據(jù)報道將鼠(小鼠)單克隆抗體1F5(一種抗-CD20抗體)通過連續(xù)靜脈內(nèi)輸注對B細(xì)胞性淋巴瘤患者給藥。據(jù)報道為消耗循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞需要極高水平(＞2克)的1F5，結(jié)果被描述為“瞬時的”。Press等“人B細(xì)胞性淋巴瘤的單克隆抗體1F5(抗-CD20)血清療法”《血液》69/2584-591(1987)。
這種方法的潛在問題是非人類單克隆抗體(例如鼠單克隆抗體)通常缺乏人效應(yīng)器功能性，也就是它們尤其不能通過抗體依賴性細(xì)胞毒性或Fc-受體介導(dǎo)的吞噬作用介導(dǎo)補(bǔ)體依賴性溶胞作用或者溶解人靶細(xì)胞。此外，非人類單克隆抗體可能被人宿主識別為外來蛋白質(zhì)；因此，這類外來抗體的反復(fù)注射可能誘導(dǎo)引起有害過敏反應(yīng)的免疫應(yīng)答。關(guān)于基于鼠的單克隆抗體，這經(jīng)常被稱為人抗小鼠抗體應(yīng)答，或“HAMA”應(yīng)答。另外，這些“外來”抗體可以受到宿主免疫系統(tǒng)的攻擊，以致它們實(shí)際上在到達(dá)它們的靶部位之前即被中和。
一種致力于補(bǔ)償鼠抗體效應(yīng)器功能缺乏的方法是將這類抗體綴合在毒素或放射性標(biāo)記上。淋巴細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞天生對放射療法敏感。因此，B細(xì)胞惡性腫瘤是放射免疫療法(RIT)的有力目標(biāo)，這有若干原因放射性標(biāo)記抗體電離放射的局部發(fā)射可以殺死帶有或沒有靶抗原(例如CD20)的細(xì)胞，靶抗原非?？拷c抗原結(jié)合的抗體；穿透輻射、即β發(fā)射體可以避免在龐大或多血管化腫瘤中接近抗體有限的問題；可以減少所需抗體總量，從而減輕潛在HAMA應(yīng)答的嚴(yán)重性。放射性核素發(fā)射放射性粒子，能夠損害細(xì)胞DNA至細(xì)胞修復(fù)機(jī)理不能使細(xì)胞繼續(xù)存活的程度；因此，如果靶細(xì)胞是腫瘤，那么放射性標(biāo)記有益于殺死腫瘤細(xì)胞。按照定義，放射性標(biāo)記抗體包括放射性物質(zhì)的使用，這可能要求預(yù)先警告患者(即可能的骨髓移植)以及健康護(hù)理人員(也就是在放射性條件下工作時需要高度謹(jǐn)慎)。
現(xiàn)已公開了大量特異性抗體可與放射性標(biāo)記或毒素綴合，以便該標(biāo)記或毒素定位于腫瘤部位。例如，上述IF5抗體已經(jīng)用碘-131(131I)“標(biāo)記”，據(jù)報道評價了兩名患者的生物分布。參見Eary，J.F.等“B細(xì)胞性淋巴瘤的造影與治療”《核醫(yī)學(xué)雜志》31/81257-1268(1990)；另見Press，O.W.等“用放射性標(biāo)記的MB-1(抗-CD37)抗體治療頑固性非何杰金氏淋巴瘤”《臨床腫瘤學(xué)雜志》7181027-1038(1989)(指出用131I標(biāo)記IF5治療的一名患者達(dá)到“部分應(yīng)答”)；Goldenberg，D.M.等“用碘-131標(biāo)記LL2單克隆抗體定向B細(xì)胞性淋巴瘤和劑量測定法與放射免疫療法”《臨床腫瘤學(xué)雜志》9/4548-564(1991)(據(jù)報道接受多次注射的八名患者中有三名發(fā)展為HAMA應(yīng)答)；Appelbaum，F(xiàn).R.“非何杰金氏淋巴瘤治療中的放射性標(biāo)記單克隆抗體”《Hem./Onc.Clinics of N.A.》5/51013-1025(1991)(評論文章)；Press，O.W.等“帶有自體骨髓支架的B細(xì)胞性淋巴瘤的放射性標(biāo)記抗體療法”《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》329/171219-1223(1993)(碘-131標(biāo)記的抗-CD20抗體IF5和B1)；Kaminski，M.G.等“使用131I抗-B1(抗-CD20)抗體的B細(xì)胞性淋巴瘤的放射免疫療法”《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》329/7(1993)(碘-131標(biāo)記的抗-CD20抗體B1；另見Kaminski的美國專利No.5,843,398)。還已將毒素(即化學(xué)治療劑，例如阿霉素或絲裂霉素C)與抗體綴合。例如參見PCT公布的申請WO 92/07466(1992年5月14日公布)。
美國申請08/475,813、08/475,815和08/478,967引用在此作為參考文獻(xiàn)，其中公開了用于定向和破壞B細(xì)胞性淋巴瘤和腫瘤細(xì)胞的放射性標(biāo)記的治療性抗體。特別是公開了Y2B8抗體，它是一種抗人CD20鼠單克隆抗體2B8，經(jīng)由雙官能螯合劑MX-DTPA與釔-[90](90Y)連接。選擇這種放射性核素用于治療有若干原因。90Y長達(dá)64小時的半衰期足以允許腫瘤的抗體蓄積，例如不象131I，它是一種高能的純β發(fā)射體，在其衰退中不伴有γ輻射，范圍為100至1000個細(xì)胞直徑。最小穿透放射量允許90Y標(biāo)記抗體對門診病人給藥。此外，殺死細(xì)胞不要求標(biāo)記抗體的內(nèi)在化，電離放射的局部發(fā)射對缺乏靶抗原的相鄰腫瘤細(xì)胞應(yīng)當(dāng)是致命性的。
涉及螯合劑和螯合劑綴合物的專利是本領(lǐng)域已知的。例如，Gansow的美國專利No.4,831,175涉及多取代的二亞乙基三胺五乙酸螯合物和含有它的蛋白質(zhì)綴合物，和它們的制備方法。Gansow的美國專利No.5,099,069、5,246,692、5,286,850和5,124,471也涉及多取代的DTPA螯合物。這些專利全文引用在此作為參考文獻(xiàn)。
選擇在申請08/475,813、08/475,815和08/478,967中用于促進(jìn)螯合作用的具體雙官能螯合劑，因?yàn)樗鼘θ齼r金屬具有較高親合性，增加腫瘤-非腫瘤之比，減少骨攝取，并且提供更多的放射性核素在靶部位、即B細(xì)胞性淋巴瘤部位的體內(nèi)滯留。不過，其他雙官能螯合劑也是本領(lǐng)域已知的，對腫瘤療法也是有益的。
未決申請08/475,813、08/475,815和08/478,967還報道了放射性標(biāo)記的Y2B8綴合物以及未標(biāo)記的嵌合抗-CD20抗體的給藥，導(dǎo)致B細(xì)胞成淋巴細(xì)胞腫瘤小鼠的腫瘤顯著減少。而且，其中所報道的人臨床試驗(yàn)顯示輸注嵌合抗-CD20抗體顯著消耗淋巴瘤患者的B細(xì)胞。事實(shí)上，嵌合2B8最近已被宣布為美國第一種經(jīng)過FDA批準(zhǔn)的抗癌單克隆抗體，名稱為Rituximab(在美國為Rituxan，在英國為Mabthera)。
另外，美國申請08/475,813公開了Rituxan與釔標(biāo)記的Y2B8鼠單克隆抗體的順序給藥。盡管用于這種聯(lián)合療法的放射性標(biāo)記抗體是鼠抗體，不過最初用嵌合抗-CD20抗體治療足以消耗B細(xì)胞種群，以便減少HAMA應(yīng)答，從而有利于聯(lián)合治療與診斷制度。而且，美國申請08/475,813顯示，治療學(xué)上有效劑量的釔標(biāo)記抗-CD20抗體在Rituxan之后給藥足以(a)清除所有未被嵌合抗-CD20抗體清除的剩余外周血液B細(xì)胞；(b)開始消耗淋巴結(jié)中的B細(xì)胞；或(c)開始消耗其他組織中的B細(xì)胞。
因而，放射性標(biāo)記與癌治療性抗體的綴合作用提供了有價值的臨床工具，它可以用于增強(qiáng)或補(bǔ)充嵌合抗體的腫瘤殺死潛力。根據(jù)抗-CD20抗體在非何杰金氏淋巴瘤治療中的確定功效和已知的淋巴細(xì)胞對放射性的敏感性，若這類治療性抗體成為商業(yè)上可得到的試劑盒將是非常有利的，由此它們可以容易地被放射性標(biāo)記所修飾，在臨床背景下直接對患者給藥。
為此，美國申請No.09/259,337公開了用于實(shí)現(xiàn)抗體的放射性標(biāo)記的方法、試劑和試劑盒。這類試劑盒是適宜將這些試劑置于臨床背景下的載體，使它們易于制備，并且可以在放射性標(biāo)記顯著衰退或者抗體由于放射性標(biāo)記的存在而顯著破壞之前對患者給藥。申請No.09/259,337引用在此作為參考文獻(xiàn)，其中所公開的試劑盒克服了現(xiàn)有技術(shù)的很多缺陷，這些缺陷制止了這類方便工具的引入，以使這種有價值的技術(shù)商業(yè)化。
放射性標(biāo)記試劑盒引入市場緩慢的原因可能是有些已知的標(biāo)記方案證明結(jié)合效率差，和在放射性標(biāo)記操作之后需要對試劑進(jìn)行柱純化。這類試劑盒的延緩開發(fā)也可能部分由于以前缺乏獲得純放射性同位素商品的手段，后者可以用于有效產(chǎn)生標(biāo)記產(chǎn)物，無需隨后純化。或者，這類試劑盒一般不可得到的原因也許是實(shí)際上缺乏能夠象Rituxan在人淋巴瘤患者的治療中都已經(jīng)實(shí)現(xiàn)的那樣獲得批準(zhǔn)或者具有功效的抗體。
例如，美國專利4,636,380引用在此作為參考文獻(xiàn)，正如其中所討論的，科學(xué)界普遍認(rèn)為為了發(fā)現(xiàn)放射性藥物的臨床實(shí)用性，必須容忍長期和沉悶的分離和純化過程。向患者注射未結(jié)合的放射性標(biāo)記的確不是可取的。對額外純化步驟的需求賦予在臨床背景下放射性標(biāo)記抗體的過程以不可能性，特別是對醫(yī)生來說，他們既沒有設(shè)備也沒有時間來純化他們自己的治療劑。
此外，放射性標(biāo)記的蛋白質(zhì)可能是天生不穩(wěn)定的，特別是用輻解同位素、例如90Y標(biāo)記的那些，與靠近的抗體連接的時間越長，它們就越具有導(dǎo)致?lián)p害的趨勢。這類輻解作用由于放射性標(biāo)記的喪失和/或與靶抗原的結(jié)合減少而依次導(dǎo)致治療效率不可靠，并且可以引起所不需要的針對變性蛋白質(zhì)的免疫應(yīng)答。盡管沒有就地標(biāo)記和純化抗體的設(shè)施，醫(yī)師沒有別的選擇，只有定購已經(jīng)標(biāo)記過的治療性抗體，或者在另處的有關(guān)設(shè)施上標(biāo)記它們，標(biāo)記之后運(yùn)輸，對患者給藥。所有這類操作增加了標(biāo)記與給藥之間的寶貴時間，從而加大治療劑的不穩(wěn)定性，實(shí)際上減少放射性標(biāo)記試劑盒在臨床背景下的實(shí)用性。
其他人主張開發(fā)適用于不要求單獨(dú)純化步驟的試劑盒的放射性標(biāo)記方案(Richardson等(1987)“111In免疫閃爍照相術(shù)常用DTPA-標(biāo)記抗體試劑盒的優(yōu)化和成批制備”《核醫(yī)學(xué)通訊》8347-356；Chinol和Hnatowich(1987)“發(fā)生器產(chǎn)生的放射免疫療法用釔-[90]”《核醫(yī)學(xué)雜志》28(9)1465-1470)。不過，這類方法不能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明人利用本文公開的方案所實(shí)現(xiàn)的結(jié)合水平，本方案導(dǎo)致結(jié)合水平為至少95％。這樣一種結(jié)合水平提供額外的增加安全性的益處，事實(shí)上沒有因放射結(jié)合率低而使未結(jié)合的標(biāo)記注射給患者。
公開在美國申請No.09/259,337中的發(fā)明試劑盒所包括的方案允許快速標(biāo)記，因標(biāo)記而異，可以在大約半小時內(nèi)或者短至五分鐘內(nèi)進(jìn)行。而且，正如上面所討論的，公開在該申請中的試劑盒方案的標(biāo)記效率超過95％，從而放棄對進(jìn)一步純化的需要。由于放棄對進(jìn)一步純化的需要，放射性標(biāo)記的半衰期和抗體的完整性出于它所標(biāo)記的治療目的得以保存。
不過，在用β發(fā)射性放射性同位素、例如90Y放射性標(biāo)記的免疫治療劑的方便臨床使用上仍然存在一些障礙。與111In不同，90Y不能用于造影目的，因?yàn)槿狈εc之有關(guān)的γ放射。因而，診斷性“造影”放射性核素、例如111In通常在治療性嵌合抗體或90Y-標(biāo)記抗體的給藥之前和/或之后用于測定腫瘤的位置和相對大小。另外，銦-標(biāo)記的抗體能夠進(jìn)行劑量測定，這被普遍認(rèn)為需要在使用90Y-標(biāo)記的抗體之前進(jìn)行，因?yàn)樗鼈儽还俏盏男Я挖厔菹鄬^高。
例如，Kaminski等的美國專利No.5,843,398公開了將90Y標(biāo)記的抗體對淋巴瘤患者給藥的方法，但是堅(jiān)持需要對90Y進(jìn)行劑量測定。為了進(jìn)行劑量測定，Kaminski在90Y-標(biāo)記的抗體給藥之前使用111In-標(biāo)記的抗體，不過也承認(rèn)預(yù)期有一定的不精確性，因?yàn)閮煞N放射性同位素的藥動學(xué)特征不同。另外，Kaminski的專利建議還可以謹(jǐn)慎地增加90Y-標(biāo)記的抗體劑量，以減少產(chǎn)生不可逆毒性的機(jī)會。
這種對在治療性抗體給藥之前進(jìn)行劑量測定評價的要求使在臨床背景下使用免疫療法治療患者的方便性大打折扣，浪費(fèi)了患者可能接受實(shí)際上有助于減輕疾病的治療的寶貴時間，增加了患者和醫(yī)生與放射性的接觸。而且，使用定向相同細(xì)胞表面分子的診斷抗體作為治療性抗體，必須為診斷抗體分配更多的時間以廓清系統(tǒng)，目的是使治療性抗體具有澄清的路徑達(dá)到它們的位于惡性B細(xì)胞表面上的靶。如果所開發(fā)的預(yù)報放射性標(biāo)記的抗體對每名特定患者的毒性的方法使醫(yī)師能夠放棄對診斷性放射性標(biāo)記抗體的劑量測定的需要，這將有助于免疫治療劑領(lǐng)域，并進(jìn)一步有利于這類治療劑在臨床背景下的使用。
發(fā)明概述本發(fā)明提供新的臨床參數(shù)，用于在給藥之前評估放射性標(biāo)記的抗體對特定患者的血液學(xué)毒性。這類臨床參數(shù)特別適合于預(yù)報90Y-標(biāo)記的抗體毒性，特別是定向癌性細(xì)胞、特別是B細(xì)胞表面上的分子的那些，并且特別是用于治療淋巴瘤或白血病的那些，例如抗-CD20、抗-CD19抗體或抗-CD22抗體。所公開的參數(shù)驚人地提供了比標(biāo)準(zhǔn)的劑量測定法更加準(zhǔn)確的骨髓消融危險預(yù)報，可以用于在免疫療法之前測量對骨髓收獲與移植的需要。
發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明涵蓋預(yù)報血液學(xué)毒性嚴(yán)重性的方法，該毒性將是由放射性標(biāo)記的抗體對癌癥患者、特別是B細(xì)胞性淋巴瘤患者給藥而引起的，在放射性標(biāo)記的抗體給藥之前使用這樣一種預(yù)報來制止或減少這類血液學(xué)毒性。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)兩種臨床參數(shù)、特別是基線血小板數(shù)和骨髓牽連程度是比劑量測定法參數(shù)更好的、關(guān)于非何杰金氏B細(xì)胞性淋巴瘤患者血液學(xué)毒性的預(yù)報變量。
本文公開的預(yù)報然后制止放射免疫治療劑毒性的方法可以包含各種步驟，包括(a)測量基線活組織檢查中的骨髓牽連程度或基線血小板數(shù)；和(b)如果所述基線骨髓牽連程度高于5％，那么將治療學(xué)上有效量未標(biāo)記的嵌合抗體或人抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于5％?；貞浺迷诖俗鳛閰⒖嘉墨I(xiàn)的美國申請No.08/475,813，公開了Rituxan(嵌合抗-CD20抗體)與釔-標(biāo)記的Y2B8鼠單克隆抗體的順序給藥，還公開了該嵌合抗體可以用于在該放射性標(biāo)記的抗體給藥之前消耗B細(xì)胞種群，從而有利于聯(lián)合的治療與診斷方案。本發(fā)明人已經(jīng)驚人地發(fā)現(xiàn)，這類未標(biāo)記抗體先于放射性標(biāo)記抗體給藥也有效減少骨髓中癌細(xì)胞水平升高的患者的骨髓牽連程度，以便這些患者可以是放射免疫療法的更好的候選者。
因而，可以用在本發(fā)明中的消耗抗體包括未標(biāo)記的抗體，在B細(xì)胞性淋巴瘤中優(yōu)選為未標(biāo)記的抗-CD20抗體，其中所述抗-CD20抗體是人嵌合抗體或人化抗體。優(yōu)選地，所述抗體是嵌合的或人抗-CD20抗體，優(yōu)選地，該嵌合抗-CD20抗體是Rituximab。不過，也可以使用針對其他B細(xì)胞表面分子的抗體，只要這類細(xì)胞表面分子是在惡性細(xì)胞表面上被表達(dá)的即可。特別是也可以使用抗-CD19和抗-CD22抗體。
為了在放射性標(biāo)記的抗體給藥之前消耗骨髓中的B細(xì)胞，嵌合抗-CD20抗體給藥按至少50mg/m2的劑量給藥至少一次，更優(yōu)選為按每周至少50mg/m2的劑量給藥至少兩周。最優(yōu)選的劑量范圍每周從約100至約500mg/m2達(dá)至少兩周，特別包括每周約375mg/m2達(dá)四周的劑量方案。
可能有這樣一種情況，測量本文所述臨床參數(shù)時，沒有在先治療是減少骨髓牽連水平所必需的。在這類情況下，本發(fā)明的方法可以被描述為用放射性標(biāo)記的治療性抗體治療B細(xì)胞性淋巴瘤患者的改進(jìn)方法，其中所述改進(jìn)包括(a)使用基線骨髓活組織檢查和/或基線血小板數(shù)作為血液學(xué)毒性的指征；和(b)根據(jù)最初的骨髓牽連百分比或基線血小板數(shù)，將治療學(xué)上有效量的放射性標(biāo)記的抗體給藥。當(dāng)然，如果臨床參數(shù)確實(shí)提示骨髓牽連水平將引起血液學(xué)毒性，也就是如果最初的骨髓牽連百分比提示將存在血液學(xué)毒性，特別是如果骨髓牽連水平大于5％，更特別是大于15％，最特別是如果骨髓牽連水平大于25％，那么本發(fā)明的改進(jìn)方法可以進(jìn)一步包含將一定劑量或劑量方案的未標(biāo)記抗體先于放射性標(biāo)記的抗體給藥。
盡管任何定向存在于惡性細(xì)胞表面的細(xì)胞表面分子的抗體都可以用于釋放放射性同位素，不過優(yōu)選地所述放射性標(biāo)記的抗體與B細(xì)胞表面分子結(jié)合。最優(yōu)選的是抗-CD20抗體，其中所述放射性標(biāo)記的抗-CD20抗體是用α-或β-發(fā)射性同位素標(biāo)記的。鑒于衰退粒子的范圍和效力，最優(yōu)選的同位素是β-發(fā)射性同位素。優(yōu)選的β-發(fā)射體包括90Y和131I，不過90Y優(yōu)選于131I，后者也發(fā)出一定的γ輻射。90Y也比131I釋放更多的能量(2.3MeV對0.81MeV)，具有更長的路徑長度(5-10mm對1-2mm)，這有益于更大面積疾病的治療，其中與腫瘤外緣細(xì)胞結(jié)合的抗體可以殺死腫瘤內(nèi)部的細(xì)胞，無需與表面結(jié)合。其他適合用在本發(fā)明中的放射性核素包括188Re與186Re、199Au和67Cu。美國專利No.5,460,785提供了適合的放射性同位素列表，引用在此作為參考文獻(xiàn)。
優(yōu)選用在本發(fā)明中的放射性標(biāo)記的抗體是Y2B8，它是一種通過雙官能螯合劑與90Y綴合的鼠抗-CD20抗體。Y2B8的制備和使用公開在美國申請08/475,813、08/475,815和08/478,967中，引用在此作為參考文獻(xiàn)。盡管由于半衰期相對較短，就放射性同位素對人患者給藥而言鼠抗體一般優(yōu)選于嵌合抗體，不過也可以使用人的、嵌合的、結(jié)構(gòu)域缺失的或人化抗體作為放射免疫治療劑。這類抗體可以要求不同的劑量，這取決于所綴合的放射性標(biāo)記和它們的體內(nèi)穩(wěn)定性。
本發(fā)明方法的一個重要目標(biāo)是利用未標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞定向抗體消耗位于尋求接受放射免疫療法的患者骨髓中的腫瘤細(xì)胞。因而，用在所公開的方法中的未標(biāo)記抗體的治療學(xué)上有效量是有效減少骨髓牽連程度至低于指定水平的量。特別是如果所述基線骨髓牽連程度高于15％，那么將本發(fā)明的未標(biāo)記抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于15％。更特別是如果所述基線骨髓牽連程度高于25％，那么將本發(fā)明的未標(biāo)記抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于25％。最理想地，如果所述基線骨髓牽連程度高于25％，那么將本發(fā)明的未標(biāo)記抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于15％，最優(yōu)選為小于5％。實(shí)際的劑量將取決于患者的敏感性、所用抗體的類型、所定向的抗原、骨髓牽連水平和基線血小板數(shù)。
本發(fā)明方法的另一個目標(biāo)是能夠用放射性標(biāo)記的免疫治療性抗體治療癌癥患者，特別是B細(xì)胞性淋巴瘤患者，以便不需要在先的造影或經(jīng)典的劑量測定法。本文所公開的臨床參數(shù)可以取代這類劑量測定法評價，實(shí)際上是比用銦-[111]-標(biāo)記的抗體進(jìn)行的劑量測定法判斷更好的、預(yù)期在放射性標(biāo)記的抗體對特定患者給藥后產(chǎn)生的血液學(xué)毒性的預(yù)報變量。當(dāng)與美國申請No.09/259,337所公開的放射性標(biāo)記方法和試劑盒結(jié)合使用時，這類方法是特別有用的，有利于快速標(biāo)記和放射性標(biāo)記的抗體的方便給藥，無需在先純化。
放射性標(biāo)記的抗體的劑量當(dāng)然將取決于特定的患者、特定的抗體、特定的靶和特定的放射性標(biāo)記。與之有關(guān)的還有最初的骨髓牽連程度和在先用未標(biāo)記的消耗抗體治療的功效。但是關(guān)于90Y-標(biāo)記的抗-CD20抗體、特別是Y2B8，優(yōu)選的劑量將從約0.1至0.5mCi/kg。技術(shù)人員通過常規(guī)的優(yōu)化方法可以確定關(guān)于任何特定抗體的適當(dāng)劑量。
本發(fā)明的方法將有益于任何類型的癌癥患者，這些類型可能涉及惡性細(xì)胞滲入骨髓，即淋巴瘤或白血病型癌癥，其中這類患者將另外受益于使用定向這類癌性細(xì)胞表面上的細(xì)胞表面分子的抗體的放射免疫療法。被定向的腫瘤細(xì)胞可以包括任何具有浸潤骨髓能力的細(xì)胞，包括T細(xì)胞和B細(xì)胞。
證明本文所公開的方法有用的基礎(chǔ)觀察結(jié)果之一是，當(dāng)放射性標(biāo)記的抗體定向骨髓中的細(xì)胞時，具有骨髓牽連的患者對放射免疫療法特別敏感。骨髓中的放射性同位素消融甚至不可能表達(dá)被定向的細(xì)胞表面分子的正常祖代細(xì)胞，從而消耗在正常情況下將有利于放射免疫療法之后的免疫系統(tǒng)重建的免疫細(xì)胞種群。而且，具有骨髓牽連的患者的確不會受益于自體骨髓收獲和移植，因?yàn)檫@類移植僅將腫瘤細(xì)胞再輸注回到患者體內(nèi)。因而，在放射免疫療法之前鑒定和矯正骨髓牽連的常規(guī)方法將是淋巴瘤治療領(lǐng)域中有價值的附加措施。在這點(diǎn)上，本文所公開的臨床參數(shù)同樣也將指示由用其他細(xì)胞毒部分、例如毒素標(biāo)記的抗體所帶來的骨髓毒性的程度。因而，本文所公開的參數(shù)還可以用于預(yù)報和制止由細(xì)胞毒性抗體給藥引起的毒性和骨髓消融。
本發(fā)明的方法可以用于治療各種癌癥，特別是B細(xì)胞性淋巴瘤和白血病，若所述B細(xì)胞性淋巴瘤是非何杰金氏淋巴瘤(NHL)則是特別有用的。Rituximab已被批準(zhǔn)可用于低級濾泡性NHL的治療，但是本發(fā)明人已經(jīng)驚人地發(fā)現(xiàn)Rituximab也有益于中級與高級NHL、包括大面積疾病的治療。因此，可用本發(fā)明方法治療的淋巴瘤包括低級/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴細(xì)胞性(SL)NHL、中級/濾泡性NHL、中級擴(kuò)散性NHL、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、高級成免疫細(xì)胞性NHL、高級成淋巴細(xì)胞性NHL、高級小未分裂細(xì)胞性NHL、大面積NHL、外膜細(xì)胞性淋巴瘤、與AIDS有關(guān)的淋巴瘤和瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥，或者任何潛在伴有骨髓牽連的淋巴瘤類型，骨髓牽連可能使放射免疫療法的功效復(fù)雜化。
現(xiàn)在將以下列數(shù)據(jù)為例，闡述所公開的臨床參數(shù)的使用示范。
用Y2B8對五十八名復(fù)發(fā)性或頑固性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)患者(6％小淋巴細(xì)胞性、65％濾泡性、24％DLC&DMC、6％外膜細(xì)胞性)進(jìn)行I/II期研究。在治療前一周，所有患者用111In-標(biāo)記的抗體(In2B8)進(jìn)行造影和劑量測定(也公開在申請08/475,813、08/475,815和08/478,967中，引用在此作為參考文獻(xiàn))。將Rituximab250mg/m2先于造影和放射性標(biāo)記的治療性抗體之前給藥。對第2和第3組50名門診患者給以0.2、0.3或0.4mCi/kg的單一劑量。選擇輕微血小板減少患者(血小板100-150/mm3)給以0.4mCi/kg和0.3mCi/kg的II期劑量。
接受0.4mCi/kg或0.3mCi/kg的II期患者的骨髓劑量測定法(包括全血T1/2與AUC、得自血液與骶骨的骨髓劑量測定法)對血液學(xué)毒性級別分析沒有證明有顯著的相關(guān)性。不過，在淋巴瘤牽連骨髓的程度與4級底點(diǎn)(血小板≤25,000/mm3；ANC≤500/mm3)發(fā)生率之間證明有顯著相關(guān)性。無骨髓牽連的患者有百分之八(2/25)發(fā)展為4級血小板減少，骨髓牽連0.1-5％的患者有25％(1/4)、骨髓牽連5-20％的患者有45％(5/11)和骨髓牽連20-25％的患者100％(6/6)發(fā)展為4級血小板減少?？傊?，僅有5名(10％)患者發(fā)展到血小板數(shù)小于10,000/mm3。
經(jīng)過一年對立期，平均血清免疫球蛋白保持正常。所有劑量下的全部組織學(xué)檢查結(jié)果中，ORR為67％(26％CR和41％PR)，低級NHL中為82％。根據(jù)Kaplan-Meier法的預(yù)報，應(yīng)答者的中位TTP為12.9+月，應(yīng)答持續(xù)時間為11.7+月?；€脾大患者中，4/8(50％)患者有應(yīng)答，無脾大患者為74％(29/39)(p＝0.1761)。
這些結(jié)果提示，包括基線血小板數(shù)和淋巴瘤牽連骨髓的程度在內(nèi)的臨床參數(shù)能夠代替劑量測定法，用于Y2B8和其他放射性標(biāo)記的抗體對NHL患者安全給藥。Y2B8的血液學(xué)毒性明顯與存在于骨髓中的淋巴瘤細(xì)胞的治療性抗體定向有關(guān)。
權(quán)利要求
1.預(yù)報由放射性標(biāo)記的抗體對癌癥患者給藥所致血液學(xué)毒性的嚴(yán)重性并且制止或減少該血液學(xué)毒性的方法，包含(a)測量基線活組織檢查中的骨髓牽連程度；和(b)如果所述基線骨髓牽連程度高于5％，那么將治療學(xué)上有效量非標(biāo)記的消耗抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于5％。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述癌癥患者患有淋巴瘤或白血病型癌癥。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述非標(biāo)記的消耗性抗體是人的、嵌合的、結(jié)構(gòu)域缺失的或人化抗體。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述抗體是一種抗-CD20抗體。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述抗-CD20抗體是一種人的、嵌合的或人化抗體。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體是Rituximab。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按至少50mg/m2的劑量給藥至少一次。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周至少50mg/m2的劑量給藥至少兩周。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周約100至約500mg/m2的劑量給藥至少兩周。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周約375mg/m2的劑量給藥至少四周。
11.用放射性標(biāo)記的治療性抗體治療癌癥患者的改進(jìn)方法，所述改進(jìn)包含(a)使用基線骨髓活組織檢查作為血液學(xué)毒性的指征；和(b)根據(jù)最初的骨髓牽連百分比，將治療學(xué)上有效量的放射性標(biāo)記的抗體給藥。
12.權(quán)利要求11的改進(jìn)方法，其中所述癌癥患者患有淋巴瘤或白血病型癌癥。
13.權(quán)利要求12的方法，如果最初的骨髓牽連百分比大于5％，那么進(jìn)一步包含將一定劑量或劑量方案的未標(biāo)記抗體先于放射性標(biāo)記的抗體給藥。
14.權(quán)利要求13的方法，如果最初的骨髓牽連百分比大于15％，那么進(jìn)一步包含將最初劑量或劑量方案的未標(biāo)記抗體先于放射性標(biāo)記的抗體給藥。
15.權(quán)利要求14的方法，如果最初的骨髓牽連百分比大于25％，那么進(jìn)一步包含將最初劑量或劑量方案的未標(biāo)記抗體先于放射性標(biāo)記的抗體給藥。
16.權(quán)利要求11的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗體是一種抗-CD20抗體。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗-CD20抗體是用α-或β-發(fā)射性同位素標(biāo)記的。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗-CD20抗體是用β-發(fā)射性同位素標(biāo)記的。
19.權(quán)利要求18的方法，其中所述β-發(fā)射性同位素是90Y或131I。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗體是Y2B8。
21.權(quán)利要求13的方法，其中的未標(biāo)記抗體是一種抗-CD20抗體。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述未標(biāo)記抗-CD20抗體是人的、嵌合的、結(jié)構(gòu)域缺失的或人化抗體。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述抗體是嵌合抗-CD20抗體。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體是Rituximab。
25.權(quán)利要求23的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按至少50mg/m2的劑量給藥至少一次。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周至少50mg/m2的劑量給藥至少兩周。
27.權(quán)利要求26的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周約100至約500mg/m2的劑量給藥至少兩周。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周約375mg/m2的劑量給藥至少四周。
29.權(quán)利要求1的方法，其中如果所述基線骨髓牽連程度高于15％，那么將所述治療學(xué)上有效量的非標(biāo)記消耗性抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于15％。
30.權(quán)利要求1的方法，其中如果所述基線骨髓牽連程度高于25％，那么將所述治療學(xué)上有效量的非標(biāo)記消耗性抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于25％。
31.權(quán)利要求1的方法，其中如果所述基線骨髓牽連程度高于25％，那么將所述治療學(xué)上有效量的非標(biāo)記消耗性抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于15％。
32.權(quán)利要求1的方法，其中如果所述基線骨髓牽連程度高于25％，那么將所述治療學(xué)上有效量的非標(biāo)記消耗性抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于5％。
33.治療患有淋巴瘤或白血病型癌癥的癌癥患者的方法，包含將治療學(xué)上有效量的放射性標(biāo)記的抗體對所述患者給藥，無需在先的造影或劑量測定法。
34.權(quán)利要求33的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗體選自由抗-CD20、抗-CD19和抗-CD22抗體組成的組。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗-CD20抗體是用α-或β-發(fā)射性同位素標(biāo)記的。
36.權(quán)利要求35的方法，其中所述抗體是用90Y或131I標(biāo)記的。
37.權(quán)利要求34的方法，其中所述放射性標(biāo)記的是抗-CD20抗體。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述抗體是Y2B8。
39.權(quán)利要求36的方法，其中所述抗體是利用放射性標(biāo)記試劑盒的材料和說明書提供和標(biāo)記的。
40.權(quán)利要求38的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗體的治療學(xué)上有效量是約0.1至0.5mCi/kg。
41.權(quán)利要求33的方法，進(jìn)一步包含在所述放射性標(biāo)記的抗體給藥之前的步驟，其中(a)進(jìn)行基線活組織檢查，以測定骨髓牽連的程度；和(b)在放射性標(biāo)記的抗體給藥之前，用有效減少骨髓牽連百分比量的未標(biāo)記抗體治療患者。
42.權(quán)利要求41的方法，其中所述未標(biāo)記抗體是抗-CD19或抗-CD20抗體或抗-CD22抗體。
43.權(quán)利要求42的方法，其中所述抗體是抗-CD20抗體。
44.權(quán)利要求43的方法，其中所述未標(biāo)記抗-CD20抗體是人的、嵌合的、結(jié)構(gòu)域缺失的或人化抗體。
45.權(quán)利要求44的方法，其中所述抗體是嵌合抗-CD20抗體。
46.權(quán)利要求45的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體是Rituximab。
47.權(quán)利要求1的方法，其中所述癌癥選自由低級/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴細(xì)胞性(SL)NHL、中級/濾泡性NHL、中級擴(kuò)散性NHL、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、高級成免疫細(xì)胞性NHL、高級成淋巴細(xì)胞性NHL、高級小未分裂細(xì)胞性NHL、大面積NHL、外膜細(xì)胞性淋巴瘤、與AIDS有關(guān)的淋巴瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥和T細(xì)胞性淋巴瘤與白血病組成的組。
48.權(quán)利要求11的方法，其中所述癌癥選自由低級/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴細(xì)胞性(SL)NHL、中級/濾泡性NHL、中級擴(kuò)散性NHL、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、高級成免疫細(xì)胞性NHL、高級成淋巴細(xì)胞性NHL、高級小未分裂細(xì)胞性NHL、大面積NHL、外膜細(xì)胞性淋巴瘤、與AIDS有關(guān)的淋巴瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥和T細(xì)胞性淋巴瘤與白血病組成的組。
49.權(quán)利要求33的方法，其中所述B細(xì)胞性淋巴瘤選自由低級/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴細(xì)胞性(SL)NHL、中級/濾泡性NHL、中級擴(kuò)散性NHL、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、高級成免疫細(xì)胞性NHL、高級成淋巴細(xì)胞性NHL、高級小未分裂細(xì)胞性NHL、大面積NHL、外膜細(xì)胞性淋巴瘤、與AIDS有關(guān)的淋巴瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥和T細(xì)胞性淋巴瘤與白血病組成的組。
50.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包含在所述放射性標(biāo)記的抗體給藥之前測量基線血小板數(shù)。
51.權(quán)利要求11的方法，進(jìn)一步包含在所述放射性標(biāo)記的抗體給藥之前測量基線血小板數(shù)。
52.用放射性標(biāo)記的治療性抗體治療患有B細(xì)胞性淋巴瘤的淋巴瘤或白血病患者的改進(jìn)方法，所述改進(jìn)包含(a)使用基線血小板數(shù)作為血液學(xué)毒性的指征；和(b)根據(jù)所述基線血小板數(shù)將治療學(xué)上有效量的放射性標(biāo)記的抗體給藥。
全文摘要
報道了新的臨床參數(shù)，它們可以充當(dāng)與放射性標(biāo)記的治療性抗體有關(guān)的血液學(xué)毒性的預(yù)報變量，特別是定向具有定位于骨髓趨勢的淋巴瘤細(xì)胞的那些抗體。
文檔編號A61K39/395GK1450911SQ00812442
公開日2003年10月22日 申請日期2000年7月31日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月11日
發(fā)明者W·拉斯泰特, C·懷特 申請人:Idec藥物公司